分子生物学基因的体外转录和翻译
分子生物学名词解释
分子生物学：从广义来讲，分子生物学是从分子水平阐明生命现象和生物学规律的一门新兴的边缘学科。
它主要对蛋白质及核酸等生物大分子结构和功能以及遗传信息的传递过程进行研究。
DNA重组技术:DNA重组技术（又称基因工程）是将DNA片段或基因在体外经人工剪接后，按照人们的设计与克隆用载体定向连接起来，转入特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。
信号转导:是指外部信号通过细胞膜上的受体蛋白传到细胞内部，并激发诸如离子通透性、细胞形状或其它细胞功能方面的应答过程。
转录因子:是指一群能与基因5′端上游特定序列专一结合，从而保证目的基因以特定强度在特定时间和空间表达的蛋白质分子。
功能基因组：又称后基因组，是在基因组计划的基础上建立起来的，它主要研究基因及其所编码蛋白质的结构和功能，指导人们充分准确地利用这些基因的产物。
结构分子生物学:就是研究生物大分子特定空间结构及结构的运动变化与其生物学功能关系的科学。
生物信息学：是生物科学和信息科学重大交叉的前沿学科，它依靠计算机对所获得数据进行快速高效计算、统计分类以及生物大分子结构功能的预测。
染色体：是指存在于细胞核中的棒状可染色结构，由染色质构成。
染色质是由DNA、RNA和蛋白质形成的复合体。
染色体是一种动态结构，在细胞周期的不同阶段明显不同。
C-值（C-value）:一种生物单位体基因组DNA的总量。
C-值矛盾（C-value paradox）：基因组大小与机体的遗传复杂性缺乏相关性。
核心DNA（core DNA）：结合在核心颗粒而不被降解的DNA。
连接DNA（linker DNA）：重复单位中除核心DNA以外的其它DNA。
DNA多态性：指DNA序列中发生变异而导致的个体间核苷酸序列的差异，主要包括单核苷酸多态性和串联重复序列多态性两类。
DNA的一级结构：是指4种核苷酸的排列顺序，表示了该DNA分子的化学组成。
又由于4种核苷酸的差异仅仅是碱基的不同，因此又是指碱基的排列顺序。
分子生物学名词解释1
分子生物学名词解释第二章(主要的:核小体、半保留复制、复制子、单链结合蛋白、岗崎片段、错配修复、DNA的转座、C值矛盾、前导链与后随链。
)1. C值反常现象(C值矛盾C-value paradox):C值是一种生物的单倍体基因组DNA的总量。
真核细胞基因组的最大特点是它含有大量的重复序列，而且功能DNA序列大多被不编码蛋白质的非功能DNA所隔开，这就是著名的“C值反常现象”。
C值一般随着生物进化而增加，高等生物的C值一般大于低等生物。
某些两栖动物的C值甚至比哺乳动物还大，而在两栖动物里面，C值变化也很大。
2.DNA的半保留复制:由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式称半保留复制。
3.DNA聚合酶:●以DNA为模板的DNA合成酶●以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物●反应需要有模板的指导●反应需要有3 -OH存在●DNA链的合成方向为5 34.DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5‘-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。
但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用5.DNA 拓扑异构酶(DNA Topisomerase)：拓扑异构酶І：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。
主要集中在活性转录区，同转录有关。
例：大肠杆菌中的ε蛋白拓扑异构酶Π：该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子。
同复制有关。
例：大肠杆菌中的DNA旋转酶6. DNA 解螺旋酶/解链酶（DNA helicase)通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。
E.coli中的rep蛋白就是解螺旋酶，还有解螺旋酶I、II、III。
rep蛋白沿3 ’ 5’移动，而解螺旋酶I、II、III沿5 ’ 3’移动。
7. 单链结合蛋白(SSBP-single-strand binding protein)：稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。
分子生物学名词解释
分子生物学名词解释
ＡＰ位点（AP ｓｉte）:所有细胞中都带有不同类型、能识别受损核酸位点得糖苷水解酶，它能够特异性切除受损核苷酸上得N-β糖苷键，在DNＡ链上形成去嘌呤或去嘧啶位点,统称为AP位点。
cＤＮA（plemｅｎtarｙＤNＡ):在体外以mRNA为模板，利用反转录酶与DNA 聚合酶合成得一段双链DNA。
DＮA得半保留复制（ｓemｉ—consｅｒvative repｌiｃａtion)：ＤＮA 在进行复制得时候链间氢键断裂，双链解旋分开,每条链作为模板在其上合成互补链,经过一系列酶（DNＡ聚合酶、解旋酶、链接酶等)得作用生成两个新得DＮA分子。
子代DNA分子其中得一条链来自亲代DNＡ,另一条链就是新合成得，这种方式称半保留复制.
