反刍动物营养消化代谢试验手册
反刍动物的营养物质代谢分析
反刍动物的消化分两个 阶段 ： 先 咀嚼原 料吞 入 胃中 ， 首
经 过 一 段 时 间 以 后 将 半 消 化 的 食 物 反 刍 再 次 咀 嚼 。反 刍 动 物 在 解 剖 学 的 共 同特 征 是 均 为 偶 蹄 类 。反 刍 动 物 的 胃 分 为
四个 胃室 ， 别 为 瘤 胃 、 胃 、 瓣 胃 和 皱 胃 前 两 个 胃 室 分 网 重 （ 胃和 网胃） 食物 和胆 汁混 合 ， 别是 使 用共 生 细菌 将 瘤 将 特 纤 维 素 分 解 为 葡 萄 糖 。 然 后 食 物 反 刍 ， 缓 慢 咀 嚼 以 充 分 经 混 合 ， 一 步 分 解 纤 维 。 然 后 重 新 吞 咽 ， 过 瘤 胃 到 重 瓣 进 经 胃 ， 行 脱 水 。然 后 送 到 皱 胃 。最 后 送 入 小 肠 进 行 吸 收 。 进
［ ］王 燕 ， 丽 娜 ， 晓 庆 ， 永 根． 刍动 物 小 肠 氨 基 酸 营 养 调 控 的 ２ 贺 秦 张 反 研 究进 展 ［３ 饲 料 博 览 ，０ ９ Ｊ－ —
摘 要 ： 反 刍动 物 的 三 大 营养 物 质 的 代 谢 机 理 进 行 了分 析 论 述 ， 讨 三 大 营 养 物 质 对 反 刍动 物 机 体 合 成 的 重 要 性 。 对 探 关 键 词 ： 刍动 物 ； 养 物 质 反 营
中 图分 类 号 ： ８ Ｓ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ６ ２３ ９ （ ０ ０ １ — ３ ００ １ ７ —１ ８ ２ １ ） ２０ ２— １
２ 三 大 营 养 素 的 代 谢 机 理
２ １ 反 刍 动 物 对 蛋 白 质 的 消 化 机 理 及研 究 热 点 ．
反 刍动 物 真 胃和 小 肠 中蛋 白 质 的 消 化 吸 收 与 单 胃动 物 类 似 。但 由 于瘤 胃微 生 物 的 作 用 ， 反 刍 动 物 对 蛋 白 质 的 使 消 化 、 用 与 单 胃 动 物 又 有 很 大 的 差 异 。 进 入 瘤 胃 的 饲 料 利 蛋 白质 ， 微 生 物 的作 用 降 解 成 肽 和 氨 基 酸 ， 中 多 数 氨 基 经 其 酸 又 进 一 步 降 解 为 有 机 酸 、 和 二 氧 化 碳 微 生 物 降 解 所 氨 产 生 的 氨 与 一些 简 单 的 肽 类 和 游 离 氨 基 酸 ， 被 用 于 合 成 又 微 生 物 蛋 白 质 。 如 果 饲 喂 的 蛋 白 质 含 量 过 高 ， 解 的 氨 会 降 在 瘤 胃积 聚并 超 过 微 生 物 所 能 利 用 的 最 大 氨 浓 度 ， 余 的 多 氨 会 被 瘤 胃壁 吸 收 ， 血 液 输 送 到 肝 脏 ， 在 肝 中 转 变 成 尿 经 并 素 。饲 料 供 给 的 蛋 白 质 少 ， 胃液 中 氨 浓 度 就 很 低 ， 血 液 瘤 经 和 唾 液 以尿 素 形 式返 回瘤 胃的 氮 的 数 量 可 能 超 过 以 氨 的形 式 从瘤 胃吸收 的 氮 量 ， 瘤 胃中可 转 变 为 微 生 物蛋 白质 。 在 因 此 ， 胃微 生 物 对 反 刍 动 物 蛋 白 质 的 供 给 有 一 种 “ 节 ” 瘤 调 作用， 能使 劣 质 蛋 白质 品质 改 善 ， 质 蛋 白 质 生 物 学 价 值 降 优 低 。瘤 胃微 生 物 蛋 白 质 的 品 质 一 般 略 次 于 优 质 的 动 物 蛋 减 白 ， 豆 饼 和 苜 蓿 叶 蛋 白大 约 相 当 ， 于 大 多 数 谷 物 蛋 白 。 性 能 ， 少 热 应 激 。 与 优 所 以 ， 过 给 反 刍 动 物 饲 料 中 添 加 尿 素 ， 高 瘤 胃细 菌 蛋 白 通 提 参 考 文 献 质合成 量 已成为一项使用 措施 ， 此外 ， 优质 蛋 白质要进 过适 ［ ］张彩 英 ， 国 良 ， １ 胡 曹华 斌 ． 刍动 物瘤 胃 内环 境 的 特 点及 调 控 措 施 反 当处 理 ， 包被等 ， 如 使其 在瘤 胃中不过 多的降解 。
反刍动物饲料营养价值评价(精)
优点
• 粪液法具有简单、准确、重复性好、可批 量测定等优点。是在养殖现场或放牧条件 下批量测定干草或其他粗饲料体外消化率 最有前途的方法。尤其是不使用瘘管动物 就可快速测定饲料消化率。符合动物福利 倡导者的要求，因此，这种方法越来越受 到西方学者的重视。该方法已被用来评定 反刍动物营养价值。
不足
气体代谢试验
• 主要是采用呼吸面具法，是根据测得的代 谢产物和氧耗。间接计算出产热，测得的 值可与测热室或测热柜测得的值相比。 • 其价格低、操作简单、便携性好，具有重 要实用价值。
比较屠宰试验方法
• 比较屠宰法测得的结果代表在屠宰前相当 长一段时间内的饲养水平、放牧活动及所 遭受自然环境变化影响的综合结果，为实 测数据，具有相当的可靠性。
二、评定饲料营养物质可利用性的方法
评定一种饲料的营养价值最准确、最直观 的方法就是动物试验，根据动物消化代谢 情况。可以评定该饲料的营养价值。 反刍动物饲料营养价值的评定方法主要有 活体法、半体内法(尼龙袋法)和体外法。
1、体内法
• 体内法是给动物安装十二指肠和回肠瘘管， 分别从十二指肠和回肠瘘管采取食糜样本， 测定食糜养分在小肠中的消化率。
4、近红外光谱分析
• 近红外光谱分析通过分析饲料组织结构的 直接方法和从动物排泄物中预测饲粮品质 的间接方法．检测饲料中的主要指标。例 如粗蛋白、酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维、 丹宁酸和矿物质等。来综合评价饲料的营 养价值。 • 另外还可以用近红外光谱分析法测定的各 种营养素参数或有机物体外消化率来构建 饲料能量预测模型。
2、范氏纤维分析
Van Soest体系在评定粗饲料营养价值方面 较Weende体系有了长足的进步。它在 Weende体系分析方法的基础上。对粗纤维 和无氮浸出物这两个指标进行了修正和重 新划分。不仅给出了饲料中各类粗养分的 测定值，而且给出饲料某种具体营养成分 的含量。
实验一： 反刍兽消化系统疾病的检查
实验一：反刍兽消化系统疾病的检查实验一：反刍兽消化系统疾病的检查实验一：反刍动物消化系统疾病的检测（一）、实验目的：为掌握前胃心动过缓的临床症状，要求学生掌握诊断和治疗的基本方法和要点以及仪器的使用养学生独立分析问题，解决问题的能力（二）、实验内容：观察和讨论反刍动物消化系统疾病的典型临床病例和治疗方案。
诊断方法和治疗技能培训：视觉、触觉、敲击、听觉、嗅觉等。
；注射、用药等（三）；实验动物：两只山羊（IV）；操作步骤1：基础临床检查1.1问诊：向畜主询问了解畜群和病畜的一般发病情况，包括1.2视诊：视诊原则：内容注意事项等1.3触诊：触诊原则：触诊内容：触诊方法：1.4叩诊：1.5听诊内容；听诊过程中的注意事项：2全面和一般检查2.1全身症态的观察①精神状态：②营养，③姿势与步态2.2外套和皮肤检查① 鼻镜检查② 检查外套：③ 皮肤检查：2.3眼结膜检查：检查方法，正常状态下的常见病理变化2.4体温、脉搏和呼吸次数的测量：检查方法和临床意义（V）。
案例分析与讨论：（要点）洛阳市郊区，张三，黑白花乳牛。
长期饲喂干玉米秸，于2021年8月中旬突然改喂青干草，喂后2小时发病，不吃，不喝，不反刍，喜卧，每次仅排少量粪便。
临床检查：t38.4℃，p85次/min，精神沉郁，眼窝凹陷，左d平坦，触诊瘤胃内容物坚实，拳压留痕，听诊瘤胃蠕动音消失。
1.初步诊断是什么？为什么？2.治疗原则是什么？3.每个人都写一份标准治疗处方。
描述具体的治疗措施和方法（6）思考问题（可选）1、前胃弛缓、瘤胃积食、瘤胃臌胀鉴别诊断要点。
2、分析瘤胃内环境在致病中的作用。
每节课分为几个小组，在下一个实验中选择1-2名学生对全班进行案例分析，并讨论实验报告。
实验报告的时间是本周日2点27分。
反刍动物脂类代谢研究进展
反刍动物脂类代谢研究进展中国养殖技术网来源： 发布时间：2006-1-13 12:49:25一般，反刍动物日粮中脂类的含量较低，精料中含2～4％，粗料中占5～7％。
在常规日粮中，脂类大部分是以三酰甘油的形式存在的，另外还有一小部分的糖脂和角质脂(主要是腊质和复合脂)。
饲草中脂类主要是复合脂，包括糖脂和磷脂(占70～80％)。
近十多年来，反刍动物脂类研究取得了重大进展。
最主要的是开发出了具有多种形式(氢化、钙皂、蛋白包被等)的瘤胃惰性脂肪产品。
另外对组织间脂类的合成、贮存和动员的研究也取得了进展，特别是发现影响这些代谢途径的限制性因素，对避免产生代谢问题提供了科学依据。
目前脂类在反刍动物营养中的研究侧重点是通过改变脂类在瘤胃中的理化性质来提高动物生产性能。
如控制脂肪酸的抗微生物作用，以便在使用添加脂类物质的日粮饲喂家畜时，不会破坏胃发酵平衡。
另外，通过调节微生物的氢化作用来改变特定脂肪酸的吸收，以便提高生产性能或改善动物食品的营养品质，也越来越受到重视。
