分离羊肚菌菌种方法
目前羊肚菌菌种分离主要采用子实体组织分离法和孢子
目前羊肚菌菌种分离主要采用子实体组织分离法和孢子分离法。
组织分离法由于f实体q1空和组织结构较薄，操作过
程要求极其精细．一般技术条件下分离的结果往往污染牢较
高。
因此必须进行反复分离提纯上作，实际操作起来相当繁锁“J。
孢子分离法首先要收集无菌的孢子，制备无菌孢了二液，并将其
稀释成一定浓度。
然后在平板或试管斜面培养基上堵养单孢
子菌落，分离并获得单绝子菌种一山于在孢子形成阶段经过减
数分裂过程．发乍基因的分离和泵组，获得的单孢子菌种不能
保证能否结实I“。
所以必须将／{i嗣单孢子菌落的菌丝进行融
合获得蚁孩菌丝菌种，再进行双饮菌丝的分离提纯、裕定如此
等，操作十分繁琐，
笔者于2009年3月在羊肚菌生态凋研过程中，将着牛
d
羊肚菌的土壤样本装入塑料盒内存放于lO℃的冰箱中，10
后发现甥料盒内的羊肚菌长出了很长的羊肚菌气生菌丝
(1
em长，平面延伸口，达7—8cn-)一针对这一现象，笔者丁．2009年3月将带有羊肚菌菌丝网的土壤样本放在倒置的平
板培养基下利用气生菌丝进行菌种分离，。
分离羊肚菌菌种方法
分离羊肚菌菌种方法本技术的目的在于提供一种不用消毒剂，既容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种的分离羊肚菌菌种方法。
为了实现上述目的，本技术方案采用了一种分离羊肚菌菌种的方法，包括以下步骤:将胶带封闭的羊肚菌用75%消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的刀具从菌柄顶端在火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过2-4下，用刀具在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织并送入抗生素平板培养荃上，于20-30℃的温度下培养，待萌发出菌丝后，及时转接。
所述的刀具为手术刀片。
羊肚菌子实体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把羊肚菌整个缠绕密封，中间不留空隙。
所述的抗生素平板培养基为:马铃薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氢钾lg,硫酸镁0. 5g,酵母膏50g，琼脂20g、水1000mL,链霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5所述抗生素平板培养基的制作方法为:土豆削皮切薄皮加3000m1.水煮30min，过滤取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，过滤取滤液1000mL，在此滤液中加入葡萄糖、酵母膏、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL，分装于三角瓶，在高温121℃-126'C,高压0. 1-0. 14MPa灭菌30min。
待冷却至50℃左右加入青霉素钠、硫酸链霉素复合抗生素母液，使抗生素终浓度在30U/ml.左右，将配好的培养基倒入培养皿中或直接冷却成固体培养基。
本技术的分离方法，先是对羊肚菌进行封闭式消毒，防止消毒酒精浸入菌组织，有利分离成功。
另外，割掉子实体头部后，露出的菌柄内侧为无菌组织，环割取内侧菌肉组织防杂效果较好。
采用抗生素培养基也有利于防止杂菌污染，培养基的组分营养非常全面，特别是加入草炭和酵母膏，为羊肚菌菌丝生长提供了保证。
本发明的整个操作过程不用消毒液，全用火焰消毒，萌发率较高，既保证了容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种。
羊肚菌的菌种分离与制作——组织分离
羊肚菌的菌种分离与制作——组织分离组织分离是最常用的分离方法。
该方法较孢子分离相对简单，获得的菌种性状相对稳定，分离后代的基因型和亲本基因型一致，可以在一定的世代范围内传承亲本的优良性状，因此组织分离是目前应用最广泛的分离手段，也是一些菌种定向选育的筛选方法，但是并非组织分离法适用于所有材料。