DＮA得半不连续复制(Semi－ｄiscｏntｉnuoｕｓrepliｃａtioｎ）：DNA复制时，前导链上DＮA得合成就是连续得,后随链上就是不连续得,故称为半不连续复制。
操纵子（operｏｎ）：就是指原核生物中由一个或多个相关基因以及转录翻译调控元件得基因表达单元。
同义突变（synonyｍｏus mutaｔｉon):就是指碱基得改变不引起氨基酸改变得突变。
分子生物学中的基因转录和翻译
分子生物学中的基因转录和翻译基因是生命的基本单位，是人类、动物和植物的遗传信息载体。
基因可以转录为RNA，并且RNA可以被翻译为蛋白质。
基因转录和翻译是维持细胞和生物体正常生理功能的重要过程。
基因转录基因转录是指DNA水平上的信息传递，即将DNA编码的信息转换为RNA信息，并用来推断蛋白质的氨基酸序列。
基因转录是由RNA聚合酶(RNA polymerase)复制DNA时合成RNA分子的过程，RNA聚合酶会在DNA串内扫描，寻找一段特定的DNA序列，其通常以一个起始站点开始，称为启动子。
在这个地方，RNA聚合酶结合并开始克隆RNA。
这个启动序列通常是由两个特定的功能元件组成。
第一部分是TATA盒(TATA box)，它告诉RNA聚合酶在哪里开始转录。
第二部分是增强子(enhancer)序列，它可以增加基因的表达并协调DNA复制的过程。
完成转录之后，pre-mRNA序列会被剪切并拼接，形成成熟的mRNA。
mRNA可以被转运到细胞质中并参与翻译过程。
转录的主要产物是mRNA，但是转录也可以产生其他类型RNA。
转录的调控是生物体中基因表达的关键控制因素。
细胞可以通过控制RNA聚合酶与DNA的互作、核糖体合成和RNA降解等因素来控制基因转录的发生。
此外，转录的调控还受到一些核酸因子和转录激活因子的影响。
许多疾病，如肿瘤和自身免疫疾病，都与转录调控紊乱有关。
基因翻译基因翻译是指RNA水平上的信息传递，即通过将RNA信息翻译为氨基酸序列，生成蛋白质。
蛋白质质量和结构的确定取决于氨基酸的顺序。
20种不同的氨基酸可以以不同的序列组合来进一步分别形成不同的蛋白质。
蛋白质的信息来源于mRNA，mRNA中通过第三个核苷酸测序，信息被读取为三个核苷酸组成的非重叠密码子的序列。
在翻译过程中，一个RNA分子会通过核糖体与一个氨基酸专一地配对，然后一个又一个的氨基酸加入到正在被构建的多肽链中。
翻译是一个复杂的过程，它涉及到许多因素，如翻译起始和停止位点的识别、翻译调节和后翻译修饰等。
名词解释-分子生物学
1、转录（Transcription）：以某一DNA链为模板，按照碱基互补原则形成一条新的RNA链的过程，是基因表达的第一步。
2、编码链：与mRNA 有相同序列的DNA 链3、下游：沿着表达方向的序列。
例如，编码区是在起始区的下游。
4、上游：转录起点之前的序列，例如，细菌启动子在转录单位的上游，起始密码在编码区上游。
5、启动子：结合RNA 聚合酶并起始转录的DNA 区域。
6、RNA聚合酶：使用DNA作为模板合成RNA的酶(正式应为DNA-依赖性RNA 聚合酶)7、终止子：是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列。
DNA分子中终止转录的核苷酸序列。
8、转录单位：指RNA聚合酶起始位点和终止位点间的距离，可能包括不止一个基因。
9、初级转录本：与一个转录单位相对应的未修饰的RNA 产物。
10、组成型表达constitutive expression：个体发育的任一阶段，在所有细胞中都持续进行的表达。
一般是生命过程必需的基因。
11、负调控：在没有任何调节蛋白或其失活的情况下，基因表达；存在repressor的时候基因表达受阻。
12、正调控：在没有任何调节蛋白或其失活的情况下，基因关闭；存在activator的时候基因表达开启。
一般原核生物偏向负调控，原核生物的DNA裸露无保护，很容易启动转录，并翻译。
因此其细胞内的基因可以说是基本全部默认开启，因此在正常情况下原核细胞内存在大量不同的reressor阻遏着大量基因的转录。
细胞必须根据不同的条件，对一些被阻遏的基因进行去阻遏的调控，或对一些基因的表达进行阻止。
13、顺式作用元件cis-acting element DNA分子上的一些与基因转录调控相关的特定序列。
14、反式作用因子trans-acting factor一些与基因表达调控有关的蛋白因子。
15、顺式调控cis-acting regulation 一段非编码DNA序列对基因转录的调控作用，顺式正调控（启动子、增强子）；顺式负调控（沉默子）16、反式调控trans-acting regulation 转录因子作用于顺式作用元件对基因转录的调控。
分子生物学如何研究基因的表达和调控
分子生物学如何研究基因的表达和调控随着科技的不断进步和发展，分子生物学在遗传学领域中的研究日渐深入，基因的表达和调控是其研究的核心问题之一。
本文主要旨在探讨分子生物学如何研究基因的表达和调控，以及分子生物学在这一领域中的应用。
一、基因的表达基因的表达是指基因在细胞中发挥作用的过程，它是一个复杂的过程，包括基因转录和翻译两个过程。
转录是指DNA序列转换成RNA序列的过程，其中的RNA主要有mRNA、tRNA和rRNA 等。
翻译是指mRNA序列被翻译成蛋白质的过程，蛋白质是构成生命体细胞生物体化学活性的关键分子。
对于基因表达过程，分子生物学采用了一系列的技术手段进行研究，如常规的RNA/DNA杂交分析、Northern/Southern/Western blot分析、定量PCR分析、蛋白质质谱分析等。
这些技术手段不仅可以研究基因的表达水平和模式，也可以检测基因的突变、拷贝数变化等。
二、基因的调控基因的表达是一个受到多种因素调控的复杂过程，包括转录因子的特异性结合、组蛋白修饰、DNA甲基化等。
在这些调控过程中，转录因子起着重要作用。
转录因子是指与DNA序列有特异性结合并调控基因转录的蛋白质，它们主要通过结合DNA序列上的调控元件来对基因的表达进行调控。
