微量临床样品基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
QIAGEN微量DNA提取
QIAamp DNA Micro HandbookZhang weiCarrier RNA的作用：它可以提高DNA和柱子的结合能力，尤其是对于低目标分子的样本来说。
如果加入了Carrier RNA，那么最后洗脱下来的产物中会有目的DNA和Carrier RNA。
而且Carrier RNA的量远远大于DNA的量。
因此，通过计算初始加入多少CarrierRNA 的量来确定后续实验中所需要使用的洗脱产物的量。
加入310uLBuffer AE到310ug的Carrier RNA干粉末中，充分溶解，存于-20℃保存，不要反复冻融在3次以上。
轻轻的将Buffer AL和溶解的Carrier RNA混匀，不要产生泡沫。
含有Carrier RNA的Buffer AL可以在常温下（15-25℃）放置48h。
事先溶液准备Buffer ATL如果出现沉淀，可以在70℃下溶解。
Buffer AL如果出现沉淀，可以在70℃下溶解。
Buffer AW1加入25mL无水乙醇。
Buffer AW2加入30mL无水乙醇。
加入Carrier RNA：小量血液提取DNA过程中，每100uLBuffer AL加入1uL溶解的Carrier RNA。
在微量组织中提取DNA中，200uLBuffer AL中加入1uL Carrier RNA。
微量血液中提取DNA（可以从1-100u1-100uL L 血液中提取基因组DNA）（微量细胞的基因组DNA提取可以使用该步骤）1)吸取100uL血液加入1.5mL离心管中2)加入Buffer ATL至最终体积为100uL3)加入10uL蛋白酶K4)加入100uLBuffer AL，关上盖子，涡旋15s5)56℃孵育10min（孵育时反复震荡几次可以增加DNA产出量）6)简单离心，甩下瓶盖上的液滴1)加入50uL无水乙醇，关上盖子，涡旋15s，室温孵育3min（如果室温超过25℃，无水乙醇可以事先冰浴）7)简单离心，甩下盖子上的液滴8)将上步的液体转移至吸附柱里，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液（个人建议可以将滤液再次吸回吸附柱内在洗脱一次）9)在吸附柱里加入500uL Buffer AW1，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液10)在吸附柱里加入500uL Buffer AW2，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液11)空转20000×g（14000rpm）离心3min12)将吸附柱转移至干净的1.5mL离心管，在膜上小心加入20-100uL BufferAE或者双蒸水来溶解，室温放置1min，20,000×g(14,000rpm)离心1min。
基因组DNA提取试剂盒 说明书
基因组DNA 提取试剂盒使用说明书此说明书仅适用于此说明书仅适用于基因组基因组DNA 提取试剂盒提取试剂盒，，使用前请务必仔细阅读说明书有关内容使用前请务必仔细阅读说明书有关内容，，若有任何疑问若有任何疑问，，欢迎致电厦门欢迎致电厦门致致善生物科技有限公司生物科技有限公司（（4006618810*************）进行咨询进行咨询，，您也可以登录我们公司的网站您也可以登录我们公司的网站（（ ）了解相关信息或者通过E-mail ( ****************) 与我们进行沟通与我们进行沟通。
一 产品简介基因组DNA 提取试剂盒采用本公司自行研制的磁珠，用于从抗凝全血、新鲜或冻存组织、培养细胞、石蜡包埋组织、唾液、培养细菌等一系列不同样品中分离、纯化高质量的基因组DNA。
我们根据磁珠的独特分离作用，提供了一个极其简便的操作程序：样品裂解、磁珠吸附、洗涤以及洗脱。
在最适的试剂及操作条件下，可获得高质量DNA。
该方法具有简便、快捷、高效等特点，整个提取过程无须使用苯酚、氯仿等有机溶剂。
品名规格 货号 基因组DNA 提取试剂盒100T 4hk001裂解液DL 120ml ×2 磁粒 40ml 洗涤液 50ml ×5 洗脱液 45ml 缓冲液HTL 20ml ×1 二硫苏糖醇（DTT ） 10管，0.18g/管 说明书 1份储存条件储存条件：：本试剂盒所有试剂（除DTT 外）均可以室温保存,应避免阳光直射。
当室温低于15℃时，裂解液中可能有结晶析出，38℃水浴加热几分钟，恢复澄清后即可使用，提取效率不受影响。
DTT 需要于冰箱4℃保存。
本试剂盒有效期为12个月， 请于有效期内使用。
安全信息：试剂中含刺激性化合物，操作时应小心，避免沾染皮肤，眼睛和衣服，若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三 使用者自配试剂DTT 溶液使用浓度为1mol/L 。
DNAzol基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
DNAzol 基因组DNA快速提取试剂目录号：DN26目录编号包装单位DN2601 50mlDN2602 100ml❖产品介绍：DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂，简单高效，结果可靠，可快速提取基因组DNA，适用于多种大量或少量样品。
DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA，经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。
整个过程只需10-30 分钟，DNA 回收率可达70-100％，得到的DNA 不需再纯化，可直接用于Southern 杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。
❖产品储存：室温保存至少一年。
❖注意事项：DNAzol 有毒害性，应避免直接接触皮肤和眼睛。
❖操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）1.裂解，匀浆a.组织：25-50mg 组织加1ml DNAzol ，使用匀浆仪处理5-10 次。