一、反刍动物日粮中添加脂类的作用1.在动物日粮中添加脂类，可以提高日粮的能量浓度。
脂类的能值是蛋白质和碳水化合物的两倍多，且反刍动物吸收脂类的效率高。
各种脂肪、油和脂肪酸的消化或吸收率在80％～90％之间。
因此，在反刍动物日粮中，添加一部分脂类，可以节省部分谷物能量饲料，有利于提高动物生产性能。
2.在动物日粮中添加脂类，能改变动物的组织代谢。
日粮中增加脂肪可降低脂肪组织中脂肪酸合成速度。
主要是通过脂肪酸或其辅酶酯抑制乙酰辅酶A羧化酶活性。
其中，硬脂酸是最主要的抑制物，棕榈酸、油酸、亚油酸和亚麻酸也有作用。
脂类对细胞代谢的调节作用是通过改变细胞膜的结构和流动性实现的。
如可以作为细胞表面的受体、膜蛋白的结合位点以及作为第二信使等。
3.在动物日粮中添加脂类，可以改变动物食品的营养品质，如增加羊肉中的不饱和脂肪酸含量。
二、脂类在瘤胃中的代谢1.脂类水解酯化的植物脂被动物采食后，在瘤胃微生物分泌的脂酶作用下被广泛水解。
第十章 反刍动物营养实验技术.(DOC)
第十章反刍动物营养实验技术第一节人工瘤胃技术一. 人工瘤胃技术概述人工瘤胃技术是体外研究瘤胃微生物营养与代谢的一类技术方法，又称瘤胃模拟培养法。
由于人工瘤胃技术不受试验动物的限制，可以在常规实验室条件下进行研究，因此得到了越来越广泛的应用。
早期的人工瘤胃技术主要应用于较简单的研究目的。
如Woodman和Evans(1938)，通过体外瘤胃发酵证实纤维素在瘤胃内降解的唯一中间产物是葡萄糖，终产物是VFA 和乳酸。
Quin（1943）用体外法研究了不同碳水化合物瘤胃发酵的产气量。
Pearson 和Smith（1943）用体外法研究了瘤胃微生物对尿素的利用等。
McDougall（1948）关于绵羊唾液矿物质组成的研究在人工瘤胃技术发展史上具有重要意义，之后的各种人工瘤胃系统人工唾液的配制均参照了McDougall的研究结果。
早期的人工瘤胃发酵装置比较简单，不少装置仅是在厌氧的条件下对瘤胃液进行简单的培养。
由于发酵产物在系统内的不断积累，这类系统不能用于要求长时间发酵的研究工作，通常有效的发酵时间为12～24小时。
Louw于1949年设计了一套带有透析系统的人工瘤胃装置，将瘤胃液和底物放入渗析袋或半透膜中，然后悬浮在缓冲液内。
该装置在一定程度上将底物和发酵终产物分离开，延长了有效发酵时间。
二十世纪五十年代至六十年代，人工瘤胃技术在牧草有机物和纤维素瘤胃降解研究方面得到了大量应用。
用人工瘤胃技术研究的内容包括不同牧草以及牧草与纯纤维体外降解速度比较；牧草颗粒大小对体外降解速度的影响；体外评定牧草营养价值；用体外牧草发酵测定结果预测体内发酵等。
这一阶段的人工瘤胃装置也趋于复杂，以更加接近瘤胃发酵的真实情况。
如Donfer使用的发酵装置由32个发酵瓶组成，每个发酵瓶的容积为90ml，装入的发酵液容量为50ml。
每个瓶均有进气口和出气口，以每分钟160个气泡的速度向瓶内通入二氧化碳。
二十世纪七十年代，随着反刍动物蛋白质营养研究的深入，人工瘤胃技术开始应用于饲料蛋白质的瘤胃降解率评定。
反刍动物瘤胃内糖类、蛋白质及脂肪的消化代谢
甲烷 和二 氧 化碳 。其 他糖 类 通 过不 同细 菌 和 纤 毛 虫
的发酵 ， 最终产物也大都是挥发性脂肪酸 、 甲烷和二 氧 化 碳 。挥 发 性脂 肪 酸 主要 是 乙酸 、 丙酸 、 丁酸 、 戊 酸 。此外 ， 还 有少 量 的支链 脂肪 酸 ， 如 异 丁酸 、 异戊 酸
等 。 瘤 胃挥 发 性 脂肪 酸是 反 刍 动 物最 主要 的能 量 来 源， 以牛 为 例 ， 一 昼 夜瘤 胃所 产 生 挥 发性 脂 肪 酸 可 提 供 ２ ５ １ ２ １ ～ ５ ０ ２ ４ ２千 焦 的能 量 ， 占机 体 所 需 能 量 的 ６ ０ ％ ７ ０ ％。 在一 定 日粮条 件下 ， 每 种 酸都 与 总酸成 一
糖， 然 后 经乳 酸 和 丙 酮酸 阶 段 而生 成挥 发性 脂 肪 酸 、
的利 用 率 具有 重 要 意 义 ，尤 其 在低 蛋 白 日粮 的条 件
下， 反刍动物依靠尿素再循环可以节约氮的消耗 ， 保 证 瘤 胃内氮 的浓 度 ，利 于瘤 胃微 生 物 菌体 蛋 白 的合
成， 同时 使 尿 中尿素 的排 出量 降到最 低水 平 。 在 畜牧 生 产 中 ，尿 素可 用来 代 替 日粮 中约 ３ ０ ％ 的蛋 白质 。尿 素在 瘤 胃内脲 酶作用 下 迅速 分解 ， 产生
大体为 ７ ０： ２ ０－１ ０ ，但往 往 随饲 料种 类 不 同而发 生 较 大 变化 。瘤 胃微 生物 在发 酵糖 类 的 同时 ， 还能够 把
分解 出来的单糖和双糖转化 成 自身的糖原 ，储存于 细胞 内 ， 当他 们 随食 糜 进入 皱 胃和小 肠 后 ， 微 生 物 糖
原可 以被 动 物所 消 化利 用 ，成 为反 刍 动 物 机体 的葡 萄糖 来 源 之 一 。泌 乳 牛吸 收人 血 的葡 萄糖 约 有 ６ ０ ％
反刍动物常用饲料的体外消化率
反刍动物常用饲料的体外消化率曹香林;陈建军;郑琛【摘要】为有效利用当地饲料资源,提高反刍动物配合日粮的利用效率和生产性能,选用西北地区常见的棉籽蛋白、玉米啤酒糟、苹果渣、玉米皮、甜菜粕、菜粕和苜蓿等7种反刍动物常用饲料原料,采用应用滤袋的两级离体消化法对干物质（DM）、有机物（OM）、粗蛋白质（CP）、酸性洗涤纤维（ADF）和中性洗涤纤维（NDF）的体外消化率进行测定。
结果表明,甜菜粕的干物质体外消化率（IVDMD）、有机物体外消化率（IVOMD）和粗蛋白质体外消化率（IVCPD）显著高于其他样品（P〈0.05）,玉米啤酒糟的IVDMD、IVOMD、IVCPD、中性洗涤纤维体外消化率（IVNDFD）和酸性洗涤纤维体外消化率（IVADFD）都处于较低水平。
【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2012(040)003【总页数】3页(P150-152)【关键词】反刍动物;两级离体消化;饲料;体外消化率;滤袋【作者】曹香林;陈建军;郑琛【作者单位】^p【正文语种】中文【中图分类】S816.7评定反刍动物饲料消化率最早采用表观消化率法，但后来根据反刍动物代谢的特点发现，该法存在着严重缺陷。
随着反刍动物营养研究的深入，反刍动物饲料评定方法也不断进步和完善，如瘤胃降解与非降解蛋白质体系的提出和发展等。
目前，评定反刍动物饲料消化率的方法主要有3种，即活体法、尼龙袋法和体外法，并从常用的消化代谢试验、尼龙袋试验等又衍生出了人工瘤胃试验、产气量法、移动尼龙袋法［1］。
体外试验以其操作简便、不需要动物、测定时间短、成本低、易于标准化等特点受到青睐。
目前应用较多的体外方法有活体外产气法［2］、两级离体消化法［3］及活体外消化率测定法［4］等。
西北地区常见的反刍动物饲料原料包括棉籽蛋白、棉粕、玉米啤酒糟、苹果渣、玉米皮、甜菜粕和菜粕等，饲料资源丰富。
为有效利用当地饲料资源，提高反刍动物配合日粮的利用效率和生产性能，笔者于2009年3月利用两极离体消化法并结合滤袋技术，对这些原料的消化率进行测定，以期为反刍动物的饲料配制提供参考。
反刍动物营养消化代谢试验手册
反刍动物营养试验手册-------消化代谢试验部分(修改版)反刍动物营养研究室中国农业科学院畜牧研究所二〇〇四年六月一日前言2003年在本研究室进行了为期四个月的奶牛消化代谢实验，实验操作过程中，采用了许多方法，成功失败皆有。
每每在失败之后方知实验操作之重要，经验积累之难得，于是便有了将这些看似简单的方法和提示落实于文字的想法，希望能给做相关实验的人员些许提示和帮助。
但毕竟能力有限，在实验过程中因力求细致准确而有因简就繁之嫌，有些文字表达方面过于累赘，错误和不当之处在所难免，同时，由于实验内容要求，所涉及的方法有限，所以这只能是抛砖引玉，希望大家能够不吝指出，并不断改进，使之逐渐完善！手册的形成是在导师王加启研究员指导督促以及实验室各位老师同学帮助下，集实验小组各成员（王吉峰博士、汪水平硕士和姚美蓉硕士）的工作结果而成！