质量SOP规程：SOP-ZL-JY018-1 菌检培养基配制、使用和检验标准操作规程

培养基配制标准操作规程

1.目的：建立本规程旨在为培养基配制提供操作标准。

2.范围：公司培养基配制3.责任：质量管理科、菌检员对实施本SOP负责。

4.检验依据：《中国药典》2015年版四部。

5.内容：5.1 营养琼脂◆称本品34g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为7.2±0.2范围内），放于冰箱内保存，备用。

5.2 玫瑰红钠琼脂培养基◆用于霉菌总数测定。

称本品30g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为6.4±0.2范围内），放于冰箱内保存，备用。

5.3 普通琼脂斜面培养基◆称本品33g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为8.0～8.2），放入冰箱内保存、备用。

5.4 胆盐乳糖培养基◆称本品36g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好后高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为7.2～7.4），放入冰箱内保存、备用。

5.5 营养肉汤培养基◆适用于一般细菌的培养。

称取本品19g，加纯化水1000ml，煮沸到完全溶解后分装，高压灭菌121℃30分钟备用。

5.6 伊红美兰琼脂培养基◆用于大肠杆菌及肠道致病菌的分离鉴别。

称取本品36g，加纯化水1000ml，浸泡10分钟，煮沸至完全溶解，高压灭菌115℃30分钟，冷至55℃左右，振摇培养基，倾注灭菌平皿备用。

5.7 室温菌种保存培养基◆用于常用菌种的保存。

称取本品28g，加纯化水1000ml，浸泡10分钟，加热煮沸，高压灭菌121℃30分钟,备用。

6.文件变更历史：。

培养基配制、适用性检查标准操作程序

目的：制定培养基配制、培养基适用性检查的标准操作程序。

范围：适用于微生物实验室培养基的配制和适用性检查。

责任者：微生物检验员所用器具、仪器、材料、菌种器具、仪器：高压蒸汽灭菌锅、高温灭菌柜、隔水恒温培养箱、生化培养箱、双人净化操作台、单人净化操作台、干燥箱、恒温水浴锅、电子天平、500ml三角瓶、移液管、培养皿、试管、接种环、酒精灯材料：标准干燥培养基（购于生物研究所）、待验证培养基菌种：大肠杆菌CMCC（B）44102、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、枯草芽孢杆菌CMCC （B）63501、白色念球菌CMCC （F）10231沙门氏菌CMCC （B）500941. 培养基的配制1.1 准备工作1.1.1 选择适宜容量的容器配制试剂，配制培养基的容器应为玻璃容器，以避免接触金属离子，如吸管、试管、三角瓶和平皿等，应按《玻璃容器清洗规程》洗涤、干燥、灭菌。

1.1.2 配制用水培养基配制用水应为纯化水，纯化水应临用新配。

1.2 配制1.2.1 记录所用脱水培养基的品名、批号、生产日期、生产厂家及配制处方。

1.2.2 用分度值为0.01的电子天平准确按处方量进行称量并装入三角瓶内。

1.2.3 用量筒按照培养基处方配比加入纯化水。

1.2.4 用硅胶橡皮塞塞上瓶口，轻轻振摇使充分混匀。

1.2.5 培养基在配置后必须进行PH值的测定，以确保符合药典要求和生产厂家的规定，一般情况下，PH值不能超过规制值±0.2。

1.2.6 用牛皮纸包扎瓶口，贴上标签，注明品名、批号、配置日期、配置人、有效期。

1.3 灭菌将上述已配制的培养基放入高压蒸汽灭菌锅按培养基灭菌条件进行灭菌（每次配制的培养基应在2小时内进行有效灭菌，否则极易染菌。

若未能在2小时内进行有效灭菌，则倒掉重新配制）。

若没有具体要求，一般灭菌温度（压力）为121℃（0.1MPa），灭菌时间为20分钟。

灭菌完成后，待高压灭菌锅温度、压强自然下降为“0”值，方可取出灭菌好的培养基（不可未降温时拿出，否则培养基内外会形成负压，易染菌）。

培养基配制操作规程

培养基配置操作规程目的：本规程规范了微生物实验室培养基的申购、配制、培养基质量控制、储存、使用、废弃处理等。

范围：本规程适用于微生物实验室检验用的所有培养基职责：QC检验员对本标准的实施负责。

执行标准：《中国药典》2020年版四部内容:1、培养基（Media）是指人工配制的生物营养物质，即用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。