一个基因可以被多个转录因子调控，同样一个转录因子也可以调控多个基因。
调控元件是指DNA序列上识别和结合转录因子的区域，包括启动子、增强子、沉默子、基础子等。
启动子是指位于基因转录开始位点上游的区域，是转录复合体的结合点。
增强子是指与启动子相邻的DNA区域，它通过转录因子的结合增强启动子的活性。
沉默子是指细胞中的某些DNA序列，当转录因子结合沉默子时，可以抑制特定的基因表达。
基础子是指在一些转录因子缺乏的情况下可以保证基因的低水平转录。
分子生物学通过对转录因子、调控元件的研究，探讨基因的调控机制。
近年来，高通量测序技术的发展也使得科学家们能够对基因的调控网络进行系统性的分析和研究，解析了大量基因调控网络。
基因转录和翻译后修饰的生物化学研究
基因转录和翻译后修饰的生物化学研究基因转录和翻译是生物体内关键的两个过程，也是分子生物学的核心研究领域之一。
基因转录和翻译后修饰过程对于生物的正常生长和繁殖起着至关重要的作用，因此，研究这些过程是非常必要的。
一、基因转录基因转录是指将DNA模板复制成RNA分子的过程。
在该过程中，脱氧核糖核酸（DNA）中的信息通过转录过程被复制成核糖核酸（RNA）分子，RNA分子再通过翻译过程被转化为特定的蛋白质。
基因转录的启动基因是RNA聚合酶，其可使RNA从DNA模板上合成RNA分子。
转录的起点是启动子区域，在DNA上，启动子区域携带了转录因子能够结合的序列，这些转录因子可影响RNA聚合酶在启动子上的结合和转录。
基因转录的产物RNA是未成熟的前体RNA，在后续的剪切和修饰过程中，这些RNA会被加工成成熟的mRNA，可以指导翻译过程。
二、翻译过程翻译是指将RNA分子转化为特定的蛋白质的过程。
RNA分子被转录出来后，mRNA分子进一步在核内经历剪切，而后进入核膜孔然后转移到核外，最终升级为可合成特定蛋白质的mRNA，它能够被核糖体识别并利用对应的tRNA实现翻译。
核糖体是由RNA和蛋白质组成的超分子，它能够与mRNA上绑定的tRNA配对，然后通过多肽键形成蛋白质，多肽键起到连接氨基酸的作用。
三、修饰过程RNA修饰是指，mRNA分子在产生之后经历的一系列化学修饰，包括非编码RNA（ncRNA）的化学修饰和编码RNA的剪切修饰。
而在翻译的过程中，则涉及到蛋白质的翻译后修饰。
3.1 ncRNA的化学修饰ncRNA（Non-coding RNA）是指不编码蛋白质的RNA分子，包括长非编码RNA、微小RNA和_piwi RNA等。
它们在基因表达调控、染色质修饰和RNA稳定性等方面发挥着重要的作用。
在ncRNA的修饰中，包括乙酰化、甲基化和糖基化等，这些修饰可影响ncRNA的结构、稳定性和功能。
3.2 编码RNA的剪切修饰编码RNA的剪切是指在转录后，mRNA的剪切过程。
分子生物学中的转录和翻译过程
分子生物学中的转录和翻译过程转录和翻译是分子生物学中的两个重要过程。
转录是指从DNA模板合成RNA分子的过程，其中RNA作为信息的中介传递到细胞内的核外，然后供翻译使用。
翻译是指将RNA翻译成蛋白质序列的过程，是生命体系中产生多种功能蛋白质的基础。
本文将分别介绍这两个过程的机制和重要性。
一、转录过程转录是一种基因表达过程，它涉及到模板DNA的开放和RNA合成。
本质上，转录是一种DNA依赖性RNA合成过程，能够启动生物体内大多数核苷酸序列的表达。
相比DNA，RNA分子更易于合成和分解，并且具有许多不同类型：传递RNA（tRNA）、转运RNA（rRNA）和信使RNA（mRNA）等。
转录过程的主要步骤如下：1. 启动子序列的结合：RNA聚合酶必须与某种DNA序列结合才能启动合成RNA的过程。
启动子序列通常位于基因的起始位置，用于指示RNA酶具体在哪一片段开始转录。
2. 开链：RNA酶从DNA双链中打开某一区段，从而产生一个开放的DNA单链。
该单链被稳定地保护，以避免在转录期间被其他元件损坏。
3. 合成RNA：RNA聚合酶沿着单链DNA向前移动，并利用进入口处的核苷酸再合成一个反义核苷酸链的RNA分子。
RNA聚合酶仅将核苷酸添加到5'末端，仅被用作RNA合成起始部分的碱基标志在3'末端停止合成。
整个过程持续到RNA合成末端的终止序列，然后RNA成品释放，并RNA聚合酶从DNA模板中离开。
二、翻译过程翻译是将RNA序列转化为蛋白质的序列的过程，可以分为三个主要步骤：启动、延长和终止。
启动从AUG（起始）密码子开始，在三联码（一种由三个核苷酸组成的密码子，每个三联码都代表一条氨基酸）的作用下继续进行。
翻译过程必须稍微转换一下信息：DNA中的碱基序列被翻译成RNA中的天然核苷酸单元，然后转变为氨基酸的多肽链中的化学信号。
然而，在许多细胞中，许多会影响翻译机制的复杂调节机制也存在。
三、结论转录翻译是基因表达的重要过程，可实现生命中原始信息的继承、分化和增加。
分子生物学的基本原理与方法
分子生物学的基本原理与方法分子生物学是研究生物分子结构、功能和相互作用的学科，是现代生物学的重要分支。
本文将介绍分子生物学的基本原理和常用的实验方法。
一、分子生物学的基本原理分子生物学的基本原理是基于遗传物质DNA的复制、转录和翻译过程。
DNA是生物体内的遗传物质，它携带了生物个体的遗传信息。
DNA的复制是指DNA分子通过自我复制过程，使得每个新合成的DNA分子与原始DNA分子具有相同的遗传信息。
转录是指DNA通过酶的作用，产生RNA分子的过程。
转录产生的RNA可以是信使RNA （mRNA）、转运RNA（tRNA）或核糖体RNA（rRNA），这些RNA 分子在翻译过程中发挥重要的作用。
翻译是指RNA分子通过核糖体的作用，将RNA上的密码子翻译成氨基酸序列，合成蛋白质。
分子生物学的基本原理还包括基因的表达调控机制。
基因表达是指基因通过转录和翻译过程产生蛋白质的过程。
在这个过程中，细胞内的信号分子会识别和结合到基因的启动子区域，调控基因的转录水平。
