骨组织电镜脱钙技术在免疫组化中的应用

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初级(士)卫生资格初级病理学技术士模拟题2021年(3)_真题-无答案

初级(士)卫生资格初级病理学技术士模拟题2021年(3) (总分97.XX01,考试时间120分钟)A1/A2题型1. 合成结构蛋白的细胞器是A. 微粒体B. 游离核糖体C. 高尔基复合体D. 固着核糖体E. 滑面内质网2. 用于电镜标本后固定的试剂是A. 戊二醛B. 多聚甲醛C. 丙酮D. 锇酸E. 酒精3. 下列哪一项符合抗原的物理状态分类法分类A. 颗粒性抗原B. 多糖抗原C. 异种抗原D. 半抗原E. 天然抗原4. 一般死后多长时间开始出现尸斑A. 2～4小时B. 6～8小时C. 14～16小时D. 10～12小时E. 18小时以上5. 碱性品红属于A. 吖啶染料B. 偶氮染料C. 苯甲烷染料D. 醌亚胺染料E. 硝基染料6. Bouin液是一种良好的固定液，它常用的pH为多少A. 2～2.5B. 3.6～4.0C. 4.7～5.0D. 3～3.5E. 4.0～4.57. 作为乳腺癌和子宫内膜癌的病理检验的重要项目之一的是A. 催乳素（PRL）B. 促黄体生成激素（LH）C. 滤泡刺激激素（FSH）D. 雌孕激素受体（ER和PR）E. 雄激素受体（AR）8. 肥大细胞中不含有何种成分A. 多巴胺B. 组胺C. 血清素D. 肝素E. 黑色素9. 目前，最常用的石蜡切片机是A. 轮转式切片机B. 滑走式切片机C. 恒冷切片机D. 超薄切片机E. 骨组织切片机10. 戊二醛储存时间过长会使溶液颜色变黄，原因是戊二醛发生了A. 氧化B. 交联C. 聚合D. 吸水E. 还原11. 下列病理大体标本的固定原则中错误的是A. 固定标本的容器宜宽大，口不宜过小B. 固定液的量要充足C. 较贵重的固定液亦不能少于标本体积的4倍D. 固定液的性质及温度与固定时间有关E. 各类标本固定的时间要一致12. 下列不是广谱上皮细胞标志物的是A. 细胞角蛋白B. 上皮特异抗原C. 波形蛋白D. 癌胚抗原E. 上皮肿瘤相关抗原13. 原位杂交固定是为了()。

