医院检验科过氧化氢酶(触酶)试验标准操作规程
医院检验中心过氧化物酶染色操作规程
医院检验中心过氧化物酶(POX)染色操作规程[原理]粒细胞和单核细胞脑浆内含过氧化物酶，能借助受体(联苯胺)脱氢催化过氧化氢而释放新生氧。
受体被氧化成联苯胺蓝。
再与亚硝基铁氰化钠结合成稳定的蓝色颗粒而沉淀于脑浆内。
[试剂]1．联苯胺溶液：联苯胺0．38，加36％亚硝基铁氰化钠溶液1ml，再取95％乙醇加到100ml，水浴加热助溶。
贮于棕色瓶中，可保存数月。
工作时应小心溶液污染皮肤。
2.稀双氧水：临用前将30％双氧水用蒸馏水1：80稀释。
[操作](1)新鲜干燥血片或骨髓片，加联苯胺液5—8滴，使布满整张涂片，固定1—2分钟。
(2)加等量稀双氧水，用吸球吹吸，使两液混匀，作用4—8分钟。
(3)涂片用流水冲洗。
待干后再用瑞氏染液复染，复染时间约30分钟。
[结果观察]可报告阳性程度或阳性细胞％。
阴性：无蓝色颗粒和蓝色物质。
弱阳性：蓝色颗粒量少且细小，相当于(十)。
阳性：‘蓝色颗粒量多，粗细不一。
相当于(++)。
强阳性：细胞充满粗大紧密蓝色颗粒。
相当于(+++）。
[临床意义](1)粒系统细胞除早期原粒细胞阴性外，晚期原粒细胞及以下各阶段细胞均含有不同程度的蓝色颗粒。
嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，呈深蓝色。
嗜碱性细胞为阴性。
(2)单核细胞中，除早期原始阶段外，皆呈弱阳性反应，其颗粒细小稀疏。
(3)某些网状细胞及吞噬细胞可呈不同程度的过氧化物酶阳性反应。
(4)所有淋巴细胞过氧化物酶染色皆为阴性。
(5)该化学染色是区别急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴细胞性白血病的关键化学染色。
FAB分型规定前者阳性率＜3％。
[附注](1)联苯胺溶液若明显变色发绿，应重新配制。
(2)亚硝基铁氰化钠溶液也可在临用前取0．368溶解于1ml蒸馏水中，加热助溶后应用。
(3)双氧水浓度若过高，则有抑制酶作用。
双氧水浓度太高、制片太厚、涂片冲洗不净以及粒细胞破坏过多，可造成假阳性。
涂片中粒细胞若看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示双氧水过浓。
酶活性的测定
式中
A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数；
VT—酶液总量（ml）； V1—反应所用酶液量（ml）;
W—样品鲜重（g）；
1.7mg
1.7—1ml H2O2。
0.1mol/L旳KMnO4相当于
紫外分光光度法:
H化测2O氢量2在，吸2使光40反率nm应旳波溶变长液化下吸速有光度强度即烈可(吸A测2收40出)，随过过反氧氧应化化时氢氢间酶酶而旳能降活分低性解。。过根氧据 以1min内A240降低0.1旳酶量为1个酶活单位（u）。
硫酸盐缓冲液，盐酸羟胺，黄嘌呤，黄嘌 呤氧化酶，醋酸等。
试验环节：
计算措施：
每毫升反应液中SOD 抑止率达50％时相应 旳SOD 量为一种SOD 活力单位（U），待测 样品中旳SOD 活力由下式计算：
SOD克制率（％）＝（A2-A1）/A2×100% SOD 活力（U/ml）＝（A2-A1）
据此，可根据H2O2旳消耗量或O2旳生成量测定该酶活力大小。 在反应系统中加入一定量（反应过量）旳H2O2溶液，经酶促反 应后，用原则高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多出旳H2O2
。
即可求出消耗旳H2O2旳量。
酶表活达性 ：用每克鲜重样品1min内分解H2O2旳毫克数
酶活(mgH2O2/gFW·min)=
测定茶树鲜叶APX活性旳最佳条件
PVPP旳加入量为鲜叶重旳1.5倍，提取液pH 为7.8，反应液pH为7.0，底物AsA浓度为 0.5mmol/L。
注意事项：
（1）因为测定反应是经过加液量控制在60s内，使产生旳A290光值下 降呈良好旳线性关系。
1.试剂： 0.1mol/L Tris-HCl 缓冲液
(pH8.2
细菌室SOP文件
细菌室SOP文件页码：第1页共7页临床细菌检验工作的基本要求和技术一、对临床细菌检验人员的要求1．负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。
2．一般细菌室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌的知识。
3．通晓细菌室守则，并严格遵守。
4．负责人应不断更新知识，了解细菌学检验的新进展。
5．定期或随时与临床医师联系，主动参与临床病例讨论，了解病情及治疗情况，达到细菌检验与临床的密切联系。
6．工作人员应定期进行健康体检及必要的预防接种，增强自身抵抗能力。
二、工作人员守则在细菌室工作人员应注意，既不要给室内带来污染，也不要被室内的微生物感染。
工作人员必须遵守以下规则：1．穿专用的工作衣、帽入室；必要时应戴口罩。
2．不允许无关人员进入实验室。
