培养基和胎牛血清
ht29细胞培养方法
ht29细胞培养方法
HT29细胞是一种人类结肠癌细胞系，常用于研究肠道肿瘤的生物学特性及药物治疗反应。
以下是HT29细胞的培养方法：
1. 培养基配制：使用DMEM/F12培养基，加入10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素和0.25%胰酶/乳酸酸酯酶混合液（Trypsin-EDTA）。
2. 细胞传代：当细胞生长到80%以上时，用Trypsin-EDTA消化细胞，离心收集，重新种植到新的培养瓶中。
每7-10天传代一次。
3. 细胞冻存：将HT29细胞分散在1ml凝胶剂液中（10% DMSO、90% FBS），混合后放置在-80℃冷冻库中保存备用。
4. 细胞检测：检测细胞的形态、生长状态和细胞表面标志物，以确保细胞的纯度和鉴定。
以上是HT29细胞的基本培养方法，通过科学合理地操作和管理，可以获得高质量的HT29细胞，用于肠道肿瘤研究和药物筛选等领域。
- 1 -。
细胞培养手册
细胞培养手册1.培养基配制（如200 mL）：①胎牛血清10%（20 mL）②双抗1%（青霉素-链霉素，2 mL）③加入DMEM 至200 mL。
2.细胞复苏：①将冻存于-80℃或液氮中的细胞取出，放在37℃的温水中来回摇晃，使处于冰状的细胞解冻。
②将培养基、PBS提前预热至37℃，可增大细胞复苏成功率。
③将解冻的细胞（含培养基）移至15 mL的离心管中，1000 rpm离心10 min。
④倒掉上清液，向离心管中加入1-3 mL的完全培养基，用移液枪将细胞轻轻吹打，使得细胞均匀地悬浮在培养基中。
⑤将吹散的细胞加到装有培养基的培养皿（或培养瓶）中，再将培养皿（或培养瓶）轻轻摇晃，使细胞均匀地分布在培养基中。
⑥将接种有细胞的培养皿（或培养瓶）放入37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
2.细胞传代①将培养瓶（皿）中的培养液倒出至废液盒中。
②向培养瓶（皿）中加入2 mL胰蛋白酶，消化细胞，让贴壁的细胞分散开来。
③加入胰蛋白酶消化2 min后，向培养瓶（皿）中加入4 mL培养基，同时轻轻吹打培养瓶（皿）壁，将贴壁生长的细胞吹散开。
④将胰蛋白酶消化过的细胞移至15 mL离心管中，1000 rpm离心10 min。
⑤将离心后的上清液倒掉，向离心管中加入4-6 mL的培养基，轻轻地将细胞吹打开，使细胞均匀地悬浮在培养基中。
再将分散好的细胞加入到培养瓶（皿），每个培养皿中加入2 mL细胞悬浮液。
⑥将接种有细胞的培养皿置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
3.细胞冻存将经胰蛋白酶消化后的细胞1000 rpm离心10 min，去掉上清液，再向离心管中加入1-1.5 mL冻存液（冻存液配制：70%DMEM-1050μL、20%FBS-300μL、10%DMSO-150μL），先放在4℃存放1 h，再放在-20℃存放1 h，然后再放在-80℃下过夜，最后放在液氮中长期储存。
4.细胞计算。
293t细胞冻存步骤
293T细胞是一种广泛应用于细胞生物学和分子生物学研究中的细胞系，冻存293T细胞的 步骤如下：
1. 细胞培养：将293T细胞在含有适当培养基（如DMEM）和10%胎牛血清（FBS）的细 胞培养皿中培养。细胞应保持在37℃、5% CO2的培养箱中，并定期更换培养基。
2. 细胞准备：当293T细胞生长至80%-90%的密度时，准备细胞用于冻存。将细胞从培养 皿中用胰酶或三胰蛋白酶等酶解剂进行胶原酶消化，使细胞分散成单细胞悬浮液。
3. 细胞计数：使用细胞计数板或自动细胞计数仪对细胞进行计数，以确定细胞的浓度。
293t细胞冻存步骤
4. 细胞冻存液的配制：根据细胞密度计算所需的冻存液量。常用的冻存液配方包括含有 10% DMSO（二甲基亚砜）的培养基。将DMSO缓慢加入到培养基中，充分混合。
5. 细胞冻存：将细胞悬浮液冻存液按照适当比例混合，使细胞最终的浓度为1-2×10^6 细胞/mL。将混合液分装到冻存管中，每管约放入1-2 mL的混合液。然后将冻存管放入冷冻 容器中，以-80℃或液氮中的-196℃进行冷冻。
6. 细胞保存：将冻存管转移到液氮罐中进行长期保存。细胞在液氮中保存时可以长期保持 其生物学特性。
293t细胞冻存步骤
需要注意的是，在进行细胞冻存时，应注意细胞的健康状态、冻存液的配制和细胞密度的 控制，以确保冻存后的细胞能够保持其生物学特性和可用性。
细胞培养要用胎牛血清吗？选好细胞培养基很重要
细胞培养要用胎牛血清吗？选好细胞培养培养基很重要
细胞培养要用胎牛血清吗？选好细胞培养培养基很重要。
不是所有培养试验都是用胎牛血清的，下面来简单的介绍下细胞培养培养基的选择。
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。
在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。
总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。
