实验五-粪标本的微生物学检验
粪便分离实验报告
粪便中病原微生物的分离与鉴定二、实验目的1. 掌握粪便标本的采集、处理和病原微生物的分离方法。
2. 熟悉不同培养基的制备和使用，了解病原微生物的生物学特性。
3. 培养实验室操作技能，提高对医学微生物学基本原理的认识。
三、实验原理粪便中存在大量微生物，其中既有对人体有益的正常菌群，也有可能引起疾病的病原微生物。
通过特定的分离培养方法，可以将病原微生物从粪便中分离出来，并进行鉴定，从而为疾病的诊断和治疗提供依据。
四、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜粪便标本2. 试剂与仪器：- 牛奶琼脂培养基- 血琼脂培养基- 脱纤维蛋白血琼脂培养基- 碎琼脂培养基- 革兰氏染色液- 稀释液- 移液器- 灭菌镊子- 灭菌培养皿- 显微镜- 移菌环1. 标本采集：采集新鲜粪便标本，注意避免污染。
2. 标本处理：将粪便标本加入适量的稀释液中，充分混合均匀。
3. 分离培养：- 取适量稀释后的粪便标本，分别接种于牛奶琼脂培养基、血琼脂培养基和脱纤维蛋白血琼脂培养基上。
- 将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24-48小时。
4. 观察与记录：观察培养基上菌落生长情况，记录菌落特征。
5. 鉴定：- 对疑似病原菌进行革兰氏染色，观察菌体形态和染色特性。
- 根据菌落特征和染色结果，进行初步鉴定。
六、实验结果1. 牛奶琼脂培养基上观察到典型的金黄色葡萄球菌菌落，革兰氏染色呈阳性。
2. 血琼脂培养基上观察到典型的溶血性链球菌菌落，革兰氏染色呈阳性。
3. 脱纤维蛋白血琼脂培养基上观察到典型的大肠杆菌菌落，革兰氏染色呈阴性。
七、讨论与分析1. 本实验成功分离出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和大肠杆菌，表明粪便标本中存在这些病原微生物。
2. 金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌均为革兰氏阳性菌，具有致病性，可能引起皮肤感染、呼吸道感染等疾病。
3. 大肠杆菌为革兰氏阴性菌，通常存在于人体肠道中，但在某些情况下也可能引起感染，如尿路感染、腹泻等。
4. 本实验结果表明，粪便分离培养是诊断肠道感染的重要手段，对于疾病的预防和治疗具有重要意义。
2018-粪便检查实验报告-范文word版 (12页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==粪便检查实验报告篇一：脓汁和粪便标本中病原菌的检验实验报告脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业：学号：姓名：一实验目的：从脓汁和粪便标本中分离、培养和检测病原体。
了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理，树立牢固的无菌观念。
二实验器材：试管架,酒精灯,污物盘，普通冰箱，隔水式电热恒温培养箱，奥林巴斯 CX21型生物显微镜，乙醇乙醚，吸水纸，石蜡油，拭镜纸，染色架，革兰染色瓶，1500W电炉，石棉网，手套，酒精棉球，镊子，碘酒棉球,接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、冷藏室、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子三方法与步骤：1培养基的制备、消毒和灭菌: ○1. 调配→溶化→ 矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。
2. 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→灭菌→检定→保存。
②细菌的分离培养: 采用平板划线分离法，将取脓汁和粪便标本中混杂的多种细菌，分别在普通平板和伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37℃培养18～24h ，从而分离出单个菌落。
③细菌的纯培养：脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落；粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。