TRAP染色与免疫组化套染技术在骨组织损伤修复染色中的应用

综上所述，ＴＲＡＰ染色与ＶＥＧＦ免疫组化套染技术虽步骤较多，但操作简便，染色效果较好，值得推广。
参考文献：
［１］何佳，祁珊珊，李鑫鑫．抗酒石酸酸性磷酸酶染色方法的改良［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０１９，３５（７）：８６４－８６６．
［２］翁丹枫，张声，李国平，等．改良ＥＤＴＡ脱钙液在骨髓活检组织中染色效果观察［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０１８，３４（４）：４６１－４６３．
临床与实验病理学杂志ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ２０２１Ｍａｙ；３７（５）
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散在细胞胞质暗红色，细胞核蓝色，胞体大，核数量不等的破骨细胞分布，其余细胞胞质不显色，ＴＲＡＰ染色与ＶＥＧＦ免疫组化套染可见兔股骨髁骨缺损处生物材料内ＶＥＧＦ在新生骨组织细胞、部分破骨细胞、新生血管内皮及部分炎细胞胞质呈棕黄色表达，破骨细胞胞质暗红色，胞核蓝色，其余细胞胞核蓝色、胞质不显色且背景干净（图２）。
［５］丁伟，王德田．简明病理学技术［Ｍ］．浙江：科学技术出版社，２０１４：４－７．
［６］李丽，牛钰清，陈菲，等．介绍一种细胞凋亡ＴＵＮＥＬ检测与Ｋｉ６７ＤＡＰＩ三色荧光染色操作流程［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０１９，３５（８）：９８０－９８１．
［７］潘琳．实验病理学技术图鉴［Ｍ］．北京：科学技术出版社，２０１２：４３３－４３４．
３讨论
骨组织损伤修复基础研究中，ＶＥＧＦ增强缺损处血管通透性，诱导新骨形成的同时也加速破骨细胞的骨吸收，促进骨愈合［４］。破骨细胞起源于造血干细胞，与执行骨形成功能的成骨细胞处于动态平衡。研究者试图在同一张脱钙骨组织石蜡切片上观察破骨细胞与ＶＥＧＦ的共表达。本实验采用ＴＲＡＰ染色与ＶＥＧＦ免疫组化套染技术，经反复实验发现该套染技术成功需要注意以下几方面。（１）骨组织离体后处理：骨组织离体后除立即使用１０％中性缓冲福尔马林固定外［５］，还使用硬组织切片机将骨组织修切成３ｍｍ厚薄片，以便固定液充分渗透到骨组织内部得到最佳固定效果。骨组织比软组织致密，若不切开固定，固定液渗透慢导致固定欠佳，导致不能较好地保存骨组织内部细胞形态结构、ＴＲＡＰ酶及抗原。固定不佳的组织后续脱水处理不佳，增加组织脱片的风险。本实验脱钙液选择文献报道的改良脱钙液［２］，脱钙和固定同时进行，脱钙使用３７℃水浴加快脱钙速度，以保证在最短的时间内脱钙完全。组织离体后进行该处理方法可大大降低脱片、ＴＲＡＰ酶及抗原丢失的风险。（２）ＴＲＡＰ染色：ＴＲＡＰ染液容易失效，每次实验前待染切片置于３７℃水浴锅中静置１５ｍｉｎ时即可配制ＴＲＡＰ孵育液，现用

骨组织的脱钙及其免疫组织化学技术的探讨

脱水液的ｐ值在６５７２之问［，１１。Ｈ．～．１，，］２ｏ１
３．骨组织的快速脱钙方法
仁，胞浆嗜酸性，有突起，电镜下可见微绒毛。破骨细胞
含有丰富的酸性磷酸酶和胶原酶。骨细胞间质由有机质和无机质两种成分紧密结合而成。无机质是骨盐（要是羟主基磷灰石）。有机质包括骨胶纤维和无定形的有机质。骨胶纤维即骨中的胶原纤维，构成骨胶原纤维的蛋白质为Ｉ型
Ｃ）技术是用已知的标记的特异性抗体或抗原对组织内相应Ｓ抗原或抗体进行定性、定位或定量检测，经组织化学反应，使标记于特异性抗体的酶、金属及荧光素等呈现出某种颜色，并借助于光镜、荧光显微镜及电子显微镜等观察所显示的颜色和变化，从而了解抗原或抗体结合部位和含量的一门
面：一是组织块过大，固定剂未能充分浸透使组织中心部位的抗原溶解、弥散或丢失；二是福尔马林固定时间过长，因
百－茎氨基交联而降低抗原性；三是固定液的种类、浓度和温度对一些特殊抗原有很大的破坏作用，如浓度超过２的醛类固定剂、０４苯二酮等对５羟色胺抗原保存不利［］．一１。
骨是构成人体骨骼的主要器官，它由骨组织、骨膜
关节和关节软骨构成。骨组织由骨细胞和细胞间质（称又骨间质）构成。骨的细胞成分有：① 成骨细胞，其形态与静止及活跃状态有关，呈梭形。成骨细胞能产生骨样基质，由骨样基质与其周边的成骨细胞构成骨样组织，Ｈ・染Ｅ色呈粉红色。② 骨细胞，位于骨陷窝内，呈小梭形。骨细胞可分成最年轻的骨细胞、较成熟的骨细胞和成熟的骨细三种形态结构，他们的功能随细胞的年龄而不同。③ 破骨细胞，为多核巨细胞，可有１一２ＯＯ个核，核淡染，有核

电镜制片技术在骨组织免疫组化中的应用

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三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响作者：张大贵等来源：《中国现代医生》2012年第24期[摘要] 目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

[关键词] 脱钙液；骨组织；免疫组化染色[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）24—0101—03骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。

