千层塔的23种原植物中石杉碱甲含量

采集上述原植物，从速粉碎与干燥；2%酒石酸提取总碱，HPLC 测定石杉碱甲含量，外标法定量。结果 草药千层塔来源
于石杉科石杉属与马尾杉属共计 23 种拟蕨类原植物，其中 18 种含有石杉碱甲，伏帖石杉中含量最高，达 0.200 4%，而东
北石杉等 5 种中未检出石杉碱甲。结论 目前中国应用的千层塔原植物来源多样，且各种之间石杉碱甲含量差别较大。
WANG Jun1，2， PAN Sheng-li3 (1. College of Medicine，Jiaxing University，Jiaxing 314002，China; 2. Wuyi Epiphyte Research
Institute，Wuyi 321400，China; 3.College of Pharmacy，Fudan University，Shanghai 200032，China)
千层塔原为江南民间草药，收载于《中华本草》 第二卷 [1]，目前主要作为工业上提取石杉碱甲之 用，后者为当今治疗阿尔茨海默病的重要药物。
传统的观点认为千层塔的原植物为石杉科 （Huperziaceae）石杉属（Huperzia）拟蕨类植物蛇 足石杉[Huperzia serrata (Thunb. ex Murray) Trev.] 以及少量的同属植物皱边石杉、长柄石杉等，并认 为石杉科植物普遍含有石杉碱甲［2］。为合理利用资 源，笔者细致整理了目前我国所用的草药千层塔的 原植物，并测定了各原植物新鲜成熟样品中石杉碱 甲的含量。结果发现，千层塔原植物来源多样，且 诸种间石杉碱甲含量差别较大。
0.008 32 25
H.serrata
Jilin:Tonghua, Shihu, Fusong,Antu; Liaoning:Huanren; Zhejiang: Xiaofeng, 0.022 6 35 Wuyi, Songyang
H. serrata var. intermedia
Hunan: Hongjiang, Yanling;Zhejiang: Xiaofeng, Songyang
0.027 5
20
H. serrata var. longipetiolata
Anhui: Ningguo; Hunan: Hongjiang ,
Yanling; Fujian:Fuzhou, Changting,
Liancheng, Sanming; Chongqing: Jinyun, Yunnan: Jinghong, Hainan: Tongzha;
关键词：千层塔;石杉属；马尾杉属；石杉碱甲；高效液相色谱法
中图分类号：R284
文献标识码：A
文章编号：1001-2494(2009)16-1212-03
Content of Huperzine A in 23 Species from Chinese Herbal Medicine Qiancengta
ABSTRACT：OBJECTIVE To determine the contents of huperzine A in fresh materials of each species from Qiancengta,Chinese herbal medicine. METHODS Herbal materials of Qiancengta were sorted in order to identify the taxonomic species by the aid of specimens in herbariums. Above species were collected in the wild forests from various provinces and were then grinded and dried as soon as possible. Total alkaloids were extracted by 2% tactic acid, and were analyzed by HPLC. The content of huperzine A was determined by external standards. RESULTS Qiancengta consisted of 23 species from Huperzia Bern. and Phlegmariurus (Herter) Holub. Huperzine A was found in 18 species, especially in H. appressa (Desv.) Löve et Löve, whose content reached