经验表明，一些种类的组织分离物，绝大多数丰产性有所下降，如平菇、双孢菇等。
长期从事羊肚菌的朋友一定也发现过，你采集的新鲜标本，存在着一定概率完全分离不出来的情况，这就是羊肚菌组织容易老化的一个表现，老化的菌株肯定是不能用于生产的。
组织分离的具体方法是：取半成熟至成熟的健壮新鲜子实体，0.1％升汞或75％酒精表面消毒。
如果是干标本，则用无菌水振荡冲洗、泡开后用再升汞或酒精进行消毒处理。
在消毒之前，还可以用吹风机冷风吹去表面的附着物和杂菌，用升汞或酒精表面擦洗，特别是菌柄部分。
在无菌条件下从子实体中间纵向掰开，用尖嘴镊子或解剖刀小心取菌盖与菌柄交界处或菌肉厚的部分（即远离组织表面）约1~3mm 大小的菌肉组织，置于适宜培养基上，在适宜温度下培养。
当菌落长至直径1~2cm时进行转管纯化。
下面根据羊肚菌的特点详解羊肚菌的组织分离步骤：1）用具和材料准备：酒精灯、打火机、75%酒精棉球、解剖刀、尖嘴镊子、顿口镊子、挑针或接种针、无菌吸水纸或滤纸、75%的酒精或0.1%的升汞（氯化汞）溶液、无菌蒸馏水、斜面试管或倒好培养基的平板、超净工作台，以及待分离的新鲜羊肚菌子囊果。
2）将上述用具置于超净工作台中，开紫外灯，表面杀菌20~30min；之后关闭紫外灯，放入待分离的子囊果标本；打开风机，中高档风速吹风5~10min。
3）打开超净工作台白炽灯，风速可以减少到中低档位；用75%的酒精棉球擦拭双手，进行表面消毒，再用新鲜的75%酒精棉球对超净工作台台面进行擦拭。
4）用略干的酒精棉球将子囊果菌柄特别是基部与土壤交界处的灰尘或泥土擦拭干净，擦拭过程中及时更换酒精棉球；将擦拭干净的子囊果用解剖刀切取菌柄0.5×1cm组织块2~3块，或取菌柄与菌盖交接处组织较厚的部位；将组织块置于0.1%的升汞溶液内浸泡0.5~1min（或75%的酒精内浸泡2~3min），根据材料不同，需要调整浸泡时间，可以先从短时间开始，依次检查效果，避免升汞或酒精将羊肚菌菌丝全部杀死。
一种羊肚菌菌种分离方法[发明专利]
![一种羊肚菌菌种分离方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d14fd45e1a37f111f0855b0e.png)
专利名称：一种羊肚菌菌种分离方法
专利类型：发明专利
发明人：李勇,史新敏,樊继德,李刚波,赵林,张婷申请号：CN201810540704.6
申请日：20180530
公开号：CN108812079A
公开日：
20181116
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种羊肚菌菌种分离方法，属羊肚菌分离方法领域。
利用这种方法，用特定规格透明长方体玻璃瓶作母种容器，按特定配方制得培养基。
把基部带土的羊肚菌种菇削至见斑状菌肉，挑取0.3毫米见方菌土混合体，直接接菌到容器内培养基平面的后部。
在特定温度下，经1‑2次提纯，即可得到羊肚菌纯菌丝体。
与现有羊肚菌菌种分离方法相比，这种分离方法操作简单，成功率高，解决了羊肚菌生产中菌种分离成功率过低的技术瓶颈问题。
申请人：江苏徐淮地区徐州农业科学研究所(江苏徐州甘薯研究中心)
地址：221000 江苏省徐州市高铁站北
国籍：CN
代理机构：徐州市三联专利事务所
代理人：周爱芳
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羊肚菌菌种分离技术
原始菌种分离自野生材料或栽培材料。
一般用野生或栽培果(子实体),也可用干子实体来进行分离,干子实体作菌料的成活率及子实体产量均比新鲜子实体作分离菌种的材更高。
栽培子实体达到商业化采收标准时一般还没有成熟和子囊孢子也都未完全成熟;孢子分离需要将子囊孢子培养到完熟的状态,子实体已经倾斜或快要倒伏,外观形态表现为子囊果面有白色、灰白色的孢子粉出现时比较可靠。
野生子实体成熟比较很小的子实体就已经形成了孢子,容易获得大量孢子粉。
种菇的选择：选择菇形正常,菌盖圆整,顶端较尖,尖顶凸起完整,菌柄圆正,菌柄短而结实,大小适中,无虫害、霉变或杂菌感染的子实体,鲜品或干品均可。