2002级博士研究生李树聪 2004年7月13日于反刍动物营养研究室目录饲料及其剩余料样品的采集______________________________________________1瘤胃液pH，NH3-N和VFA样品采集和保存__________________________________2瘤胃动态食糜样品采集和保存____________________________________________3分离瘤胃微生物样品采集________________________________________________4瘤胃原虫计数用样品的采集和保存________________________________________5乳样的采集和保存______________________________________________________6小肠液采集及其预处理__________________________________________________7粪样采集及其预处理____________________________________________________8尿样采集及其预处理____________________________________________________9瘤胃原虫计数方法_____________________________________________________10酸性洗涤不溶灰分的测定_______________________________________________12氨氮测定方法--氧化镁直接蒸馏法________________________________________13瘤胃液氨氮检测方法－靛酚比色法_______________________________________15瘤胃液VFA测定---气相色谱法___________________________________________18瘤胃微生物量测定方法-嘌呤碱基法______________________________________21 Co—EDTA 配制_______________________________________________________24铬染纤维的制备_______________________________________________________25原子吸收测定用容器洗涤方法___________________________________________27干法灰化食糜流量监测用指示剂（Co Cr Yb）测定________________________28湿法消化食糜流量监测用指示剂（Co Cr Yb）测定_________________________29瘤胃液中Co浓度的测定_________________________________________________30指示剂的配合和使用方法_______________________________________________31饲料及其剩余料样品的采集一、采样方法预试期每天饲喂时准确记录饲喂量，观察饲料采集速度，记录采食完85～95%饲料所需时间，调整剩余料采集时间。
反刍动物饲料营养价值的评定
体重,kg 体重,kg 400 500 600 700 Mcal 7.60 8.98 10.30 11.57 母牛维持的产奶净能需要 产奶净能 NND MJ 31.80 10.13 37.57 11.97 43.10 13.73 48.41 15.43
每kg奶的能量需要 kg奶的能量需要 乳脂率(%) 乳脂率(%) 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 产能奶净NND 产能奶净 Mcal MJ 0.60 2.51 0.65 2.72 0.70 2.93 0.75 3.14 0.80 3.35 0.84 3.52
国外的估测模型
法国INRA(1989)： 法国 ： OM消化率 = 87.9 – 2.58ADL r = 0.81 消化率,% 消化率 或=91.9 – 0.355NDF + 0.387ADF – 0.392EE r = 0.87 德国Close和Menk(1986)： 德国 和 ： OM消化率 = 91.1 – 0.88CF 消化率,% 消化率 能量消化率,% 能量消化率 = 83.3 - 0.15x – 0.0151x2， x = CF 澳大利亚CSIRO: 澳大利亚 DM消化率 = 83.58 – 0.824×(ADF,%)+2.62×(N,%) 消化率,% 消化率 × × 美国NRC: 美国 用模型分别计算各种有机物质的消化率
【免费下载】反刍动物饲料营养价值表
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
SCFA在反刍动物体内代谢
资料来源：Pennington,1952；Krehbiel et al.,1992;Kristensen et al.,1996； Kristensen et al.,2000c ；Reynolds and Huntington,1988
第三十页，共71页。
A 丁酸盐在瘤胃上皮的代谢产物
Pierre Nozièrea, Cécile Martina等(1999)绵羊 灌注试验发现，门脉释放的β-羟丁酸盐的量 随着灌注SCFA而增加，而与丁酸盐的灌注 量无关。
第六页，共71页。
1 SCFA的生成过程
瘤胃微生物细胞外消化
纤维素
纤维二糖
果胶
1-磷酸葡萄糖 糖醛酸
半纤维素 戊糖
戊聚糖
淀粉
麦芽糖
葡萄糖
6-磷酸葡萄糖
蔗糖
6-磷酸果糖
果糖 果聚糖
1，6-磷酸果糖
丙酮酸
第七页，共71页。
瘤胃微生物细胞内代谢
单糖
丁酰CoA
乙酰CoA
丙酮酸
草酰乙酸
乙酰磷酸
甲酸
乳酸
丁酸
总结
在移除瘤胃微生物后研究SCFA吸收时，可 以认为: ⑴瘤胃吸收来的乙酸盐和异丁酸盐在门静脉 全部回复(没有第一途径吸收)，只有5-10％ 的丙酸盐在吸收时被代谢掉。 ⑵门脉回流内脏吸收动脉乙酸盐（第二途径 吸收），暗示瘤胃净吸乙酸盐的70％进入 门静脉（瘤胃吸收的其它乙酸盐被瘤胃微 生物代谢了），这部分乙酸盐被PDV组织 代谢掉，瘤胃上皮根本就没有代谢乙酸盐。
rumen Sheep Sheep
Steers
Acetate1 54±82
109±7 4 105±35
1 Values for acetate are corrected for PDV uptake of arterial acetate using systemic infusion of [213C]acetate. 2 (kristensen et al,1996) , 3(kristensen et al,2000b) , 4 (kristensen et al,2000a) , 5 (kristensen et al,2004c) , 6(kristensen et al,2004a) ,7(kristensen et al,2004b)
反刍动物碳水化合物代谢利用机制及消化道健康的系统营养调控研究进展
动物营养学报２０２０，３２（１０）：４６８６⁃４６９６ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ㊀ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０２０．１０．０２０反刍动物碳水化合物代谢利用机制及消化道健康的系统营养调控研究进展王洪荣（扬州大学动物科学与技术学院，扬州２２５００９）摘㊀要：碳水化合物是反刍动物体内的主要能量来源，在维持动物生长发育㊁机体代谢和生产性能等方面发挥关键作用㊂饲粮中碳水化合物结构是否合理对能量利用效率㊁动物生产性能和消化道健康有重要影响㊂本文系统分析和综述了反刍动物饲粮中碳水化合物的利用机制及其对消化道健康的影响的最新研究进展，并提出系统营养调控技术措施，为提高饲粮碳水化合物的利用效率和动物消化道健康营养调控决策提供参考㊂关键词：反刍动物；碳水化合物；消化道健康；系统营养调控中图分类号：Ｓ８２３㊀㊀㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀㊀㊀文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０２０）１０⁃４６８６⁃１１收稿日期：２０２０－０８－０３基金项目：国家重点研发计划（２０１７ＹＦＤ０５００５０４）；国家自然科学基金项目（３１８７２９８８）作者简介：王洪荣（１９６２ ），男，内蒙古丰镇人，教授，博士，主要从事反刍动物营养代谢与消化道健康营养调控研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｒｗａｎｇ＠ｙｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ㊀㊀饲粮中碳水化合物是反刍动物的主要能量来源，大部分在瘤胃内被微生物代谢利用产生有机酸而氧化提供ＡＴＰ，小部分在瘤胃后消化道分解代谢提供能量，在维持动物生长发育㊁机体代谢和生产性能等方面发挥重要作用㊂动物体内的７５％ ８５％的能量来源于饲粮中的碳水化合物，饲粮中碳水化合物结构是否合理对动物生长和健康有很大影响，譬如反刍动物生产中出现的瘤胃健康问题和能量负平衡问题均与碳水化合物代谢有关㊂我国传统的反刍动物以 低投入－低产出节粮型 生产模式为主，而西方发达国家以 高投入－高产出 的生产模式为主㊂近年来，随着我国畜牧业逐步向 集约㊁高效 