挑选这四种不同菌落分别在斜面培养基上接种④细菌的形态学检查：涂片制备→ 干燥→ 固定→ 革兰染色⑤细菌的生化试验等 : 糖发酵试验, 细菌药物敏感性试验, 血浆凝固酶试验, 半固体接种法, 痢疾血清玻片凝集反应⑥结果观察、分析、总结四结果与讨论结果讨论：1. 在制备好培养基后，我们首先采用的是平板划线分离法，从脓汁标本中分离出黄色和白色两种菌落→在显微镜下观察，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌→再结合菌落或菌苔颜色，可初步断定，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌→再通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。
脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验报告
2016年秋季学期微生物学实验报告1、了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理。
2、熟悉常见病原性球菌及常见肠道致病菌的检查程序，掌握各检查实验操作。
3、了解脓汁和粪便标本中病原菌的检测的临床应用及临床意义。
4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。
5、熟悉抗生素对于不同细菌的作用机理。
6、树立牢固的无菌观念。
二、实验器材：1、培养基：营养琼脂平板、伊红美兰平板、斜面、营养肉汤、半固体琼脂2、标本：脓汁标本、粪便标本、空气细菌培养物、手指皮肤细菌培养物、细菌分离培养物、斜面培养物、营养肉汤培养物、药敏试验培养物3、器材：1）培养基的制备：天平、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、试管、试管架、刻度吸管、洗耳球、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、干粉培养基、酒精灯、火机。
2）细菌的分离培养：碘酒棉球，酒精棉球、眼科镊子、接种环。
3）细菌的纯培养: 接种环。
4）细菌的形态学检查：生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、结晶紫染液、芦戈氏碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红、染色架、接种环。
5）细菌的生化试验:糖发酵管、抗菌素（青霉素、链霉素、庆大霉素）纸片、眼科镊子、接种针、接种环、小砂轮、葡萄糖发酵微量管、乳糖发酵微量管、兔血浆、生理盐水、载玻片。
6）结果分析：尺子。
三、方法与步骤1、营养肉汤培养基的制备取1.1g营养肉汤粉末于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，摇晃锥形瓶使其几乎完全溶解。
将锥形瓶置于电陶炉上加热至沸腾，观察固体是否完全溶解，冷却后分装至试管内。
2、细菌的分离培养（平板划线分离法）甲→脓汁标本→营养琼脂平板乙→脓汁标本→营养琼脂平板丙→粪便标本→伊红美蓝平板丁→粪便标本→伊红美蓝平板1）接种环烧灼灭菌，以免污染标本。
2）取标本3～5ul。
3）转动平板，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。
4）接种环与平板呈30～40度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条5）甲、乙烧掉接种环上多余的标本。
临床微生物学检验的标本采集
临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。
（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。
按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。
2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。
2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。
3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。
（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。
2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。
3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。
4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。
（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。
2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。