通常指干粉培养基（Dehydrated Medium）和配制好的琼脂（Agar）、肉汤（Broths）、稀释液（Diluents）等等。

3.程序3.1. 购买3.1.1. 质量控制部提出采购计划，并填写《采购计划》，注明培养基名称、数量、质量要求、生产厂家等，由相关人员审核，交采购部采购。

3.1.2. 培养基买回后，由使用部门填写领料单，由物流部发出。

3.1.3. 领回后的干粉培养基，开瓶后应贴上《开启标签》，注明开口日期、有效期至、开口人、贮存条件，并且不得把原标签覆盖。

使用时填写《干粉培养基使用记录》。

3.1.4. 检验人员必须依据培养基生产厂家的操作说明进行配制，并填写《培养基配制使用记录》，配制记录上注明所用培养基的批号；盛装配制好的培养基的容器外应贴《培养基标签》，标签应注明：名称、批号、配制人、配制日期、有效期至等信息。

批号编号方式为年XX，月XX，日XX，流水号XX。

3.1.5. 配制好的培养基应在一定时间内，按说明书规定时间进行灭菌，避免微生物滋生。

3.1.6. 必要时，灭菌后的培养基在配制后必须进行pH值的测定以确保符合药典及生产厂家的规定。

3.2. 培养基质量控制3.2.1. 为了保证微生物检验的质量，在使用前，每批配制好的培养基在灭菌后用于供试品检验之前都应进行培养基质量控制检查。

3.2.2.进行培养基质量控制检查应填写相应的记录，如《计数用培养基适用性检查记录》、《控制菌检查用培养基适用性检查记录》。

3.2.3菌种复活、传代用的培养基不需进行适用性检查。

菌检培养基配制、使用和检验标准操作规程

目的：建立菌检培养基配制、使用和检验的方法，以保证检验结果客观准确。

应用范围：适用于微生物检查、生物测定检查用培养基的配制及使用。

责任人：菌检检验员、QA、质量部经理。

内容：1 概述培养基是人工配制的生物营养物质，目前，多数微生物应使用商品化的干粉培养基，这些培养基性能一般比较稳定，只需按照产品说明书的规定贮存条件，配制，在有效期内使用即可获得满意的效果，而自制培养基则应进行较严格的质量控制。

2 培养基的制备通则2.1 常用玻璃仪器的制备2.1.1 概述制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，晾干后备用。

2.1.2 细则2.1.2.1 平皿用纸或布包好，或装在金属盒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。

2.1.2.2 试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好，用布或报纸包好，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。

2.1.2.3 吸管与滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出或橡皮帽内的气体污染）然后用纸包好或装入金属吸管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。

其他玻璃器皿均可按上法进行处理，也可装金属筒内于160～180℃干热灭菌2h后，备用。

2.2.培养基的制备及储存2.2.1 配制2.2.1.1配制干粉培养基时，先将蒸馏水按足量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10～15 min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要加热，必要时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏。

2.2.1.2 溶化一般应放在玻璃器皿或搪瓷器内。

加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦化，待其溶解后加足水分。

2.2.2 校正酸碱度2.2.2.1 培养基必须有适当的pH。

测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，干粉培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证。