以上细胞培养培养基选择由拜力生物Mr.wang整理提供，如找不到您想要的资料，请联系拜力生物技术人员。
细胞培养所需耗材有哪些
细胞培养的路上，有多虐心就有多少需要值得注意的地方。
小小的平皿之中，细胞点点，引无数英雄竞挂东南枝。
正所谓“万事开头难”，即便是细胞复苏与保存这两件看似简单的事情，也能造成实验汪内心无比巨大的阴影面积。
下面就给各位实验室新手介绍一下细胞培养具体需要哪些耗材。
一、细胞培养基础试剂1、培养基：一般是用不完全培养基+10% FBS（胎牛血清）自己配的，有时也添加双抗预防细胞感染。
具体培养基类型根据你养的细胞类型去选择。
2、胰蛋白酶：简称是胰酶，消化细胞用的。
一般消化1-2 min，时间太短，细胞消化不完全，时间太长，会消化过度损伤细胞。
3、常用试剂：酒精，PBS 缓冲液。
二、细胞培养基础耗材1、细胞培养容器。
（1）培养瓶：如果你们是实验室小规模一般选50ML 100ML 250ML。
（2）玻璃瓶：培养基可以买胰酶的配置需要的成本很低所以准备两三个150ML的瓶子自己配就行了。
配置胰酶需要购买一种过滤器。
（3）细胞4102培养1653板（我们自己常用的有96空、24孔、6孔，当然还有其他的规格，可以根据需回要选择）。
（4）培养基：如果自己配置的话要买一些蓝盖的瓶子，一般规格会有1000ml、500ml、250ml、100ml的，也要买一些装血清的血清瓶，10ml的玻璃试管也要买一些。
2、耗材。
吸管、移液管、各种枪和枪头、离心管、封口膜等。
（1）玻璃吸管：长25-30CM 玻璃器2113皿总是摔5261断所以稍稍长一点比较好。
（2）EP管：4ML的塑料管、冻存管、这些塑料的管子是必须的。
（3）移液枪：（各种型号都要一把吧）这个不算是耗材但是枪头是耗材。
三、细胞冻存试剂和耗材1、冻存液：一般用10% DMSO+FBS+培养基组成，FBS 和培养基的比例依细胞类型决定，比较珍贵的细胞一般用90% FBS，一般的细胞可以用50% FBS+40% 培养基来配制。
2、胰蛋白酶等用于细胞培养的一般试剂。
3、冻存管、离心管、离心机、吸管、枪头、显微镜、冻存盒、冰箱、液氮罐等。
细胞培养时为什么要加入胎牛血清
细胞培养时为什么要加入胎牛血清？许多临床和做科研的小伙伴们都要涉及到细胞培养，在细胞培养实验中，血清无疑成为影响实验成功与否的重要因素，而在众多血清之中，牛血清是最为常用的。
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，其中含有丰富的细胞生长所必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。
牛血清是一种成分复杂的混合物，而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。
牛血清主要成分有蛋白质，多肽类，激素类，其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。
我们都知道牛血清根据取材时间不同而有不同的区分。
分别有胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。
由于胎牛从未接触过外界，与新生牛和小牛血清相比，抗体含量明显降低，故抗体与培养细胞发生交叉反应的风险也较低，是理想的细胞生长补充剂。
市场上胎牛血清的品牌种类很多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨血清质量的优劣。
小编汇总了多家用户和血清经销商以及网络的经验，分析如下：养过细胞的童鞋大都有着这样的共识：血清，由于其复杂的内在成分和难以控制的外界因素，它既是细胞生长的必备营养，也是细胞死亡的致命毒药，当我们废寝忘食的，呕心沥血的，鞠躬尽瘁的养着细胞同时，也极有可能因为一时的疏忽和大意选错了血清，导致珍贵的细胞意外身外，一切归零，不得不洗心革面重头开始！当血清中内毒素含量≤10EU/ml时，此血清为特级胎牛血清；目前，由于同一厂家，不同批次的血清，内毒素数值也可能有较大差异，因此很多血清厂家在名称上已不注明级别。
但使用者仍可通过检测报告，自行甄别挑选。
编辑Ausbian品牌许晴将经过初步检测合格的很多供体胎牛的粗血清，混合在一起，在低温条件下，经七次加压过滤，最后三次为0.1 µm无菌过滤处理，保证用血清的安全性，同事价格上也有较大优势，是一款高性价比的血清品牌。
成骨培养基配方
成骨培养基配方
成骨培养基是一种特殊的细胞培养基，它可以用于培养和研究骨细胞、软骨细胞和成骨细胞。
成骨培养基的配方是关键之一，下面介绍一种经典的成骨培养基配方。
1. DMEM/F12培养基：DMEM和F12培养基的混合物能够提供足够的营养物质和生长因子，支持细胞的存活和生长。
2. FBS：胎牛血清(FBS)是细胞培养中最广泛使用的血清，提供多种生长因子和营养物质，促进细胞的增殖和分化。
3. 抗生素和抗真菌剂：如青霉素和链霉素，保持培养物的纯度和无菌状态。
4. 抗氧化剂：细胞长期培养会产生氧化应激，影响细胞的生长和功能，加入抗氧化剂如谷胱甘肽(GSH)和丙酮酸可以减少氧化应激的影响。