转录因子是一种可以结合到启动子区域的蛋白质，它们可以促进或抑制基因的转录过程。
此外，还有一些表观遗传学的机制，如DNA甲基化和组蛋白修饰等，也参与了基因的表达调控。
二、分子生物学的基本方法1. DNA提取：DNA提取是从生物体组织或细胞中分离纯化DNA的过程。
常用的DNA提取方法包括酚-氯仿法、盐析法和柱层析法等。
2. 聚合酶链式反应（PCR）：PCR是一种用于增加DNA片段数量的方法，它可以在体外通过模拟DNA复制过程，快速地合成大量特定DNA序列。
PCR可以应用于基因检测、DNA序列扩增和基因克隆等领域。
3. 凝胶电泳：凝胶电泳是分子生物学中常用的实验方法，可以将DNA、RNA或蛋白质根据其大小和电荷迁移率分离。
通过观察样品在凝胶上的迁移情况，可以判断目标分子的大小和纯度。
4. 蛋白质表达与纯化：蛋白质表达与纯化是分子生物学中用于获得特定蛋白质的方法。
分子生物学名词解释
RFLP：个体之间DNA的核苷酸序列存在差异，称为DNA多态性。
由于碱基组成的变化而改变了限制性内切酶的酶切位点，从而导致相应的限制性片段的长度和数量发生变化，称为RFLP。
翻译：是指在多种因子辅助下，由tRNA携带并转运相应氨基酸，识别mRNA上的三联体密码子，在核糖体上合成具有特定序列多肽链的过程，称为翻译。
突变: DNA的结构发生永久性改变，即突变.转化：通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。
转导：当病毒从被感染的（供体）细胞释放出来、再次感染另一（受体）细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用。
受体：是细胞膜上或细胞内能识别外源化学信号并与之结合的成分，其化学本质是蛋白质，个别糖脂。
粘粒：又称柯斯质粒，是一类由人工构建的含有λDNA 粘性末端cos序列和质粒复制子的杂种质粒载体。
它是为克隆和增殖真核基因组DNA的大区段而设计的，是组建真核生物基因文库及从多种生物中分离基因的有效手段。
质粒：是存在于细菌染色体外的、具有自主复制能力的环状双链DNA分子。
端粒：以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特殊的结构叫端粒。
该结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，仅在真核细胞染色体末端存在。
端粒DNA由重复序列组成，人类端粒一端是TTAGGG另一端是AATCCC.克隆：通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全相同的子代群体。
探针：用放射性核素、生物素或荧光染料标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为“探针”。
转录：以DNA为模版，由DNA依赖的RNA聚合酶（RNApol）催化4中NTP聚合，生成RNA 的过程。
增强子：其含有多个作用原件，可以特异性地与转录因子结合，增强基因的转录活性的段短DNA序列。
启动子：能被RNA聚合酶特异性识别并与其结合，启动转录的DNA序列。
操纵子:由功能相关的一组基因在染色体上串联，共同构成的一个转录单位。
分子生物学名词解释
三、名词解释基因工程：在体外应用人工方法进行基因重组，然后把重组的基因导入宿主细胞，进行复制、转录及翻译的过程。
PCR技术：针对插入重组体中的目的基因，设计一对引物，进行菌落PCR，如能扩增出条带，则为阳性克隆。
限制性核酸内切酶：识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。
基因工程载体：供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或(和)复制的运载工具。
重组DNA技术：重组DNA技术简单概括为：“分、切、接、转、筛”1.分：分离目的基因2.切：对目的基因和载体适当切割3.接：目的基因与载体连接4.转：重组DNA转入受体菌5.筛：筛选出含有重组体的受菌体互补DNA：以mRNA为模板，利用反转录酶合成的与mRNA互补的DNA。
四、问答题1、简述基因工程的基本程序。
基本程序目的基因的获得（DNA片段）(分、切）↓DNA片段与载体基因的连接（体外重组）（接）↓连接产物（重组体）导入宿主细胞（转）↓重组体的扩增、筛选与鉴定（筛）↓目的基因在宿主细胞中的表达↓表达产物的分离纯化2、简述基因工程技术在医学上的应用。
（一）疾病基因的发现与克隆（二）生物制药（三）基因诊断（四）基因治疗（五）遗传病的预防三、名词解释1、受体：（receptor）细胞膜或细胞内的一些天然分子，能够识别和结合有生物活性的化学信号物质（配体，liganal）,从而启动一系列信号转导，最后产生相应的生物学效应。
2、G蛋白：是一种鸟苷三磷酸(GTP)结合蛋白，一般是指与细胞表面受体偶联的异三聚体G蛋白。
3、MAPK:MAPK 通路是多种促增殖信号在细胞内信号转导的共同通路。
MAPK 的上游激酶MAPKK 或MEK 是一个DSPK，它能使MAPK 分子中的Thr 185 和Tyr 187 磷酸化而使该酶激活。
4、第二信使：细胞内的化学信号----第二信使5、PTK：酪氨酸蛋白激酶（protein tyrosine kinase, PTK ）是一类能催化蛋白质酪氨酸残基(tyr或Y)磷酸化的蛋白激酶，共同特征是所极端具有典型的PTK结构域，该酶可催化自身或底物磷酸化。
体外翻译系统在分子生物学研究中的应用
体外翻译系统在分子生物学研究中的应用李 前综述 孙曼霁审阅军事医学科学院毒物药物研究所(北京,100850) 摘要 体外翻译系统又称无细胞蛋白质合成系统,是分子生物学中一种常规的表达系统。
该系统可用于蛋白质快速分析鉴定,基因转录和翻译的调控机理的研究以及分子间的相互作用的研究,如蛋白质和蛋白质的相互作用,蛋白质与DN A的相互作用,蛋白质与RN A的相互作用等。