种菇的采集：菌柄基部最好带少量土壤一起采集,用吸水纸包裹3层,再用报纸包裹,低温下带回实验室。
不要把菌柄基部剪掉留下空心的子实体进行分离新鲜子实体采集后放在室内桌面或吸水纸上自然晾,稍稍除去部分水分,若采集地点离实验室很远或工作时间较长,可以晾干到子实体含水量在15%以下。
标本用吸水纸包,再用报纸包裹,带回实将未成熟的栽培子实体采集后,可以放在室内假植几离。
方法是移栽在盐内湿上上,培养儿天直到有子弹射为止,以便集孢于注意一般不要把标本放入塑料袋内运送,也绝对不能用烘干的办法处理需要分离的标本。
菌种分离一般不要采用传统教科书所叙述的方法,传统的方法都容易导致污染和不生长。
为此本专著为大家特别介绍了下列的新方法。
常见的分离方法有：纯组织分离法,分别有菌盖组织、菌柄组织,菌盖菌柄结合部位组织、组孢混合分离法、膨大细胞分离法、纯多孢分离法、单孢分离法等等。
其中,上内菌丝分离比较困难。
纯组织分离法：采野生或栽培的幼嫩体,用无菌吸水纸包裹,放于无菌纸袋内。
0~4℃冰瓶保存。
送到实验室,放在无菌培养皿内,在超净工作外线照射20min,具体可以采用悬挂法、断斜面法。
组织块悬挂分离法：将羊肚菌子实体撕开或用刀片切成两片,刮肉内壁的膨大细胞层。
分别在菌柄内壁、菌盖内壁、菌柄与菌盖接部位取子实体内壁的中央菌丝组织。
羊肚菌菌种提纯工艺流程
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羊肚菌菌种规模化生产技术
羊肚菌菌种规模化生产技术
羊肚菌栽培的基础是优质的各级菌种，原始菌种来源必须非常可靠，生产时接种要严格执行环境灭菌和无菌操作，要创造良好的培养条件；栽培种原料配方中要有足够比例的小麦，栽培种和营养料袋的数量要足够。
菌种必须在最优的播种时节集中供应，从多方面保证栽培的成功和效益。
今日介绍一下羊肚菌原始菌种的选择，供广大生产者参考。
羊肚菌原始菌种的选择
1.菌种来源
羊肚菌菌种的分离方法包括鲜菇组织分离、干菇组织分离、多孢分离、单孢分离、单菌核分离、多菌核分离、组孢混合分离等，很多方法得到的菌种可能会不出菇、出菇率很低，或产量、品质不佳。
因此，生产者自行分离的菌种最好先通过出菇试验，能够大量形成原基后再进行推广，应用于生产。
一般来说，购自可靠机构经过出菇试验和大面积种植获得高产的原始菌株母种，较为放心。
对自行采集本地野生或栽培的新鲜成熟子实体，并用可靠的方法纯化得到的纯菌种，又经出菇试验的也可使用。
2.羊肚菌栽培物种的主要种类
常见的羊肚菌商业化栽培物种有：六妹羊肚菌、七妹羊肚菌、梯棱羊肚菌等。
其他黑色物种，如Mel-21、Mel-20等产量较低，不适合商业化栽培。
3.注意事项
建议采用当年的野生或栽培子实体通过单孢分离得到的纯菌种；不建议使用保藏多年的菌种，多次、无限转扩的母种，技术信誉度不高的机构的菌种，以及所谓多孢菌种、组孢混合、组织分离的菌种，或是分离方法不详、无法说清原理的菌种。
也不建议使用未经鉴定的野生物种进行分离和大面积栽培，特别是黄色的物种。
羊肚菌菌种生产和营养袋制作技术简介
羊肚菌菌种生产和营养袋制作技术简介羊肚菌菌种最大的缺点就是容易退化、变异，给羊肚菌栽培带来很大困难。
（一）菌种生产技术要点菌种生产流程如下：羊肚菌选择和采集>组织（孢子）分离>提纯培养>出菇试验>优良一级菌种>复壮培养>菌种扩繁>二级菌种接种>培养栽培菌种。
1.菌种分离羊肚菌的分离方法与其他食用菌大体相同，采用组织分离和孢子分离。
（1）组织分离选取成熟、具优良长势的羊肚菌子实体，在无菌环境中用接种针将组织块接入平皿培养基上，获得菌种。
①培养基制作。
配方为马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18～20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、水1000ml。
将培养基装到500ml三角瓶中（每瓶装入200ml），115℃灭菌30min后在无菌条件下将培养基倒入平皿中（每个平皿约20ml），冷却备用。
②选取头潮、新鲜、健壮、周围幼菇或原基多、朵形圆整、七八分熟的子实体。
③菇面用75%酒精棉球擦拭消毒。
④切取组织块（菌肉）。