5. 骨形态发生蛋白-2(BMP-2)：BMP-2是一种重要的成骨分化因子，能够促进干细胞向成骨细胞的转化，加入BMP-2能够促进细胞的成骨分化。
6. 维生素C：维生素C是一种重要的抗氧化剂，能够抑制细胞凋亡和促进胶原合成，加入适量的维生素C可以促进细胞的生长和分化。
以上是一种经典的成骨培养基配方，但随着科学技术的发展和研究的深入，配方也在不断改进和完善。
未来的成骨培养基会更加精细化，能够更好地模拟人体环境，促进细胞的生长和分化。
各种培养液的配方
各种培养液的配方不同的细胞类型和培养目的需要使用不同的培养液。
下面列举一些常见的细胞培养液配方及其用途。
1.DMEM培养液：DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种最常用的细胞培养基，适用于多种哺乳动物细胞的培养。
以下是DMEM培养液的配方：-1×DMEM：将DMEM粉末加入去离子水中，调整pH至7.2-7.4，用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%胎牛血清（FBS）：将FBS加入1×DMEM中，使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素：将1%抗生素/抗菌素（如青霉素/链霉素）加入1×DMEM中，使最终浓度为1%。
2.RPMI1640培养液：RPMI1640是一种适用于淋巴细胞和白血病细胞的培养基。
以下是RPMI1640培养液的配方：-1×RPMI1640：将RPMI1640粉末加入去离子水中，调整pH至7.2-7.4，用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%FBS：将FBS加入1×RPMI1640中，使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素：将1%抗生素/抗菌素加入1×RPMI1640中，使最终浓度为1%。
- 2-mercaptoethanol：将2-mercaptoethanol加入1×RPMI 1640中，使最终浓度为0.05mM。
3.MEM培养液：MEM（Minimum Essential Medium）是一种用于哺乳动物细胞培养的基础培养液。
以下是MEM培养液的配方：-1×MEM：将MEM粉末加入去离子水中，调整pH至7.2-7.4，用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%FBS：将FBS加入1×MEM中，使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素：将1%抗生素/抗菌素加入1×MEM中，使最终浓度为1%。
-1×非必需氨基酸：将非必需氨基酸（如谷氨酰胺、苏氨酸等）加入1×MEM中。
细胞培养的必需营养物质
细胞培养的必需营养物质
细胞培养所需的必需营养物质包括以下几类：
1. 基础培养基：如RPMI-1640、DMEM 等，提供细胞生长所需的基本营养成分。
2. 血清：胎牛血清或新生牛血清，提供细胞生长所需的生长因子和激素。
3. 氨基酸：细胞合成蛋白质所需的必需氨基酸。
4. 维生素：如维生素C、维生素E 等，对细胞的生长和代谢有重要作用。
5. 无机盐：如钠、钾、钙、镁等，维持细胞的渗透压和酸碱平衡。
6. 葡萄糖：细胞的主要能量来源。
7. 生长因子：如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子等，促进细胞的生长和分化。
8. 抗生素：防止细菌和真菌污染。
细胞培养操作步骤
细胞培养操作步骤培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清2ml。
依次比例酌量配置。
超净工作台常规配置移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，保种管所需试剂：gibco高糖培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。
首次传代前细胞的复苏，首先用一大烧杯盛满37℃的温水放于液氮罐旁边，待细胞株取出后留上端1/3于37℃水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。
若种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。
这一过程可在超净工作台外操作。
实验步骤一、原代细胞的培养1.紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。
2.将所需的培养基确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基瓶口用酒精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。
特别是将培养基瓶放于斜架上，瓶口对准酒精灯，且放在距离酒精灯最近的位置，瓶盖置于酒精灯的另一侧。