关键词 体外翻译系统; 基因表达调控 体外翻译系统又称无细胞蛋白质合成系统,是一种相对胞内表达系统而言的开放表达体系。
翻译系统内的组分和翻译条件可以根据需要进行适当的改变,因而体外翻译系统中翻译特定的基因较胞内表达系统具有许多优点如内源性mRNA干扰很小(由于体外翻译系统是用指定的模板进行目的蛋白质合成,因而可以大大降低或消除在体内翻译系统中由于内源mRNA所造成的背景);可以同时加入多种基因模板研究多种蛋白质的相互作用;体外翻译系统可以对基因产物进行特异性标记,便于在反应混合物中检测。
此外体外翻译系统是一种蛋白质快速鉴定系统,蛋白质表达可以不需要先进行克隆。
目前,体外翻译系统有兔网织红细胞系统、麦胚提取物系统、E.coli S30系统3种。
1 真核体外翻译系统在分子生物学研究中的应用1.1 兔网织红细胞系统体外翻译系统中兔网织红细胞系统是真核体外翻译系统中应用最广泛的一种,常用于较大的mR-NA种类鉴定,基因产物性质的分析,转录和翻译调控的研究,以及共翻译加工的研究等等。
兔网织红细胞用新西兰大白兔制备[1],通过纯化除去兔网织红细胞以外的污染细胞。
网织红细胞裂解后,提取物用微球菌核酸酶破坏内源m RNA,最大限度降低翻译背景。
裂解物包含蛋白质合成所必须的细胞内组分(tRNA,核糖体,氨基酸,起始、延伸、终止因子)。
为了使系统更适于m RNA的翻译,兔网织红细胞中还添加了磷酸肌酸和磷酸肌酸激酶的能量生成系统,以及氯化高铁血红素防止翻译起始的抑制,此外还添加了tRNAs混合物用于扩大m RNA翻译的范围,以及乙酸钾和乙酸镁等。
基因的体外转录与翻译
2020年10月10日星期六
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Bradford法的突出优点是： （1）灵敏度高，据估计比Lowry法 约高四倍，这是因为蛋白质与染料 结合后产生的颜色变化很大，蛋白 质－染料复合物有更高的消光系数， 因而光吸收值随蛋白质浓度的变化 比Lowry法要大的多。
2020年10月10日星期六
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（2）测定快速、简便，只需加一种 试剂。完成一个样品的测定，只需 要5分钟左右。由于染料与蛋白质结 合的过程，大约只要2分钟即可完成， 其颜色可以在1小时内保持稳定，且 在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定 性最好。因而完全不用像Lowry法那 样费时和严格地控制时间。
2020年10月10日星期六
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（2）仍有一些物质干扰此法的测 定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠 （SDS）和0.1N的NaOH （3）标准曲线也有轻微的非线性， 因而不能用Beer定律进行计算，而 只能用标准曲线来测定未知蛋白质 的浓度。
2020年10月10日星期六
3、分离得到的细胞核比较纯且没有核蛋 白的流失。
2020年10月10日星期六
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体外基因转录反应
体外基因转录一般用硅化的1.5ml塑 料管，在24~32℃条件下进行，为 了保证产物的稳定，反应体系中必 须加入RNase抑制剂，终止反应时，
可加入蛋白酶以降解核提取物中的 RNase。同时加入酵母tRNA作为产 物RNA的载体起到保护作用。反应
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利用不同模板和翻译体系进行翻译
时，应匹配相应的翻译起始序列。 如用原核细胞翻译体系时RNA模板 应含有SD序列，应用真核翻译体 系时，应有帽子结构；在RNA的3ˊ 未端含有合适的终止信号。
2020年10月10日星期六
分子生物学名词解释--英汉双译
●Anticodon反密码子：tRNA反密码环中部的碱基三联体，可以识别mRNA上相应的密码子。
●Antisense strand/Template strand反义链/模板链：在DNA双链中，根据碱基互补原则指导mRNA合成的DNA链，也称负链。
●Attenuator弱化子：在trp mRNA 5’端trpE基因的起始密码前有一个长162bp的mRNA片段，称为前导区，在有色氨酸存在时，mRNA的转录总是在123-150这个区域终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子。
因为转录终止发生在这一区域，并且这种终止是被调节的，这个区域就被称为弱化子（attenuator）。
●C-value C值：在真核生物中，每种生物的单倍体基因组的DNA总量是恒定的，即C值。
●C-value paradox C值悖论：指物种进化程度与C值大小不相关的现象。
●Central dogma中心法则：是指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。
也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。
这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。
在某些病毒中的RNA自我复制和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程是对中心法则的补充。
如图：●Cis-acting element顺势作用元件：可影响自身基因表达活性的DNA序列。
通常是非编码序列，包括启动子、增强子等。
●Cistron顺反子：编码一个多肽的mRNA称顺反子。