up to 0.200 4%, while the content of huperzine A was not observed in H. miyoshiana and other 4 species. CONCLUSION The variable species of Qiancengta were found in China, and the difference of their contents of huperzine A is in evidence. KEY WORDS：Qiancengta; Huperzia; Phlegmariurus; huperzine A; HPLC
表 1 23 种千层塔原植物及各自石杉碱甲含量
Tab.1 23 Species from Qiancengta combined with their content of huperzine A respectively
Species
Herborizing site
Huperzine A content/%
石杉碱甲（台州万邦药业有限公司丁跃庭提 供，纯度为 99.8%）；酒石酸、醋酸铵、冰醋酸及其 他试剂均为分析纯；甲醇为 HPLC 级；水为超纯水。
2 方法与结果 2.1 千层塔各种原植物的Байду номын сангаас定
于浙江省某药厂用于工业提取的收购自各地 的草药千层塔原料中，仔细分检原植物，核对中科 院植物所及各地馆藏标本，经分类鉴定确定原植 物，同时收集记录产地信息，产地分别为安吉 (Anji)；安图(Antu)；长汀(Changting)；赤水(Chishui)；
大瑶山(Dayaoshan)；抚松(Fusong)；福州(Fuzhou)； 洪江(Hongjiang)；桓仁(Huanren)；景洪(Jinghong)； 缙 云 山 (Jinyunshan) ； 雷 公 山 (Leigongshan) ； 连 城 (Liancheng)；龙游(Longyou)；南川(Nanchuan)；宁 国(Ningguo)；三明(Sanming)；石湖(Shihu)；松阳 (Songyang)；通化(Tonghua)；通什(Tongzha)；武义 (Wuyi)；孝丰(Xiaofeng)；炎陵(Yanling)；马来西亚 (Malaysia)；越南(Vietnam)。各原植物种名见表 1。 2.2 野生样品的采集与供试样品的制备 2.2.1 野生样品的采集 根据“2.1”项下收集到的 产地信息，结合馆藏标本所记载的产地，在当地具 有相当植物分类学专业知识的科研人员协助下，野 外实地采集新鲜样品。选取其中分类学性状典型且 生长 3 年以上者，从速制成供试样品并压制凭证标 本（凭证标本存于复旦大学药学院生药教研室标本 室）。23 种原植物的种名及采集信息见表 1。样品 采集工作始于 2000 年 5 月，止于 2007 年 11 月。 国内样品均为笔者实地采集；越南样品由浙江万邦
n
Huperzia appressa H. chishuiensis
Jilin:Antu Guizhou：Leigongshan
0.200 4 15
0.029 2
5
H. crispata H. hunanensis H.leishanensis
Hunan:Hongjiang, Guizhou: Chishui) Hunan:Hongjiang Guizhou：Leigongshan
1 仪器与试药 Shimadazu LC-10ATvp 高 效 液 相 色 谱 仪 ；
Shimadazu SPD-10Avp 紫外检测器(日本岛津)； HW2000 色谱工作站(南京千谱科技发展有限公 司)；Milli-Q 超纯水发生器(Millipore)；PHS-3TC 型 pH 计(上海天达仪器有限公司)。
基金项目：浙江省科技厅重大专项课题（2006C12146） 作者简介：王峻，男，博士 研究方向：中药资源学与中药新药研究开发
·1212· Chin Pharm J，2009 August，Vol. 44 No. 16
Tel：13901982666
E-mail：baishanqiao@yahoo.com.cn 中国药学杂志 2009 年 8 月第 44 卷第 16 期
0.021 2 10
Ph. cryptomerianus Fujian: Liancheng
0.196 1
5
Ph. fargesii
Guangxi: Dayaoshan
0.004 5
5
Ph.fordii
Yunnan: Jinghong; Fujian: Liancheng
0.004 6 10
Ph. merrillii
