斑马鱼的性腺发育

SB产卵板
不同龄雌鱼卵巢发育



0～16日龄:没有观察到性腺发育情况。 17～22日龄:原始生殖细胞没有两性分化，数量开始增多，并逐渐聚 集成团，细胞质嗜酸性，核较大，嗜碱性，有一明显核仁。 27日龄:原始生殖细胞分化为卵原细胞，体积变大，数量增多，成排 排列，在腹腔后背部分布，与肝胰脏相连。 32～57日龄:卵巢体积较小，位于腹腔后背部，靠近肝胰脏。卵巢内 主要为第Ⅰ时相卵母细胞，细胞体积小，圆形，细胞质少，有一明显 细胞核。核中部有1～2个核仁，核内染色质细丝状。 62日龄:主要为第Ⅱ时相卵母细胞，细胞为多角形、圆形。细胞质较 多，染色较深，为淡紫红色。核相应增大，弱嗜酸性，核仁数个，靠 近核膜内侧分布。卵母细胞外面有一层滤泡细胞。 67～72日龄:卵巢粗短，主要存在第Ⅱ时相和发育早期的第Ⅲ时相卵 母细胞。早期第Ⅲ时相卵母细胞比第Ⅱ时相卵母细胞体积大，圆形或 椭圆形，染色较浅，核周细胞质内出现少量空泡。细胞核较大，弱嗜 酸性，核仁多个，分布在核膜内缘，被染成深蓝色。卵母细胞外周辐 射带很薄，结构不明显，细胞外隐约能看到两层滤泡膜。
•卵母细胞在Ⅱ时相增长不明显，在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ时相期增长 迅速 •胞核的直径在Ⅱ时相增长迅速，在Ⅲ时相中期、Ⅳ时相增 长缓慢，几乎没有变化 •核质比在第Ⅱ时相最大，随着卵母细胞的发育，核质比越 来越小



卵巢壁:由两层被膜构成， 外层为腹膜，内层为白膜。 白膜由外到内依次为扁平上 皮细胞、疏松结缔组织、间 质组织和生殖上皮。 产卵板:白膜中的结缔组织 向卵巢内部伸展与卵巢生殖 上皮共同构成板层状结构， 称产卵板，是卵子产生的地 方。 卵巢腔:存在于卵巢内部的 空腔，与输卵管相通。
V时相卵母细胞(成熟卵期)

卵母细胞已充分发 育，呈圆球形，卵 径约为467.04～ 564.34μm。卵黄 颗粒相互融合，细 胞质中充满粗大的 卵黄颗粒，卵黄颗 粒散布于整个卵母 细胞的胞质内，至 此，卵母细胞已经 成熟，以后便脱离 滤泡膜而排入卵巢 腔。
2.2.2.5VI时相卵母细胞

卵细胞排出， 剩余的空滤泡 膜，形状不规 则，蜷曲于卵 巢内。




77日龄:以第Ⅱ、Ⅲ时相卵母细胞为主，大部分第Ⅲ时相卵母细胞处于发育 中期。中期第Ⅲ时相卵母细胞近圆形，体积明显增大。胞质的空泡内出现了 嗜酸性的卵黄颗粒，越靠近细胞核，卵黄颗粒越大。卵核体积增大，染色较 浅，核仁多个，分布在核膜内缘。随卵母细胞的发育，核仁逐渐向核中央移 动，呈深蓝色。细胞周围辐射带明显，并随着细胞体积的增大而增厚，细胞 外两层滤泡膜发育明显。 82～90日龄:以第Ⅲ、第Ⅳ时相卵母细胞为主。晚期第Ⅲ时相卵母细胞体积 较大，空泡内充满卵黄。第Ⅳ时相卵母细胞由于卵黄物质不断积累，细胞体 积继续增大，圆球形的卵黄颗粒基本充满卵母细胞质。细胞核逐渐由中央向 动物极移动。卵巢壁随卵母细胞的数量增多和体积增加而逐渐变薄，放射带 明显增厚。 成熟小鱼:卵巢白膜变得很薄。卵巢以第Ⅴ时相卵母细胞为主，也存在有发育 早期的卵母细胞。第Ⅴ时相卵母细胞已充分发育，呈圆球形，卵黄颗粒相互 融合，细胞质中充满粗大的卵黄颗粒，散布于整个卵母细胞的胞质内。至此， 卵母细胞发育成熟，不久，核膜崩解、消失，卵母细胞进入第2次成熟分裂中 期，形成次级卵母细胞，排到卵巢腔。 产卵后小鱼:卵巢细长，结构松散，包含有排卵后的空滤泡、第Ⅱ时相、第Ⅲ 时相和第Ⅳ时相卵母细胞。
斑马鱼的性腺发育
精巢的组织学结构和不同发育阶段 生殖细胞形态