发展，奶牛㊁肉牛和肉羊生产盲目追求高产，为了提高生产效率大量饲喂以谷物淀粉为主的全混合日粮（ＴＭＲ）和颗粒饲料，从而改变了原有的饲粮中碳水化合物结构的平衡，导致以亚急性瘤胃酸中毒（ＳＡＲＡ）为主的代谢性疾病的发病率提高，也导致动物消化道和机体健康受损㊂这种饲养模式不仅消耗掉大量谷物粮食，而且对动物本身的消化道健康和环境带来负面影响，已成为我国反刍动物生产中的突出问题之一㊂本文结合本团队及国内外研究进展，围绕反刍动物饲粮中碳水化合物结构与能量高效利用和消化道健康的关系，采用系统整体营养调控措施提高饲料利用效率和改善健康方面进行综述，为反刍动物营养调控决策提供参考㊂１ 反刍动物饲粮结构与能量供给的特点㊀㊀反刍动物由于在长期的进化中形成独特的消化系统，其前胃（包括瘤胃和网胃）栖居有大量的微生物，能够消化和利用大量的富含纤维素和半纤维素的植物来源的碳水化合物㊂反刍动物的消化生理是以微生物消化为主要特点，其体内能量的前体物是由瘤胃微生物发酵所产生的挥发性脂肪酸（ＦＶＡ）为主，而单胃动物（猪和家禽体）能量的前体物是以葡萄糖为主㊂碳水化合物中纤维性碳水化合物（ＦＣ）的作用是维持瘤胃健康和为机体提供能量；而非纤维性碳水化合物（ＮＦＣ）的作用是为瘤胃微生物提供能量和为机体提供能量，其次是提供葡萄糖㊂碳水化合物转化为乙酸㊁丙酸１０期王洪荣：反刍动物碳水化合物代谢利用机制及消化道健康的系统营养调控研究进展和丁酸能量利用效率分别为６２％㊁１０９％和７８％，可见瘤胃丙酸发酵是机体和微生物能量利用效率最高的发酵方式［１－２］㊂符合反刍动物消化生理特点的饲粮结构要以纤维性碳水化合物为主，非纤维性碳水化合物为辅，这样才能保证反刍动物的消化道健康㊂饲粮中纤维物质在反刍动物营养生理中发挥重要作用，同时对维持正常瘤胃功能和保持动物消化道健康有着不可替代的作用㊂正是反刍动物能够大量利用粗饲料的特点，反刍动物可以将人类不能直接利用的低质粗饲料转化为畜产品而为人类服务，这也是世界各国大力发展反刍动物，作为节粮型畜牧业发展的优势所在㊂在反刍动物生产中也需要根据其基本的消化生理特点合理配制饲粮，才能保证反刍动物生产的健康发展㊂２㊀饲粮中碳水化合物结构对能量利用效率和消化道健康的影响２．１㊀饲粮中瘤胃可降解淀粉（ＲＤＳ）评价㊀㊀根据饲粮的碳水化合物在反刍动物体内转化为能量的速度，可将其分为快速能量物质和慢速能量物质㊂非纤维性碳水化合物属于快速能量物质㊂其中，ＲＤＳ是决定反刍动物消化道健康与养分利用的关键饲粮因子［３］㊂正常情况下，瘤胃内碳水化合物代谢的主要产物为乙酸（５５％ ７０％）㊁丙酸（１６％ ２５％）㊁丁酸（８％ １０％）和少量支链脂肪酸，其比例随饲粮精粗比而变化㊂正常情况下，瘤胃内有机酸的产生和利用保持平衡，中和酸度主要通过唾液分泌㊁瘤胃上皮吸收有机酸㊁瘤胃液外流稀释和代谢途径来完成㊂如果动物采食大量富含谷物淀粉的快速能量物质则会引起ＳＡＲＡ㊂瘤胃对酸度变化的缓冲能力受内源因素和饲粮因素的影响，内源缓冲能力主要由动物的唾液分泌量决定；饲粮缓冲能力主要由饲粮中的中性洗涤纤维（ＮＤＦ）水平和饲粮阴阳离子差决定㊂国内外学者在饲粮精粗料比例对瘤胃微生物代谢的影响以及ＳＡＲＡ的发生方面进行了大量研究㊂近年来，在反刍动物饲粮结构，特别是碳水化合物类型对ＳＡＲＡ发生的影响方面也进行了研究㊂研究普遍认为保持瘤胃微生物区系的稳定是维持瘤胃酸度平衡和健康的关键所在㊂非纤维性碳水化合物中的不同组分（蔗糖㊁果胶㊁淀粉和抗性淀粉）对瘤胃发酵的影响存在差异，与淀粉相比，可溶性糖（如蔗糖）发酵产生的丁酸较多，果胶发酵产生乙酸较多㊂另外，据报道不同类型的碳水化合物饲粮其在瘤胃中的发酵速度不同，如可溶性糖㊁淀粉㊁半纤维素及纤维素被降解的时间分别为１２ ２５ｍｉｎ㊁１．２ ５．０ｈ㊁８ ２５ｈ㊁２４ ９６ｈ，即使是同类型饲粮因其淀粉结构（支链淀粉和直链淀粉）不同而其代谢的时间与方式也不尽一致，如小麦淀粉和马铃薯淀粉的瘤胃降解速率分别为每小时３４％和５％；软粒小麦比硬粒小麦在瘤胃内发酵产生的乳酸少［４］㊂饲粮中碳水化合物在瘤胃中的降解速度和代谢产物可改变瘤胃微生物区系，也可以影响瘤胃微生物对有机酸代谢的途径㊂通过饲粮加工可改变饲粮中淀粉的瘤胃降解率，从而改变进入小肠淀粉的量㊂过瘤胃淀粉在胰腺α－淀粉酶的作用下生成葡萄糖，是反刍动物代谢葡萄糖中外源葡萄糖的最主要来源㊂提高饲粮中淀粉的过瘤胃率和过瘤胃淀粉的消化率，可提高淀粉的能量利用效率㊂当淀粉的小肠消化率低于７０％时，在保证瘤胃健康的前提下，提高ＲＤＳ的量可提高淀粉能量利用效率㊂然而，小肠淀粉的利用率会受到小肠中胰淀粉酶的分泌量限制㊂淀粉在小肠水解过程中生成的葡萄糖比在瘤胃中生产有机酸的供能效率高约４２％［５－６］，因此，在生产应用中可适当提高过瘤胃淀粉量来提高淀粉的能量利用率，但过多的过瘤胃淀粉会降低淀粉的小肠消化率，未消化的淀粉随粪便排出体外又会造成能量损失，降低动物生产性能［７］㊂综合淀粉在瘤胃㊁小肠和大肠降解特点及其对反刍动物的能量供应差异，姚军虎等［３］提出饲粮淀粉能量利用效率（ＳＥＦ）公式：ＳＥＦ（％）＝０．７ＲＤＳ＋１．０ＳＩＤＳ＋０．４ＬＩＤＳ，式中ＲＤＳ㊁ＳＩＤ和ＳＬＩＤＳ分别为瘤胃㊁小肠和大肠降解淀粉量占动物总淀粉摄入量的百分比（％）㊂假设淀粉在小肠内完全消化吸收的能量效率为１，已知淀粉在瘤胃内降解利用的能量利用效率为小肠的０．７倍，淀粉在大肠内降解利用的能量利用效率为小肠的０．４倍㊂胰腺α－淀粉酶分泌不足是限制过瘤胃淀粉在小肠消化率的最关键因素㊂于志鹏［８］研究发现，一些功能性氨基酸如亮氨酸和苯丙氨酸均能促进α－淀粉酶分泌，有助于提高淀粉在小肠的利用率㊂大肠对全肠道淀粉消化率的贡献比瘤胃和小肠低，淀粉在大肠发酵的能量利用效率仅为小肠的４０％，是能量利用效率最低的淀粉消化位点［６］，要避免大量淀粉进入７８６４㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷大肠发酵㊂但大肠对动物生产和健康具有同样重要的影响㊂大肠贡献反刍动物消化道吸收总挥发性脂肪酸的８％ １７％，提供５％ １０％代谢能［９］㊂因此，在生产实践中，除考虑饲粮淀粉含量外，还需要综合考虑胃肠道不同位点（瘤胃和小肠）淀粉的降解率与能量利用效率㊂２．２㊀饲粮中有效纤维的评价㊀㊀饲粮中纤维物质包括所有非淀粉多糖（ＮＳＰ）和果胶，属于慢速能量物质㊂纤维的物理和化学特性与其在动物体内消化活动以及消化酶的作用关系密切，ＮＤＦ含量在很大程度上影响瘤胃正常功能发挥与健康，饲粮的物理与化学特性在很大程度上影响动物对饲粮的咀嚼㊁反刍时间㊁流通㊁饲料利用率和瘤胃酸碱平衡，与消化道健康和ＳＡＲＡ的发生有密切关㊂Ｍｅｒｔｅｎｓ［１０］提出物理有效纤维（ｐｅＮＤＦ）的评价指标，将饲粮中纤维长短与动物咀嚼能力和反刍次数相联系，将宾州筛（ＰＳＰＳ）应用于饲料粒度的测定㊂ｐｅＮＤＦ水平过低或饲料颗粒太小也是引起ＳＡＲＡ的重要因素㊂奶牛饲粮中充足的ｐｅＮＤＦ是维持其瘤胃健康和牛奶中乳脂率恒定所必需的㊂当饲粮淀粉含量大于２８％（干物质基础）㊁精粗比例大于５５％㊁饲粮纤维含量过低，如ＮＤＦ小于２５％和来源于粗饲料的ＮＤＦ小于１９％时，均可引发ＳＡＲＡ㊂Ｗａｎｇ等［１１］采用以长㊁中㊁短不同长度的羊草为基础的不同ｐｅＮＤＦ水平的饲粮饲喂后备奶牛，获得８ １０月龄后备奶牛最佳生长发育和瘤胃健康的饲粮ｐｅＮＤＦ＞８．０为１８％㊂Ｙａｎｇ等［１２］测定了奶牛饲粮中不同ｐｅＮＤＦ水平对咀嚼时间㊁瘤胃酸度㊁ＮＤＦ消化率㊁产乳量和乳脂率的影响，发现增加饲粮ｐｅＮＤＦ水平可延长动物咀嚼时间，但不能保证提高瘤胃液ｐＨ㊂尽管ｐｅＮＤＦ评价指标系统在反刍动物饲粮纤维有效性评价技术方面有很大的进步，但也存在一些局限性，主要是测定饲料粒度的筛的标准化㊁计算以干物质还是以饲喂时风干状态为基础㊁ＮＤＦ是否均匀分布及其受饲料中水分含量的影响等；该系统没有考虑影响反刍时间的粗饲料脆性和消化率；一些学者已经提出和采用饲粮中非粗饲料来源纤维（ＮＦＦＳ）作为饲粮有效纤维的评价指标；潮湿和干燥状态下的粗饲料对反刍活动和唾液分泌量的影响存在较大差异，但采用ｐｅＮＤＦ指标却没有区分度㊂因此，ＮＲＣ（２００１）中未将ｐｅＮＤＦ指标列入饲粮碳水化合物指标㊂最近，一些学者［１３－１４］提出校正物理有效纤维（ｐａＮＤＦ）指标，采用ＰＳＰＳ测定饲料粒度，并用瘤胃可降解ＮＤＦ（ｄＮＤＦ）㊁瘤胃可降解淀粉（ｄＳｔａｒｃｈ）㊁粗饲料源ＮＤＦ（ｆＮＤＦ）和粒度脆性指标建立用于预测年干物质采食量㊁反刍时间和瘤胃酸度的模型㊂Ｍｅｒｔｅｎｓ［１５］也提出潜在可消化中洗纤维（ｐｄＮＤＦ）和不可消化中洗纤维（ｉＮＤＦ）的指标，即纤维消化率＝ｐｄＮＤＦˑ［ｋｄ／（ｋｄ＋ｋｐ）］㊂今后建立一种在国际上统一的反刍动物饲粮有效纤维评价方法势在必行㊂２．３㊀饲粮碳水化合物结构对瘤胃微生物菌群及其代谢的影响２．３．１㊀瘤胃微生物区系的变化㊀㊀高谷物精料饲粮会诱发反刍动物瘤胃微生物区系发生显著变化，通常表现为在门水平上引起瘤胃中优势菌群发生变化，使厚壁菌门数量增加，拟杆菌门㊁变形菌门和放线菌门数量减少㊂饲喂高精料饲粮的奶牛瘤胃液中牛链球菌和乳酸杆菌数量分别提高３．６２％和４．６５％，溶纤维丁酸弧菌和埃氏巨型球菌的数量分别降低１．１４％和４．９０％［１６］㊂在高精料饲粮条件下，奶牛易发生ＳＡＲＡ，同时发现由于高精料型碳水化合物结构饲粮可致使瘤胃液ｐＨ降低，进而导致瘤胃菌群结构失衡；瘤胃上皮乳头出现肿大㊁角质层脱落等异常状态［１７］㊂２．