3．室内禁止饮食、吸烟、闲谈等非专业活动。
4．养成在室内手不触及口、脸、头发及躯体的习惯。
5．操作中不可说话，以免口中飞沫污染标本。
6．每次完成工作和离开实验室前，应用肥皂洗手，接触了致病菌类，须用消毒剂消毒手。
7．个人物品不许带入室内。
8．当工作环境被细菌培养物污染，必须用适当的强消毒液泼撒覆盖污染物，并报告主管人员采取必要的措施。
9．工作人员被细菌培养物污染，应用弱或中等消毒剂清洗，必要时应给予药物治疗，并向主管负责人报告，进一步采用特殊措施。
细菌室SOP文件页码：第1页共7页基本染色方法染色的第一步是制作涂片。
菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。
菌落涂片时，先取生理盐水1滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。
涂片时必须注意应轻轻操作。
猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。
制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。
将固定后的涂片进行染色。
一、革兰染色本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。
染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。
触酶的实验报告
一、实验目的1. 了解触酶的生物学特性及其催化反应过程。
2. 掌握触酶活性测定的原理和方法。
3. 通过实验验证触酶在特定条件下的催化活性。
二、实验原理触酶（Catalase，CAT）是一种广泛存在于生物体内的酶，具有催化分解过氧化氢（H2O2）生成水（H2O）和氧气（O2）的功能。
本实验通过测定触酶催化H2O2分解的速率，来评价触酶的活性。
反应方程式如下：2H2O2 → 2H2O + O2在一定条件下，触酶催化H2O2分解产生氧气的速率与触酶的活性呈正相关。
通过测定单位时间内产生的氧气量，可以计算出触酶的活性。
三、实验材料1. 触酶样品2. 过氧化氢溶液（30%）3. 水浴加热装置4. 移液器5. 秒表6. 酸碱滴定仪7. 酸碱指示剂（如酚酞）四、实验方法1. 准备实验器材和试剂。
2. 设置实验组与对照组，分别加入触酶样品和等量H2O2溶液。
3. 将实验组和对照组置于水浴加热装置中，恒温反应一段时间。
4. 取出实验组和对照组，分别加入适量的酸碱指示剂，观察颜色变化。
5. 使用酸碱滴定仪测定反应体系中剩余的H2O2浓度。
6. 计算实验组和对照组产生的氧气量，并比较其差异。
7. 根据实验结果，分析触酶的活性。
五、实验步骤1. 准备实验器材和试剂，包括触酶样品、过氧化氢溶液、水浴加热装置、移液器、秒表、酸碱滴定仪和酸碱指示剂。
2. 将触酶样品和过氧化氢溶液分别置于两个试管中，标记为实验组和对照组。
3. 使用移液器取等量的触酶样品和过氧化氢溶液分别加入实验组和对照组试管中。
4. 将实验组和对照组试管置于水浴加热装置中，恒温反应一段时间（如30分钟）。
5. 取出实验组和对照组试管，分别加入适量的酸碱指示剂（如酚酞），观察颜色变化。
6. 使用酸碱滴定仪测定反应体系中剩余的H2O2浓度。
7. 计算实验组和对照组产生的氧气量，并比较其差异。
8. 根据实验结果，分析触酶的活性。
六、实验结果与分析1. 实验结果实验组和对照组产生的氧气量分别为X1和X2，其中X1 > X2。
(完整版)实验35过氧化氢酶的活性测定
植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积.H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。
因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。
本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性.一、过氧化氢含量的测定【原理】H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm波长下比色测定.在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系.【仪器和用具】研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支；离心机；分光光度计。
【试剂】100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30％分析纯H2O257μl,溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5％（W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水.【方法】1。