用手术刀切开种菇，在菌盖或菌柄内侧用无菌手术刀或尖嘴镊子取5mm见方组织块（菌肉）接于培养基上。
⑤培养。
温箱18℃恒温培养，2天后组织块萌发，待菌落长到2cm，用接种针选取最优菌落的先端菌丝接入新培养基，进行尖端脱毒。
将菌丝生长快、产菌核适中、产色素少且晚的分离物挑选出来，作为第一代母种保存备用。
（2）孢子分离无菌条件下，使孢子在适宜的培养基上萌发成菌丝体而获得纯培养的方法。
多孢分离的菌株不能直接用于生产，要经过出菇试验。
采集孢子有多种方法，如整朵插种菇、三角瓶钩悬和试管琼脂培养基黏附法等，此处介绍整朵插种菇法。
①选取头潮、新鲜、健壮、八九分成熟的子实体。
②采集孢子。
将按照组织分离方法消毒子实体的整朵菇插入无菌孢子收集器里，在18℃下培养2～3天后子囊孢子落下，形成孢子印。
③孢子分离、培养。
无菌条件下，将少量孢子移入盛无菌水的三角瓶内稀释成孢子悬浮液，其浓度以1滴水中含5～10个孢子为宜。
羊肚菌菌种制作方法
羊肚菌菌种制作方法
羊肚菌，又名松茸、牛肝菌，是一种珍贵的食用菌，具有丰富的营养价值和独特的风味，深受人们喜爱。
而要种植羊肚菌，首先就需要准备好菌种。
下面，我将为大家介绍一下羊肚菌菌种制作方法。
首先，准备好菌丝培养基。
羊肚菌菌种的制作主要是通过培养基来培育菌丝。
培养基的制作需要准备葡萄糖、酵母提取物、琼脂等原料。
按照一定的比例将这些原料混合均匀，然后加入适量的水，进行高压蒸汽灭菌，最后倒入培养皿中，待其凝固成为培养基。
其次，进行羊肚菌菌丝接种。
将培养好的羊肚菌菌丝接种在培养基上，然后将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，控制好温度和湿度，利用光照和适当的通风条件，有利于菌丝的生长和繁殖。
接着，进行菌丝的培养和增殖。
在恒温培养箱中，菌丝会逐渐生长并扩散到整个培养基表面，形成一层白色的细菌丝。
此时，可以将培养好的菌丝分离出来，进行分装保存，以备后续的种植使用。
最后，进行菌种的保存和贮藏。
将培养好的羊肚菌菌种分装在无菌瓶中，添加适量的保存液，然后密封好瓶盖，放置在4℃左右的冰箱中进行贮藏。
这样可以延长菌种的保存时间，以便日后的使用。
通过以上的步骤，我们就可以成功制作出羊肚菌的菌种。
在进行种植时，只需要将菌种接种在适当的培养基上，控制好温度、湿度和光照条件，就能够培育出新鲜的羊肚菌。
希望以上介绍对大家有所帮助，祝愿大家成功种植出丰收的羊肚菌！。
羊肚菌菌种制作方法
羊肚菌菌种制作方法
羊肚菌是一种珍贵的食用菌，下面是一种羊肚菌菌种的制作方法：
材料：
- 成熟的羊肚菌果体
- 脱脂奶粉
- 蔗糖
- 净化水
- 瓶子（可密封）
步骤：
1. 将成熟的羊肚菌果体切成小碎片，去除任何外表的杂质，并进行必要的清洗。
2. 将果体投放到净化水中，用刷子或手轻轻刷洗，确保清洗干净。
3. 将清洗后的羊肚菌果体晾干，可使用纸巾或者晾干机进行辅助。
4. 将晾干的羊肚菌果体放入研磨机中研磨成粉末。
5. 将研磨后的羊肚菌粉末与脱脂奶粉按1:1的比例混合均匀，加入适量的蔗糖，再次搅拌均匀。
6. 将混合物装入干净的瓶子中，尽量填满，然后密封好。
7. 将密封的瓶子放入蒸锅中，用大火蒸30分钟至1小时，杀灭瓶子中的细菌。
8. 蒸熟后的瓶子取出，放置在干净的环境中自然冷却。
9. 冷却后的菌种可以用于培养羊肚菌菌丝体，可将冷藏保存，有效期一般为6个月左右。
以上就是制作羊肚菌菌种的方法，制作过程中要保持材料和环境的卫生。
在实际操作时，建议遵循专业食用菌的培养方法和相关规范，确保食用菌的安全和品质。
羊肚菌菌种分离和培养技术
羊肚菌菌种分离和培养技术1、菌种分离目前可以纯人工栽培的羊肚菌品种有变红羊肚菌、梯纹羊肚菌、尖顶羊肚菌、六妹羊肚菌、七妹羊肚菌以及粗柄羊肚菌、普通羊肚菌。
当前我国的栽培品种主要以黑色品系为主，梯纹羊肚菌占总栽培面积的95％以上，产量及稳定性最好；六妹羊肚菌和七妹羊肚菌次之，产量稳定性与梯纹羊肚菌相当，开发潜力较大；黄色品系粗柄羊肚菌栽培规模较小，产量及稳定性有待进一步提高。
采用孢子分离、组织分离或基质分离法获得纯菌种。
分离物必须经过纯化鉴定，并经出菇试验方可大规模栽培使用。