本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。

骨组织脱钙技术及其应用

骨组织脱钙技术及其应用张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【摘要】@@ 骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2011(024)011【总页数】4页(P1264-1267)【关键词】骨组织;脱钙技术;应用【作者】张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【作者单位】解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000【正文语种】中文【中图分类】R954.65;R392.1骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的。

无机盐以羟基磷灰石结晶的形式存在,其中绝大部分为水合磷酸钙,此外还包括微量碳酸盐和柠檬酸盐等[1,2],因此骨和其他一些已钙化的组织在脱水、透明等制片前必须将组织中的钙盐用脱钙剂除去,才能制成4～5μm厚的切片。

目前,常用的脱钙剂主要有单纯酸类、混合酸类、螯合剂、离子交换树脂和电解脱钙等方法[3～6],尤其是近年来应用微波技术辅助脱钙明显缩短了脱钙时间,改善了HE、组织化学、免疫组织化学染色和原位杂交[7～11]。

现将骨组织的脱钙技术及应用等有关内容简介如下。

1 骨组织的组织学特点[1,2]骨组织由骨基质和骨细胞组成,骨基质是由有机物质和无机物质紧密结合而成,主要成分有:(1)胶原纤维:为Ⅰ型胶原;(2)粘蛋白:为胶原纤维间的无定型物质;(3)骨盐:主要是羟基磷灰石;(4)酶:包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和胶原酶等。

软骨基质是由软骨母细胞分泌丰富的蛋白多糖组成的,HE染色呈淡蓝色,A lcian蓝染色阳性(蓝色),甲苯胺蓝呈异染性反应(紫红色),软骨的胶原属Ⅱ型胶原。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响张大贵;林小芳;张普;周婵萍【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2012(50)24【摘要】目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响.方法选择12例骨组织,随机分为3组.A组用14％硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色.结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大.PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好.结论室温条件下,三种脱钙液巾PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好.但南于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查.硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差.【总页数】3页(P101-103)【作者】张大贵;林小芳;张普;周婵萍【作者单位】温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院泌尿外科,浙江温州 325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000【正文语种】中文【中图分类】R446.4+1【相关文献】1.三种脱钙液对免疫组化染色效果的比较 [J], 孙庆妹;刘军2.三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析 [J], 连丽琴;夏凌志;钟惠霞3.四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响 [J], 李锐;金玉兰;韩一丁;刘红刚4.混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析 [J], 吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣5.八种脱钙液对骨组织制片后HE染色质量影响的实践探究 [J], 方皓;云杰苗;王雄;袁滋铎;林俞辰;陶子春;薛逢贵;胡爱华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

病理学技术士《专业知识》模拟试卷二

病理学技术士《专业知识》模拟试卷二[单选题]1.在免疫组织化学染色中，引起交叉反应的是（江南博哥）A.半抗原B.异种抗原C.超抗原D.共同抗原E.特异性抗原参考答案：D参考解析：共同抗原引起交叉反应。

[单选题]2.网状纤维染色中，10%中性甲醛的作用是A.氧化B.漂白C.媒染D.还原E.镀银参考答案：D参考解析：甲醛的作用是将银离子还原成金属银。

[单选题]3.临床常用的上皮源性肿瘤标记抗体，最常用于鳞癌诊断的是A.上皮膜抗原（EMA）B.细胞角蛋白（LowMW）C.细胞角蛋白7D.细胞角蛋白（Pan）E.细胞角蛋白（HighMW）参考答案：E[单选题]4.骨组织作免疫组化染色时，常用的脱钙剂是A.硝酸B.盐酸C.EDTAD.蚁酸E.硫酸参考答案：A参考解析：骨组织作免疫组化染色时，常用的脱钙剂是硝酸。

[单选题]5.以下哪项对于冰冻切片的描述是正确的A.所有病例均需进行冰冻诊断报告B.60分钟内完成C.提供最后病理诊断D.提供初步病理诊断E.原位杂交等结果参考答案：D参考解析：冰冻切片提供初步病理诊断。

[单选题]6.目前使用计算机不能储存的病理资料是A.病理特殊检测病例资料B.消化道肿瘤好发部位资料C.图文报告资料D.病理切片资料E.肉瘤的索引资料参考答案：D参考解析：病理切片资料不能用计算机存储。