3.取1个高压后的新培养瓶，瓶口在酒精灯上消毒2-3次，旋开后分别再次消毒瓶口和瓶盖2-3次分别放于酒精灯两侧，把保种管在超净台外用酒精棉球擦拭下2/3后拿进超净台内在酒精灯上消毒保种管口2-3次放于台面左手边，取1ml移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2次，然后再装上枪头吸取保种管内的细胞液，悬空移入培养瓶内。
4.拿出1支高压后的5ml定量移液管，在酒精灯上灼烧尾部后装于电动移液器上，再次放于酒精灯上灼烧整个定量移液管管身2-3次，悬空进入培养基瓶内吸取4ml培养基再悬空移入培养瓶内，将培养瓶瓶口和瓶盖在酒精灯上消毒2-3次后拧紧平放，在瓶身做好实验标记。
hela细胞的培养传代
hela细胞的培养条件为:高糖DMEM培养基,100ml/l胎牛血清;培养液中一般血清含量为10%传代步骤: 1．倒去细胞培养液(对于小口的培养瓶可采用顷倒方法,对于培养皿,必须用吸管吸出)2．吸取适量的PBS加入培养瓶中,轻轻振荡后弃去重复一次,以清于血清成分,利于胰酶消化3．加入适量0.25%胰蛋白酶（一般100mm培养皿可加入1ml，15cm 培养瓶加入5-8滴）转动培养瓶，使其湿润整个细胞房，高温下消化2-3分钟。
翻转培养瓶，肉眼观察细胞单层，见细胞单层薄膜出现针孔大小空隙时即可顷去消化液，如消化程度不够可延长消化时间，或置于37°C孵箱中加速胰酶作用如见大量细胞片装脱落，已消化过头，则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作4．加入适量培养液终止消化吸取瓶中培养液反复冲瓶壁上的细胞层，至全部冲下轻轻吹打，混匀，成细胞悬液取样计数，调整细胞浓度为5′10 /ml15cm 培养瓶培养时，吸取1ml细胞悬液加到新培养瓶中，加入4ml培养液，盖好,置37°C 孵箱中培养。
传代的天数要以HELA细胞的生长密度为基础,细胞密度大了就要传,应该每天观察HELA细胞,注意其生长状态.HELA细胞的生长分5期:游离期细胞经消化分散后，由于愿生质收缩及细胞弹性，细胞成圆形，折光性强，呈悬浮状态。
吸附期接种24小时后，由于细胞的附壁特性，开始贴壁，圆形细胞变成延展状态。
繁殖期细胞快速生长、分裂，形成细胞岛直至细胞单层。
维持期细胞形成单层后生长与分裂减缓、折光性减弱，细胞内颗粒增多，由于代谢物的积累，CO2增多，培养液变黄。
衰退期如不及时换液和传代，由于营养缺乏、代谢物积累，细胞内颗粒进一步增多,立体感差，细胞皱缩、脱落、逐渐衰老死亡。
应该在其维持期和衰退期及时换液.一般而言是4天换一次液.。
胎牛血清的详细介绍
胎牛血清的详细介绍胎牛血清细胞培养基的几个问题L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。
脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。
L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。
L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？ GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。
一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。
什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中用作PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。
研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。
为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。
由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。
如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升细胞悬液中加0.1毫升0.4％的台盼兰溶液。
轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。
活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色细胞是死细胞。
培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。
EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。
建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
培养基的配制
培养基的配制：实验步骤：在超净台内，安装好滤器。
用去离子水溶解1640培养基，并用磁力搅拌器搅拌2 h，使之充分溶解。
在超净台内过滤。