●Codon密码子：又称三联体密码（triplet code）,是mRNA分子中编码一个氨基酸的三个相邻的核苷酸。
●Commaless连续性：编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码间既无间断也无交叉。
●Complexity复杂度：指核酸或DNA的每一个单一序列所含的碱基对数。
●Core promoter核心启动子：指RNA聚合酶精确起始转录所必需的序列元件。
分子生物学方法
分子生物学方法分子生物学是一种研究生命分子机制的科学方法。
它旨在通过研究分子水平上的生物基础来揭示生命机理和生命系统的运作原理。
分子生物学方法已经为各种生物学研究提供了基础，例如基因工程、蛋白质生化、细胞生物学和生物物理学等等。
生命分子的各种方法可以分为两大类：在体方法和体外方法。
在体方法是指基于生命体内发生的反应进行的研究，包括基因操作、转录和翻译等等；而体外方法是指在离体条件下进行的研究，例如PCR扩增、蛋白质结晶、电泳等等。
这些方法都能够揭示生物分子的性质和活动特性。
其中最常用的在体方法是PCR技术。
PCR技术是一种快速而准确扩增DNA分子的方法。
它是利用引物的互补性，将DNA分子的某一特定片段进行放大，使其曾经的数量增加了亿万倍以上。
PCR技术已在基因工程、生命科学研究、生物医学、农业和环境等领域得到广泛应用。
另一种流行的在体方法是基因操作。
基因操作分为三个步骤：转化、筛选和鉴定。
通过转化方法将外源基因导入宿主细胞的染色体中，然后选择具有该外源基因的细胞或组织，和研究它们的表达、结构和功能等等。
基因操作技术的应用范围非常广，包括基因疗法、转基因食品和植物，还可以用于制造诊断和治疗工具等。
体外方法之一是电泳方法。
电泳方法是将带电分子沿着电场进行分离的技术。
通过控制电场的强度、方向和时间，将各种分子根据其大小、电荷或其他特性分离开来。
这种方法可以用于分离和纯化DNA、RNA和蛋白质等生物分子。
综上所述，分子生物学方法可以揭示生命分子的许多性质和机制，从而促进科学家们对生命机理的认识。
这些方法还为人们提供了许多研究工具，例如一系列在体方法和体外方法。
在未来，这些技术将在生物科学、临床医学和工业等领域继续发挥重要作用。
分子生物学实验技术考试题库
一、名词解释1。
分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。
2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。
3。
连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。
4。
预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。
5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。
首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。
6。
稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。
7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型,推测相应基因的功能。
8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb）作为基本测量单位(图距）的基因组图。
9。
质谱图 :不同质荷比的离子经质量分析器分开后,到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形.10。
侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。
11。
离子交换层析：是以离子交换剂为固定相,液体为流动相的系统中进行的层析。
12。
Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程.13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。
14。
电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。
15。
多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程.16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签(Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达),方便后继的纯化步骤或者检测.17。
名词解释分子生物学
分子生物学名词解释基因组，Genome，一般的定义是单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组，或是单倍体细胞中的全部基因为一个基因组半保留复制（semiconservative replication）：一种双链脱氧核糖核酸（DNA）的复制模型，其中亲代双链分离后，每条单链均作为新链合成的模板。
因此，复制完成时将有两个子代DNA分子，每个分子的核苷酸序列均与亲代分子相同，半不连续复制(Semi-ondisctinuousreplication)。
是指DNA复制时，前导链上DNA的合成是连续的，后随链上是不连续的，故称为半不连续复制。
dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。
是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,dUTP等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。