精巢一对，位于腹腔背部两侧，体积较小，以系膜与体壁相联，左右 精巢彼此分开，在尾端合并成一条很短的输精管，和一般鲤科鱼类相 同。 生殖上皮随着结缔组织向精巢内部延伸，形成许多隔膜，把精巢分成 许多不规则的精小叶，从其横切面上可见许多精小叶紧密排列，但没 有一定的规律性，精小叶为精巢的实质部分，因其呈管状又可称为精 小管。 在精小叶内由许多精小囊组成，随着精巢的发育，精小叶内各精小囊 间生精细胞发育不同步，而在同一精小囊内生精细胞发育是同步的。 精小叶中央为小叶腔，小叶腔在精巢内相互连接成网状，最后通到输 精管，精原细胞位于精小叶的边缘处，在分化过程中，当生殖细胞在 精小囊内发育成为成熟的精子时，精小囊破裂，成熟的精子释放到小 叶腔中，各小叶腔内的精子最后汇集到输精管内并可借助于输精管排 出，因此成熟的精子只在小叶腔和输精管内存在。 生殖细胞在发生上由外向里可分为精原细胞、初级精母细胞、次级精 母细胞、精子细胞和精子。
交配中

公鱼在交配的过程中，采绝对主动方式， 会先以眼睛观察并决定要向哪一只母鱼进 行攻势。其次会进行求偶舞蹈，在想要交 配的母鱼周围绕圈圈或是８字型，游向母 鱼后，利用腹部侧面摩擦母鱼，刺激母鱼 排卵，公鱼便会同时射精。
产卵


母鱼会一次把全部腹中的卵包括卵囊全部 排出，一胎约会生出200-500颗卵。排出后 母鱼会重新产生新的卵，约3-5天就可以再 生下一次卵。 伴随着卵的释放，会有其他激素一起排出， 这种激素可以让母鱼顺利把卵排放出来， 另外一个功能则是让其他还产生卵的母鱼， 停止排卵的行为，这在演化上算是一种竞 争的结果。
Sg，精原细胞；ScⅠ，初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St， 精子细胞；Sz，精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC，支持细 胞；ST，精小囊
卵巢的组织学结构和不同发育阶段 生殖细胞形态



斑马鱼卵巢一对，左右两叶， 大部分对称；成熟卵巢呈囊 状，位于体腔内，外被由平 滑肌和结缔组织形成的卵巢 膜，卵巢膜不发达。 卵巢位于腹中线两侧，在鱼 体后端汇合成一短的输卵管， 进入泄殖腔，由泄殖腔开口 于体外。 卵母细胞直径、核径和核质 比在不同时相中的变化:
步骤二、交配前准备

产卵前一天的准备：
1. 挑选出适当的公鱼跟母鱼，体长要尽量一样， 母鱼可以略大一些。 2. 将公鱼与母鱼分别放置产卵缸的两侧，中间 设置隔板将其隔开。 3. 产卵房的准备
步骤三、交配当天



光周期控制的隔天清晨，当天亮后约十分 钟，公鱼和母鱼会恢复清醒。 当母鱼发现公鱼时，由于前一天的费洛蒙 影响，母鱼在天亮后也释放另一种费洛蒙， 使公鱼往母鱼方向前去的行为更加明显及 强烈。 此时就可以准备打开隔板，让公鱼跟母鱼 进行交配。
斑马鱼的繁殖
斑马鱼为研究脊椎动物胚胎发育的 理想模式生物




子代数多 可以光周期诱发产卵 体外受精，胚体透明，胚胎发育快 可以诱发产生突变种 可以分子生物技术控制特定基因表现或产 生基因转殖鱼 在胚胎发育时期的讯号传递路径和哺乳动 物有很高的同源性
Fra Baidu bibliotek
分辨斑马鱼雌雄

公鱼：与性成熟前体态 相似，保持原本的流线型， 臀鳍较母鱼长。在身上各 个鱼鳍末端，时常可看到 有明显的黄色出现。
Ⅲ时相卵母细胞(卵黄生成期)

主要是处在大生长期早期的初级卵母细胞。 第3时相卵母细胞比第2时相卵母细胞大， 但染色要浅。卵母细胞呈圆球形，该时相 卵母细胞开始出现液泡，内含物被H.E染成 淡红色。滤泡膜上皮细胞开始分裂，并与 卵母细胞的质膜分离，出现不明显的放射 带。根据卵母细胞的大小、卵黄沉积的多 少以及放射膜的有无将其分为早、中、晚 三个时期。
Ⅲ时相早期