分装到250 mL的玻璃瓶内。
用封口膜封好，-20℃保存，过滤结束时，还要取少许培养基进行菌培，验证培养基是否是无菌。
胎牛血清的处理：没有灭活的血清中含有补体成分，需要将血清在56℃条件下灭活30 min。
在水浴锅内进行，灭活的过程中，要不停地摇晃，使受热均匀，防止沉淀析出来。
注意：刚取出的冻存血清不要立即放入56℃中，因为突然的温度升高会使装血清的玻璃瓶破裂，应该放在室温逐渐溶解，然后，再进行灭活处理。
生长培养基的配制：90 mL IMDM中加入大约10 mL的胎牛血清（10% 左右），双抗可以不加。
(有资料表明双抗对细胞有一定的毒副作用)Hanks 和D-Hanks液，以及胰酶的配制Hanks液是一种常用的平衡盐溶液，D-hanks 液是不含钙镁的Hanks液。
它们与细胞的生长状况下的pH值和渗透压一致，细胞在Hanks 液中可生存几个小时，Hanks液主要用于清洗细胞。
D-Hanks液主要用于配制胰酶。
配制Hanks液需将CaCl2溶于蒸馏水，再将其它试剂配制成溶液，将两次配制的溶液混合，定容。
胰酶是一种常用的细胞消化液，在原代培养时，用胰酶消化，使细胞从组织块中游离出来。
传代培养时，用胰酶消化贴壁的细胞，并分散成单个细胞。
胰酶分离细胞的能力与不仅与胰酶作用的温度、时间、浓度和pH有关，还与细胞的类型和特性有关。
用于原代培养消化组织块采用的浓度为：0.1% 或 0.125%；用于传代培养采用的胰酶浓度为：0.25%或者0.2%。
胰酶的配制：1）由于胰蛋白酶的作用主要机制是通过螯合钙镁离子，而钙镁离子是保持细胞和细胞之间相互连接所必需的，所以，胰酶的配制用无钙镁的D-Hank液，避免钙镁离子干扰胰酶的活性。
2）胰酶在pH8.0时活性最强，在过滤除菌前，须用NaHCO3干粉调溶液的pH值。
培养细胞所需的几种主要液体的配制方法
培养细胞所需的几种主要液体的配制方法：1．DMEM维持培养基DMEM基础培养基95ml 95ml胎牛血清5ml谷氨酰胺液2ml含有DMEM基础培养基95ml，胎牛血清5ml，谷氨酰胺液2ml。
混合均匀，密封后与4摄氏度保存。
2．D-hank’sD-hank’s干粉g(1袋)NaHCO3超纯水1000ml取D-hank’s干粉加入超纯水500ml搅拌均匀，加入的NaHCO3搅拌至完全溶解，倒入1000ml容量瓶中，用1mol/l的HCL或者NaOH 溶液调整溶液的PH值为7.2,最后经过∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装后4摄氏度保存.3. DMEM完全培养基85ml,DMEM基础培养液85ml,, l-谷氨酰胺溶液, 2ml1000u/ml双抗液1ml胎牛血清15ml取DMEM基础培养基85ml, 胎牛血清15ml,l -谷氨酰胺溶液2ml,混合均匀,密封于4摄氏度保存.4. DMEM细胞基础培养基DMEM干粉(1袋)Na2HCO3超纯水1000 ml取DMEM干粉1袋()倒入烧杯中,取800ml 超纯水溶解培养基干粉,搅拌均匀,然后向溶液中加入的Na2HCO3,搅拌至完全溶解后倾入1000 ml容量瓶中,再用1mol/l 的HCL 或者1mol/l的NaOH溶液调整溶液的PH值为7.2,混合均匀后,定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装4摄氏度保存.5. l-谷氨酰胺溶液l-谷氨酰胺DMEM基础培养基100ml称取l-谷氨酰胺干粉g于烧杯中,加80 ml超纯水于烧杯中搅拌溶解,用100ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20摄氏度保存.使用添加量是1ml/50ml,使用浓度是2mmol/l.青霉素(注射用) 80万单位(1瓶)链霉素(注射用) 0.8 g％生理盐水80ml取注射用青霉素100万单位及注射用链霉素于80ml DMEM培养基中,搅拌混合均匀,用∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中-20℃％的胰酶溶液胰蛋白酶干粉 0.25 gDMEM基础培养基100ml称取胰蛋白酶干粉0.25 g于烧杯中,加入80ml DMEM基础培养基溶液,进行搅拌溶解,100 ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20℃条件下保存.8.mg/ml的内皮细胞生长添加物溶液(ECGS)ECGS干粉 15 g(1支)无菌超净水 6 ml取内皮细胞生长添加物15 g(1支),加入6 ml无菌超纯水完全溶解后,分装于-20℃条件下保存.在培养基中添加剂量为1ml/50ml,即培养基浓度为50微克/ ml.9.PBS 液KCLNaclNa2HPO4.12H2OKH2PO4分别取KCL, Nacl, Na2HPO4.12H2O, KH2PO4于烧杯中,加入适量的超纯水搅拌至所有药物完全溶解,然后倾入1000ml容量瓶中,最后定容并调节PH为7.20,分装于4℃保存,。
浅析影响胎牛血清质量的几大因素
浅析影响胎牛血清质量的几大因素胎牛血清作为一种常用的培养基添加剂，被广泛用于细胞培养、疫苗制备、抗体生产等领域。