通常情况下，分离物在20℃～25℃培养2d即可萌动，3d左右即可形成初生菌落，挑取萌发菌落的尖端进行纯化或扩大培养。
2、母种培养各种真菌培养基均适合羊肚菌菌丝的生长，通常情况下，菌丝在25％条件下培养4d～7d即可长满试管，5d～8d开始形成菌核。
母种培养基：PDA培养基，马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20g、琼脂18g～20g，自来水1000mL，pH值自然；CYM完全培养基：葡萄糖20g、蛋白胨2g、酵母膏2g、卧磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.46g、琼脂粉20g，蒸馏水1000mL。
优良母种表现为菌丝生长均匀，初期菌丝密集洁白，粗壮，气生菌丝旺盛，爬壁力强，后期菌丝产生浅棕黄色色素，菌落浅棕色至棕色。
大部分羊肚菌菌株在培养4d～6d开始产生菌核，菌核初期白色，针尖大小，后期芝麻粒至绿豆粒大小，分散或凝集呈片状，菌核随着生长时间增长开始变黄，最终为棕黄色。
3、原种、栽培种培养基原种、栽培种培养基配方基本相同，常压或高压灭菌后使用，常用配方如下：杂木屑70％、麦麸20％、生石灰1％～2％、石膏1.5％、腐殖质土10％；杂木屑60％、小麦25％、生石灰l％～2％、石膏1.5％、腐殖质土15％。
每个18mm×l80mm母种块转接6瓶原种，每瓶原种转接50袋～55袋栽培种。
750mL菌种瓶生产原种，22℃～25℃暗室培育，15d～20d即可长满，25d可用于栽培种制作。
羊肚菌菌种制作方法
羊肚菌菌种制作方法羊肚菌，又名牛肚菌、牛肚菇，是一种珍贵的野生食用菌，具有丰富的营养价值和独特的风味，因而备受青睐。
在市场上，羊肚菌的价格较高，因此很多人都希望能够自己种植羊肚菌，以满足自己和家人的食用需求。
接下来，我们将介绍羊肚菌的菌种制作方法，希望能够帮助到有需要的朋友。
首先，准备好羊肚菌的菌种培养基。
你可以去市场上购买现成的羊肚菌菌种，或者从野生的羊肚菌中提取菌种。
如果你选择从野生羊肚菌中提取菌种，需要注意保持清洁，避免外界杂菌的污染。
提取菌种的方法是将新鲜的羊肚菌放入消毒过的容器中，然后在恒温培养箱中进行培养，等待菌丝生长。
其次，准备好菌种培养的工具和设备。
你需要准备好玻璃烧杯、试管、移液器、无菌培养皿、无菌手套等工具，以及恒温培养箱、无菌工作台等设备。
在进行菌种制作的过程中，一定要注意保持无菌环境，避免外界杂菌的污染。
接着，进行菌种的分离和培养。
将采集到的羊肚菌菌丝分离到无菌培养皿中，进行培养和生长。
在培养的过程中，需要定期观察菌丝的生长情况，确保菌种的纯度和活力。
同时，要注意控制培养皿中的湿度和温度，提供适宜的生长环境。
最后，保存和储存菌种。
当菌种培养得到足够的数量和活力之后，可以将其保存和储存起来，以备将来使用。
最常见的保存方法是在无菌瓶中保存冷冻干燥的菌种，或者在琼脂培养基中保存活体菌种。
在保存和储存菌种的过程中，一定要注意保持无菌环境，避免外界杂菌的污染，以确保菌种的质量和活力。
通过以上的步骤，我们就可以制作出羊肚菌的菌种。
希望这些方法能够帮助到你，让你成功地种植出自己的羊肚菌，享受到美味和营养。
祝你成功！。
一株野生羊肚菌的分离鉴定及原种培养基的筛选
Edible and medicinal mushrooms 2021，29（1）：50～55一株野生羊肚菌的分离鉴定及原种培养基的筛选吴金罗凯夏险李梦玲涂俊铭*（湖北师范大学生命科学学院，食用野生植物保育与利用湖北省重点实验室，特色野菜良种繁育与综合利用技术湖北省工程研究中心，湖北黄石435002）摘要对野外茅草林下采集到的一株野生羊肚菌（菌株命名为Y1）进行分离纯化，通过经典分类方法结合分子生物学方法进行品种鉴定，并基于菌丝生长速度、菌丝密度及菌核数量从9种不同培养基配方中筛选最佳原种培养基。
结果为：Y1的子实体菌盖呈黄色，上有凹凸不平的网格，菌柄呈白色、中空，形似羊肚菌；在显微镜下观察，菌丝体呈黄色，菌丝粗壮，菌丝结构明显，与羊肚菌属形态特征相似；ITS序列比对显示Y1与羊肚菌属中的黄色羊肚菌类群同源性高达99%，初步鉴定该野生菌株为羊肚菌Mes-19；筛选出的最优原种培养基配方为麦粒75%、土壤23%、石灰1%、过磷酸钙1%。