二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。
（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。
准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。
2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。
为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。
（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。
粪细菌培养
粪细菌培养
粪细菌培养是一种常见的临床微生物检测方法，用于检测肠道中的细菌种类和数量，以帮助医生诊断疾病和制定治疗方案。
本文将介绍粪细菌培养的原理、方法和临床意义。
原理
粪便中包含大量的细菌，包括有益菌和病原菌。
通过将粪便样本接种到含有营养物质的培养基上，可以促进细菌的生长和繁殖。
不同类型的细菌在不同的培养条件下会呈现不同的形态和特征，通过观察细菌的形态、颜色和数量可以初步判断粪便样本中的细菌种类和数量。
方法
1.样本采集：患者需在大便后立即将新鲜的粪便样本采集到干净的容
器中，并尽快送至医院或实验室进行检测。
2.处理：将粪便样本均匀搅拌后取适量的样品，并接种到含有培养基
的平板上。
3.培养：将接种后的平板放入恒温箱中，在适当的温度和湿度条件下
培养一定时间。
4.观察：观察培养基上细菌的形态、颜色、大小等特征，并记录不同
细菌的数量。
5.鉴定：根据细菌的形态特征以及进一步的生化和分子生物学方法鉴
定出不同种类的细菌。
临床意义
粪便细菌培养可以帮助医生诊断和治疗一系列肠道感染和疾病，包括：•感染性腹泻：通过培养检测病原菌如沙门菌、大肠杆菌等，帮助医生明确病原体，指导抗生素的使用。
•炎症性肠病：细菌培养可以帮助区分炎症性肠病的类型，指导治疗方案。
•肠道菌群失调：通过观察有益菌和病原菌的比例，评估肠道菌群的健康状况，指导益生菌或其他调节菌群的治疗。
总的来说，粪细菌培养是一种简单而有效的临床检测方法，对于肠道疾病的诊治具有重要的意义。
以上是关于粪细菌培养的介绍，希望能对读者有所帮助。
食品卫生微生物学检验 大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌计数
大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤
6.2 初发酵实验 对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液体 样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸 盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL， 则用双料LST肉汤）。36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气 泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如 未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管 数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。
食品卫生微生物学检验 大肠杆菌计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Escherichia coli
大肠菌群计数
大肠菌群
定义：一群在36℃条件下培养24~48小时能发酵乳糖、产酸 产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 卫生学概念，包括埃希氏菌属，克雷伯氏菌属、肠杆菌属 和柠檬酸杆菌属等的细菌 检验比较简单，所以被广泛用做水源的卫生指标和食品加 工卫生状况的通用指标
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Coliforms
食品卫生微生物学检验 粪大肠菌群计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of faecal coliforms
℃± 1 ℃ 36 36℃
验
24h~ 48h
报告结果
大肠菌群计数
大肠菌群计数
大肠菌群计数
第一法
MPN法
第二法 平板计数法 第三法 Petrifilm测试片法
2024年高级卫生专业技术资格考试微生物检验技术(094)(正高级)试卷及答案指导