３．２㊀高精料饲粮激活瘤胃微生物的乳酸代谢通路㊀㊀高精料饲粮会引起瘤胃内微生物紊乱，特别是乳酸产生菌与乳酸利用菌之间的菌群失衡而导致瘤胃内乳酸积累，这是诱发ＳＡＲＡ的直接原因［１７］㊂瘤胃中乳酸产生菌主要包括溶纤维丁酸弧菌㊁牛链球菌㊁乳酸杆菌等；乳酸利用菌主要包括反刍兽新月单胞菌㊁埃氏巨形球菌等，二者之间的平衡状态决定了瘤胃中乳酸的积累程度㊂当反刍动物摄入大量可溶性碳水化合物后，几乎所有瘤胃微生物均加速生长㊂牛链球菌在诱发ＳＡＲＡ中至关重要，该菌在不同的ｐＨ条件下所代谢的产物不同，当ｐＨ低于６．０时，则激活该菌的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性，同时抑制其丙酮酸甲酸裂解酶（ＰＦＬ）的活性，激活乳酸代谢通路后将以乳酸为代谢终产物［１８］；当ｐＨ高于６．０时，牛链球菌快速繁殖的代谢产物是乳酸，而缓慢生长则以产乙酸㊁甲酸和乙醇为主；如果在反刍动物生产中长期饲喂８８６４１０期王洪荣：反刍动物碳水化合物代谢利用机制及消化道健康的系统营养调控研究进展以谷物为主的高精料饲粮，牛链球菌可将淀粉和可溶性糖快速地分解为乳酸的比例增加，那么瘤胃乳酸浓度维持一定水平，瘤胃液ｐＨ长时间（３ｈ／ｄ）维持在５．０ ５．５，将诱发ＳＡＲＡ㊂大部分乳酸可被乳酸利用菌代谢转化为丙酸和乙酸，然而，当瘤胃液ｐＨ低于５．０时乳酸利用菌受到抑制，就会造成乳酸积累［１９］㊂在集约化养殖条件下，以淀粉为主的高精料饲粮的饲养方式会引起反刍动物瘤胃中牛链球菌快速增殖和发酵产生大量乳酸，造成乳酸积累，加速ＳＡＲＡ进程［２０－２１］㊂Ａｓａｎｕ⁃ｍａ等［２２］研究发现，牛链球菌糖酵解产酸主要倾向乳酸和甲酸㊂瘤胃中超过７０％的乳酸能被埃氏巨型球菌分解利用，埃氏巨型球菌酵解乳酸产物主要为丙酸㊁丁酸及少量的乙酸㊁戊酸等㊂瘤胃中乳酸的分解代谢主要有３条通路：琥珀酸途径㊁丙烯酸途径㊁乙酸和丁酸途径（图１）㊂图１㊀瘤胃中乳酸的代谢途径Ｆｉｇ．１㊀Ｍｅｔａｂｏｌｉｃｐａｔｈｗａｙｓｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｉｎｒｕｍｅｎ［２３］㊀㊀埃氏巨型球菌利用乳酸可产生丙酸，主要通过丙烯酸途径和琥珀酸途径［２４］㊂在不同饲粮条件下的乳酸利用途径存在差异，瘤胃中ｐＨ是决定乳酸代谢途径的关键㊂常规饲粮条件下，瘤胃中乳酸主要经琥珀酸途径或者由乙酸和丁酸途径进行代谢，乳酸经由对应的ＬＤＨ转化为丙酮酸，进入三羧循环后生成丙酸；丙酮酸也可能生成乙酸和丁酸㊂而在高精料饲粮条件下，乳酸主要经过丙烯酸途径，生成乳酰辅酶Ａ，随后脱水生成丙烯酰辅酶Ａ，最终丙烯酰辅酶通过加氢作用被还原为丙酸㊂㊀㊀高谷物精料型碳水化合物结构的饲粮会引起瘤胃内ｐＨ降低㊂本团队Ｃｈｅｎ等［２５］的研究发现底物浓度相同，ｐＨ分别在５．５（发生ＳＡＲＡ）和６．５（正常生理状态）条件下，牛链球菌的增殖速率有所差异，且其产酸模式受ｐＨ的调控㊂瘤胃酸度对牛链球菌糖酵解产酸起到调控作用，主要是因为酵解产酸过程中相关酶的活性随ｐＨ的变化被不同程度地抑制或激活㊂除对酶的活性影响外，ｐＨ还可从转录水平调控ＬＤＨ合成㊂Ａｓａｎｕｍａ等［２６］研究发现培养基ｐＨ会影响ＬＤＨ的转录水平㊂但其信号通路或者感应机制介导途径仍有待进一步研究㊂由于乳酸代谢产生ＡＴＰ的效率明显低于其他有机酸，这样会降低谷物能量的利用效率㊂２．４㊀高淀粉饲粮诱发瘤胃异常代谢产物形成㊀㊀高谷物饲粮诱发ＳＡＲＡ后，瘤胃代谢紊乱，使瘤胃中Ｇ－菌死亡崩解而产生大量异常代谢产物［包括细菌内毒素（ＬＰＳ）㊁组胺㊁酪胺㊁色胺㊁乙醇胺㊁亚硝基二甲胺和Ｄ－乳酸等］［２７］㊂这些异常代谢产物会引起消化道炎症反应而影响消化道上皮结构的完整性；当奶牛发生ＳＡＲＡ时，瘤胃中低ｐＨ和高渗透压可能导致瘤胃复层扁平上皮的结构受损，降低细胞颗粒层间的紧密连接［２８］，因此，在饲喂高精料诱发ＳＡＲＡ时，瘤胃上皮和肠上皮９８６４㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷屏障功能受损，消化道中产生的ＬＰＳ可能同时通过瘤胃壁和肠壁而转移至循环系统，导致ＬＰＳ渗透性增强，使得大量革兰氏阴性菌死亡崩解释放的ＬＰＳ被吸收入血，形成内毒素血症［２９－３１］㊂㊀㊀组胺是一种结构简单的化学信号分子和自体活性物质，其与组胺受体（ＨＲ）结合可改变细胞的生物活性，发挥广泛的生理或病理作用［３２］㊂在酸性条件下，组胺由组氨酸脱羧酶作用于组氨酸而产生㊂当奶牛采食高精料饲粮时，导致瘤胃内不同种类细菌促使组氨酸脱羧，组胺浓度升高［３３］㊂组胺可以通过瘤胃壁和肠壁转运至血液㊂生理状体下，进入机体的微量组胺可通过肝脏的甲基化或氧化作用迅速转化为非活性物质从尿液排出体外［３４］㊂当ＳＡＲＡ发生时，血液中组胺浓度升高会造成胃肠道紧密连接蛋白和内嵌蛋白表达下调以及上皮细胞凋亡速率提高［３５］，黏膜和上皮细胞损伤，屏障功能下降，导致组胺和ＬＰＳ转运增加，进而加重ＳＡＲＡ㊂乙醇胺是由瘤胃中革兰氏阴性菌大量死亡和瘤胃上皮细胞更新产生，可通过为肠道中致病菌供给碳源和氮源促进其在肠道定植，进而发挥致病作用㊂２．５㊀高淀粉饲粮诱发动物发生炎症反应及免疫反应㊀㊀高精料型碳水化合物结构饲粮诱发消化道内产生大量的ＬＰＳ，通过瘤胃或小肠吸收而进入血液循环系统运送至其他组织和器官，从而引起炎性反应和免疫反应，也可能沉积在乳㊁肉畜产品中而影响畜产品的品质，增加畜产品的安全风险㊂血液中的ＬＰＳ可激活核因子－κＢ（ＮＦ⁃κＢ）通路而引起炎症反应［３６］㊂同时，ＬＰＳ也可诱导细胞因子的表达而激活免疫系统㊂奶牛发生ＳＡＲＡ后，外周血中白细胞数在２４ｈ时内增加１１ˑ１０３个／μＬ，中性粒细胞比例提高３５％，淋巴细胞比例降低３３％［３７］㊂有研究也表明，高精料（６３％）饲粮相对于低精料（４１％）饲粮，能诱发奶牛血中白细胞㊁中性粒细胞和ＣＤ１４细胞数量显著升高［３８］㊂另有报道，ＳＡＲＡ会导致奶牛外周血中急性期蛋白（血清珠蛋白㊁内毒素结合蛋白等）含量上升［３９］㊂㊀㊀组胺可以作为一种炎症信号，促进细胞表达和释放炎症因子㊂Ａｓｃｈｅｎｂａｃｈ等［４０］研究发现，外周血中组胺含量将会随着瘤胃内产生的组胺增加而增加；另有研究表明，奶牛瘤胃内高浓度的组胺可以激活瘤胃上皮细胞的ＮＦ⁃κＢ信号通路，引起奶牛瘤胃上皮细胞的炎症损伤［４１］㊂组胺是通过与组胺受体（Ｈ１Ｒ㊁Ｈ２Ｒ㊁Ｈ３Ｒ和Ｈ４Ｒ）结合而产生的㊂组胺与Ｈ１Ｒ结合，主要诱导或增强炎症反应；与Ｈ２Ｒ结合，主要抑制或减弱炎症反应［４２］㊂组胺对机体免疫系统也有广泛的调节作用，并调节先天和获得性免疫㊂组胺通过其受体主动参与抗原递呈细胞（树突状细胞，ＤＣ）各分化阶段的功能和活化，与Ｈ１Ｒ和Ｈ３Ｒ结合诱导未成熟ＤＣ的钙内流㊁肌动蛋白聚合，提高ＤＣ的趋化活性，增强其细胞递呈抗原㊁合成促炎性细胞因子及激活辅助性Ｔ细胞（Ｔｈｌ）的能力㊂相反，Ｈ２Ｒ抑制其抗原递呈能力，抑制单核细胞合成肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ⁃α）㊁白细胞介素－１２（ＩＬ⁃１２）及白细胞介素－１８（ＩＬ⁃１８）等促炎性细胞因子，促进白细胞介素－１０（ＩＬ⁃１０）等抗炎性细胞因子的合成，并诱导合成ＩＬ⁃１０的Ｔ细胞（或Ｔｈ２细胞）增殖［４３］㊂成熟ＤＣ的这些反应丧失，但组胺仍可以通过Ｈ２Ｒ剂量依赖性增加成熟ＤＣ内环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）水平并刺激ＩＬ⁃１０分泌，同时抑制ＤＣ的ＩＬ⁃１２合成［４４］㊂３㊀采用系统整体营养调控技术措施提高饲粮中碳水化合物利用效率和消化道健康的研究进展３．１㊀饲粮结构和组成平衡调控㊀㊀生命在于平衡，营养平衡是动物健康的基础㊂中国最早的典籍之一‘黄帝内经“中记载有 五谷为养，五果为助，五畜为益，五菜为充，气味合而服之，以补精益气 ㊂这里强调的是食物的综合平衡㊂动物机体内营养平衡是保证动物获得较好的饲粮利用效率㊁理想的生产性能和良好的健康状况的重要技术指标㊂从系统动物营养学多层次营养平衡理论［４５］的角度出发，从饲粮层次㊁消化道层次和代谢层次（肝脏和外周组织）３个水平考虑调控反刍动物对饲粮碳水化合物的高效利用㊂在饲粮层次上，徐明［６］提出采用饲粮中碳水化合物平衡指数，即物理有效纤维与饲粮中瘤胃可降解淀粉比值（ｐｅＮＤＦ／ＲＤＳ）来调控饲粮中碳水化合物结构的平衡，研究确定泌乳牛和泌乳山羊的适宜ｐｅＮＤＦ／ＲＤＳ为１．０ １．１，育肥牛ｐｅＮＤＦ／ＲＤＳ为０．２５㊂Ｓｕｎ等［４６］将饲粮中物理有效纤维与代谢葡萄糖比值（ｐｅＮＤＦ／ＭＧ）应用于８ １０月龄后备奶牛的生长发育评定，确定最佳比值为１．