2.2.2.2 pH测定时，一般用指示剂滴入培养基中观察，其颜色的变化，或用pH计校正，测定标准温度应为（25±2℃），如与所需pH不符，可用酸或碱液加以校正。

质量SOP规程：SOP-ZL-JY016-1 培养基灵敏度查标准操作规程

目的：建立培养基灵敏度检验标准操作规程，保证检查结果的准确性和可靠性。

应用范围：适用于培养基灵敏度的检查。

责任人：QC无菌检验员。

编订依据：《中国药典》2010年版二部、《中国药品检验标准操作规范》2010年版。

内容：
1 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的灵敏度检查及适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。

2 菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44 102]
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B) 26 003]
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63 501]
白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98 001]。

培养基配制SOP

培养基配制SOP1.目的确保各种培养基及稀释液配制过程标准、规范。

2.范围2.1.本SOP适用于pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的配制，pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液可作为供试品稀释液。

2.2.本SOP适用于营养肉汤培养基的配制，营养肉汤培养基用于一般细菌培养。

2.3.本SOP适用于改良马丁培养基的配制，改良马丁培养基用于生物制品无菌试验，检查真菌和腐生菌。

2.4.本SOP适用于改良马丁琼脂培养基的配制，改良马丁琼脂培养基用于生物制品无菌试验，检查真菌和腐生菌。

2.5.本SOP适用于硫乙醇酸盐流体培养基的配制，硫乙醇酸盐流体培养基用于药品及生物制品等的无菌试验，检查需氧菌和厌氧菌。

2.6.本SOP适用于玫瑰红钠琼脂培养基的配制，玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌总数测定。

2.7.本SOP适用于营养琼脂培养基的配制，营养琼脂培养基用于一般细菌培养。

2.8.本SOP适用于胰酪胨大豆肉汤培养基的配制，胰酪胨大豆肉汤培养基用于真菌、需氧菌无菌检查。

2.9.本SOP适用于0.1％蛋白胨水溶液配制，0.1％蛋白胨水溶液可作为供试品稀释液。

2.10.本SOP适用于胰酪胨大豆琼脂培养基的配制，用于一般细菌分离培养。

2.11.本SOP适用于品红亚硫酸钠琼脂培养基的配制，用于饮用水、水源水中总大肠菌群的选择性分离和鉴别。

2.12.本SOP适用于酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的配制，用于含蜜浆剂酵母菌数测定。

3.定义无4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。

5.引用标准厂家说明书6.材料6.1.pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（干粉），营养肉汤培养基（干粉），改良马丁培养基（干粉），改良马丁琼脂培养基（干粉），硫乙醇酸盐流体培养基（干粉），玫瑰红钠琼脂培养基（干粉），营养琼脂培养基（干粉），胰酪胨大豆肉汤培养基（干粉），蛋白胨（干粉），胰酪胨大豆琼脂培养基（干粉），酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（干粉），品红亚硫酸钠琼脂（干粉）。