制作标准曲线：取10ml离心管7支,顺序编号，并按表40—1加入试剂.待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色.2.样品提取和测定：（1）称取新鲜植物组织2~5g（视H2O2含量多少而定），按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，转入离心管3000 r/min下离心10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。
(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35—1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。
沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。
(3）向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。
3.结果计算:植物组织中H2O2含量（μmol/g Fw）=式中 C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）;V t—样品提取液总体积（ml）；V1—测定时用样品提取液体积（ml）；FW-植物组织鲜重(g）。
过氧化物酶染色标准操作程序
过氧化物酶染色标准操作程序1.检验目的通过对血细胞内过氧化物酶的染色测定，可用于白血病细胞的鉴别与分型。
2.检测原理血细胞内过氧化物酶（POX）能将无色的二氨基联苯胺的氢原子转移给过氧化氢，使前者变为有色染料沉积在细胞质酶所在部位。
1.标本新鲜的骨髓细胞涂片及血液细胞涂片。
2.试剂联苯胺液(A液)、H2O2(B液) 、瑞姬氏染液(C液) 、磷酸盐缓冲液(D液) 3.环境和安全5.1环境温度要求：2~8℃保存,有效期12个月。
5.2安全控制：工作中所有与病人的样本接触或有潜在性接触可能的样本都视为污染物。
在操作时有必要穿戴保护性的工作服、外套和手套。
在处理废弃样本时不可触摸废弃物，一定戴手套和护目镜以避免直接接触。
如果操作人员不小心接触血液、试剂、废弃物/皮肤或衣物上沾到了样本、试剂及废液，用大量清水冲洗并适当考虑必要的医疗措施。
4.操作步骤6.1新鲜的涂片滴加A染色液数滴(以覆盖涂片为宜),再滴加B染色液数滴(A 液:B液=1:1),混合后室温染色5~10分钟,流水冲洗2分钟，待干。
6.2然后用瑞姬氏染色(C液)与磷酸盐缓冲液(D液)1:2比例混合，对其染色3~5分钟,流水冲洗,干后镜检。
7.检验结果解释阴性------胞质内无沉淀物（无色）阳性------胞质内出现棕黄或蓝黑色沉淀物8.实验室临床解释8.1粒细胞系统呈集中状颗粒强阳性反应，单核细胞系统呈弥散状颗粒弱阳性反应，部分原始单核细胞可呈阴性反应。
8.2淋巴细胞系、红细胞系、巨核细胞系、浆细胞系等均为阴性反应。
8.3在白血病细胞的鉴别与分型中的应用：强阳性提示：FAB中的M1，M2，M3；部分强阳性与弥散状弱阳性提示：FAB中的M4；弥散状弱阳性提示：FAB中的M5；阴性提示：FAB中的M0，M5，M6，M7，ALL等。
9.变异潜在来源若样本采集后不能及时测定，可采用95%乙醇固定2分钟后，可保存数天。
宜可使用某些抗凝血（肝素、EDTA），样本在未染色前切勿沾有甲醇和氧化剂类试剂，以免细胞内的过氧化物酶被抑制或破坏。
菌种鉴定标准操作规程
菌种鉴定标准操作规程目的：建立菌种鉴定标准操作规程范围：适用于******鉴定标准操作职责：内容：1整体操作步骤1.1纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。
1.2挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。
1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。
如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。
1.4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。
如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。
1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。
1.6选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。
鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。
2革兰氏染色2.1染色剂的配制2.1.1结晶紫染色液：甲液：结晶紫 1.0g95%的酒精20ml乙液：草酸铵0.8g水80ml将甲液和乙液混合均匀，静置48h使用，置密闭棕色瓶中储存。