４６㊂在消化道层次上，在维持瘤胃微生物高效发酵的前提０９６４１０期王洪荣：反刍动物碳水化合物代谢利用机制及消化道健康的系统营养调控研究进展下，通过调控淀粉的降解和消化部位以及粗饲料的能量利用来提高碳水化合物的利用效率㊂在代谢层次上，通过调控Ｃ２＋Ｃ４能和Ｃ３＋Ｃ６能占摄入代谢能的比例，为机体有效地提供葡萄糖（ＭＧ），并进一步提高碳水化合物利用效率；另外，动物体内的渗透压平衡㊁酸碱平衡㊁氧化平衡和免疫平衡是重要的生理基础，与体内碳水化合物的代谢㊁吸收㊁利用密切相关，在实施营养调控技术中必须加以重视㊂㊀㊀充足的纤维供给是反刍动物唾液分泌㊁反刍㊁瘤胃缓冲和瘤胃壁健康所必需的㊂在生产实际中依据动物的生产目标，通过调控碳水化合物组成来制定合理平衡的饲粮结构和预期采食量，包括ＲＤＳ㊁中性洗涤纤维（ＮＤＦ㊁ｐｅＮＤＦ）㊁有机酸等组分的合理结构㊂以奶牛为例，ＮＲＣ（２００１）颁布的标准中推荐泌乳奶牛饲粮中碳水化合物结构平衡的推荐量，详见表１㊂即在ＮＲＣ（２００１）奶牛饲养标准中提出：采用饲粮中非纤维性碳水化合物与中性洗涤纤维比例（ＮＦＣ／ＮＤＦ）作为评价奶牛饲粮中碳水化合物平衡的标准，并提出奶牛饲粮中７５％的ＮＤＦ应来源于粗饲料，饲粮中ＮＦＣ含量最高不超出４４％，这样保证饲粮中ｐｅＮＤＦ的充足含量㊂在奶牛和肉牛的饲养实践中，以美国为先导的世界上许多国家在奶牛饲粮配制方法上推广使用科学的ＴＭＲ，以保证饲粮中的ｐｅＮＤＦ含量，饲粮中淀粉含量在２２％以下，最大限度地预防ＳＡＲＡ的发生㊂表１㊀泌乳奶牛饲粮中碳水化合物结构（ＮＦＣ／ＮＤＦ）平衡的推荐量（ＮＲＣ，２００１）Ｔａｂｌｅ１㊀Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（ＮＦＣ／ＮＤＦ）ｉｎｄｉｅｔｓｏｆｌａｃｔａｔｉｎｇｄａｉｒｙｃｏｗｓ（ＮＲＣ，２００１）项目Ｉｔｅｍｓ泌乳初期Ｅａｒｌｙｌａｃｔａｔｉｏｎ泌乳中期Ｍｉｄｄｌｅｌａｃｔａｔｉｏｎ泌乳后期Ｌａｔｅｌａｃｔａｔｉｏｎ粗饲料中性洗涤纤维ＮＤＦｉｎｆｏｒａｇｅ／％ＤＭ２１ ２４２５ ２６２７ ２８饲粮中性洗涤纤维ＮＤＦｉｎａｄｉｅｔ／％ＤＭ２８ ３２３３ ３５３６ ３８非结构性碳水化合物ＮＳＣ／％ＤＭ３２ ３８３２ ３８３２ ３８非结构性碳水化合物／中性洗涤纤维ＮＳＣ／ＮＤＦ１．１４ １．１９０．７９ １．０９０．８９ １．００㊀㊀Ｐｌａｉｚｉｅｒ等［４７］在其综述中提出饲粮中ｐｅＮＤＦ低于１２．５％时就会发生ＳＡＲＡ㊂Ｚｅｂｅｌｉ等［４８］用４５个试验的Ｍｅｔａ分析结果中指出：奶牛饲粮ｐｅＮＤＦ与ＲＤＳ的比值达到１．４５时可维持瘤胃液ｐＨ在６．２以上，以保证奶牛消化道的健康㊂淀粉在消化道不同部位消化的供能效率不同，谷物饲料原料理化特性和加工处理方法对消化部位有很大影响，要调控淀粉在消化道的最佳位点，适当提高饲粮中淀粉的过瘤胃率可提高淀粉的能量利用效率㊂３．２㊀谷物能量饲料原料预处理技术㊀㊀为充分发挥高产反刍动物生产性能，生产中常大量饲喂谷物饲料，以高淀粉增加饲粮能量水平㊂由于不同来源谷物的淀粉含量和瘤胃降解率有较大差异，常用谷物的有效降解率顺序为燕麦＞小麦＞大麦＞玉米＞高粱㊂对谷物进行预处理可以在一定程度上提高谷物的消化率和能量利用率，也可预防和缓解ＳＡＲＡ，目前对谷物的预处理技术主要有：物理处理（如制粒㊁膨化㊁烘焙㊁爆破㊁蒸汽压片㊁包衣等）㊁化学处理（如酸碱法㊁氨化㊁化学修饰等）和生物学处理（如微生物㊁酶处理等）㊂多数物理处理谷物可提高谷物淀粉的瘤胃降解率和消化率，但烘焙加工后，淀粉与蛋白质结合形成复合结构，可降低淀粉的瘤胃降解率㊂部分物理加工方式可能会加快谷物在瘤胃内的发酵，诱发ＳＡＲＡ㊂Ｓｈｅｎ等［４９］运用有机酸处理谷物在调控瘤胃发酵㊁缓解瘤胃酸中毒方面显示出正效应㊂最近有研究表明，有机酸不仅可以用作饲料添加剂，还可直接作用于反刍动物的谷物精料，通过增加精料中的瘤胃抗性淀粉的含量来改善瘤胃发酵，提高瘤胃液ｐＨ等，从而在缓解ＳＡＲＡ方面发挥重要的作用㊂这里值得注意的是谷物粉碎程度和粒度对淀粉利用和消化道健康会产生很大影响，特别是在生产应用谷物时不宜粉碎太细，甚至在低精料饲粮条件下可整粒饲喂玉米㊂对谷物原料进行预处理，不仅可以提高过瘤胃淀粉的量，也可提高淀粉能量的利用效率，而且有助于保证瘤胃健康，从而改善反刍动物健康状况和生产性能㊂但是在生产应用时仍需进一步进行成本与效益的综合评估㊂１９６４。
在反刍动物体内代谢PPT课件
分别是： 缬氨酸 脯氨酸 异亮氨酸 亮氨酸
异丁酸 戊酸 2-甲基丁酸 3-甲基丁酸
2 影响SCFA组成的因素
日粮 动物品种
参考文献 Leng and Brett （1966）
韩继福等 （1998）
杨红建，冯仰廉 （2003）
张吉鹍，卢德勋等 （2005）
赵国琦，贾亚红 等 （2006）
日粮
结果
用11只绵羊测得4种日粮的SCFA的摩尔百分数 很相近，分别为乙酸65％，丙酸20％，丁酸9 ％，其他6％
SCFA在反刍动物体内代谢 机制的研究概况
主要内容
前言 SCFA的生成及影响组成的因素 SCFA代谢理论 研究内脏代谢的新方法 结语 参考文献
前言
据预测到2010、2020、2030年， 我国粮食产量的38％、43％和50％将用作 饲料， 2010年－2020年，我国能量饲料的 缺口为4300万吨-8300万吨，蛋白质饲料缺 口为2400万吨-4800万吨左右。
这对瘤胃上皮大量氧化SCFA的观点提出 了挑战。
Table 1 Portal vein recovery(％) of SCFA infused
into a functional rumen of sheep or into the
washed rumen of sheep or steers
Item
乙酸/丙酸比随NDF/NFE比的降低而减小
动物品种
不同动物VFA比较（％）
动物 季节 方式 乙酸 丙酸 丁酸 材料来源
山羊 水牛 牦牛
青草期 放牧 春夏秋 放牧 青草期 放牧
69.69 54.26 46.30
20.40 19.30 26.17
8.12 秦为琳，
反刍动物主要养分代谢模型化研究进展_1_
反刍动物主要养分代谢模型化研究进展熊本海，杨亮，杨露中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室摘要：本文从动物营养模型化的优势及反刍动物营养模型化的研究进展分析着手，简述了“关于模型化农业动物的养分利用”国际工作组近20年开展的学术研究进展，并着重分析了泌乳奶牛的养分代谢与转化的典型模型研究进展：主要包括干物质采食量模型、荷斯坦奶牛的泌乳曲线模型、瘤胃挥发性脂肪酸(VFAs)的产生与吸收模型、小肠氨基酸吸收模型、饲料中脂肪酸代谢与转化定量模型、体贮的激素调控模型、乳腺代谢及乳成分产量及浓度的定量计算模型等。
文中所描述的模型具有的共同特点是与日粮的成分特性和/或奶牛的泌乳特性建立了关联，可通过模型预测实际生产指标。
由于从饲料养分到牛乳产品的转化、调控等生理过程的复杂性，决定了通过动态的、模型化的方法揭示这些转化过程是当今动物营养研究的又一主要方法。
因此，必须借助计算机计算系统的开发，才能揭示模型化计算的最终结果。
一、模型化研究的优势模型化技术是研究复杂系统的有力工具，是各门科学尤其是系统科学广泛使用的技术。
应用模型化技术的水平成为各门科学发展水平的标志。
它不仅是对该门科学过去的科研成果的总结和现有理论知识的整合，而且还是该门科学通向未来的起点。
概括起来，模型化技术有以下优势：第一，正确的模型可以使复杂系统和复杂问题的处理大为简化，且又能保证不会发生大的偏差。
第二，用模型化技术研究复杂系统，可以先研究其理想模型，然后再对模型的研究结果不断加以种种修正，使之逐步与实际情况完全相符为止。
第三，应用模型化技术可对现有理论知识进行整合，获得科学结论。
第四，模型化技术的运用，能使人们更好地发挥思唯的力量，揭示新的研究方向，形成新的科学预见。
二、反刍动物营养代谢模型化研究进展在动物营养的数学模型的构建即模型化研究领域，因反刍动物消化生理与代谢的复杂性，使得通过数学模型化研究与揭示养分在整个消化道的消化、吸收与转化的规律研究活动越来越活跃，尤其随着计算机与计算技术的发展，为复杂的机理或经验模型的建立及模块化的计算与优化提供了可能，使得进入本世纪以来，以奶牛为研究对象的采食量模型、泌乳曲线模型、能量与碳水化合物在全消化道的物质代谢与转化模型，以及通过神经内分泌的激素调控模型的研究报道呈现加速增加的态势，而且新近构建模型的系统性、集成度及参数的实例化程度逐步与实际生产相吻合，为动物模型化的研究结果指导实际生产提供了发展的空间。
代谢组学在反刍动物营养研究中的应用进展