[单选题]7.肝细胞癌的特异性标记抗体是什么A.CEAB.CKC.AFPD.VimentinE.Actin参考答案：C参考解析：肝细胞癌的特异性标志是AFP。

[单选题]8.下面不属于胞质染色剂的染料是A.橘黄GB.酸性品红C.伊红YD.水溶性苯胺蓝E.核固红参考答案：E参考解析：ABCD都是染细胞质的染料。

[单选题]9.可使G+菌着色的染料是A.碱性复红B.酸性复红C.结晶紫D.石碳酸复红E.亚甲蓝参考答案：C参考解析：结晶紫可使G+菌着蓝色或紫色。

[单选题]10.HE染色中脱蜡不彻底会出现的结果是A.核染过深B.核染色淡C.成地图样染色D.质不染色E.质染色深参考答案：C参考解析：脱蜡不彻底会导致组织着色不均。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。

骨组织脱钙方法的比较

成标本的惟一标识条码，大大提高了病理科在标本验收环节的准确性，因为用条码激光扫描的方法比人眼核对要可靠得多。同样，山该系统自动生成和分配给每一例标本的条码式病理号也增加了标本大体检查进一步核对时的方便性和可诱性。病理科的重要性不言而喻，病理科的质景管理事关重大。通过ＩＳ０９０００与信息化系统的引进，给病理科的管理带来了新生，为病理科的发展提供了保障，病理信息学与现代质晕管理学已经逐步与分予生物学一起成为了当代病理学发展的重要支柱。
微小病理标本制作体会
李春梅（哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理科
１５００４Ｏ）
随着临床检查技术的提高及各种检杏仪器的广泛应用，病理科收到的微小病仰。‘二冬明显增加，如Ｂ超ＣＴ引导下的各种细针穿刺标本、各种窥镜的钳取标本等。据我２００８年小完全统汁，微小标本近３０００例，占总病检量大约五分之一。如此大晕的微小标本，增加了制作切片的难度。我的体会是：一、严格遵守操作流程微小标本一般在卜２ｍｍ３左右，送检时均山洒精同定于小药瓶中，我们的操作流程是：核对标本、登记、编ｕ．，对标本大小、块数进行描述；脱水透明、浸蜡先倾倒掉原同定
２００９年全国病理学技术进展和应用研讨会
骨锯将其锯成厚度不超过０．５ｃｍ的骨片，剥去骨组织周嗣的软组织。经１０％中性福尔马林液同定１２ｈ～２４ｈ后，分别放入以下三种脱钙液中：１．１取１５ｍｌ盐酸，取氯化钠７．５ｍｌ加蒸馏水至ｌＯＯｍｌ，即为含盐酸脱钙液（ＶｏｎＥｂｎｅｒ氏液）。１．２取ｌＯｍｌ甲酸，取ｌＯｍｌ甲醛加蒸馏水至１００Ｍ，即为甲酸一福尔马林液脱钙液（Ｇｏｏｄｉｎｇ和Ｓｔｅｗａｒｔ氏液）。１．３取ｌＯｍｌ硝酸，取ｌＯｍｌ甲醛加蒸馏水全ｌＯＯｍｌ，即为福尔马林一硝酸脱钙液（Ｃｌａｙｄｅｎ氏液）方案（１）：将已固定１２ｈ～２４ｈ的骨片组织分别以１：３０的比例分别放入以上三种脱钙液中，置入恒温箱中３７℃过夜，或５０℃６ｈ～８ｈ，或６０℃４ｈ～６ｈ加温并更换液体２次，最终使组织变软用针轻刺可进入而不感到阻力为宜。脱钙后的组织经流水冲洗后，再行常规石蜡制片。方案（２）：将已同定１２ｈ～２４ｈ的骨片组织以１：３０的比例放入福尔马林一硝酸液脱钙液中，放在振荡器上振荡３ｈ’６ｈ并更换液体２次，最终使组织变软用针轻刺可进入而不感到阻力为宜。脱钙后的组织经流水冲洗后，再行常规石蜡制片。２、结果骨组织标本用盐酸脱钙液处理后切片质量欠佳，用甲酸脱钙溶液处理后的切片质量尚可，但需时间较长，而用福尔马林一硝酸脱钙液经振荡技术处理后的骨组织切片效果明显优于前二者，切片完整，切片厚度可达３鲜明。３、讨论传统脱钙的方法是将标本取材后直接放入单纯的含酸脱钙液中进行脱钙，一般需３天～７天的较长时间。强酸溶液在对组织脱钙的同时也会对组织酸化，骨组织在酸性｜悦钙液中浸入时间过长会影响后续切片及染色的效果。而且未经同定的骨组织在酸性脱钙液中会受到更大的损伤，所以先将骨组织同定１２小时～２４小时后再放入脱钙液内，能较好的保持骨组织的细胞形态结构。采用以上三种脱钙液处理骨组织，使溶液既能起到固定的作用又能达到脱钙的目的。其中甲醛可部分抑制酸的浸软作用，可适当保护组织不受酸的损害，不妨碍后续的染色技术，能保证切片ＨＥ染色的质量。骨组织过厚则需适肖延长脱钙时问，如脱钙不完全，组织切片时不仅损坏刀刃，而且切片偏厚，染色时组织易出现脱片现象。镜下观察可见骨组织结构模糊，骨基质欠平整，大部分区域折叠卷曲，骨细胞核皱缩而影响诊断。因此骨组织取材大小一定要控制在约ｌｃｍ