2.1.2碘液：碘 1.0g碘化钾 2.0g水300ml配制时先用3～5ml水将碘化钾溶解，再加入碘，用力摇匀，使之全部溶解后，再加水稀释至300ml，摇匀，分装在棕色瓶中储存。
2.1.3稀石碳酸红溶液:碱性品红 1.0g石碳酸 5.0ml95%乙醇10.0ml配制时用乙醇溶解碱性品红，然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml，摇匀。
2.2操作:2.2.1涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
高密度脂蛋白胆固醇试剂盒(直接法-过氧化氢酶清除法),标准化操作规程 HDLC-SOP
高密度脂蛋白胆固醇试剂盒（直接法-过氧化氢酶清除法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人 经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围 本试剂用于体外定量检测人血清中高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
4 检验方法本试剂盒采用直接测试法测定高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
5 检验原理样本中的高密度脂蛋白胆固醇在试剂中表面活性剂的作用下被胆固醇脂酶选择性地催化水解为胆固醇和游离脂肪酸，生成的胆固醇经胆固醇氧化酶氧化生成胆甾-4-烯-3-酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的催化下与苯胺类色原物质和4-氨基安替比林作用产生水和醌亚胺色素，醌亚胺色素的生成量与样本中高密度脂蛋白胆固醇的含量成正比，通过测定特定波长处反应最终生成的色素量，可以计算出样本中高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
高密度脂蛋白胆固醇＋ H 2O −−−−−→−胆固醇脂酶胆固醇 ＋ 游离脂肪酸 胆固醇 + O 2−−−−−−→−胆固醇氧化酶胆甾-4-烯-3-酮 ＋ H 2O 2 H 2O 2 + 4-氨基安替比林 + 苯胺类色原物质 −−−−−→−过氧化物酶醌亚胺色素+水 6 检验标本要求6.1 样本为血清,不得使用溶血、脂血或被污染的样本。
6.2 样本在2℃~8℃可稳定7天，-20℃可稳定1个月。
避免样本反复冻融。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司高密度脂蛋白胆固醇试剂盒（直接测试法）7.2 7.2含非反应性填充物及稳定剂7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为12个月。
7.3.2试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1 试剂空白吸光度：A＜0.05。
8.2.2 分析灵敏度：测试1.00mmol/L样本时，吸光度变化△A＞0.04。
过氧化氢酶(CAT)酶活测定方法
过氧化氢酶酶活测定方法
一配溶液:
1. 1.5% NaBO3·4H2：
称取1.5g NaBO3·4H2O溶于100ml纯水
2. 0.067M 磷酸盐缓冲：
称取磷酸氢二钠 2.398g溶于100ml纯水，另称取磷酸二氢钠 1.05g 溶于100ml 纯水中，按配方配置成PH为6.8的PBS
3. 1M硫：
10.87ml浓硫酸加入200ml纯水中
4. 0.05M高锰：
0.79g高锰酸钾溶于100ml纯水中。
5. HCl溶液：调PH
二仪器：37°水浴箱，，滴定管，PH试纸，移液器，15ML的离心管，烧杯三步骤：
1.预先用HCL将pH调至6.8的1.5%NaBO3·4H2O 8mL加入含有1.5mL
0.067M ph6.8的磷酸盐缓冲液的烧杯中。
2.在37℃下保持20min后，实验组加入0.5ml酶，对照组加入等量的缓冲
液，混合摇匀。
3．5分钟后，加入到10ml1M硫酸中
4. 在烧瓶中用0.05M高锰酸钾滴定。
5. 结果表示为硼酸单位/每克酶
四计算公式：
酶活力=(V blank—V sample)×0.05×稀释倍数/(样品浓度×0.5) ×(1000/5min)×1000(U/g)
1。
过氧化氢酶的活性测定
过氧化氢酶的活性测定方法一：高锰酸钾滴定法1、实验目的：掌握高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶的活性的原理和方法。
2、实验内容：实验原理：过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2。
即可求出消耗的H2O2的量。