微生物培养基配制操作规程

微生物培养基配制操作规程1. 引言微生物培养基的配制是微生物学研究中重要的实验操作之一。

培养基的配制质量直接影响微生物培养实验的结果，因此，需要严格按照操作规程进行培养基的配制。

本文档介绍了微生物培养基的配制操作规程，以确保培养基的质量和稳定性。

2. 材料和仪器•试剂：包括蛋白胨、葡萄糖、琼脂、酵母粉、磷酸二氢钾等。

•仪器：包括天平、电热板、烧杯、移液器等。

3. 培养基配制操作步骤3.1 准备工作•清洗容器：将烧杯、烧瓶等容器用肥皂水彻底洗净，再用去离子水冲洗干净，确保容器干净无杂质。

•消毒操作：将容器用高温高压自动消毒器进行消毒处理。

充分消毒后，放置在无菌条件下待用。

3.2 培养基成分配制1.清量试剂：根据配方，使用天平准确称取所需的试剂。

注意避免交叉污染，每次称取完一个试剂后，清洁秤盘。

2.溶解试剂：按照配方所需的顺序，将试剂加入适量的去离子水中，并使用电热板加热搅拌溶解。

3.pH调节：根据培养基的需求，使用磷酸二氢钾或氢氧化钠溶液进行pH调节。

使用pH计检测pH值，调节至所需范围内。

3.3 琼脂平板制备1.蒸汽消毒：将琼脂平板瓶放入高温高压自动消毒器中，进行蒸汽消毒处理。

注意避免瓶内产生真空现象，以免使琼脂变质。

2.冷却倒填：倒出适量的琼脂溶液，均匀铺平于无菌工作台上，并迅速冷却至约40℃左右。

3.加药：将需要添加的抗生素等药物加入琼脂中，并充分混匀。

4.转移菌液：待琼脂冷却凝固后，使用无菌技术将待测微生物菌液转移到琼脂平板上。

3.4 培养基灭菌1.灭菌器验证：使用化学指示剂验证培养基灭菌器的灭菌能力，确保达到灭菌要求。

2.灭菌操作：将配制好的培养基装入无菌烧瓶或试管中，使用高压灭菌器进行灭菌处理，温度和时间根据不同培养基的需求进行设置。

3.冷却保存：灭菌完成后，将烧瓶或试管放置在无菌条件下，待其冷却至室温后，即可进行保存。

4. 注意事项1.操作无菌技术：操作过程中，需要严格采用无菌技术，防止外源菌的污染。

SOP-QC-011培养基配制标准操作规程

**有限公司操作标准目的：建立一个规范培养基配制操作的文件。

范围：适用于培养基配制操作。

责任：化验员。

内容：1、玻璃器皿的洗涤。

1.1制备培养基所用的吸管、试管，三角瓶和平皿等新的玻璃器皿，因有灰尘和游离碱性物质，先用水冲洗干净。

然后置3％的盐酸中浸泡约12小时。

取出后，用清水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗1～2次，晾干后备用。

1.2凡各种装量大而又不宜高压的含糖培养基，所用的玻璃器皿应事先灭菌，以免因一次性低压灭菌不彻底而染菌。

2、用具包装与灭菌。

2.1硅胶塞：应用水冲洗干净，再以蒸馏水冲洗1～2次，烘干备用。

2.2试管：各种试管最好先配上合适的硅胶塞，待高压灭菌后再分装培养基，可防止污染。

2.3平皿：取洗净凉干的平皿，每7 套作一个包装， 121℃ 30分钟灭菌后烘干备用；也可用160℃ 2小时干热灭菌后备用。

2.4供染菌限度检验用的吸管，应防止堵塞，故选用红刻度粗下口的。

用前洗净烘干，上口塞进少许普通棉花，松紧适度，以防污染。

然后按其容量大小，分别放在用双层牛皮纸作成的纸袋或者金属盒内，包严经121℃ 30分钟灭菌后烘干备用。

3、操作3.1根据用途选择培养基，按其用法进行准确称量和加蒸馏水，并填写配制记录如名称、配制量、配比、配制日期、配制者。

3.2培养基完全溶解后，进行过滤和分装，液体培养基一般应澄清无沉淀，否则影响观察细菌生长的结果。

过滤时可用滤纸或脱脂棉。

4、分装4.1各种液体培养基分装试管时，每支应按试管大小及用途不同定量分装，可用吸管或注射器分装，也可用漏斗分装。

一般漏斗下口连接一段橡胶管，管口插一小段玻璃管，再加上一个弹簧夹控制流量，分装时将漏斗放在支架上，内装培养基，然后将下口插入试管中即可按量将培养基逐管分装，注意，不同品种的培养基用过的漏斗，应充分洗净后再用，以防两种培养基互相混淆，影响使用效果。

4.2固体培养基应趁热分装，以防冷后凝固：分装时也可用支架漏斗，但须注意勿将培养基沾污管口，以防污染杂菌。

1SOP-QM-8068-00 培养基配制、使用及适用性检查操作规程

1.目的：建立培养基的配制、使用、适用性检查的操作规程，使其操作规范化，避免人为的错误。

2.范围：本规程适用于微生物限度检查所使用的培养基。

3.责任：本文件由QC检验员负责起草，QA主管审核，质量部经理批准；QC检验员实施。

4.内容：4.1.设备、仪器及用具、试液、培养基、菌种4.1.1设备1.1.1.净化工作台（洁净度为100级）、生化培养箱、恒温培养箱、电热恒温水浴锅、高压蒸汽消毒器、电热恒温干燥箱（最高工作温度300℃）、冰箱。