在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reverse transcription PCR）、Real-time PCR）中起原料作用。
转座子是一类在细菌的染色体，质粒或噬菌体之间自行移动的遗传成分，是基因组中一段特异的具有转位特性的独立的DNA序列.多顺反子（polycistronicmRNA)在原核细胞中，通常是几种不同的mRNA连在一起，相互之间由一段短的不编码蛋白质的间隔序列所隔开，这种mRNA叫做多顺反子mRNA。
这样的一条mRNA链含有指导合成几种蛋白质的信息。
基因表达：(gene expression)是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程外显子(expressed region)是真核生物基因的一部分，它在剪接(Splicing)后仍会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被表达为蛋白质。
外显子是最后出现在成熟RNA中的基因序列，又称表达序列。
分子生物学 名词解释
医学分子生物学名词基因：编码RNA或蛋白质的全部核苷酸序列。
基因组：一个单倍体生物所含有的全部DNA。
结构基因：编码RNA或蛋白质的核苷酸序列。
转录单位：从启动子到转录终止子之间的DNA节段。
基因表达：是指DNA携带的遗传信息通过转录传递给RNA，mRNA通过翻译将基因的遗传信息在细胞内合成具有生物功能的各种蛋白质的过程。
基因表达调控：指对基因组中某一基因或一些功能相近的基因表达的开启、关闭和表达强度的直接调节。
开放阅读框（ORF）：始于起始密码子并终于终止密码子的一串密码子组成的核苷酸序列。
内含子：DNA或RNA中的非编码序列。
外显子：DNA或RNA中的编码序列。
启动子：与RNA聚合酶识别、结合和转录起始所需的DNA序列。
SD序列：mRNA ５′端在起始密码子AUG 上游 3～11bP处，含A-G 短序列，容易与１６S r RNA ３′-端含U-C 序列互补配对的序列称为SD 序列。
操纵子：由一组功能相关的结构基因连同其上游调控序列共同构成一个转录单位。
病毒癌基因：是病毒从宿主细胞中获得的、以不同方式融合进入病毒结构基因中，使靶细胞发生恶性转化的特定DNA序列。
细胞癌基因：真核细胞中被感染的病毒从宿主细胞中捕获的核苷酸序列（病毒癌基因）的复本抑癌基因：抑制细胞过度生长、增殖从而遏制肿瘤形成的基因。
生长因子：活细胞产生的，通过质膜上特异的受体，将信息传递至细胞内部，调节细胞生长与增殖的多肽类物质。
核酸分子杂交技术：用探针来检测样品中未知核酸序列，再经显影或显色的方法，将结合核苷酸序列的位臵或大小显示出来。
探针：标记的已知DNA或RNA片段。
Southern印迹杂交：检测经凝胶电泳分离且转移至膜上的DNA分子。
Northern印迹杂交: 检测经凝胶电泳分离且转移至膜上的RNA分子Western印迹:检测经凝胶电泳分离且转移至膜上的蛋白质分子质粒：细菌细胞染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状DNA分子。
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嗪乙磺酸) pH 7.9,10mmol/LKCl，
1.5mmol/L DTT(二硫苏糖醇)，0.2mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氟)]，冰浴30min，用 玻璃匀浆器匀浆，3000rpm离心15min 得细胞核沉淀。
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5、染色质结构调整与基因转录的关系；
6、制备RNA探针。
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6
一、基因体外转录的基本原理
基本原理：以DNA为模板，在无细 胞体系中一系列转录因子的作用下 经RNA聚合酶合成RNA的过程。
质粒DNA
模 板
线性DNA
核小体形式存在的DNA
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能用于体外转录的质粒载体
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液 中与蛋白质结合，使染料的最大吸收 峰的位置（lmax），由465nm变为 595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为 兰色。经研究认为，染料主要是与蛋 白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸） 和芳香族氨基酸残基相结合。 在595nm下测定的吸光度值A595，与 蛋白质浓度成正比。
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基因体外转录和翻译的作用：为研 究基因转录和蛋白质翻译提供了一 个十分理想实验体系和技术平台及 找到了一个研究与探讨转录和翻译 这两个复杂的现象的重要手段和方 法。
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4
第一节 基因的体外转录
• 一、基因体外转录的目的和意义 • 基因的体外转录体系最早由Pelham和
Jakson于1976年创立的，经很多实验室的 不断修订和改进，现已成为一项成熟的分 子生物学和细胞生物学技术，已被多家试 剂公司提供标准的实验程序。