关键词羊肚菌；分离纯化；品种鉴定；ITS序列；原种培养基中图分类号：Q93-3,S646 文献标识码：B 文章编码：2095-0934（2021）01-050-06Isolation and identification of a wild Morchella strain and its spawnmedium screeningWu Jin Luo Kai Xia Xian Li Mengling Tu Junming*（Hubei Key Laboratory of Edible Wild Plants Conservation & Utilization; Hubei Engineering Research Center of Characteristic Wild Vegetable Breeding and Comprehensive Utilization Technology; College of Life Sciences, Hubei Normal University,Huangshi, 435002, China）Abstract A wild edible fungus strain Y1 was found under a thatched forest during field investigation. The strain was purified and identified by classical classification and molecular biology methods. At the same time, through the analysis of the mycelial growth speed, mycelial density and the number of sclerotia of Morchella among 9 different kinds of medium formula, the spawn medium of Morchella was screened. The results showed that Y1 fruiting body is yellow in cap, white and hollow in stipe which was similar to Morchella in shape. Moreover, the mycelium was yellow, the mycelium was thick, obvious mycelium structure, under the microscope, which was similar to Morchella in morphological characteristics. The ITS sequence of the strain shared 99% homology with the yellow Morchella species in Morchella genus. It was identified as Morchella sp.Mes-19. The optimum spawn medium formulation was 75%基金项目：食用野生植物保育与利用湖北省重点实验室开放基金资助（EWPL201907）；湖北师范大学创新团队项目（T201907）作者简介：吴金，女，在读硕士研究生，主要研究食用菌资源开发与利用。
羊肚菌母种菌种分离技术
每到八月，就到了菌类生长的重要时期。
这个时期要十分注重羊肚菌的菌种培养，这一步直接关系到未来一年的羊肚菌栽培成果，千万大意不得。
下面小编就给大家介绍一下羊肚菌母种菌种的分离技术，给大家一些参考。
菌种分离：首先要具有食用菌专业基础知识、多年的菌种分离经验及菌丝鉴别能力，其次要购置母种培养基、无菌接种箱、恒温培养箱、冰箱、高倍显微镜等必要设备。
根据当地羊肚菌生长季节，趁羊肚菌生长旺盛时做菌种分离工作。
1、分离方法羊肚菌的分离方法与其它食用菌大不相同。
它需要一种助生菌与羊肚菌菌丝共生时才能出菇。
这种助生菌长期活动在土壤中，有时以芽孢菌形式出现，有时以菌丝形式出现。