4.1.2仪器及用具1.1.2.托盘天平、显微镜、酒精灯、灭菌剪刀、接种环、接种针、灭菌镊子、大小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并定期用70～75%乙醇溶液浸泡）、记号笔。

1.1.3.锥形瓶、吸管、试管、培养皿（90mm）、量筒。

1.1.4.洁净服、帽、口罩（用牛皮纸包严）灭菌，备用。

4.1.3试液1.1.5.消毒液（0.1%新洁尔灭、75%乙醇溶液、5%来苏儿溶液），稀释剂（0.9%无菌氯化钠溶液），靛基质试液（柯凡克试剂或欧-波氏试剂）、结晶紫染液、碘液、95%乙醇、沙黄染液、溴麝香草酚蓝指示剂。

4.1.4.培养基营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基（霉菌及酵母菌计数用）、营养肉汤培养基、胆盐乳糖发酵培养基、胆盐乳糖培养基。

4.1.5菌种大肠埃希菌[CMCC(B) 44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26003]、枯草芽孢杆菌 [CMCC(B) 63501]、乙型副伤寒沙门菌[CMCC(B) 50094]、白色念珠菌 [CMCC(F) 98001]、黑曲霉 [CMCC(F) 98003]4.2.培养基适用性的检查4.2.1.培养基质量检查对初次使用的或新购进的培养基均要按批准的规定程序进行验证、检验，即适用性检查，即已知菌对照试验，并做好检查记录。

内容包括：名称、配制日期、接种菌名称、接种菌培养（阳性检查）结果、未接种菌培养（阴性检查）结果、PH值、结论、检查日期、检查者。

SOP-QC-001样本无菌检验标准操作规程(SOP)

目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。

范围：本标准适用于本公司静脉注射产品无菌检验操作。

责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容：1、标准依据：《中国药典》2010年版二部附录XI H。

2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。

检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。

若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。

3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。

其全过程必须严格遵守无菌操作。

防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。

操作前环境洁净度应经验证。

日常检验需对试验环境进行监控。

4、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。

5、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。

6、检验数量及检验量：6.1、每支供试品接入每种培养基的最少量:5ml（100ml-500ml），1ml （20-100ml）,0.5ml(5-20ml)。

7、细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。

8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、手提灭菌器、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、微量移液器、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球9、消毒剂配制：9.1、75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。

9.2、0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。

9.3、2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。

10、试剂及培养基的配制：10.1、0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。

10.2、pH7.0灭菌氯化钠－蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾 3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml微温溶解，滤清，分装，灭菌。

培养基配制及适用性检查标准操作规程

培养基配制及适用性检查标准操作规程目的：建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。

范围：适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。

依据：《药品生产质量管理规范（修订）》、《中华人民共和国药典》第四部职责：1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验能够顺利进行。

2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。

内容1 培养基的申购根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。

申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。

2 培养基的验收2.1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。

验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。

2.2 验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。

3 培养基的贮藏3.1未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。

已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。

3.2灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。

灭菌后培养基储存期为7天。

4 培养基的配制4.1培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。

4.2培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如 1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:00。

配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。

（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如00-01）4.3培养基配制方法4.3.1 使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。

实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每个成分物质含量、制造商、批号，pH 值，培养基体积/分装体积，灭菌条件（灭菌方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。