代谢组学在反刍动物营养研究中的应用进展代童童;李耀坤;刘德武;柳广斌;孙宝丽【摘要】代谢组学是研究生物系统中所有代谢物的一门新兴学科.它能够检测生命系统中某一特定生物层次的所有代谢物的变化,并能够利用其特有的分析技术平台和数据分析平台对所得代谢物进行系统性度量.近年来,因其测试技术的广泛适用性,代谢组学逐渐被应用于反刍动物的营养学研究中.本文从瘤胃代谢组学、肝脏代谢组学、乳腺代谢组学和血液代谢组学等4个方面对代谢组学在反刍动物营养研究中的应用进展进行了综述.%Metabonomics is a new discipline which is applied to study all metabolites of biological systems.It can not only detect the changes of all metabolites of a particular biological system,but also systematically measure the metabolites by the means of its unique analytical platforms and data analysis platforms.Owing to its widely applicability,metabonomics has been employed to nutrition study of ruminants in recent years.In this paper,we reviewed the application of metabonomics in ruminant nutrition,including the metabonomics of the rumen,the liver,the breast and the blood.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2017(029)009【总页数】7页(P3044-3050)【关键词】代谢组学;反刍动物;营养;瘤胃;肝脏;乳腺;血液【作者】代童童;李耀坤;刘德武;柳广斌;孙宝丽【作者单位】华南农业大学动物科学学院,草食动物研究室,广州 510642;华南农业大学动物科学学院,草食动物研究室,广州 510642;华南农业大学动物科学学院,草食动物研究室,广州 510642;华南农业大学动物科学学院,草食动物研究室,广州510642;华南农业大学动物科学学院,草食动物研究室,广州 510642【正文语种】中文【中图分类】S811.3代谢组学是系统生物学的一个分支，它以族群指标分析为根本，以数据建模和系统整合为标的，通过检测内源性代谢物整体变化的轨迹来反映病理、生理过程[1]。
牛羊反刍技术实验报告范文(3篇)
第1篇一、实验名称牛羊反刍技术实验二、实验日期和地点2023年X月X日，XX农业大学畜牧实验中心三、实验目的1. 了解牛羊反刍机制的基本原理。
2. 掌握牛羊反刍的观察方法。
3. 分析影响牛羊反刍效率的因素。
4. 评估不同饲料对牛羊反刍性能的影响。
四、实验原理反刍是牛羊等反刍动物特有的消化过程，通过将食物逆流至口腔进行再次咀嚼和混合唾液，提高食物的消化率。
本实验旨在通过观察牛羊的反刍行为，分析反刍效率，并探讨饲料类型对反刍性能的影响。
五、实验内容1. 观察牛羊反刍行为。
2. 记录反刍次数和持续时间。
3. 分析不同饲料对反刍性能的影响。
4. 评估反刍效率。
六、实验步骤1. 准备阶段- 选择健康牛羊各3头，随机分为A、B、C三组，每组1头。
- A组：基础饲料（玉米秸秆、麦麸、豆粕等）。
- B组：高蛋白饲料（玉米秸秆、麦麸、豆粕、豆饼等）。
- C组：低纤维饲料（玉米秸秆、麦麸、豆粕、玉米等）。
2. 观察阶段- 在牛羊进食后1小时内，观察并记录反刍次数和持续时间。
- 观察时注意牛羊的反刍行为，如口腔活动、舌部运动等。
3. 数据分析- 对A、B、C三组牛羊的反刍次数和持续时间进行统计分析。
- 比较不同饲料对反刍性能的影响。
七、实验结果1. A组牛羊反刍次数为（X）次，持续时间为（Y）分钟。
2. B组牛羊反刍次数为（X+Z）次，持续时间为（Y+Z）分钟。
3. C组牛羊反刍次数为（X+W）次，持续时间为（Y+W）分钟。
八、实验分析1. 从实验结果可以看出，高蛋白饲料组（B组）的反刍次数和持续时间均高于基础饲料组（A组）和低纤维饲料组（C组）。
2. 分析原因：高蛋白饲料含有较高的蛋白质和能量，有利于刺激牛羊的反刍行为，提高反刍效率。
3. 反刍效率与饲料类型、牛羊品种、环境等因素有关。
九、实验结论1. 高蛋白饲料有利于提高牛羊的反刍性能。
2. 在实际养殖过程中，应根据牛羊的生长阶段和营养需求，合理搭配饲料，以提高饲料转化率和经济效益。
反刍动物碳水化合物代谢调控(经典
2020/6/4
16
1 碳水化合物平衡指数的构建
碳水化合物平衡指数的计算和推荐标准
• 指数的推荐形式：peNDF/RDS或（RDS-peNDF）？ • 计算方法: CBI= peNDF/RDS • 泌乳牛推荐标准: CBI=1.0±0.1 • 育肥牛推荐标准: CBI=0.25±0.05
麦秸
77.9 188.4b 1.73 2.36 4.09a 6.20a
P
** **
NS NS
* *
20
1.1 粗饲料种类对物理有效性的影响
Chewing time (min/kg FNDF) l Rumen pH
4.2
Wheat straw 6.3
4
6.25
3.8
Corn silage
6.2
3.6
可能原因
①采食量差异; ②RDS和FNDF对瘤胃pH的影响程度
平衡指数 = RDS -FNDF
2020/6/4
14
1 碳水化合物平衡指数的构建
2020/6/4
摘自：徐明（2007）。
15
1 碳水化合物平衡指数的构建
结论
① [RDS(kg/d) – FNDF(kg/d)] 可统一育肥牛和泌乳牛 ② (RDS – FNDF)≤1.3 kg/d可保证瘤胃pH≥6.0
24
平衡指数对瘤胃液酶活性和养分有效降解率的影响
Enzyme activity (IU/ml)
Effective degradability (%)
3 2.5
2 1.5
1 0.5
0 0
1
2
Carbohydrate Balance Index
反刍动物营养学莫放3
-ct) (1-e
降解率的数学模型
100 75 降解% 50
ｄp = a + b (1-e-ct)
c
b
25
a 0
24
48 时 间 (小时）
72
降解率
饲料蛋白质在瘤胃的降解规律符合数学模型 dP=a+b(1-exp(-ct))， 其中• dP是t时间的蛋白质降解率， a是快速降解部分，b是慢速降解部分， c是b的速降速率。 根据最小二乘法的原理，应用计算机将被测饲料的的a、b、c 求得， 结 • 合饲料在瘤胃的外流速度K用公式 P=a+(bc)/c+K)计算该饲料的动态降解率Ｐ。 如表 饲料样本在不同时间点的降解率及动态降解率
甲醛处理对豆粕蛋白质的降解率有显著影响(P<0.05)。随 着甲醛用量的增加,豆粕蛋白质降解率明显下降。 表 不同甲醛水平处理豆粕对其蛋白质在瘤胃降解率(%) 的影响
甲醛水平g/100gCP 0.0 0.4 0.6 0.8 1.0 降解率 49.53±2.29a 40.66±2.79b 42.69±2.51b 39.70±1.11c 34.97±2.58d
反刍动物过瘤胃蛋白保护研究
⑶化学调控处理： 现在已有人投入大量人力物力寻找 可以减少蛋白质在瘤胃内降解的物质， 即抑制多肽水解和氨基酸脱氨作用如 添加脱氨酶抑制剂等。
反刍动物过瘤胃蛋白保护研究
（4）物理包被保护蛋白质 白蛋白包被保护 全血、乳清蛋白、卵清蛋白等富含白蛋白的物质 都能对蛋白质起到保护作用（程茂基等，1995； ORskov 等，1980；李爱科，1991），白蛋白在饲料 颗粒外可形成一层保护壳（Matsumoto 等到，1995）， 防止易溶蛋白在瘤胃内的扩散溶解，从而降低了被保 护的蛋白质饲料在瘤胃内的降解。 化合物、聚合物包被保护 依据瘤胃与皱胃ph差别， 把饲料用一些在中性或崩解的材料包裹起来。
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反刍动物营养试验手册-------消化代谢试验部分(修改版)反刍动物营养研究室中国农业科学院畜牧研究所二〇〇四年六月一日前言2003年在本研究室进行了为期四个月的奶牛消化代谢实验，实验操作过程中，采用了许多方法，成功失败皆有。
每每在失败之后方知实验操作之重要，经验积累之难得，于是便有了将这些看似简单的方法和提示落实于文字的想法，希望能给做相关实验的人员些许提示和帮助。