大鼠关节组织硝酸＼EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较

大鼠关节组织硝酸＼EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较标签：大鼠关节组织;硝酸脱钙;EDTA脱钙;石蜡制片骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一。

它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的。

适用组织化学、免疫组化等技术的染色。

大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败。

现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色。

对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果。

1 材料与方法1.1 材料大鼠30只、出生10周,平均体质量400 g(购自中山大学动物实验)。

雌雄不限,随机分组。

在麻醉状态下经心脏注射生理盐水及1%多聚甲醛处死动物,取关节组织、标本置10%甲醛固定液中固定24 h。

10%的硝酸脱钙液。

EDTA脱钙液,微波炉。

1.2 方法10%硝酸脱钙液的配制及脱钙方法将1份的硝酸溶液加入到9份的蒸馏水中搅拌均匀即可。

将大鼠关节组织放入是组织体积20倍量的10%硝酸溶液中,浸泡16～18 h,浸泡中无需更换脱钙液,用针能刺入即可。

取出组织置流水中冲洗碱化2 h。

取材,入脱水机石蜡包埋、切片、染色。

1.3 EDTA脱钙液的配制及脱钙方法用PBS缓冲液(pH7.2)100 ml、加NaOH 搅拌溶解至饱合状态,再加入EDTA10 g溶解后用1 mol/L Hcl调节pH值至7.2,加甲醛15 ml即可。

把脱钙液装入小烧杯中,将大鼠关节组织放置其中,脱钙液需充足。

放入微波炉中调节微波功率50℃,微波照射50 s即可达到脱钙的目的。

取出无需流水冲洗、直接取材、入脱水机、石蜡包埋、切片、染色。

2 结果10%硝酸脱钙处理的大鼠关节组织切片组织结构尚完整,组织块也能顺利连续切片,镜下:细胞形态、结构尚清,HE着色较淡,有时细胞核仁及膜边界不太清晰,分界不清,对比度不强。

在特殊染色和免疫组化染色中,着色较困难,效果欠佳。

一种可用于免疫组化的快速脱钙法

现脱钙不完全可重复脱钙１次．５％硝酸及ｉｋｇ液脱钙组微波脱钙方法同ＨＳ脱钙液ｅｉｓｎｎＡ组，室温脱钙法则分别将每组１Ｏ块骨组织放人装有ＨＡ液、５Ｓ％硝酸和ｊｋｎｓ的广口瓶内，脱ｅｉｇ液ｎ钙液体积为被脱钙骨组织体积的８以上，脱钙倍过程中加以震荡．（）统计学处理方法：ＳＳ１．６ＰＳ５统计软件包１
［通讯作者］王廷华．ＥｍｉＱＨＹ０７Ａｏ．ｎ． — ａ：Ｚ２０＠ＹＨｕｃｅｌｏｎ
维普资讯
１４７
昆明医学院学报
第２９卷
表１不同脱钙方法的比较 ±ｓ）脱钙方法
ＨＳ液ＡＨＳ液＋微波Ａ
每组２０块，每组再分为２小组，每小组１０块，
分别用于微波脱钙和室温脱钙．每块标本骨厚
０．ｍ３ｅ
［者简介］钱忠义（９３）作１７～，男，回族，云南楚雄州人，医学学士，实验师，主要从事病理实验技术及实验教学工作
０５）１７，均购自福州迈新生物技术开发有限公司．（）微波炉：有高火档的各种品牌家用微波３凡
炉均可．
（）标本：取已确诊股骨肉瘤标本共６４０块，每块大小为１ｅ ×１ｅ × ．ｅｍｍ０３ｍ，分为３大组，
理诊断需要．我们经过反复实验，探索出用ＨＳＡ