细菌培养系统常用液体配制标准SOP操作规程样本

细菌培养系统常用液体配制标准SOP操作规程样本1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。

2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。

3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。

4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含0.5g卡那霉素。

取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。

5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。

剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。

6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。

将细菌置于0℃，低渗CaCl2 溶液中时，菌细胞壁和膜的通透性增强，菌体膨胀成球型。

外源DNA与Ca2+形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物黏附于细胞表面，在经42℃短暂的热冲击处理（一般热休克90s）后能促进细胞吸收外源DNA 复合物。

2）仪器、材料与试剂：①超净工作台、低温离心机、摇床、-80℃冰箱，装液氮的泡沫盒及液氮、50ml的离心管2个，50ml的注射器及0.22um小过滤器各1个。

SOP-QC10018 培养基适用性检查标准操作规程

培养基适用性检查标准操作规程1. 目的1.目的建立培养基配制适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作。

2. 范围适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。

3. 依据药品生产质量管理规范（2010年版修订）、《中华人民共和国药典》第四部4. 职责4.1 微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验正常进行。

4.2 微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。

5. 程序5.1 培养基的贮藏5.1.1 未开封的胶水培养基贮存于阴谅室，使用培养基处于低温、干燥、和避光条件下。

开封的胶水培养基应盖紧，贮存于阴谅库。

5.1.2 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存，培养基储存期为7天。

5.2 培养基的配制应填写培养基配制及使用记录。

供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。

5.3 培养基的质量控制5.3.1 计数培养基适用性检查菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代( 从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。

菌液制备按表 1规定程序培养各试验菌株。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液;取黑曲霉的新鲜培养物加入适量含0.05% ( ml/mI)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/mI )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%( mI/ml )聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用;若保存在2～ 8C,可在24小时内使用。

无菌检验培养基的制作及鉴定SOP

1. 目的建立无菌检验培养基的制作及鉴定规程，确保合格培养基用于检验。

2. 范围无菌检验培养基的制作及鉴定。

3. 职责3.1.质量管理部：负责本规程的起草。

3.2. 质量管理部检验人员：负责本规程的操作。

3.3. 总经理：负责本规程的审批。

4. 定义无5. 引用标准无。

6. 材料6.1. 仪器设备6.1.1. 恒温培养箱、6.1.2 高压锅6.1.3 电子天平6.2. 器械、用具6.2.1 移液管6.2.2 中试管6.2.3 1000ml三角瓶7. 流程图无8. 内容8.1.马丁氏肉汤：8.1.1. 配制：称取马丁48g溶于1000ml纯化水中煮沸；8.1.2. 分装：用注射器抽取5ml溶液注入5#试管中并塞上试管塞；8.1.3. 灭菌：高压116℃维持20分钟。

8.1.4. pH：7.2—7.68.2. 葡萄糖蛋白胨（G.P）：8.2.1．配制：取本品28g溶于1000ml纯化水中，加热溶解；8.2.2. 分装：用移液管抽取5ml溶液注入5#试管中并塞上试管塞；8.2.3．灭菌：高压116℃维持20分钟；8.2.4．pH：6.0—6.68.3．硫乙醇酸盐（T.G）：8.3.1．配制：称取本品30g溶于1000ml纯化水内加热溶解；8.3.2．分装：用移液管抽取5ml溶液注入5#试管中并塞上试管塞；8.3.3．灭菌：高压116℃维持20分钟；8.3.4．备注：放置过久红色层超过1/3时可加热驱氧一次凉至45℃时方可使用；8.3.5．pH：7.0—7.2，用于检验杂菌（包括需、厌氧菌）。

8.4．酪胨琼脂（G.A）：8.4.1．配制：取本品40g溶于1000ml纯化水中煮沸。

8.4.2．分装：用5ml移液管抽取4ml溶液注入5#试管中并塞上试管塞；8.4.3．灭菌：高压116℃维持20分钟；8.5．高压灭菌按《蒸汽灭菌柜操作规程》进行，灭菌后放入恒温培养箱中存放，对酪胨琼脂要摆放成斜面，摆放斜面时，要使培养基一侧距离试管胶塞2-3厘米，一侧不得超过试管锥底部。