2024年高级卫生专业技术资格考试微生物检验技术(094)(正高级)模拟试卷(答案在后面)一、多项选择题（本大题有30小题，每小题1分，共30分）1、以下哪些属于微生物检验技术的基本步骤？（）A. 样品采集与处理B. 微生物分离纯化C. 微生物鉴定D. 药物敏感试验E. 报告撰写2、在微生物分离纯化的过程中，以下哪种方法常用于分离革兰氏阳性菌？（）A. 霍夫曼平板法B. 沙氏平板法C. 肉汤培养法D. 培养基稀释法E. 稀释涂布平板法3、下列关于细菌培养基的选择与配制的说法正确的是：A. 所有细菌的培养都使用相同的培养基B. 选择培养基时需要考虑目标菌株的营养需求和生长条件C. 培养基配制完成后无需灭菌即可使用D. 鉴定肠道致病菌常用SS琼脂作为选择性培养基E. 血平板常用于初次分离培养细菌4、关于抗生素敏感性试验，以下叙述正确的是：A. 抗生素敏感性试验仅对革兰氏阳性菌有意义B. MIC（最小抑菌浓度）法可以定量测定细菌对抗生素的敏感度C. 纸片扩散法适用于所有临床分离菌株的药敏测试D. 抗生素敏感性试验的结果可以直接指导临床用药E. 在进行药敏试验前，必须确保菌悬液浓度符合标准5、下列关于细菌形态学的描述中，正确的是（）A. 革兰氏染色法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌B. 细菌的形态学观察主要用于细菌的鉴定C. 细菌的形态学观察包括细菌的大小、形状、排列等D. 细菌的形态学观察可以用于判断细菌的致病性6、以下关于细菌生理学的描述中，错误的是（）A. 细菌的生长繁殖需要营养物质、水分、适宜的温度和pH值B. 细菌的新陈代谢包括同化作用和异化作用C. 细菌的同化作用包括自养和异养D. 细菌的异化作用包括光合作用和化能作用7、关于细菌L型的描述，下列哪些是正确的？A. 细菌L型是指在某些条件下细菌细胞壁缺陷而形成的形态B. L型细菌可以通过常规培养基生长C. 它们通常在高渗透压培养基上生长D. L型细菌对青霉素类抗生素敏感E. 由于细胞壁的缺失，L型细菌可以在不利环境下存活8、关于真菌的基本特征，以下哪几项说法是准确的？A. 真菌属于原核生物界B. 大多数真菌通过产生孢子的方式繁殖C. 酵母菌是一种单细胞形式的真菌D. 所有真菌都是多细胞有机体E. 真菌能够进行光合作用9、以下哪些微生物属于革兰氏阴性菌？A. 肠杆菌属（如大肠杆菌）B. 铜绿假单胞菌C. 链球菌属（如肺炎链球菌）D. 霍乱弧菌 10、以下哪些指标可以用来判断细菌的耐药性？A. 最小抑菌浓度（MIC）B. 敏感性试验结果C. 药物敏感度指数D. 耐药基因检测11、下列关于细菌的细胞壁成分及其功能的说法，哪几项是正确的？A. 肽聚糖是所有细菌细胞壁的主要成分。
临床常见标本的微生物检验
主要内容
➢ 1.临床常见标本的微生物检验
一、血、骨髓、静脉导管标本 二、痰及下呼吸道标本 三、尿液标本 四、大便标本 五、生殖道系统标本
六、化脓和创伤标本 七、穿刺液标本 八、眼、耳、鼻、咽拭子标本 九、组织标本
一、血、骨髓、静脉导管标 本
（一）血培养检测采血指征 临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的 患者
无菌生长，需要进行末次接种。
双相培养瓶
二.导管相关性血流感染的标本培养
导管相关性血流感染：
最常见的为血管内导管相关性血流感染（CRBSI），发生率与导管种 类、导管相关医疗操作的频率、患者病情等因素有关。
短期留置的血管内导管，皮肤定值菌通过皮下隧道移植到导管尖端， 随后引发感染；
长期留置的血管内导管，导管头被细菌污染，导管腔发生细菌定植， 引发感染；
三、 尿培养标本
尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引起的尿路 炎症。尿路感染并非是一种单一的疾病，而是一种临 床综合征。根据感染部位可分为上尿路感染（如肾盂 肾炎）及下尿路感染（如膀胱炎），男性还可出现前 列腺感染，不同部位同时感染也很常见。尿路感染是 人类最常见的感染之一，可发生于各个年龄段的人群， 好发于女性，男:女之比为1:10。
2.延迟送检或待处理标本应置于4 ℃冰箱保存（疑似肺炎 链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌的例外），但应在24小时 内处理；
3.对可疑烈性呼吸道传染病（SARS、炭疽、鼠疫等）的 标本，必须全过程注意生物安全；
4.经口腔部污染的标本均不可以做厌氧菌培养。
痰标本的处理
一.痰标本的革兰染色涂片检测：
其目的是判定标本是否适合做细菌培养，并初步判定有否病原菌， 病原菌的数量级类别，有助于初步报告、培养基选择和培养结果 的判定。
实验五环境中微生物的检测和分离纯化
实验五环境中微生物的检测和分离纯化一、实验目的1．熟悉常用微生物培养基的配制方法。