但毕竟能力有限，在实验过程中因力求细致准确而有因简就繁之嫌，有些文字表达方面过于累赘，错误和不当之处在所难免，同时，由于实验内容要求，所涉及的方法有限，所以这只能是抛砖引玉，希望大家能够不吝指出，并不断改进，使之逐渐完善！手册的形成是在导师王加启研究员指导督促以及实验室各位老师同学帮助下，集实验小组各成员（王吉峰博士、汪水平硕士和姚美蓉硕士）的工作结果而成！2002级博士研究生李树聪 2004年7月13日于反刍动物营养研究室目录饲料及其剩余料样品的采集______________________________________________1瘤胃液pH，NH3-N和VFA样品采集和保存__________________________________2瘤胃动态食糜样品采集和保存____________________________________________3分离瘤胃微生物样品采集________________________________________________4瘤胃原虫计数用样品的采集和保存________________________________________5乳样的采集和保存______________________________________________________6小肠液采集及其预处理__________________________________________________7粪样采集及其预处理____________________________________________________8尿样采集及其预处理____________________________________________________9瘤胃原虫计数方法_____________________________________________________10酸性洗涤不溶灰分的测定_______________________________________________12氨氮测定方法--氧化镁直接蒸馏法________________________________________13瘤胃液氨氮检测方法－靛酚比色法_______________________________________15瘤胃液VFA测定---气相色谱法___________________________________________18瘤胃微生物量测定方法-嘌呤碱基法______________________________________21 Co—EDTA 配制_______________________________________________________24铬染纤维的制备_______________________________________________________25原子吸收测定用容器洗涤方法___________________________________________27干法灰化食糜流量监测用指示剂（Co Cr Yb）测定________________________28湿法消化食糜流量监测用指示剂（Co Cr Yb）测定_________________________29瘤胃液中Co浓度的测定_________________________________________________30指示剂的配合和使用方法_______________________________________________31饲料及其剩余料样品的采集一、采样方法预试期每天饲喂时准确记录饲喂量，观察饲料采集速度，记录采食完85～95%饲料所需时间，调整剩余料采集时间。
每天早晨采集饲料样，采集量为精料5%，苜蓿干草10%，羊草10%，青贮饲料10%。
精料可以在配合完成时采集，但注意和配合好的饲料一同保存，在规定采样时间取回处理，以保证样品和实际摄入日粮成分一致。
采样过程中精料、苜蓿干草、羊草在常温保存；青贮料采样称重后及时65℃烘干测定初水份后保存，如不能及时烘干，及时密封放入冰箱冷冻保存。
采集完成后，各样品混合均匀，适当四分法缩样，风干，全部2mm筛粉碎，混合均匀，室温保存备用。
采集饲料样的同时收集剩余料，收集时间根据情况可定为采食完成后半小时至饲喂前半小时，准确称重，记录，取10-20%立即密封放入冰柜－20 ℃保存，四天采样完成后，混合均匀，65℃烘干，计算初水分后2mm粉碎，然后根据剩余料数量适当缩小样品，室温保存备用。
二、采样时间进入正试期后收粪或采集肠液之前一天开始采样，连续采集三～四天。
瘤胃液pH，NH3-N和VFA样品采集和保存一、采样方法各时间点从瘤胃均匀选取三----四个位点，共抽取瘤胃液200-300ml至抽滤瓶，轻轻摇匀，取约100ml，直接测定pH值后，四层纱布过滤。
其余瘤胃液倒回瘤胃（过量抽出主要为保证采样代表性）。
准确量取过滤后瘤胃液20ml，加入7.2N硫酸0.2ml，摇匀，分装为两份－20℃冷冻保存，用于测定VFA及其备用。
另取过滤后瘤胃液10ml，4℃保存，尽快用于测定NH3-N浓度。
二、采样时间早7:30(采食前)，9:30，11:30，13:30，15:30，17:30，19:30（采食前）。
瘤胃动态食糜样品采集和保存一、采集时间：第一天：07:30（采食前）， 08:30， 09:30，10:30， 11:30， 13:30， 15:30，17:30， 19:30（采食前），23:30第二天：07:30（采食前），11:30， 19:30（采食前）第三天：07:30（采食前），19:30（采食前）二、采集量及方法各时间点，瘤胃均匀选取四个位点，总共取瘤胃固相内容物500g左右到一洁净小桶中，搅拌均匀，再从中取100g，－20 ℃保存备用，其余放回瘤胃。
各时间点，瘤胃均匀选取四个位点，抽取瘤胃液500ml，摇匀后量取50ml，－20 ℃冷冻保存，其余瘤胃液倒回瘤胃。
备注：由于奶牛采食量及饮水量均很大，瘤胃内容物极其不均匀，采样时要严格操作，同时，注意每次采完样品的用具清洁干净，下次才可继续使用。
分离瘤胃微生物样品采集一、采集时间点：13:30 19:30 01:30第一天：07:3015:30 21:30 03:30第二天：09:3017:30 23:30 05:30第三天：11:30二、采集量及方法各时间点，瘤胃均匀选取四个位点，取瘤胃固相内容物约100g，-20℃保存。
各时间点，瘤胃均匀选取四个位点，抽取瘤胃液100ml，－20 ℃冷冻保存。
瘤胃原虫计数用样品的采集和保存一、采样方法从瘤胃均匀选取四个位点，抽取瘤胃液200ml至抽滤瓶，轻轻摇匀，取约30ml四层纱布过滤，其余瘤胃液倒回瘤胃。
准确量取过滤后瘤胃液10ml，加入20mlM.F.S.，轻轻摇匀，室温下保存备用。
注意：整个操作尽量在短时间完成；加入MFS液后能保存十周左右。
二、采样时间根据试验要求确定，以饲喂后二到三为佳。
乳样的采集和保存一、采样方法采样前搅拌均匀，乳样采样器缓慢插入奶桶，保证采样器内外样品一致，提起取样器取样，每头牛每次采集乳样总量1%（根据产奶量确定，大约0.5-1%），立即用乳品分析仪测定乳成分。
其余样品放入冰箱4 ℃保存，连续采集两天，每头牛两天样品混合均匀注意乳中脂肪比重较小，乳汁容易分层，操作要细致快速，混合均匀后尽快根据需要分装多份。
二、采样时间连续两～三天。
三、样品保存在－20 ℃冷冻保存。
小肠液采集及其预处理一、采集时间点：根据试验安排确定二、采集量十二指肠液100 ～150ml，回肠液50 ～100ml三、采集方法清洗瘘管口，打开塞子，将肠道内瘘管附近积存的食糜丢弃，然后开始采集肠液，手持烧杯，小心收集，尽量不要多采。
采集回肠液时间较长，可将烧杯悬挂到瘘管上，注意观察等待，足量后及时收集。
立即测定pH值后，装入贴好标签的塑料瓶中，正放入冰柜中－20 ℃冷冻保存。
全部采样结束后，混合均匀，取50ml立即用于测定氨氮，其余冻干保存。
粪样采集及其预处理一、采集时间：根据试验安排确定二、采集量及方法全收粪法：全量收集牛粪，测定重量，搅拌均匀，取20%放入塑料桶中搅匀，加6N盐酸10%（酒石酸等有机酸较好）。
定时按加酸粪量的20%采集样本，0~4 ℃冷冻保存。
直肠取粪：在采样时间点前后30分钟，奶牛排粪，则从无污染粪中搅拌均匀取样200g，否则在各时间点直肠取粪200g，搅拌均匀后，测定pH值。
此后，100g直接装入贴好标签的塑料袋中，放入冰柜中－20 ℃冷冻保存。
每期实验结束后，同一头牛所有样品混合均匀，取鲜样测定氨态氮及总氮。
其余样品65 ℃烘干，2mm粉碎，－20℃冰箱冷冻保存。
尿样采集及其预处理一、采集时间：连续全量收集两至三天。
每天缩样三～四次。
二、采集方法采用全收尿法，连续收集试验动物尿样。
收尿前先在集尿器内加入200ml6N盐酸，收尿期间适当摇动集尿器，在缩样时间点准确称量尿液重量，搅拌均匀后，润洗塑料量桶，用量桶准确取纱布过滤后样5%，装入贴好标签的塑料瓶中，4 ℃冰箱保存。
其余尿液丢弃，尿箱加酸后继续收集。
缩样前注意观察尿样，发现被粪污染或有阴道排出的粘液等时，该次样品只记录重量，不采样，同时做好记录。
采样结束后，将每头牛所有尿液混合均匀，留取200ml尿液，分装，-20℃冷冻保存。
瘤胃原虫计数方法一、试剂：染色液M.F.S. (Methyl green-formalin-sodium chloride)：35%福尔马林100ml、NaCl 8.0g、甲基绿0.6g、蒸馏水900ml。
磷酸缓冲液：氯化钠0.50%；无水乙酸钠0.13%；磷酸二氢钾0.03%；磷酸氢二钾0.10%；七水硫酸镁0.01%；pH6.9～7.2二、试验用品和设备大口吸管管口口径在1mm以上吸管计数板计数室深度约0.2mm以上（以保证大体积原虫正常进入）显微镜普通显微镜手动计数器吸水纸，擦镜纸，洗瓶，废液收集用烧杯等三、瘤胃液样品采集一般在采食后两小时，自瘤胃取样，也可根据试验安排定时取样，试验结果中须注明样品采集条件。