少量（5-10mg）柔软组织，如脾或脑组织，可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打混匀，室温放置5-10 分钟。
b.细胞：单层培养的细胞应直接裂解，倒出培养基，加入DNAzol 用取样器吹打几次混匀。
每10cm2 细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。
c.细胞沉淀或悬浮液：每1-3×107细胞（体积小于0.1ml）加1ml DNAzol，反复吹打混匀。
以上均要使用大口径枪头吹打，以免过度剪切断基因组。
2.离心4 -25℃，10000g 离心10 分钟。
将得到的上清转入新管。
此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。
如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品，如肝、肌肉和大部分植物组织等，或要提取不含RNA 的DNA 时，可加此步骤。
其他样品可省略此步。
3.沉淀每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇，颠倒离心管5-8 次，混匀样品至出现DNA 沉淀，室温放置1-3分钟。
可以看见DNA 絮状沉淀，让沉淀自然沉降到管底，尽可能吸弃上清。
基因组dna提取步骤
基因组DNA提取步骤1.从无水乙醇中取出少许组织（约50mg）加入干净灭菌的EP管中，剪碎；2.加入400ul 1％的SDS，8ul（20mg/ml）的蛋白酶K，充分浸润，入55℃摇床（100转/分），期间振荡助溶至澄清（5-6h）；3.取出消化液，加入6mol/L的NaCl300ul，氯仿200ul，轻柔正反颠倒，使其充分乳化，4℃13000转/分离心30min；4.取出上清（约400ul），加入等体积氯仿抽提一次，轻柔颠倒后，4℃13000转/分离心10min；5.上清加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
6.取上清加入等体积异丙醇，轻柔混匀后-20℃沉淀10min；7.4℃13000转/分离心15min，弃上清；8.用75％乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心2min），弃上清；9.冰冻无水乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心4min）弃上清，自然晾干或烘干，DDW溶解，30-50ul。
基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。
利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。
加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。
在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。
一般来说,构建基因组文库, 初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。
而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下),并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。
质粒微型试剂盒dna提取基本步骤
质粒微型试剂盒dna提取基本步骤质粒微型试剂盒DNA提取基本步骤DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，而质粒微型试剂盒则是一种常用的DNA提取工具。
下面将介绍质粒微型试剂盒DNA 提取的基本步骤。
第一步：样本准备需要准备待提取DNA的样本。
可以是细菌培养物、动物组织或植物材料等。
将样本转移到离心管中，并进行离心，将细胞沉淀在离心管底部。
第二步：细胞溶解将样本中的细胞溶解，常用的方法是加入裂解液，通过裂解液中的化学物质或酶的作用，使细胞膜和核膜破裂，释放出DNA。
裂解液中的成分可以包括缓冲液、蛋白酶K和SDS等。
第三步：蛋白质沉淀为了去除样本中的蛋白质，需要进行蛋白质沉淀。
可以通过加入盐溶液或乙醇来使蛋白质凝集沉淀。
然后，离心管进行离心，使蛋白质沉淀到离心管底部。
第四步：DNA沉淀将上一步得到的蛋白质沉淀去除后，可以通过加入乙醇使DNA沉淀。
乙醇可以使DNA分子凝聚形成沉淀，然后通过离心将DNA沉淀到离心管底部。
第五步：洗涤和溶解将DNA沉淀洗涤去除离心管中的杂质，常用的洗涤液包括乙醇和盐溶液。
然后，使用适当的缓冲液溶解DNA沉淀，使其溶解成无色透明的溶液。
第六步：测定DNA浓度可以使用紫外吸收光谱法或荧光染料法等方法测定DNA的浓度。
通过测定吸光度或荧光强度，可以确定提取得到的DNA的浓度。
以上就是质粒微型试剂盒DNA提取的基本步骤。
通过这些步骤，我们可以从样本中提取到高质量的DNA，并用于后续的实验研究。
DNA提取是分子生物学领域中不可或缺的一步，它为我们揭示生物的遗传信息提供了基础。
希望这些步骤能够对您有所帮助！。
病毒基因组DNA RNA快速提取试剂盒II操作方法及步骤说明书
试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN2201) 裂解液VLB 室温20 mlPoly Carrier -20℃200μl去蛋白液RE 室温25 ml漂洗液RW 室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 mlRNase-free吸附柱RA和收集管室温50套室温储存12个月不影响使用效果，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液，包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。
该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求，如病毒RNA：HCV（丙肝病毒）,HIV（艾滋病毒）,和HTLV（人类嗜T淋巴细胞病毒）；病毒DNA：HBV（乙肝病毒）和CMV（巨细胞病毒）等等。
病毒裂解后，DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。
纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR/RT-PCR分析。
产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒DNA/RNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
注意事项：1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。
3.裂解液VLB和去蛋白液RE中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。
微量临床样品基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
微量临床样品基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN25目录编号包装单位DN2501 50次适用范围：适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签等微量样品中分离纯化基因组DNA。
试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次裂解液ML 室温11 ml结合液CB 室温15 ml抑制物去除液IR 室温25 ml漂洗液WB 室温15ml第一次使用前按说明加指定量乙醇Poly Carrier -20℃200 μl洗脱缓冲液EB 室温10 ml蛋白酶K粉（可选）20mg/ml-20℃20 mg吸附柱AC和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果储存事项：1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解。
因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
仔细阅读注意事项4。
4.产品介绍：本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中分离纯化基因组DNA。
各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA 从硅基质膜上洗脱。
纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。
产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.配备了Poly Carrier用于充分收集特别微量DNA。
基因组DNA抽提操作流程
基因组DNA抽提操作流程一、原理与意义先用细胞裂解液对已制备好的组织匀浆充分裂解，然后用蛋白酶去除其中的蛋白，再用氯仿一次抽提（无需用酚抽提）、预备液沉淀、RNase 去除RNA、乙醇再沉淀即可得到完整DNA。
该方法适用于从人或动物的各种组织、血液、培养细胞、G+/G－细菌中快速抽提基因组DNA。
抽提出来的DNA能用于几乎所有的分子生物学实验，如DNA梯度分析、PCR、限制性内切酶反应、克隆、Southern Blot分析等。
二、试剂及其配制抽提试剂盒购于上海生工公司，内含以下试剂：1.TE缓冲液：PH8.0，由10 mM Tris HCl和1 mM EDTA配成。
2.RNase A（3 mg）：使用前加入300 µl无菌双蒸水，煮沸10 min后使其自然冷却后使用，-20 ℃冻存。
3.Proteinase K（12 mg）：使用前加入600 µl无菌水，分装成小份，-20 ℃冻存。
4.Cell Lysis Solution与Precipitation Solution：溶液出现絮状沉淀50 ℃加热溶解后使用。
5. 1.2 mol/L NaCl。
冰冷乙醇和氯仿自备。
三、实验器材水浴锅、普通冰箱、1.5/2 ml离心管、移液器及枪头、紫外分光计、离心管架、剪刀、镊子、滤纸等。
四、操作步骤1.组织匀浆制备：取30 mg左右新鲜组织，加600 μl TE缓冲液，手工匀浆数次。
2.细胞裂解：吸取300 µl匀浆加600 µl Cell Lysis Solution，混匀。
3.消化蛋白：再加入9 µl Proteinase K(可适当增加)混匀，置于55 ℃水浴30 min以上（可达2.5 h），其间上下混匀几次。
4.氯仿抽提：加入600 µl氯仿（用户自备），轻柔上下混匀，不能太剧烈，以保证DNA的完整性。
5.沉淀：在台式离心机上，10000转/分，室温离心2 min。
细菌基因组DNA提取试剂盒(溶液型)操作方法及步骤说明书
细菌基因组DNA提取试剂盒目录号：DN12目录编号包装单位DN1201 50次DN1202 100次DN1203 200次❖适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次细胞核裂解液室温30 ml 60 ml 120 ml蛋白沉淀液室温10 ml 20 ml 40 mlDNA溶解液室温10 ml 15ml 30 mlRNase A(10mg/ml) -20℃150μl250μl400μl本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍：本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。
细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
❖产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂。
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
3.结果稳定，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50 kb -150kb，可直接用于构建文库，PCR，Southern-blot和各种酶切反应。
❖注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.用户需自备异丙醇、70％乙醇、0.5M EDTA和Lysozyme（溶菌酶）(用于革兰氏阳性菌)、lysostaphin(用于某些难裂解的革兰氏阳性菌)、水浴箱。