试剂：10％H2SO4；0.2mol／L磷酸缓冲液pH7.8；0.02mol／L高锰酸钾标准液：称取KMnO4(AR)3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，用0.1mol／L草酸溶液标定；0.1mol／L H2O2：市售30％H2O2大约等于17.6mol／L，取30％H2O2溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02molKMnO4溶液(在酸性条件下)进行标定；0.1mol／L草酸：称取优级纯H2C2O2·2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。
操作步骤：3.1酶液提取：取高羊茅草叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25mL 容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000r／min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
3.2酶反应过程取50mL三角瓶4个(3个测定，1个对照)，测定瓶中加入酶液2.5mL，对照瓶中加入煮死酶液2.5mL，再加入2.5mL 0.1mol／L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％H2SO4 2.5mL。
3.3标定用0.02mol／L KMnO4标准溶液滴定H2O2，至出现粉红色(在30s内不消失)为终点。
3.4结果计算酶活性用每克鲜重样品1Min内分解H2O2的毫克数表示：酶活(mg／g·min)＝（A-B）×V T×1.7FW×V1×t（3-2）式中:A:对照KMnO4滴定毫升数(mL)；B:酶反应后KMnO4滴定毫升数(mL)；V T:酶液总量(mL)；V1:反应所用酶液量(mL)；W:样品鲜重(g)；1.7:1mL 0.1mol／L的KMnO4相当于1.7mg H2O2。
(整理)触酶试验氧化酶试验
触酶试验(1)原理：触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。
(2)方法：取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3％H2O2 1滴，立即观察结果。
(3)结果：若立即出现大量气泡为阳性。
无气泡为阴性。
(4)应用：大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故常用此试验来鉴定。
此外，金氏杆菌属的细菌也为阴性。
分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。
注意事项：①3％H2O2溶液要新鲜配制。
②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应。
③取对数生长期的细菌。
氧化酶试验（1）原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。
（2）试剂：1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺。
（3）方法：常用方法有三种；1）菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。
2）滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。
3）试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。
（4）结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。
为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。
（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。
奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红0.3g 95%乙醇 10mL5%酚水溶液 90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。
2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸 3mL 95%乙醇 97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。
美蓝0.3g；95%乙醇 30mL；0.01%氢氧化钾溶液 100mL；将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。
2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征，经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。
根据感染特性选择合适的培养基，首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。