卵母细胞直径在约为 97.3～155.68μm之间， 核径约为38.92～ 68.11μm，核质比约为： 0.02～0.14。胞质弱嗜 碱性。核质嗜酸性，核仁 位于核膜内缘，主要为小 核仁，35个左右。细胞 质外缘出现少许小液泡， 直径1～2μm，较透明， 内含物极少。卵母细胞外 周的放射带很薄，结构不 明显。此时已经形成两层 膜结构。
Sg，精原细胞；ScⅠ，初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St， 精子细胞；Sz，精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC，支持细 胞；ST，精小囊
V期早期精巢，示精原细胞，精母细胞，精子细胞和 精子，比例尺示24μm
Sg，精原细胞；ScⅠ，初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St， 精子细胞；Sz，精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC，支持细 胞；ST，精小囊
1Ⅱ时相卵母细胞(皮层滤泡期或卵 黄生成前期)

主要是处在小生长期的卵母 细胞。卵母细胞直径在约为 54.56～94.24μm，核径 约为29.76～59.52μm， 核质比约为：0.11～0.42。 核形不规则，呈圆形、椭圆 形或多角形，细胞质嗜碱性， H.E染色呈深紫色，核浅蓝 色，位于细胞中央。在同一 切面上核内有3-10个核仁， 沿核膜内缘分布。根据卵径 大小和结构形态的不同，这 个时相又可以分为三个阶段； 在早期，卵母细胞形态仍然 不规则，形状多变；在发育 中期，卵母细胞呈近圆球形； 发育晚期，卵母细胞内生长 环迅速扩大。滤泡膜仅一层。
繁殖期，V期精巢
III期精巢；小叶腔明显，初级精母细胞排列多层，比 例尺示24μm
Sg，精原细胞；ScⅠ，初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St， 精子细胞；Sz，精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC，支持细 胞；ST，精小囊
VI期晚期精巢，示精小囊内发育同步的各期生殖细胞， 比例尺示24μm
Ⅲ时相晚期

卵母细胞增大为 145.95～ 330.82μm，核径 为48.65～ 58.38μm，核质比 0.006～0.06。液 泡充满卵黄，放射 带的外周形成均染 粉红色的胶质膜结 构，小核仁45个左 右，多位于核膜内 侧周边。
IV时相卵母细胞(卵母细胞成熟期)

主要是处在大生长期晚期 的初级卵母细胞。由于卵 黄物质不断积累，卵母细 胞细胞体积继续增大、卵 黄迅速积累、液泡被积压 到卵母细胞周边的细胞质 中，圆球形的卵黄颗粒基 本充满卵母细胞质，卵母 细胞直径在约为 379.47～447.58μm， 胞核约38.92～ 68.11μm，核质比为 0.0007～0.004，细胞 质及细胞核开始由中央直 接移向动物极移动，卵母 细胞开始表现出极性。放 射带明显增厚。
Ⅲ时相中期

卵母细胞明显增大， 卵母细胞直径在约为 124～198.4μm，胞 核约49.6～ 119.04μm，核质比 为0.03～0.36。核质 被染成浅紫色，大核 仁少见，小核仁约40 个左右，其中较大的 分布于核膜内侧，较 小的散在于核质中。 放射带发育明显。内 层膜的细胞呈立方形， 而外层的仍为扁平形。
繁殖期，IV期卵巢




Ⅰ期：初级生长期(primary growth stage)，卵母细胞 (卵泡)体积小(7~140μm)，卵母细胞开始生长。 Ⅱ期：皮质泡时期(cortical alveolus stage)，卵泡直径 140~340μm。卵母细胞体积进一步增大，卵母细胞外周 的皮质区出现许多小泡。 Ⅲ期：卵黄增生期(vitellogenesis stage)，卵泡直径 340~690μm。卵母细胞体积增加很快，卵黄颗粒物质快 速积累，越靠近细胞核，卵黄颗粒越大。 Ⅳ期：卵母细胞成熟期(oocyte maturation stage)，卵 泡直径690~730μm。由于卵黄颗粒数量和体积的增长， 圆球形的卵黄颗粒基本充满卵母细胞的细胞质。 Ⅴ期：成熟卵期(mature egg stage)，卵泡直径 730~750μm。卵母细胞成熟，细胞内充满了粗大的卵黄 颗粒。
母鱼：性成熟后肚子开始膨大，里面卵囊形成 卵，臀鳍较公鱼来得小、短且较圆，鱼鳍末端 有时也有黄色出现，但相对于公鱼出现的时间 比较少。

步骤一、布置环境
※光周期调控：斑马鱼需要在约14:10光照周 期下，才会产生交配产卵的 行为。 ※水温：需在24~28.5℃。

在适当的水温下，将公鱼和母鱼分缸进行 饲养约5-7天后，即可在光周期天亮后1小 时内，看到斑马鱼进行交配行为。
V期中期精巢，示成熟的精子充满整个精小叶， 比例尺示24μm；
Sg，精原细胞；ScⅠ，初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St， 精子细胞；Sz，精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC，支持细 胞；ST，精小囊
Ⅵ期精巢，示精子排出后留下的空腔，腔内有少量残 存的精子和第二次发育由精原细胞有丝分裂产生的初 级精母细胞.