细菌基因组DNA提取试剂说明书
细菌基因组DNA提取试剂盒使用说明本试剂盒可用于革兰氏阴性和阳性菌的基因组DNA提取，由细菌重悬液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液组成。
可从1-5ml菌液中提取基因组DNA。
整个提取过程不超过45分钟。
提取过程包括：1菌液离心，重悬。
2裂解菌体，释放基因组DNA。
3盐析沉淀蛋白，分离DNA。
4异丙醇沉淀脱盐并浓缩。
5 70%乙醇清洗，晾干并用DNA溶解液溶解。
本试剂盒采用复合裂解液，其中含有抑制DNA酶的成分，在加热（65°C）状态下，可保证完整的细菌基因组DNA的充分裂解释放，本试剂盒即可提取异丙醇沉淀时，罕见浑浊的蛋白质杂质的共沉淀。
提取的基因组可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。
一、试剂盒组成（本试剂盒提供的组份, 至少可提取100份1-5ml菌液基因组DNA的纯化，每种组份均有足够的富余量）1．复合裂解液：30ml×1瓶。
2．蛋白沉淀液：300ml×1瓶。
3．DNA溶解液：20ml×1瓶。
4．操作说明书一份。
二、本试剂盒未提供，须用户自备的试剂为：异丙醇，70%乙醇（国产分析纯）。
三、提取操作：1．菌液离心：取革兰氏阴性菌菌液1-2ml；或者革兰氏阳性菌菌液2-5ml，1000rpm离心1分钟。
2．加入细菌重悬液100ul，震荡使菌体重悬。
3．将复合裂解液置65°C水浴加热，使结晶成分溶解，每个细菌重悬液中分别加入300ul的复合裂解液。
4．混璇器震荡混匀10秒，置65°C水浴中反应10分钟（革兰氏阴性菌），20分钟（革兰氏阳性菌）。
5．各管中加入300ul蛋白沉淀液。
上下颠倒5-6次使两者混匀。
6．13000-16000×g, 离心3-5分钟。
7．将上清液转移至新的离心管中（注意：由于有些细菌含有多糖或者脂蛋白成分，离心后会出现细胞成分上浮的情况，此时取漂浮层下的均一透明液体），加入等体积异丙醇，此时可见透明的絮状物，混匀后离心，同步骤5，吸去上清。
细菌基因组DNA提取快速微量提取法1取15ml菌体培养物于一灭菌
细菌基因组DNA提取快速微量提取法1.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Eppendorf管中，13000rpm离心1min, 弃上清液，收集菌体。
2.加入400ul裂解液（40mMTris-醋酸，20mM醋酸钠, 1mMEDTA，1%SDS,pH7.8）混匀,置于37℃水浴1h。
3.然后加入200ul 5mol/L的氯化钠溶液，混匀后于13000rpm离心15min。
4.取上清液，用苯酚抽提2次，氯仿抽提1次。
5.加两倍体积无水乙醇，1/10体积醋酸钾(3M ,pH8.0)，-20度保存1小时后，13000rpm离心15min，弃上清液，沉淀用70%乙醇洗2次；置于室温干燥后，溶于50ul TE溶液中，置4℃保存备用。
蛋白酶/SDS法制备1.取10ml菌体（如：Delftia sp）过夜培养物于一灭菌Eppendorf管中，4000rpm离心10min 收集菌体。
2.用Washing TE（50mmol/L Tris-HCl pH8.0, 10mmol/L EDTA pH8.0）洗菌体2次。
3.将菌体充分悬浮在5ml 1×TE缓冲液中，先后加入0.5ml 5mg/L的蛋白酶、0.5ml 10% SDS，轻轻混匀后50℃放置3h~5h。
4.接着用等体积的Tris饱和苯酚抽提2次，苯酚/氯仿/异戊醇抽提一次。
5.氯仿抽提一次后，乙醇沉淀DNA，用吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中，70%乙醇洗2次，干燥后溶于适当1×TE或ddH2O中。
酚氯仿1.细菌收集：取1ml培养物于1.5ml EP管中，室温8000rpm离心5min，弃上清，沉淀重新悬浮于1ml TE（pH8.0）中（用ddH2O也行)。
2.菌体裂解：加入6μl 50mg/ml的溶菌酶，37℃作用2h。
再加2mol/L NaCl50μl，10% SDS 110μl，20mg/ml的蛋白酶K 3μl，50℃作用3h或37℃过夜。
试剂盒DNA提取详细操作步骤
试剂盒DNA提取详细操作步骤一、试剂盒打开后需要准备的工作1、Proteinase K（蛋白酶K）的溶解①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100u l～200ul③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存，使用期限为12个月2、组织抑制剂（Inhibitor Removal buffer）的调配加入20ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩3、洗液（wash buffer）的调配加入80ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩二、组织DNA提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将采集来的样品剪碎（≤0.1cm）洗净保存液。
②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3个小时使其充分消化。
2、DNA提取①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴锅中10分钟。
②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。
③倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor Removal 然后离心倒掉底液④加洗液washing buffer500ul离心（洗液加两次）⑤在70℃预热Elution Buffer，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入Elution Buffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20℃保存。