它为羊肚菌的原基形成和子实体生长发育起着至关重要的作用。
因此，从土壤中分离该菌比其它任何方式分离要好些。
但从土壤分离难度太大，成功率不到万分之一，并且难以分辨，所以只有采取羊肚菌基脚土分离，才能真正找到羊肚菌的出菇菌丝。
初学者可在四川德立隆购买培养好的羊肚菌优良母种，并参加现场培训。
2、操作过程在羊肚菌生长的周围，可见白色菌丝充满土壤。
从土壤中挑选这种菌丝容易成功。
现介绍两种土壤分离的简易方法：一种是土壤直接分离，另一种是浸提分离。
土壤直接分离法：在羊肚菌生长的地方去掉羊肚菌，取周围5厘米以内的土壤，去掉表层，把土壤放入无菌接种箱内，然后放入试管培养基，进行接种箱空间消毒。
即按接种箱每立方米空间用甲醛10毫升，高锰酸钾5克，混合产生气体消毒，半小时后才可操作。
将基脚土用接种针挑取黄豆大小一块，迅速放到试管内的空白培养基上，每管放一块，塞上棉塞，接种后取出培养。
浸提分离法：将基脚土用无菌水稀释，澄清后用接种针蘸取少量溶液，滴到试管内的空白培养基上，塞上棉塞后取出培养。
分离后，放在12～18℃温度下培养观察。
3天后培养基上萌发菌丝，每天仔细检查每支试管的发菌及变化情况。
区分和认识各类杂菌是最关键的核心技术。
真正的羊肚菌菌丝最初为灰白色，生长很快，时间长会变成棕黄色，有时会出现菌核，母种7天长满试管，原种、栽培种15天可长满瓶底。
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分离羊肚菌菌种方法
本技术的目的在于提供一种不用消毒剂，既容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种的分离羊肚菌菌种方法。
为了实现上述目的，本技术方案采用了一种分离羊肚菌菌种的方法，包括以下步骤:将胶带封闭的羊肚菌用75%消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的刀具从菌柄顶端在
火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过2-4下，用刀具在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织并送入抗生素平板培养荃上，于20-30℃的温度下培养，待萌发出菌丝后，及时转接。
所述的刀具为手术刀片。
羊肚菌子实体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把羊肚菌整个缠绕密封，中间
不留空隙。
所述的抗生素平板培养基为:马铃薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氢钾lg,
硫酸镁0. 5g,酵母膏50g，琼脂20g、水1000mL,链霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5
所述抗生素平板培养基的制作方法为:土豆削皮切薄皮加3000m1.水煮
30min，过
滤取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，过滤取滤液1000mL，在此滤液中加入葡萄糖、酵母膏、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL，分装于三角瓶，在高温121℃-126'C,高压0. 1-0. 14MPa灭菌30min。
待冷却至50℃左右加入青霉素钠、硫酸链霉素复合抗生素母液，使抗生素终浓度在30U/ml.左右，将配好的培养基倒入培养皿中或直接冷却成固体培养基。
本技术的分离方法，先是对羊肚菌进行封闭式消毒，防止消毒酒精浸入菌组织，有利分离成功。
另外，割掉子实体头部后，露出的菌柄内侧为无菌组织，环割取内侧菌肉组织防杂效果较好。
采用抗生素培养基也有利于防止杂菌污染，培养基的组分营养非常全面，特别是加入草炭和酵母膏，为羊肚菌菌丝生长提供了保证。
本发明的整个操作过程不用消毒液，全用火焰消毒，萌发率较高，既保证了容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种。