然后确定革兰氏染色性、形态，再按科、属、种逐步鉴定下来。
应该利用已具备的条件，尽可能地缩小鉴定范围，这是在作实验设计时必须想到的，要用最小数量的试验方法作出鉴定。
基于鉴定菌的特点，选用合适的鉴定体系，力求方法学简单，反应判断明确，价廉的方法。
血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高，给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。
对培养困难的病原菌，可考虑应用基因水平的鉴定技术。
最后还要提示，对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。
【球菌】球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌。
包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等，根据革兰氏染色可将其分为两类，均无鞭毛和芽孢，少数可形成荚膜。
本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验；葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法；肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。
一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。
能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。
有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等，又是医院内交叉感染的重要传染源。
近年来，耐药性菌株逐年增多。
临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。
[材料]1．菌种：葡萄球菌培养物。
2．培养基：血琼脂平板，普通琼脂平板，甘露醇发酵管，氧化、发酵(OF)管，甲苯胺蓝核酸琼脂。
3．试剂：兔血浆、3％H2O2、致敏胶乳／红细胞制剂。
4．其他：革兰氏染液、玻片、一次性卡片。
[方法]1．形态学观察：取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许，涂片，革兰氏染色，镜检。
可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。
医院检验科过氧化氢酶(触酶)试验标准操作规程
XXXX医院
检验科过氧化氢酶（触酶）试验标准操作规程
1 试验原理
黄酶系统的呼吸酶最后把氢交给分子氧而形成过氧化氢，过氧化氢对活细胞有毒，过氧化氢酶的作用是使过氧化氢分解为新生态氧。
2H2O2 → 触酶→ 2H2O+ O2↑
2 试剂配置
3%的过氧化氢水溶液(新鲜配制)。
3 试验方法
挑取固体培养基上的菌落1接种环，置于洁净玻上（或试管内）滴加3%的过氧化氢溶液数滴，观察结果。
4 结果判定
于半分钟内有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性。
5 试验用途
绝大多数细菌均产生过氧化氢酶，但链球菌的触酶阴性，故常用此试验来鉴定链球菌。
此外，金氏杆菌属细菌的触酶也阴性，因此，此试验在鉴定这些细菌时有特异性。
6 注意事项
6.1 做触酶试验不宜用血琼脂平板上的菌落，因红细内含有触酶，会出现假阳性反应，最好用营养琼脂或培养基。
6.2 本实验必须用18 ~ 24小时培养物，因陈旧培养物可能丢触酶活性，而出现假阴性反应。
6.3 此试验一定要用阳性及阴性菌株做对照，可ATCC25923(金黄色葡球菌)做阳性对照菌，用链球菌做阴性对照菌。
过氧化氢酶试验
过氧化氢酶试验简介过氧化氢酶是一种重要的酶类，它参与了细胞内的一系列氧化还原反应。
过氧化氢酶能够催化过氧化氢分解为水和氧气，从而起到抗氧化和解毒的作用。
过氧化氢酶试验用于检测过氧化氢酶的活性，并可以评估细胞内氧化应激的程度。
实验原理过氧化氢酶试验基于过氧化氢酶催化过氧化氢分解的反应。
过氧化氢酶催化反应如下：2 H2O2 → 2 H2O + O2该反应产生的氧气可以通过不同的方法进行测量。
一种常见的方法是使用氧合酶催化，将产生的氧气转化为可与染料发生反应的物质。
常用的染料有二氧化钛、乙基紫等。
实验步骤材料准备•过氧化氢酶试剂•过氧化氢溶液（浓度为1%）•染料溶液（如二氧化钛溶液）•缓冲液（如磷酸盐缓冲液）•96孔微孔板•透明薄膜操作步骤1.在96孔微孔板中加入适量的缓冲液，使每个孔的体积约为200μL。
2.加入适量的过氧化氢酶试剂到孔中，使每个孔的酶液体积约为10-20μL。
注意，不要交叉污染不同的试剂。
3.加入适量的染料溶液到每个孔中，使每个孔的染料体积约为10-20μL。
4.加入适量的过氧化氢溶液到每个孔中，使每个孔的过氧化氢体积约为10-20μL。
