影响荧光值强度的因素

影响荧光强度的因素

1.荧光的减退

荧光物质经紫外线长时间照射及空气的氧化

作用，会使荧光逐渐减退。

2.荧光强度与溶液浓度的关系

在稀溶液中：F＝Kc F 为荧光强度

K—检测效率（由仪器决定）c 为液体的浓度

高浓度时，荧光物质发生熄灭和自吸收现象，使F与c不呈线性关系

3.温度的影响

温度对荧光强度的影响较敏感。溶液温度

下降时，介质的粘度增大，荧光物质与分子的

碰撞也随之减少，去活化过程也减少，则荧光

强度增加。相反，随着温度上升，荧光物质与

分子的碰撞频率增加，使去活化几率增加，则

荧光强度下降。

4. pH的影响

带有酸性或碱性官能团的大多数芳香族化

合物的荧光一般都与溶液PH值有关，例如：在

pH=7~12的溶液中苯胺以分子形式存在，会发出

蓝色荧光；而在pH<2或pH>13的溶液中苯胺以离

子形式存在，都不会发出荧光。同时所用酸的种

类也影响荧光的强度，例如：奎宁在硫酸溶液中

的荧光比在盐酸中的要强。

5.溶剂

许多有机物及金属的有机络合物，在乙醇

溶液中的荧光比在水溶液中强。乙醇、甘油、

丙酮、氯仿及苯都是常用的有机溶剂，其中大

多有荧光，应设法避免；一般避免的办法是稀

释，或加入一部分水。

6.荧光强度达到最高点所需要的时间不同，有

的反应加入试剂后荧光强度立即达到最高峰。有

的反应需要经过15~30分钟才能达到最高峰。

7.有机溶剂中常有产生荧光的杂质，可用蒸馏法提纯。橡皮塞、软木塞及滤纸中也常有能溶于溶剂的一些带荧光的物质。

注意事项

①在实验中，拿比色杯要拿4个棱角，切勿

拿光滑的透光面，以免影响检测效果

②比色杯用后，应用醇或其它有机溶剂浸

泡。

③氙灯长时间使用（1000h以上）后可能

会发生爆炸，所以保证期（500h）以后，应及

时更换。

④在安装或更换氙灯时，应确认电源开关

为OFF，并切断电源。

核黄素易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。核黄素在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测核黄素时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。

维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。其结构式为：

由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。

维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。维生素B2在pH＝6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。