2．学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。
3．用平板划线法和稀释法分离微生物。
4．认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。
二、实验原理(一)微生物的分离与纯化土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此，土壤是微生物多样性的重要插所，也是发掘微生物资源的重要基地，可以从土壤中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的是平板分离法。
为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对雪养、酸碱度、浓度和氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某些抑制剂抑制其他菌生长而利于此菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物．再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直至得到纯菌株。
(二)平板菌落计数法平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞．统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。
平板菌落计数法虽然操作繁琐，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
三、实验材料土样10g，未知菌变形杆菌单菌落平板和无菌水．取液器(5m1、l000ml各一支)，培养箱，培养皿(20个)，无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，5ml、1ml 无菌吸头（移液管），记号笔，酒精灯，火柴，试管架，牙签，。
四，实验步骤(一)培养基的制备(提前准备)按以下步骤制备牛肉膏蛋白胨平板培养基，每组20个平板。
微生物实验报告细菌
微生物实验报告题目脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业2013级临床医学八年制实验者学号小组成员指导老师一、实验目的1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。
2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。
3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。
4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。
5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。
6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。
7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。
二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。
临床微生物学检验题目单选多选简答论述
临床微生物学检验题目一、单选题1.下列检查中除哪项外均可用于霍乱的诊断：EA.大便悬滴法检查B.大便碱性蛋白胨水培养C.大便涂片革兰染色D.霍乱血清凝集试验找特异性抗体E.血培养找霍乱弧菌2.近年来发现对痢疾杆菌较敏感的抗菌药物为：DA.卡那霉素B.庆大霉素D.氟喹诺酮类E.氨苄青霉素3.在钩端螺旋体病血清学试验中,国内以下列哪种试验有较高的特异性和敏感性：AA.显凝试验B.炭凝试验C.红细胞凝集试验D.红细胞溶解试验E.补体结合试验4.乙脑患者早期的特异性诊断检查：EA.腰穿检测脑压B.脑脊液化验检查C.头颅CT检查D.补体结合试验检测乙脑IgG抗体E.酶联免疫吸附试验,检测乙脑IgM抗体5.流行性斑疹伤寒的实验室诊断方法常选：CA.血常规B.病原体接种分离C.外斐反应D.立克次体凝集试验E.补体结合试验6.血清流行病学调查时,若需要长期保存血清应置于：DA.－4℃冰箱B.－8℃冰箱C.－10℃冰箱D.－20℃冰箱E.以上都不对7.用于血清流行病学调查的静脉采血量一般为：E以下～2ml～3ml～5ml以上8.能长期或永久保存血清的温度条件是：E℃℃℃℃℃9.志贺菌属中,下列哪一项不正确：EA.在普通琼脂平板上生长形成中等大小、半透明的光滑型菌落抗原为型特异型抗原抗原为群特异性抗原D.分解葡萄糖,产酸不产气E.分解乳糖,产酸产气10.