骨髓活检组织制片中改良脱钙液的应用及常见问题分析

骨髓活检组织制片中改良脱钙液的应用及常见问题分析翁丹枫【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2018(034)010【总页数】3页(P1166-1168)【关键词】骨髓活检;EDTA;制片;HE染色;免疫组织化学【作者】翁丹枫【作者单位】福建医科大学附属第一医院病理科,福州350005【正文语种】中文【中图分类】R446.8在临床病理外检工作中，骨髓组织由于含有大量的钙盐而比较坚硬，需经过脱钙处理后才能进行常规制片，脱钙不全或脱钙过度均影响骨髓HE染色及免疫组化染色效果，降低病理诊断的准确率。

作者在长期的骨髓制片工作中，摸索出一种适合骨髓组织的改良EDTA脱钙液，提高了骨髓制片质量和染色效果。

本文现就骨髓活检标本固定及取材、脱钙、制片和染色等环节进行总结，供广大同仁分析交流，共同提高骨髓活检组织制片和染色质量。

1 材料与方法1.1 材料选取福建医科大学附属第一医院病理科2016年1月～2017年8月骨髓活检穿刺标本1 000余例。

1.2 仪器及试剂 Thermo Pathcenter脱水机，Leica ST5020多功能染色机，Dako全自动免疫组化染色机；苏木精和伊红购自广州维格斯公司；二甲苯、乙醇及乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)购自上海沪试公司；CD3、CD38、CD68、CD138、MPO和Ki-67购自北京中杉金桥公司；CD20、CD42b、CD56、CD235a、Lambda购自福州迈新公司；Kappa购自Dako公司。

1.3 脱钙液配制改良EDTA脱钙液(pH 7.0)：取250 g的EDTA-2Na，溶于1 350 mL磷酸盐缓冲液中，待溶液彻底溶解后加入40%甲醛150 mL，加入氢氧化钠使溶液pH值至7.0。

1.4 HE染色及免疫组化染色送检骨髓组织经固定，3段取材后分别经盐酸甲酸混合酸脱钙液脱钙、不脱钙或改良EDTA脱钙液脱钙(图1)，脱水机脱水浸蜡(表1)，进行HE染色及免疫组化染色。

对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响

对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响发布时间：2021-04-15T05:57:28.848Z 来源：《健康世界》2021年2期作者：鞠学萍[导读] 目的对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响。

方法选取本院21例骨肿瘤患者标本开展本次研究，时间2019年01月-2020年01月，21例患者分别给予常规脱钙法（对照组）和表面脱钙法（观察组），比较两组对免疫组化抗原的影响。

结果观察组的骨松质脱钙时间、骨密质脱钙时间和光密度值均明显优于对照组（P＜0.05）；鞠学萍大庆市第四医院 163712摘要：目的对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响。

结果观察组的骨松质脱钙时间、骨密质脱钙时间和光密度值均明显优于对照组（P＜0.05）；与对照组的ki-67阳性率和Vimentin阳性率相比，观察组均明显偏高（P＜0.05）。