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基因体外转录体系在分子生物学和 细胞生物学研究中的用途和意义：
1、快速检测目的基因的转录情况； 2、分析转录因子调节基因转录的过程； 3、分析启动子序列的活性； 4、分析转录因子、DNA结合蛋白和RNA 剪切因子的组成和作用；
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(3)裂解细胞核：向细胞核沉淀中加
入2倍体积的低盐缓冲液(20mmol/L
HEPES，pH 7.9，25％甘油，
1.5mmol/L MgCl2，20mmol/L KCl，
0.2mmol/L EDTA，0.2mmol/L PMSF，
0.5mmol/L DTT)，冰浴10min，用玻 璃匀浆器匀浆。滴加入2倍核沉淀 体积的高盐缓冲液冰浴 轻轻搅拌
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（3）干扰物质少。如干扰Lowry法的K 、 Na 、Mg2 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、 甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测 定法。 此法的缺点是： （1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳 香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法 用于不同蛋白质测定时有较大的偏差， 在制作标准曲线时通常选用 g—球蛋白 为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
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1、一般方法
优点：细胞核完整、内含物丰富
缺点：在分离的细胞核中可能存 在少量细胞质成分
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(1)收集细胞：取5×106/ml的培养细胞 20ml，1500rpm离心5min，用新配制的 0.01mol/LPBS洗涤，收集细胞。 (2)低渗液裂解细胞并纯化细胞核：将收
集的细胞迅速加入原体积1/10的低渗缓
转录的必要条件：无论是真核细胞
的转录体系还是原核细胞的转录体
系，基因转录时都必须有启动子序
列，且该序列能被转录体系识别。
原核细胞体外转录体系常用的启动
子有T3、T7及SP6启动子。
真核细胞体外转录体系除需启动子，
增强子等顺式作用元件外，还需各
种反式作用元件的参与。
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基因体外转录体系
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1
Hale Waihona Puke 什么是基因的体外转录和翻译
基因的体外转录和翻译是20世纪70 年代发展起来的一项分子生物学和 细胞生物学实验技术，是研究离体 条件下(非细胞体系)基因表达情况 的理想体系。
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2
基因表达包括：转录和翻译两个过 程。
基因表达的调控包括：染色体结构 的调节、DNA结构的调节、转录过 程的调控、转录后的调控、翻译过 程的调控及翻译后的调控。
14
附：Bradford法测蛋白含量
1976年由Bradford建立的考马斯亮兰 法（Bradford法），是根据蛋白质与 染料相结合的原理设计的。这种蛋 白质测定法具有超过其他几种方法 的突出优点，因而正在得到广泛的 应用。这一方法是目前灵敏度最高 的蛋白质测定法。
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DNA模板：含有转录启动子及必要 的调控序列(起始和终止序列等)的 DNA及为研究基因转录调控的需要, 在体外组装成的核小体链(注意避免 RNase的污染)。
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9
细胞核抽提物的制备：
细胞核抽提物：DNA转录由RNA聚合酶、 各种转录因子及必要的环境条件等，这 一切必需由细胞提供。常用于制备细胞 核抽提物的细胞有酵母细胞、兔网织红 细胞和Hela细胞
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Bradford法的突出优点是： （1）灵敏度高，据估计比Lowry法 约高四倍，这是因为蛋白质与染料 结合后产生的颜色变化很大，蛋白 质－染料复合物有更高的消光系数， 因而光吸收值随蛋白质浓度的变化 比Lowry法要大的多。
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（2）测定快速、简便，只需加一种 试剂。完成一个样品的测定，只需 要5分钟左右。由于染料与蛋白质结 合的过程，大约只要2分钟即可完成， 其颜色可以在1小时内保持稳定，且 在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定 性最好。因而完全不用像Lowry法那 样费时和严格地控制时间。
30min。
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(4)收集核提取物：25000g离心 30min，收集上清液后，用缓冲液 透析2h后，4℃，25000g离心20min， 上清液置-70℃保存。
(5)核提取物的蛋白定量：核抽提物 总蛋白浓度采用Bradford法测定， 以牛白蛋白为参照。
2020年3月27日星期五