宋内氏志贺氏菌有两个变异相,急性患者分离的菌株一般是：AA.Ⅰ相B.Ⅱ相C.Ⅰ相或Ⅱ相D.Ⅰ相和Ⅱ相E.以上都不对11.有关细菌培养基的描述,哪项是不正确的：BA.按物理状态可分为液体、固体和半固体三类培养基属于鉴别培养基C.血琼脂平板属于营养培养基D.蛋白胨水为常用的基础培养基E.庖肉培养基属于厌氧培养基12.新从病人分离的肠道杆菌菌落是：B型型或S型和S型E.以上都不对13.接种立克次体的鸡胚应置于下列哪一个温度的孵卵箱中孵育：AA. 32～35℃B. 37～38℃C. 38～39℃D. 39～40℃E. 40～41℃14.用吉姆尼茨染色法染色立克次体时加石炭酸复红染色液一般需要：CA. 1分钟B. 2分钟C. 5分钟D. 10分钟E. 15分钟15.最早采用的检测方法为：BA. 分离培养B. 直接涂片镜检C. 血清学试验D. 动物试验E. 电镜检查16.下列哪种细菌的最适生长温度为25℃：CA. 肠炎沙门菌B. 空肠弯曲菌C. 假结核耶尔森菌D. O157：H7大肠杆菌E. 宋内志贺菌17.常用琼脂扩散试验的琼脂浓度为：B宋内志贺菌：DA. 快速发酵乳糖B. 为B群C. 包括10型D. 培养中常出现扁平的粗糙型菌落E. 为A群19.下列哪一项是痢疾志贺菌的特性：AA. 可产生志贺毒素B. 只有1型C. 迟缓发酵乳糖D. 有15个型E. 培养中常出现扁平的粗糙型菌落20.测定HIV感染的最简便方法是下列哪一个：AA. 测定HIV抗体B. 分离HIV病毒C. 测定HIV抗原D. 测定HIV核酸E. HIV基因测序21.庆大霉素培养基适用于培养何种细菌：CA. 鼠疫杆菌B. 布鲁氏菌C. 霍乱弧菌D. 白喉杆菌E. 奈瑟氏菌的抗原成分中哪一种与病毒的中和性作用有关：BA. HBvAgB. HBsAgC. HBcAgD. HBeAgE. HBuAg23.甲型肝炎实验室诊断方法主要依赖于检测患者血清中的下列哪种成分：CA. 抗HAV的IgAB. 抗HAV的IgGC. 抗HAV的IgMD. 抗HAV的IgDE. 抗HAV的IgE24.沙门菌属在普通平板上的菌落特点为：AA. 中等大小,无色半透明B. 针尖状小菌落,不透明C. 中等大小,粘液型D. 针尖状小菌落,粘液型E. 扁平粗糙型25.立克次体病原学检查,脏器组织和节肢动物可做切片检查,切法要求越薄越好,一般不超过：A～4微米～8微米～15微米～25微米～40微米26.做补体结合试验前血清加热灭活以破坏它所含有的补体,通常羊血清用下列哪一个温度灭活：BA. 48℃B. 58℃C. 68℃D. 78℃E. 88℃27.在CFT反应中为了查Ag,常常降低反应温度,称为冷CFT,冷CFT 反应温度通常是：EA. 37℃B. 18℃C. 24℃D. 30℃E. 4℃28.当进行抗球蛋白试验查不完Ab时,其中一个重要试剂是第二Ab,在抗球蛋白试验中第二抗体是：AA. 双价抗体B. 单价抗体C. IgE抗体D. 半抗体E. IgD抗体29.在CFT反应中有5种成份：Ag、被检血清、补体、溶血素和SRBC,CFT反应中补体的作用是：EA. 特异性结合B. 指示剂C. 抑制剂D. 中和作用E. 非特异性结合30.在进行免疫血清学检查时进行Ag-Ab反应,进行此反应有许多影响因素,一般Ag-Ab反应中无电解质时：BA. 敏感性下降B. 不反应C. 敏感性上升D. 反应正常E. 提高特异性31.某菌属的一个血清群只有1个血清型,诊断时需同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清,这一菌属为：AA.志贺氏菌B.艾希氏菌C.沙门氏菌D.大肠杆菌E.耶尔森氏菌32.某菌属的一个血清群只有1个血清型,诊断时需同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清,这一菌属分为几个血清群：B33.某菌属的一个血清群只有1个血清型,诊断时需同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清,所述血清群为第几群：D群群群群E.以上都不对34.有关放射免疫测定,哪种说法是不正确的：DA.放射性强度常用毫居里mCi或微居里μCi表示B.广泛应用于蛋白质、酶的测定C.广泛应用于半抗原和药物的测定D.其特点是特异性强,但敏感性低E.可能存在的放射性污染为其缺点之一试验是测试细菌：CA.产生志贺样毒素的能力B.产生肠毒素的能力C.侵袭力D.产生内毒素的能力E.粘附能力36.军团菌培养时,BCYE-α琼脂与BCYE琼脂成分不同之处在于前者含有：BA.苏氨酸B.酮戊二酸C.头孢羟唑D.多粘菌素E.茴香霉素37.鲎试验用于何种物质的测定：CA. 外毒素B. 类毒素C. 内毒素D. 神经毒素E. 肠毒素38.可用于扩增未知序列的PCR方法是：BA. 对称PCRB. 反向PCRC. RT-PCRD. 不对称PCRE. 嵌套PCR39.把外源质粒导入细菌中的方法称为：BA. 