结论相对比于常规脱钙法来说，表面脱钙法更有利于保存免疫组化抗原，脱钙效果更理想，具有推广价值。

关键词：骨组织；表面脱钙法；免疫组化抗原 [Abstract] Objective To compare the effect of surface decalcification and conventional decalcification on immunohistochemical antigen of bone tissue.Methods 21 cases of bone tumor patients in our hospital were selected to carry out this study from January 2019 to January 2020.21 cases were given conventional decalcification method（control group）and surface decalcification method（observation group），and the influence of two groups on immunohistochemical antigen was compared.Results the cancellous decalcification time，dense decalcification time and optical density value of the observation group were significantly better than those of the control group（P < 0.05）；compared with the Ki-67 positive rate and vimentin positive rate of the control group，the observation group was significantly higher（P < 0.05）.Conclusion compared with the conventional decalcification method，the surface decalcification method is more conducive to the preservation of immunohistochemical antigen，and the decalcification effect is more ideal. [Key words] bone tissue；surface decalcification；immunohistochemical antigen骨组织是人体中存在的一种非常坚硬的结缔组织，基质中存在大量钙盐是骨组织存在的最突出特点【1】。

两种组织脱钙法对免疫组织化学染色影响比较

技术方法两种组织脱钙法对免疫组织化学染色影响比较杜娟,柳剑英,苏静(北京大学基础医学院病理学系,北京 100191)[摘要]目的:了解1%(体积分数)盐酸和10%(体积分数)硝酸脱钙液对多种抗原免疫组织化学染色效果的影响。

方法:选择伴有灶状钙化的软组织标本包括甲状腺乳头状癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和淋巴结各3例,骨组织标本包括活检和尸检病例共9例,将样本分为3组,一组分别用10%(体积分数)硝酸处理24、42和48h ,另一组分别用1%(体积分数)盐酸处理1、2和3h ,还有一组不用酸处理作为对照组,同时进行多种抗原免疫组织化学染色,其中乳腺癌组织作ER 、PR 和K -i 67染色,甲状腺癌组织作TT F -1染色,前列腺癌作34 E12和P504s 染色,结肠癌作AE1/AE3、P504s 和K -i 67染色,淋巴结作CD 3、CD 20和K -i 67染色,骨组织作CD3、CD 20、CD68、CD 235a 、M PO 、K -i 67、A E1/A E3和TTF-1染色。

结果:伴有钙化的软组织和骨组织内多种抗原免疫组织化学染色阳性程度均随酸处理时间的延长而有不同程度的下降,骨组织对酸处理的耐受力比软组织强;不同抗原对酸处理的敏感性不同,TTF-1和K -i 67最为敏感,ER 、CD3、和CD 20耐受性较好。