三、细胞DNA的提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液③加200ul Binding Buffer，40ul蛋白酶K 混合均匀放入70℃水浴锅内消化10分钟。
2、DNA提取①加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。
DK614已降解基因组 DNA 小量提取试剂盒 说明书
上海莱枫生物科技有限公司网址：订货电话：传真：技术解答：技术支持：上海)已降解基因组DNA小量提取试剂盒一、产品简介本试剂盒采用独特的组织和细胞裂解液，配合蛋白酶K裂解细胞释放基因组DNA，Buffer GB调整DNA结合条件后，释放的基因组DNA被选择性吸附到硅胶膜上。
本试剂盒能有效回收≥50 bp的DNA片段，特别适合从DNA已经严重降解的动物组织中提取DNA，比如动物源性饲料或者固体食品、因保存不当DNA已经严重降解的组织，也适合从Trizol相间沉淀中提取DNA。
本试剂盒使用DNA吸附柱-CA回收DNA，最大吸附量为10 μg DNA，最小洗脱体积为15 μl。
相关产品：痕量DNA提取试剂盒(DK803)使用DK803处理DNA有明显降解的组织(乙醇或者福尔马林等固定液浸泡的组织和石蜡包埋的组织)可获得更高的产量，石蜡包埋组织无需脱蜡。
二、试剂盒组成和储存组成内容DK614-01 (50次) 原理与用途Proteinase K＊ 1 ml 降解蛋白Buffer TG-A 15 ml 分散组织Buffer GL 15 ml 释放DNABuffer GB 30 ml 调整DNA结合条件Buffer WAG 30 ml 洗涤去除蛋白Buffer WB2§16 ml 洗涤去除盐DNA吸附柱-CA 50个吸附DNA收集管50个×2 接收废液1.5 ml离心管(用于洗脱) 50个接收洗脱的DNATE※15 ml 洗脱DNA说明书1份＊Proteinase K：20 mg/ml, 室温保存。
可能会析出白色粉末状、絮状或者晶体状不溶物，不影响使用效果，使用前混合均匀。
§Buffer WB2：第一次使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇，混合均匀。
※TE：10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, 0.025%NaN3, pH 8.0(25°C)。
试剂盒所有组成成分均于室温储存。
试剂盒dna提取基本步骤
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试剂盒dna提取基本步骤（大纲）一、准备工作1.1准备所需试剂和材料1.2配制缓冲液和溶液1.3检查设备和工作台面二、样本处理2.1样本采集2.2样本破碎2.3样本澄清三、DNA提取3.1结合DNA3.1.1添加结合缓冲液3.1.2加入磁珠3.1.3混合均匀3.2清洗磁珠3.2.1加入清洗缓冲液3.2.2清洗磁珠3.2.3去除废液3.3DNA洗脱3.3.1加入洗脱缓冲液3.3.2洗脱DNA3.3.3收集洗脱液四、DNA纯化和检测4.1纯化DNA4.1.1使用纯化试剂4.1.2纯化DNA4.2DNA浓度和纯度检测4.2.1使用紫外分光光度计4.2.2分析检测结果五、DNA保存5.1保存条件5.1.1选择适当的保存温度5.1.2使用适当的保存缓冲液5.2DNA分装和保存5.2.1分装DNA5.2.2存放于指定位置六、实验注意事项和废弃物处理6.1注意事项6.1.1遵循实验室安全规范6.1.2防止交叉污染6.2废弃物处理6.2.1分类收集废弃物6.2.2按照规定处理废弃物一、准备工作在DNA提取的基本步骤中，准备工作是至关重要的一步，它包括以下几个主要内容：1.1 准备所需试剂和材料：首先，需要准备DNA提取过程中所需的各种试剂和材料。
DNA提取步骤中文版
一．DNA的抽提（QIAGEN试剂盒）。
（1）标记1.5mlEP管，吸取20ul蛋白酶K加入1.5mlEP管底部。
（2）加入200ul血清至1.5mlEP管。
若血清不足200ul，可加适量PBS 补充。
（余血清-20℃保存）（3）加200ul缓冲液AL至样品管，震荡混匀15s。
（4）56℃孵育10min。
（5）稍微离心，将EP管壁上的液体离心下去。
（6）加200ul无水乙醇至样品管中，震荡混匀15s，稍微离心。
（7）混合液转移至QIAamp螺旋住置于2ml收集管上，小心勿沾湿边缘。
（加样器垂直于螺旋住，将混合液慢慢加至滤膜中间）。
关盖，标记，8000rpm离心1min。
再将QIAamp螺旋住转移至一个清洁的2ml 收集管内，弃含滤液的收集管。
（8）打开QIAamp螺旋柱加入500ul缓冲液AW1，勿沾湿边缘。
关盖，8000rmp离心1min。
再将QIAamp柱转移至一个清洁的2ml收集管内，弃含滤液的收集管。
（9）打开QIAamp柱加入500ul缓冲液AW2，勿沾湿边缘。
关盖，全速12000rpm离心3min。
（10）标记1.5ml离心管，将QIAamp柱置于一个清洁的1.5mlEP管，弃含滤液的收集管。
打开QIAamp柱加入50ul缓冲液AE。
室温孵育3min。
12000rpm离心1min。
继续下一步实验操作或-20℃保存。
二：目的片段的扩增第一轮PCR反应体系30ul（要有一个阳性对照和一个阴性对照），n个标本10×Buffer 3n uldNTP（200ul/ml） 3n ulprimer 上游引物 0.3n ul下游引物 0.3n ulTaq酶 0.5n ulH2O 20n ul模板DNA 3 ul反应条件94℃ 1min94℃ 20sec55℃ 20sec72℃ 1min20sec反应35个循环注意：配体系时先配总反应体系（混匀），分装后，再加标本（一管一枪头）。
防止污染。
配置体系要在超净台内操作。
细菌基因组 DNA 快速提取试剂盒 说明书
细菌基因组DNA快速提取试剂盒（溶液型）GK1061 50 次GK1062 100次一、试剂盒组成Components GK1061 GK1062Digestion Solution(a)Proteinase K(b)NaCl Solution CTAB/NaCl Solution(c) Boiled RNase A (10mg/ml)TE (pH8.0)Lysozyme（d）SP Buffer 18ml3mg6ml6ml240µl18ml30mg0.5ml36ml6mg12ml12ml480µl36ml60mg1.0ml二、实验前的准备(a) Digestion Solution低温时可能出现沉淀，请于55℃适当加温溶解后使用，不会影响实验结果。