其质量的好坏直接关系到最终产品的质量和效果。
下面将重点分析影响胎牛血清质量的几大因素。
1.采集方式：采集胎牛血清的方式有两种，一种是直接采集胎牛静脉血，另一种是采集到胎儿自然脱落的胎盘血。
直接采集胎牛静脉血可以获得更多的血清，但胎牛的死亡率较高，容易造成血清污染和质量下降。
而采集胎盘血则减少了对胎牛的伤害，但血量较少，收集效率低。
因此，选择适当的采集方式可以更好地保证胎牛血清的质量。
2.饲养管理：胎牛的饲养管理直接关系到血清的质量。
饲养环境应该干净卫生，并严禁使用生长激素、抗生素和激素类药物等对胎牛进行干预。
合理的饲料和草料供应可以保证胎牛的健康成长，进而提高血清的质量。
3.血样处理：从采集到的胎牛血样中提取血清时，需要经过一系列处理步骤，如离心、分离、过滤等。
这些步骤的操作技术和条件都可能影响血清的质量。
离心速度和时间的不当可能导致沉淀和杂质的残留。
分离过程中，应避免血样与外界的接触，以避免污染。
过滤时应选择合适的滤膜和过滤器，以确保血清的纯净度。
4.保存条件：胎牛血清的保存条件对血清的质量起着重要作用。
一般来说，胎牛血清应存放在低温环境下，常见的保存温度为-20℃或-80℃，并避免频繁的冻融循环。
此外，胎牛血清应避免阳光直射和暴露在高温环境下，以防止脂质氧化和蛋白质降解。
适当的保存条件可以保持血清的活性和稳定性。
5.检测方法：血清的质量可通过多种方法来进行评估，如蛋白质浓度检测、免疫球蛋白含量检测、内毒素浓度检测等。
选择合适的检测方法，可以及时发现质量问题，并进行调整和改进。
定期对血清质量进行检测，是保证血清质量的重要手段。
总之，影响胎牛血清质量的因素很多，包括采集方式、饲养管理、血样处理、保存条件和检测方法等。
只有综合考虑这些因素，并采取相应的措施，才能有效提高胎牛血清的质量，满足各种应用的需求。
分装胎牛血清解冻条件
分装胎牛血清解冻条件胎牛血清是一种常用的细胞培养基中的补充物，它含有丰富的营养物质和生长因子，可以提供细胞生长所需的环境。
然而，胎牛血清在低温保存时会形成冰晶，导致部分蛋白质凝固，使其失去活性。
因此，在使用胎牛血清前，需要进行解冻处理，以恢复其活性和功能。
胎牛血清的解冻条件是指解冻的时间、温度和方法。
解冻时间应尽量缩短，以减少活性的损失。
常见的解冻时间为15-30分钟。
解冻温度应适中，过高的温度会导致蛋白质的变性，过低的温度则会延长解冻时间。
通常，解冻温度为37°C。
解冻方法有两种常用的方式，一种是水浴法，即将胎牛血清放入37°C的水中解冻；另一种是室温解冻，即将胎牛血清放置在室温下解冻。
除了解冻条件，胎牛血清的贮存条件也是影响其活性和功能的重要因素。
胎牛血清应储存在-20°C以下的冰箱中，避免频繁的冻融循环。
在取用胎牛血清时，应采取无菌操作，避免污染。
在解冻胎牛血清前，需要先将其从冰箱中取出，放置在4°C的冰箱中解冻12小时。
解冻后，应立即将胎牛血清转移到无菌条件下进行分装。
分装时，应避免长时间的接触空气，以防止污染和氧化。
分装胎牛血清的容器也是需要注意的。
常见的容器有离心管、瓶子和板子等。
离心管适合小规模的分装，瓶子适合中等规模的分装，板子适合大规模的分装。
无论使用何种容器，都应保持容器的无菌性，以防止细菌污染。
在分装胎牛血清时，还需要控制分装量和保存方式。
分装量应根据实际需要进行调整，避免浪费和交叉污染。
保存时，应将胎牛血清置于-20°C以下的冰箱中，避免频繁的冻融循环。
胎牛血清的解冻和分装条件对胎牛血清的活性和功能具有重要影响。
合理的解冻条件可以最大程度地保持胎牛血清的活性和功能，从而提高细胞培养的成功率。
合理的分装条件可以保持胎牛血清的质量和稳定性，确保其长期保存和使用。
分装胎牛血清的解冻条件是解冻的时间、温度和方法。
解冻时间应尽量缩短，解冻温度应适中，解冻方法可以选择水浴法或室温解冻。
小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案
小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案小鼠星形胶质细胞是中枢神经系统中的一类胶质细胞，具有重要的生理功能。
进行小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验是研究其功能和机制的关键步骤之一、下面是一份关于小鼠星形胶质细胞的原代培养及分离纯化实验方案。
实验步骤：1.小鼠主星形胶质细胞原代培养（1）准备培养基：将DMEM/F12培养基配制好，添加10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素/链霉素（P/S）和20ng/mL生长因子（如EGF和bFGF），混匀即可。
将培养基过滤灭菌。
（2）小鼠灭菌和解剖：选取3-5天龄的小鼠，进行表面消毒处理，解剖小鼠颅脑组织。
（3）组织分离：将解剖得到的小鼠颅脑组织放入培养皿中，使用去髓针将组织剪碎，加入2mL预先配制好的DMEM/F12培养基。
（4）消化组织：使用0.25%胰酶溶液和0.05%胆汁酸溶液进行组织消化，将组织置于37°C的恒温槽中，用胶性吸管轻轻吹泡，约30分钟后停止消化。