5.快速密封96孔微孔板的顶部，使用透明薄膜确保孔内的反应物不会挥发。
6.转动或摇晃微孔板，使反应物充分混合。
确保密封良好，避免反应物外泄。
7.将密封的96孔微孔板置于酶标仪中，设置适当的温度和时间参数。
8.启动酶标仪，开始反应。
酶标仪将按照预设的温度和时间条件控制反应的进行。
9.当反应结束后，停止酶标仪并打开微孔板。
10.使用酶标仪测量每个孔中染料的吸光度，记录吸光度值。
11.根据吸光度值，可以计算过氧化氢酶试验的结果。
根据实验需要，可以使用不同的单位进行表示。
结果分析通过过氧化氢酶试验的结果可以评估细胞内氧化应激的程度。
如果过氧化氢酶的活性较高，则说明细胞内氧化应激较轻；反之，如果过氧化氢酶的活性较低，则说明细胞内氧化应激较重。
根据实验需要，可以计算不同样品的过氧化氢酶活性，并进行比较分析。
过氧化氢酶测定方法
过氧化氢酶测定方法概述过氧化氢酶（catalase）是一种存在于细胞中的重要酶类，它能够催化过氧化氢（H2O2）的分解为水和氧气。
过氧化氢是一种有毒物质，如果在细胞内积累过多，会对细胞结构和功能造成损害。
因此，测定过氧化氢酶活性对于研究细胞代谢和抗氧化能力具有重要意义。
本文将介绍一种常用的过氧化氢酶测定方法——碳酸盐法。
实验原理碳酸盐法是通过测定酶催化下H2O2分解所产生的O2释放量来间接评估过氧化氢酶活性的方法。
具体原理如下：1.过程1：H2O2 + 酶→ H2O + O2 过程1中，过氧化氢被过氧化氢酶催化分解为水和氧。
2.过程2：HCO3- + H+ → CO2↑ + H2O 过程2中，碳酸根离子（HCO3-）与酸反应生成二氧化碳（CO2）和水。
3.过程3：CO2 + H2O → H2CO3 过程3中，二氧化碳与水反应生成碳酸。
4.过程4：H2CO3 → H+ + HCO3- 过程4中，碳酸分解为氢离子（H+）和碳酸根离子（HCO3-）。
5.总反应：H2O2 → O2↑ + 2H+ 将过程1、过程2、过程3和过程4综合起来，可以得到总反应的方程式。
根据上述原理，我们可以通过测定产生的气体量（即释放的O2）来间接测定过氧化氢酶的活性。
实验步骤准备工作1.配制试剂：a.磷酸盐缓冲液（pH 7.0），用磷酸二氢钠和二氢磷酸钠按一定比例配制而成。
b.碳酸盐溶液，用纯净水溶解固体碳酸钠而成。
2.准备样品：a.收集需要测定的样品，如细胞提取物或组织液。
b.需要对样品进行稀释，以确保酶活性在可测范围内。
实验操作1.在一组试管中分别加入以下试剂：–试管A：磷酸盐缓冲液（pH 7.0）1 mL–试管B：磷酸盐缓冲液（pH 7.0）1 mL + 样品1 mL–试管C：磷酸盐缓冲液（pH 7.0）1 mL + 样品1 mL + 过氧化氢溶液1 mL2.将所有试管置于恒温水浴中，在37°C下预热5分钟。
细菌触酶试验
触酶试验标准操作程序
1.检验目的
规范触酶试验操作
2. 实验原理
具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢,可将H2O2分解为无害的水和氧气，产生可见的气泡。
3. 样本要求：
3.1 纯的菌落。
3.2 细菌要求新鲜。
3.3 不宜用血琼脂平板上的菌落做触酶实验，若用血琼脂上的菌落，刮取菌苔时注意不要带有血培养基琼脂，因红细胞内含有触酶，可能出现假阳性。
4. 材料
3%-30％过氧化氢溶液。
5. 操作步骤
5.1 准备清洁玻片、接种环。
5.2 将接种环用酒精灯火焰灭菌，待冷却后刮取适量菌苔置于玻片上。
5.3 5～30% H2O2滴在菌苔上。
6. 结果观察：立即产生大量气泡者为阳性，少量气泡者为弱阳性，无气泡者为阴性。
7. 质控：
7.1 阳性对照：质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923。
7.2 阴性对照：质控菌株肺炎链球菌ATCC49619。
8. 支持文件
8.1 周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海：上海科学技术出版社，2007 8.2 王钦升，周正明，高屹主编. 使用医学培养基手册. 北京：人民军医出版社，1999。
过氧化物酶检测标准操作规程
过氧化物酶（pox）检测标准操作规程1.【目的】为了供骨髓涂片及血液细胞涂片染色检查。
2.【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【标本类型及实验前准备】1.标本类型1.要求新鲜的骨髓细胞涂片或血液细胞涂片。
2.若样本采集后不能及时测定，可采用95%乙醇固定2分钟后，可保存数天。
亦可使用某些抗凝血（肝素、EDTA）。
3.样本在未染色前切勿沾有甲醇和氧化剂类试剂，以免细胞内的过氧化物被抑制和破坏。
4.溶血样本不宜使用，因涂片中大量游离血红蛋白易使背景产生难以去除的杂质颗粒。
2.患者准备成人一般取骼后、骼前上棘，其次为胸骨、棘突部位。
2岁以下小儿可穿刺胫骨。
3.容器、添加剂类型骨髓液量不宜过多，不需抗凝，迅速置于载玻片上，必要时可用EDTA2K抗凝。