首次使用时，将Boiled RNase A全部加入到Digestion Solution中，充分混匀备用，加完Boiled RNase A的Digestion Solution，请于4℃保存。
(b) Proteinase K使用前加入300µl (GK1061) 、600µl (GK1062)灭菌双蒸水，分装-20℃冻存。
不得将ProteinaseK直接加入到Digestion Solution中，以免酶失活。
(c) CTAB/NaCl Solution使用前需要65℃预热，便于溶解和取液。
(d) Lysozyme使用前加入500µl (GK1061) 或1ml (GK1062) SP Buffer，使Lysozyme全部溶解。
分装后-20℃冻存。
三、试剂盒说明本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。
细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重新溶解于DNA溶解液中。
AxyPrep 基因组DNA小量制备试剂盒培养细胞DNA提取步骤
AxyPrep 基因组DNA小量制备试剂盒培养细胞DNA提取步骤1、尽可能的丢掉上清液，加1ml PBS 到每孔中，轻轻清洗1到2遍，用吸管吸出上清液。
2、每孔加0.25%胰蛋白酶0.5ml消化至细胞变圆后，加1ml1640培养基终止消化。
3、用吸头来回吸注几次，转移1.5ml匀浆至2 ml 离心管，如匀浆体积不足1.5ml，补足PBS至1.5ml。
4、1000转离心5分钟，尽可能的丢掉上清液，加350µl PBS 到每孔中，室温静置1 min。
5、用吸头来回吸注几次，制作成匀浆。
6、加入0.8 µl RNase A，漩涡振荡15s，室温静置1min。
7、加入150µl Buffer C-L和8 µl Proteinase K。
立即漩涡振荡1min 混合均匀。
短暂离心后,将离心管置56℃水浴10 min。
8、加入350 µl Buffer P-D，漩涡振荡30s 混合均匀，12,000×g 离心10 min。
9、将DNA制备管置于2 ml 离心管中，将步骤5中的混合液移至制备管中，12,000×g离心1 min。
10、弃滤液，将制备管置回到原来的2 ml 离心管中，加入500µl Buffer W1，12,000×g离心1 min。
11、弃滤液，将制备管置回到原来的2 ml 离心管中，加入700µl Buffer W2，12,000×g离心1 min，以同样的方法，用700µl Buffer W2 再洗涤一次。
12、弃滤液，将制备管置回原来的2 ml 离心管中，12,000×g 离心1 min。
13、.将DNA 制备管置于另一洁净的1.5 ml 离心管中，在制备管膜中央加100-200µl Eluent 或去离子水，室温静置1 min，12,000×g 离心1min 洗脱DNA。
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNase A(10mg/ml) -20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
细菌基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
细菌基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN11目录编号包装单位DN1101 50次DN1102 100次DN1103 200次DN1111 50次(带蛋白酶K) DN1112 100次(带蛋白酶K) DN1113 200次(带蛋白酶K)适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次平衡液室温 5 ml 10 ml 20 ml 缓冲液RB 室温30 ml 60ml 120 ml 结合液CB 室温11 ml 20 ml 40ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 50 ml 100 ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 2x25 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 蛋白酶K粉（可选）20mg/ml-20℃20mg 2×20mg 4×20mg 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
DNA微量提取
CTAB法微量提取植物基因组DNA
1．取0.1g左右植物叶片在液态中快速研磨成粉末，适量转移至2ml eppendorf管中，约1/3刻度处。
2．加入600ul预热（65℃）2×CTAB DNA提取缓冲液，然后65℃温浴30分钟。
其间再摇匀2次以上（目的使其充分混匀）。
3．取出eppendorf管，加入600ul氯仿/异戊醇（24:1）混合均匀后，室温10分钟，其间充分摇匀一次，静置至下层墨绿色。
然后12000rpm 离心10分钟，取出后吸取上清液到新的eppendorf管中(1.5ml)。
(去掉枪头尖)
4．加入500ul预冷的等体积异丙醇混合均匀，进行DNA沉淀。
6．8000rpm, 10分钟，离心沉淀DNA，倒掉上清液。
风干15~30分钟。
7．加入200ul 70% 乙醇（去除盐类）洗涤，放置3~12小时。
（可省去，仅利用第8步即可）
8．倒掉70% 乙醇，室温下风干DNA，10分钟。
再用无水酒精（去色素等有机物）洗涤一次，再风干15~30分钟后，加入200ul TE buffer，溶解DNA。
药品试剂
2×CTAB
2%CTAB 20g CTAB
75mM Tris.HCl 75ml 1M Tris.HCl PH 8.0
15 mM EDTA 30ml 0.5M EDTA PH 8.0
1.05M NaCl 61.4g
add water to 1000ml
氯仿：异戊醇（24：1）=500ml ：20.83ml。