（5）细胞分离：用离心机将细胞分离，将上清液收集到新的离心管中，用DMEM/F12培养基进行稀释后离心。
（6）细胞计数：用显微镜观察细胞形态，进行细胞计数。
（7）细胞培养：将细胞悬浮液转移到预先涂有胶原的培养皿中，加入预先配制好的培养基，放入培养箱中，37°C、5%CO2培养。
2.小鼠星形胶质细胞分离纯化（1）胶质细胞去除：在培养2-3周后，使用轻轻摇晃的方法将胶质细胞除去，以保留星形胶质细胞。
（2）非星形胶质细胞去除：使用超声波分离方法对星形胶质细胞进行提纯，将细胞悬浮液转移到离心管中，使用超声波技术使星形胶质细胞聚集起来，再次离心。
（3）细胞计数和分装：用显微镜观察细胞形态，进行细胞计数并分装到新的培养皿中。
（4）鉴定纯化程度：使用免疫细胞化学方法，如免疫荧光染色，检测特定星形胶质细胞标志物的表达水平，以确定纯化程度。
（5）细胞培养：将纯化后的星形胶质细胞继续培养，并进一步进行功能和机制的研究。
hmc3细胞培养注意事项
hmc3细胞培养注意事项
HMC3细胞是一种人类单核细胞系（human monocyte-derived cell line），用于研究中枢神经系统疾病和免疫炎症等方面。
在进行HMC3细胞的培养时，以下是一些需要注意的事项：
1.培养基选择：HMC3细胞可在DMEM/F12培养基中进行培
养。
可添加10%的胎牛血清（FBS）作为培养基的补充物。
血清的来源和批次可能会对细胞的生长和表型产生影响，
因此建议在培养过程中保持血清的一致性。
2.培养温度和CO2浓度：HMC3细胞在37°C和5% CO2的条
件下进行培养，这是保持细胞正常生长和分裂所需的适宜
条件。
在培养箱中保持稳定的温度和CO2浓度，以确保细
胞能够正常增殖和存活。
3.培养容器和涂层物：HMC3细胞可在扁平培养皿、细胞培
养瓶或多孔板等容器中进行培养。
在使用细胞培养瓶或多
孔板时，可以将表面涂层物如聚-L-赖氨酸（poly-L-lysine）
或胶原蛋白用于增强细胞的附着和生长。
4.培养时间和传代：对于HMC3细胞的传代，建议将细胞培
养至80-90%的密度，通常每3-4天进行一次传代。
过度的
细胞密度可能导致细胞死亡和阻塞。
在传代过程中，使用
适当的细胞解离试剂（比如胰酶-EDTA）进行细胞的分离。
5.污染防控：确保无菌操作环境，避免细胞培养物的污染。
定期检查和清洁培养器具、通风系统和工作区，遵循良好
的实验室操作规范和消毒程序，以防止微生物的污染。
这些注意事项供参考，具体的培养条件和实验操作可能会有所不同。
琼脂_细胞_实验报告
一、实验目的1. 掌握琼脂细胞实验的基本原理和操作方法。
2. 学习观察细胞在琼脂中的生长和繁殖情况。
3. 了解琼脂细胞实验在生物学研究中的应用。
二、实验原理琼脂细胞实验是一种常用的细胞培养方法，通过将细胞培养在含有琼脂的培养基中，可以观察到细胞的生长和繁殖情况。
琼脂作为一种凝固剂，在实验中起到固定细胞和提供营养的作用。
实验过程中，通过观察细胞的形态、大小、繁殖速度等特征，可以了解细胞的生物学特性。
三、实验材料1. 细胞：选用生长旺盛的细胞株，如HeLa细胞、3T3细胞等。
2. 培养基：DMEM培养基，含10%胎牛血清。
3. 琼脂：海藻酸钠，浓度为2%。
4. 试剂：0.25%胰蛋白酶、0.1%EDTA、无菌水、75%酒精、无菌移液枪、无菌吸管、培养皿、培养箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 准备工作：将细胞从培养瓶中取出，用0.25%胰蛋白酶和0.1%EDTA消化，制成细胞悬液。
2. 配制琼脂培养基：将海藻酸钠与无菌水按2%的比例混合，加热溶解，冷却至50℃左右，加入DMEM培养基和10%胎牛血清，充分混匀。
3. 倒制琼脂培养基：将配制好的琼脂培养基倒入培养皿中，厚度约为2mm，待凝固后，用无菌移液枪吸取细胞悬液，均匀滴加在琼脂培养基表面。
4. 培养细胞：将培养皿放入培养箱中，温度控制在37℃，湿度为95%，培养24小时后，观察细胞生长情况。
5. 观察细胞：使用显微镜观察细胞在琼脂中的生长和繁殖情况，记录细胞的形态、大小、繁殖速度等特征。
6. 数据处理：对观察到的数据进行分析，绘制细胞生长曲线，了解细胞的生物学特性。
五、实验结果与分析1. 细胞形态：在琼脂培养基中，细胞呈圆形、椭圆形或梭形，细胞质均匀，细胞核清晰可见。
2. 细胞大小：细胞大小随培养时间延长而增大，繁殖速度较快。
3. 细胞繁殖速度：在琼脂培养基中，细胞繁殖速度较快，约24小时繁殖一代。
4. 数据处理：通过绘制细胞生长曲线，发现细胞在琼脂培养基中的生长呈指数增长，符合指数生长规律。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。
配方三 黄豆芽汁培养基
黄豆芽 100克 琼脂 15克
葡萄糖 20克 水 1000毫升
洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000毫升，分装，灭菌，备用。
个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小.