转导B. 转化C. 转染D. 转入E. 克隆40.从有正常菌群存在的部位所采取的标本应接种在哪种培养基中分离培养病原菌：CA.增菌培养基B.营养培养基C.选择鉴别培养基D.基础培养基E.特殊培养基二、多选题1.可从粪便标本中分离的病毒有：ACDEA.甲型肝炎病毒B.麻疹病毒C.脊髓灰质炎病毒D.人类轮状病毒病毒2.血清学诊断法,正确的是：ABCDA.伤寒—肥达反应B.风湿病—抗“O”试验C.斑疹伤寒—外斐反应D.梅毒—瓦色曼试验E.莱姆病—IgA抗体检测三、简答题1.什么是PCR技术,典型的PCR技术分几个步骤答：PCR技术全称聚合酶链式反应Polymerase Chain Reacti-on技术,是一种扩增、复制小分子核酸片段的分子生物学技术;典型的PCR技术分为预变性,变性,退火,延伸,最后延伸5个步骤;2.什么是ELISA技术,依据原理不同ELISA技术一般可分为几类答：ELISA技术全称为酶联免疫吸附技术;依据原理不同ELISA技术可分为双抗体夹心法、双抗原夹心法、间接法、竞争法和捕获包被法;3.常用的药物敏感性测试AST技术有哪些答：纸片扩散法K-B法、E-Test法、琼脂稀释法、肉汤稀释法仅列出要点;4.细菌培养基按照其用途不同可分为哪五类答：基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基仅列出要点;5.霍乱弧菌在碱性蛋白胨水中培养形成菌膜的原因是什么答：霍乱弧菌为好氧、动力活泼菌,繁殖迅速,故在气液面形成菌膜仅列出要点;6.核酸探针杂交技术有哪几种答：共分为两种,分别为DNA印迹杂交Southern blot与RNA印迹杂交Northern blot 仅列出要点;三、论述题1.在食源性疾病暴发疫情的现场处置过程中,针对细菌性病原,如何进行样本采集与分离鉴定答：采集粪便用于细菌检测,最好是在病人使用抗菌药物之前,采集新鲜粪便;既可以使用灭菌棉拭子直接从消化道下端采集,也可以蘸取病人排泄物样本;采集的粪便样品一般有两种处理办法：1立即投入到相应致病菌增菌液中进行培养增菌,如用于霍乱增菌的APW和用于检测EHEC的mEC增菌肉汤中;2将采集的粪便拭子插入到Cary-Blair运送培养基中送至相关实验室进行检测;在进行分离鉴定时：1针对霍乱等弧菌,可将粪便拭子样本投入碱胨水APW中增菌6-8小时后用四号琼脂、庆大霉素琼脂或TCBS琼脂划线分离培养用于检测霍乱弧菌;而继续增菌16-18小时,接种麦康凯琼脂划线分离培养,可用以检测嗜水气单胞菌与类志贺邻单胞菌、副溶血弧菌等;2针对肠杆菌,可将粪便拭子投入SBG/SF/SC增菌液中增菌16-18小时后用沙门科玛嘉平板划线分离检测沙门氏菌;可将粪便拭子投入mEC肉汤中增菌16-18小时后用O157免疫磁珠富集/科玛嘉平板划线分离检测EHEC O157;还可直接将粪便拭子转种麦康凯/SS培养基37度培养16-18小时检测志贺菌与大肠杆菌;对于可疑大肠埃希氏菌,可用多重PCR的方法检测EA/ET/EI/EP/EH五种致泻大肠杆菌;3针对弯曲菌,可将粪便拭子转种与CCDA或skirrow绵羊血平板,37度微需氧环境下培养24-48小时检测空肠、结肠弯曲菌等;在整个分离培养过程中获得的可疑菌落也可以根据实际情况使用API、Vitek等系统生化鉴定方法进行鉴定与报告;4在应急检测中,也可以使用PCR技术进行致病菌的核酸检测;技术近年来在传染性病原的快速诊断领域中得到越来越广泛的应用,请概述PCR技术的原理,反应的基本成分,基本步骤及操作注意事项;答：PCR技术的原理是：双链DNA在高温条件下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝,当温度降低后又可以复性成为双链;因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制;典型PCR反应的基本成分为：特异性引物,热稳定DNA聚合酶/缓冲液包含Mg离子,4种dNTPs,模板、灭菌去离子水;PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA 的变性：模板DNA经加热至94-98℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火复性：模板DNA 经加热变性成单链后,温度降至40-55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板;每完成一个循环需2～4分钟,2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍;PCR操作注意事项：1.严格操作,避免交叉污染与气溶胶污染；2.确保引物、试剂与扩增模板质量与配比；3.产物电泳小心处理EB染料,防止污染和对人体造成危害;3.