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微量临床样品基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN25目录编号包装单位DN2501 50次适用范围：适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签等微量样品中分离纯化基因组DNA。
试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次裂解液ML 室温11 ml结合液CB 室温15 ml抑制物去除液IR 室温25 ml漂洗液WB 室温15ml第一次使用前按说明加指定量乙醇Poly Carrier -20℃200 μl洗脱缓冲液EB 室温10 ml蛋白酶K粉（可选）20mg/ml-20℃20 mg吸附柱AC和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果储存事项：1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解。
因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
仔细阅读注意事项4。
4.产品介绍：本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从微量血液、法医材料、干血点、药签、口香糖、尿液等微量样品中分离纯化基因组DNA。
各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA 从硅基质膜上洗脱。
纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。
产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.配备了Poly Carrier用于充分收集特别微量DNA。
4.多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
注意事项：1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到所需温度备用。
部分样品需要准备1M DTT。
3.结合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.Poly Carrier：Poly Carrier使用方法：如果起始处理量很少（例如小于10μl全血和法医样品），我们推荐使用Poly Carrier，如果预期有较大量DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入Poly Carrier。
使用时在每个样品提取所需结合液CB 中加入2μl Poly Carrier储存溶液，将结合液CB与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可(结合液CB 容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。
也可根据样品数量，在总共需要的结合液CB 中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。
混合液在室温24小时内稳定。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!1.血液样品a.取1-100μl血液到1.5ml 的离心管中。
b.如果不足100μl，加入裂解液ML补足到100μl。
c.加入10μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，充分混匀，再加入100μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，在70℃放置10分钟。
如果处理样品<10μl,建议在100μl结合液CB 中加入1μl Poly Carrier储存溶液。
d.冷却后加入50μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，室温放置3分钟。
如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
e.接操作步骤项下7。
2.干血点a.用打孔机打孔的方法在血卡(上面有干血点) 上冲取3mm(1/8英寸) 直径血卡小片(上面有干血点),最多将3个直径3mm血卡小片放入1.5ml 的离心管中。
一般血液应该点在特定纸或者血卡上面干燥,如903 paper or IsoCode paper (Schleicher & Schuell), BloodstainCard or FTA Card (Whatman), Guthrie test cards, or comparable blood cards.b.加入180μl裂解液ML。
c.加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。
d.56℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。
如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
e.加入200μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀。
如果只处理一个3mm血卡小片，建议在200μl结合液CB 中加入2μl Poly Carrier 储存溶液。
f.70℃轨道摇床上面900rpm振摇10分钟。
如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每3分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
g.接操作步骤项下7。
3.组织样品a.新鲜或者解冻的组织在液氮中研磨成细粉后或者用解剖刀切成小碎块（切成微块可以提高产量）后取<10mg，转入装有180μl裂解液ML的1.5ml离心管中，用大口径枪头吹打混匀。
b.加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
c.将裂解物放置在56℃水浴1-3小时或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