培养基还有:1640培养基
特殊培养基：
一 选择性培养基
1酵母菌富集培养基
葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05%
hyclone胎牛血清主要作用
1. 提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。
2. 提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
蛋白胨 10克 琼脂 20克
麦芽糖 40克 水 1000毫升
先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。
本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
配方二 马铃薯糖琼脂培养基
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。
葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克
碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克
酵母粉 0.4克 琼脂 20克
水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升
先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。
2、放线菌培养基
配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）
常见培养基有：
1、细菌培养基
配方一 牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏0.3克 ，蛋白胨1.0克，氯化钠 0.5克，琼脂 1.5克，
水 100毫升
在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。
其他培养基：
1.高氏一号培养基
KNO3:1g,
NaCl:0.5g,
K2HPO4:0.5g
MgSO4·7H2O：0.5g
FeSO4·7H2O：0.01g
可溶性淀粉20g
琼脂20g
蒸馏水1000ml
pH调至7.2~7.4，121°C灭菌30min
察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率.
器官分化及植株再生培养
将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况.
愈伤组织诱导的总体情况
烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而
把这培养基的pH值调到7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。
配方四 豌豆琼脂培养基
豌豆 80粒 琼脂 5克
水 200毫升
取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。
4、食用菌菌种培养基
配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基
蒸馏水1000g pH7.2
分离海洋微生物的培养基配方
2216E培养基配方（固体培养基）
蛋白胨 5克
酵母膏 1克
磷酸高铁 0.01克
琼脂 15-----20克
陈海水 1000毫升
煮沸氢氧化纳（5%）的溶液调PH值7.6—7.8
20%马铃薯煮汁 1000毫升
蔗糖 20克 琼脂 18克
把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升，即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。
培养基和胎牛血清
拜力生物编辑整理：
培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。
按所用原料不同，可分为两类：应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的，称为天然培养基；应用化学药品配成并标明成分的，称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基，大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在2~6。C的冰箱内。
可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克
磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克
硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克
琼脂 2克 水 100毫升
先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。
5.烟草的培养基
在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽
CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化
愈伤组织诱导培养基制备
以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.
配方二 马铃薯培养基
取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。
配方三 根瘤菌培养基
孟加拉红0.003% pH4.5
2 Ashby无氮培养基 富集好养自生固氮菌
甘露醇1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02%
二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5%
二 鉴别培养基
EMB培养基，常用于鉴别E.coli
蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g 伊红Y 0.4g 美蓝0.065g
hyclone胎牛血清的主要成分
hyclone胎牛血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且hyclone胎牛血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。hyclone胎牛血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
hyclone胎牛血清种类
目前用于组织培养的hyclone胎牛血清主要是牛hyclone胎牛血清，培养某些特殊细胞也用人hyclone胎牛血清、马hyclone胎牛血清等。选择用牛hyclone胎牛血清培养细胞的原因：来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛hyclone胎牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物hyclone胎牛血清更合适。
配方二 面粉琼脂培养基
面粉加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。
3、真菌培养基
配方一 萨市（Sabouraud’s）培养基
牛hyclone胎牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。牛hyclone胎牛血清分为小牛hyclone胎牛血清、新牛hyclone胎牛血清、胎牛hyclone胎牛血清。胎牛hyclone胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛hyclone胎牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛hyclone胎牛血清取自出生10－30天的小牛。显然，hyclone胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，hyclone胎牛血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。
制法：先用少量水将淀粉调成糊状，再取700ml水在电炉上加热煮沸
然后边搅拌便将淀粉糊倒入，同时保持沸腾。然后再将其他成分加入，
溶解后补足水分至1000ml
肉汤蛋白胨斜面：
蛋白胨10g
牛肉膏5g
蒸馏水1000ml
NaCl：5g
pH：7.0~7.2，121℃灭菌20min
烟草叶片愈伤组织诱导
取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解