结论:大多数情况下,盐酸和硝酸处理都会降低组织免疫组织化学染色的敏感性,但是对不同抗原的影响程度不同。

大块骨组织可以采用10%(体积分数)硝酸脱钙,软组织比例较高的骨组织和骨髓活检组织尽可能使用1%(体积分数)盐酸脱钙。

[关键词]脱钙技术;盐酸;硝酸;免疫组织化学[中图分类号]R36-33 [文献标志码]A [文章编号]1671-167X (2011)02-0290-05do:i 10.3969/.j issn .1671-167X.2011.02.025Co m parison of t wo different tissue decalcification m ethods for i m m unohistoche m istryDU Juan ,L I U Ji an -y ing ,S U Ji ng(D epa rt m en t of Patho l ogy ,Peking U n i versity Schoo l of Basic M ed i ca l Sc i ences ,Be ijing 100191,Ch i na)ABSTRACTObjective :To i n vestigate t h e effects of 1%hydr och loric ac i d and 10%n itric ac i d on i m m u -nohistoche m ica l sta i n i n g for several antigens .M et hods :F ifteen cases o f foca lly ca lcified soft tum ors i n -c l u di n g three cases of t h yro i d papillary carc i n o m a ,three o f breast i n vasi v e ducta l carcino m a ,three of prostate cancer ,three of colon adenocarc i n co m a and t h ree o f nor m a l ly m ph nodes ,w ere selected i n th is study ,and so w ere n i n e cases of bone and bone m arro w tissue fr o m b i o psy and au topsy .T issue sa m ples w ere div i d ed i n to three groups .One group w as each soaked i n to 10%nitric acid for 24,42and 48h,another group w as each incubated i n 1%hydr och l o ric ac i d for 1,2and 3h .The o t h er g r oup w hich w as no t treated w ith ac i d w as regarded as contro.l Then i m munoh istoche m ical sta i n i n g w as conducted i n these sa m ples for an ti g ens as fo llo w s :ER,PR and K -i 67in breast invasive ducta l carc i n o m a ;TTF -1i n thyroid papillar y carci n o m a ;34 E12and P504s i n prostate cancer ;AE1/AE3,P504s and K -i 67i n co l o n ade -nocarcinco m a ;CD3,CD20and K-i 67i n ly m ph nodes ;CD3,CD20,CD68,CD235a ,MPO,K -i 67,AE1/AE3and TTF-1in bone tissue .R esults :A fter the tissues deca lcificated in bo th acid so l u ti o ns for so m e ti m e ,t h e numbers o f positi v e cells decreased and the i n tensity of i m m unosta i n i n g beca m e w eaker ,wh ich w as proportionate to ti m e .Bone tissue w as less i n fluenced than calc ified soft ti s sue .D ifferent antigens sho w ed d ifferent sensiti v ity to the sa m e ac i d treat m en.t TTF -1and K -i 67w ere the t w o m ost vu l n erable an -tigens a m ong t h e m;wh ile ER,CD3and CD20w ere the least influenced .The effects o f decalcifica ti o n on i m m unostai n i n g o f one antigen w ere the sa m e i n d ifferent tissues .Conc l u sion :I n m ost cases ,both hy -drochloric acid and n itric acid deca lcificati o n can lo w er the sensitivity o f i m munoh istoche m ical sta i n i n g ,but have different effects on different anti g ens .It is better to use 10%nitric aci d for decalc ification of relati v ely lar ge bone tissue and to use 1%hydrochloric ac i d for bone m arro w tissues and bone tissues con -ta i n i n g m uch m ore so ft tissue .KEY W ORDS Decalcification techn i q ue ;H ydrochloric acid ;N itric acid ;I m m unoh i s toche m istry基金项目:国家重点基础研究发展计划(973计划,2007CB815602-5)资助Supported by the N ati on al Basic Res earch P rogra m of Ch i n a (973Progra m,2007CB815602-5)C orrespond i ng au t hor s e -m ai,l li u ji anyi ng @b j m u 网络出版时间:2011-3-17 15 37 00 网络出版地址:htt p ://k.i net/k c m s /d etail/11.4691.R.20110317.1537.004.h t m l骨组织和钙化软组织内含有大量以磷酸钙和碳酸钙为主的无机钙盐,组织质地较硬,往往难以直接制片[1-4],即便能够勉强制成切片,在蓝色钙盐背景下也难以看清细胞结构,对病理诊断工作造成很大290 J OURNAL OF PEK I NG UN I VERSITY(H EALT H SC IENCES ) V o.l 43 No .2 Apr .2011的不便,因此这类组织需要脱钙处理后才能进行常规制片和观察。

脱钙骨免疫组化染色方法的构建

脱钙骨免疫组化染色方法的构建
吴鸿雁
【期刊名称】《齐齐哈尔医学院学报》
【年(卷),期】2004(025)005
【摘要】在对骨骼生理和病理的研究过程中，经常需要制备脱钙的骨免疫组化标本，然而由于骨骼组织的特殊性，制备好的骨组化标本也并不是一件容易的事。

由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶，脱钙是标本制备中至关重要的过程。

一些强酸如盐酸，硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐，但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏，使接下来的工作无法进行；我们仿照目前国外方法：EDTA低温脱钙[1]，得到的结果比较满意，现总结如下。

【总页数】1页(P541)
【作者】吴鸿雁
【作者单位】南京大学医学院附属鼓楼医院病理科,210008
【正文语种】中文
【中图分类】R392
【相关文献】
1.两种常用的免疫组化染色方法对NOS染色效果的比较 [J], 居培;余红民;
2.EML4-ALKVentana全自动免疫组化和手工免疫组化染色方法应用 [J], 周立娟;苏丹;张海青;
3.HE染色切片褪色后再进行免疫组化染色方法的比较 [J], 李丽;杨桂芳
4.HE染色切片褪色后免疫组化染色方法研究 [J], 刘海芳
5.EDTA微波脱钙骨的免疫组化染色 [J], 刘大维;初同伟;张良;邱俊
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