Malaysia
0.002 8
5
Ph. Sqarrosus
Yunnan: Jinghong; Malaysia
0
10
中国药学杂志 2009 年 8 月第 44 卷第 16 期
药业丁跃庭高级工程师提供并协助鉴定；马来西亚 样品由淡马锡研究院王光远副研究员提供并协助 鉴定。 2.2.2 供试样品的制备 在野外采集过程中，选取 原植物中典型者，于当地有条件的单位，50 ℃烘 箱中干燥 4 h，粉碎过 20 目筛，再于 50 ℃烘箱中 干燥至恒重，密闭保存，从速送至复旦大学药学院 生药教研室实验室测定。部分采自中国偏远山区及 越南、马来西亚的原植物，以泥碳藓保鲜并从速送 至实验室，同法制备供试样品并从速测定。 2.3 石杉碱甲含量的测定 2.3.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18 不锈钢柱 (4.6 mm×250 mm，5 µm)；流动相：甲醇-0.6%醋 酸 铵 缓 冲 溶 液 (35 ∶ 65) (pH 6.0) ； 流 速 ： 1.0 mL·min-1；检测波长：308 nm；柱温：室温为 22 ℃； 进样量：10 µL。 2.3.2 对照品溶液的配制 精密称取干燥至恒重 的石杉碱甲 24.90 mg，用甲醇溶解并于 50 mL 的量 瓶中稀释至刻度,制成每 1 mL 含石杉碱甲 0.498 mg 的对照品溶液，冷藏备用。 2.3.3 供试样品溶液的配制 取“2.2.2”项下的供 试样品粉末，50 ℃烘箱中干燥至恒重，精密称取 1.0 g，加入 2%的酒石酸 25 mL，超声提取 2 h，定 性滤纸过滤，残渣再加入 2%的酒石酸 25 mL，超 声提取 2 h，定性滤纸过滤，合并 2 次滤液，0.45 µm 微孔滤膜过滤，取续滤液 0.5 mL，以 0.5 mL 的 2% 酒石酸溶液稀释，4 000 r·min-1 离心 10 min，取上清 液备用。 2.3.4 系统适用性实验 按“2.3.1”色谱条件分别 进样 10 µL 对照品溶液和供试样品溶液，记录色谱 图，此条件下石杉碱甲对照品及总碱色谱图见图 1。 从图 1 中可见，石杉碱甲的保留时间为 8.663 min， 并且与其他成分分离良好。理论塔板数按石杉碱甲 峰计不低于 6 000。 2.3.5 线性关系的考察 精密吸取 0.05，0.1，0.2， 0.4，0.6，0.8，1.0 mL 置于 10 mL 量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀。精密吸取“2.3.2”对照品溶液 各 10 µL，在“2.3.1”色谱条件下注入液相色谱仪， 记录峰面积积分值，以质量浓度 ρ(mg·L-1)为横坐 标，峰面积积分值 Y 为纵坐标，作图并回归处理。 在所测定范围内（2.49~49.80 mg·L-1），峰面积与浓 度有较好的线性关系，线性方程：Y＝21 390ρ+2 413 （r=0.999 8）。 2.3.6 精密度实验 精密吸取同一份石杉碱甲对
·论 著·
千层塔的 23 种原植物中石杉碱甲含量
王峻 1,2，潘胜利 3（1. 嘉兴学院医学院，浙江 嘉兴 314002；2.浙江金华寿仙谷药业有限公司，浙江 武义 321400；3.复旦大学药学院，上海
200032）
摘要：目的 测定各种新鲜千层塔原植物中石杉碱甲的含量。方法 分检千层塔草药原料，核对馆藏标本确定原植物；野外
0
5
0.068 0
5
0
5
H. lucidula (Michx.) Jilin:Antu Trev.
0.019 4
H.miyoshiana
Jilin:Fusong, Antu
0
H.nanchuanensis Chongqing: nanchuan
0
5
H.selago
Jilin:Fusong, Antu
0.052 3
95
Zhejiang: Anji, Wuyi, Longyou,
Xiaofeng, Songyang; Vietnam
H. sutchueniana
Hunan: Hongjiang; Zhejiang: Wuyi, Songyang
0.005 2 20
Phlegmaria carinatus Yunnan: Jinghong; Malaysia
Malaysia
0.000 9
5
Ph. mingcheensis Fujian: Changting , Fuzhou
0.010 3 15
Ph.petiolatus
Yunnan: Jinghong
0.059 0
5
Ph. phlegmaria
Malaysia
0.007 3
5
Ph. phyllantha