d.加入200μl 结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀。
如果处理样品量少, 建议在200μl结合液CB 中加入2μl Poly Carrier储存溶液。
e.冷却后加200μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，室温放置5分钟。
如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
f.接操作步骤项下7。
4.口香糖a.将30mg口香糖切成小块放入1.5ml离心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
b.56℃轨道摇床上面900rpm振摇至少3小时。
如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
c.加入200μl 结合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻涡旋振荡充分混匀。
d.70℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。
如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
e.冷却后加200μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。
f.最高速（约14,000rpm）离心1分钟，取上清加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。
g.接操作步骤项下8。
5.法医材料a1.剪下1 cm2烟头或者过滤嘴外层纸，切成6小块放入1.5ml离心管，加入300μl 裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
接步骤b。
a2.剪下0.5-2.5 cm2信封或者邮票，切成小块放入1.5ml离心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
接步骤b。
a3.从毛发根部毛囊处开始剪下0.5-1 cm长度毛发放入1.5ml离心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)和20μl1M DTT溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。
接步骤b。
a4.将指甲剪成小块放入1.5ml离心管，加入280μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K 溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。
接步骤b。
a5.将约0.5cm2信封沾染了血液、唾液、精液的材料剪成小块放入1.5ml离心管，加入300μl裂解液ML和20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) (如果是精液需另加入20μl 1M DTT溶液)，立刻涡旋振荡充分混匀。
接步骤b。
b.56℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。
如果没有可加热轨道摇床，可以在水浴或者heating block上面进行，每10分钟涡旋振荡10秒帮助裂解。
一般毛发1小时裂解可以完成，如果不完全可以延长时间。
指甲等难裂解物建议过夜裂解。
最后没有裂解的不溶物在后续步骤e中会通过离心去除。
c.加入200μl结合液CB（加入2μl Poly Carrier），立刻涡旋振荡充分混匀。
d.70℃轨道摇床上面900rpm振摇1小时。
e.最高速（约14,000rpm）离心1分钟，取上清加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。
f.接操作步骤项下8。
6.微切割样品（包括福尔马林固定的微切割样品）a.加入15μl裂解液ML 到0.2 ml 离心管中，放入微切割样品。
b.加入10μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml) ，立刻涡旋振荡充分混匀。
c.56℃水浴3小时（福尔马林样品16小时）至裂解完全，中间不时颠倒涡旋。
d.加入15μl裂解液ML，再加入50μl结合液CB（加入1μl PolyCarrier），立刻涡旋振荡充分混匀。
e.冷却后加入50μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，室温放置5分钟。
如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
f.接操作步骤项下7。
7.将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。
8.加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。
9.加入600μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
10.加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
11.将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
12.取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加20－50μl洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置2-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。
将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于20μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。