4仪器设备捷达骨髓成像系统，OLYMPUS显微镜5.实验试剂1.快速染液A （ A液）：曙红2.快速染液B （ B液）：天青3.碘化钾溶液（C液）：碘化钾4.WG溶液（D液）：瑞姬氏染料4.【测定原理】细胞中的过氧化物酶分解过氧化物产生新生态氧，后者与KI （碘化钾）作用产生碘，碘与WG等显色剂中的有效成分结合，形成有色颗粒定位于细胞浆中。
5.【程序性操作步骤】本法采用滴染法，滴染工作液配制（1份滴染工作液为2.4ml）使用器材：一次性塑料试管、微量移量液器、一次性吸嘴、滴管。
操作：取C液2.0ml，D液4ul，混匀，2小时内使用。
染色步骤：1.快速染色（核染色）：干燥的骨髓涂片滴加A液（覆盖标本）后，再滴加B液（A液：B液=1:1至1:2）混匀，染色20-30秒，流水冲洗，甩干或滤纸吸干；2.滴加工作液于涂片上，染色40-60秒后倾去（不用水冲洗），滤纸吸干，镜检。
6.【结果计算与判断】呈阳性反应时，可见胞浆中有红棕色至蓝黑色颗粒。
触酶实验流程
触酶实验主要用于鉴别多种细菌，比如葡萄球菌触酶阳性，而链球菌、肠球菌触酶阴性。
以下是触酶实验的基本流程：
准备试剂和工具：准备好3%的过氧化氢水溶液（需新鲜配制，置棕色瓶内于阴暗处保存）以及洁净的玻片或试管。
接种细菌：挑取固体培养基上的菌落1接种环，置于洁净玻片或试管内。
滴加试剂：向菌落上滴加3%的过氧化氢溶液数滴。
观察结果：静置后，观察结果。
在半分钟或一分钟内产生大量气泡的样本为阳性，不产生气泡的样本为阴性。
请注意，为了保证实验的准确性，细菌要求新鲜，不宜用血琼脂平板上的菌落作触酶试验，因为红细胞内含有触酶，可能出现假阳性。
同时，需要用已知阳性菌和阴性菌作对照。
完成上述步骤后，就可以根据实验结果判断细菌是否具有触酶活性，从而进一步鉴别细菌的种类。
过氧化氢酶测定
二. 过氧化氢酶测定(容量法)（比较好测）1. 试剂配制a. 0.3％过氧化氢溶液：按1:100将30%H2O2用水稀释b. 3N 硫酸（？？？？？？？？？？？）c. 0.1N 高锰酸钾（1/5KMnO4）溶液：称取化学纯高锰酸钾3.161g，溶于1升无CO2蒸馏水中，贮于综色瓶中，备用。
2. 操作步骤（1）取2g风干土，置于100mL三角瓶中，并注入40mL蒸馏水和5mL 0.3％H2O 2溶液。
（2）同时设置对照，即三角瓶中注入40mL蒸馏水和5mL 0.3％过氧化氢溶液，而不加土样。
（3）将三角瓶放在振荡机上振荡20min后，加入5mL3N硫酸，以稳定未分解的过氧化氢。
再将瓶中悬液用慢速滤纸过滤。
吸取25mL滤液，用0.1N高锰酸钾滴定至淡粉红色终点。
3. 结果计算用于滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为B，用于滴定25mL原始的过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为A。
（A-B）×T即为过氧化氢酶活性。
以20min后1g土壤的0.1N高锰酸钾的毫升数表示。
（？？？？）式中T为高锰酸钾滴定度的校正值。
（就是最后换算成每克，所以还要测土壤含水量）高锰酸钾溶液标定称取0.2g（准至0.0001g）于105~110℃烘至恒重的基准草酸钠。
溶于100mL（8+92）硫酸溶液中，用配制好的高锰酸钾溶液[c（KMnO4）=0.1mol/l]滴定，近终点时加热至65℃，继续滴定至溶液呈粉红色保持30s，同时作空白试验。
高锰酸钾溶液标准浓度按下式计算c（1/5KMnO4）=m/（V1-V2）*0.06700式中 c（1/5KMnO4）=—高锰酸钾标准液之物质的量浓度，mol/L；m——草酸钠之质量，g；V1——高锰酸钾溶液之用量，mL；V2——空白试验用高锰酸钾溶液之用量，mL；0.06700——与1.00mL高锰酸钾溶液c（1/5KMnO4）=1.000mol/l相当的以克表示的草酸钠的质量。
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1 试验原理
黄酶系统的呼吸酶最后把氢交给分子氧而形成过氧化氢，过氧化氢对活细胞有毒，过氧化氢酶的作用是使过氧化氢分解为新生态氧。
2H2O2 → 触酶→ 2H2O+ O2↑
2 试剂配置
3%的过氧化氢水溶液(新鲜配制)。
3 试验方法
挑取固体培养基上的菌落1接种环，置于洁净玻上（或试管内）滴加3%的过氧化氢溶液数滴，观察结果。
4 结果判定
于半分钟内有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性。
5 试验用途
绝大多数细菌均产生过氧化氢酶，但链球菌的触酶阴性，故常用此试验来鉴定链球菌。
此外，金氏杆菌属细菌的触酶也阴性，因此，此试验在鉴定这些细菌时有特异性。
6 注意事项
6.1 做触酶试验不宜用血琼脂平板上的菌落，因红细内含有触酶，会出现假阳性反应，最好用营养琼脂或培养基。
6.2 本实验必须用18 ~ 24小时培养物，因陈旧培养物可能丢触酶活性，而出现假阴性反应。
6.3 此试验一定要用阳性及阴性菌株做对照，可ATCC25923(金黄色葡球菌)做阳性对照菌，用链球菌做阴性对照菌。