请解释伤寒诊断中肥达氏反应O抗体与H抗体的诊断意义;答：肥达反应是诊断伤寒副伤寒的辅助诊断;其结果的解释必须结合临床变现和病程,病史,以及地区流行病学情况;机体患伤寒、副伤寒,一般于发病后1—2周内血液中出现特异性抗体并且随着病程延长而效价渐升,此时即可为阳性,第4周可达峰值,以后又逐渐降低;一般以“O”凝集效价在1:80或以上和“H”在1:160或以上为阳性;抗体主要是IgM,出现较早；H抗体主要是IgG,出现较晚;根据此特点,肥达试验结果有如下诊断价值：二者均超过正常值,患伤寒的可能性大;二者均在正常值内,患伤寒的可能性小;H抗体效价超过正常值,O 抗体效价正常,可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应;O抗体效价超过正常值,H抗体效价正常,可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染;一般间隔1—2周复查,若抗体效价比前次结果增高2—4倍,则具有诊断价值;4.霍乱是我国传染病防治法规定的甲类传染病,请列举霍乱弧菌实验室检测的方法及步骤,包括采样、增菌、分离培养、生化/血清学鉴定等环节;答：霍乱检测的采样主要对象是病人呕吐物,粪便与环境水样;对于粪便与呕吐物,可直接分离培养或用碱性蛋白胨水APW37度增菌6小时必要时可二次增菌后进行检测；对于环境水样,可用10×APW进行增菌;增菌处理结束后可用接种环挑取表面增菌液划线分离于四号琼脂/庆大霉素琼脂/TCBS琼脂37度培养16-18小时后观察是否有可疑菌落生长四号琼脂上为无色半透明黑心菌落,庆大霉素琼脂为无色半透明菌落,TCBS琼脂上为黄色菌落;挑取可疑菌落进行氧化酶/拉丝试验,氧化酶阳性/拉丝试验阳性菌落可初步判定为霍乱弧菌,可将其转种于营养平板培养后进行系统生化鉴定;鉴定为霍乱弧菌的菌株还需进一步进行O1/O139群、小川/稻叶血清分型;有条件的话还可以使用PCR/荧光定量PCR的方法检测其是否产CTX肠毒素;。
实验五 粪标本的微生物学检验
种类
病原菌
革兰阳性菌 革兰阴性菌
真菌
金黄色葡萄球、厌氧链球菌、肠球菌、结核分枝杆菌、产气荚膜 梭菌、艰难芽胞梭菌、蜡样芽胞杆菌
伤寒杆菌及其它沙门菌、志贺菌、弯曲菌、致病大肠埃希菌、霍 乱弧菌、副溶血弧菌 、气单胞菌、邻单胞菌、小肠结肠炎耶尔森 菌
白假丝酵母菌
病毒
轮状病毒
粪便标本的检验程序
粪便标本或肛拭子标本
增菌液：本培养基含有胆盐、枸橼酸盐对革 兰氏阳性菌有抑制作用，而对革兰氏阴性 菌有增菌作用，接种标本小时内，大肠杆 菌、变形杆菌及假单胞菌在此培养基中生 长迟缓，而志贺菌、沙门氏菌生长较迅速。 故常于接种粪便～小时，再自此增菌液内 接种至平板、平板中。
• 亚硒酸盐增菌液： • 本培养基中的．亚硒酸钠可抑制革兰氏阳性菌
实验六
粪便标本的微生物学检验
• 实验目的： • 掌握粪便标本的采集与处理、常见病原菌
及一般微生物学检验程序。 • 掌握沙门氏菌和志贺氏菌的鉴定方法；熟
悉它们的生物学性状。
• 粪便标本的采集与处理：
• 自然排便采集法：自然排便后，挑取粪便～克于无菌 的容器内送检。应尽可能取有脓血、粘液的标本。
• 肛拭子法：不易获得粪便的患者或作厌氧菌培养时， 常采用此法。将无菌棉拭子用无菌生理盐水湿润后， 插入肛门约～厘米（幼儿约～厘米）处，轻轻旋转， 擦取直肠表面粘液后取出，置无菌试管内送检。除婴 幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。
的生长，对革兰氏阴性菌也有毒性，但磷酸钠 有中和此毒性的作用，能使肠道致病菌迅速繁 殖。磷酸氢二钠与磷酸二氢钠有缓冲作用，有 利于肠道致病菌生长。
• 平板：是专用志贺菌、沙门菌分离培养用的一种强选择性培养基。 • 胆盐能抑制革兰氏阳性菌生长，煌绿抑制大肠杆菌的生长。促进
(医学检验技术专业)微生物学检验教学
《微生物学检验》教学大纲课程代码：00031025课程名称：微生物学检验课程总学时：136学时（其中理论68学时，实验68学时）课程类别：必修课课程性质：专业课面向专业：医学检验技术专业开设单位：基础教学部病原生物与免疫学教研室一、课程的性质、地位和任务《微生物学检验》是医学检验技术专业的一门专业课程。
本课程总论部分主要介绍微生物学及微生物学检验的基本知识，各论部分主要介绍常见病原微生物的生物学特性，包括形态染色特征、培养特性、生化反应特点、抗原性和分类，致病性和免疫性，微生物学检验的标本采集要求与方法、检验鉴定程序、具体的鉴定方法及鉴定要点和报告方式。
通过实验课程的学习，巩固和加强对微生物学及微生物学检验理论知识的认识和理解，提高学生的实际操作能力，培养学生创新思维和实事求是的科学态度。
二、课程教学目标（一）理论、知识方面1.明确微生物学检验的研究内容，学习微生物学检验的目的，认识医学微生物分类的意义及各类医学微生物的主要特性。
2.掌握医学微生物的主要生物学性状、遗传与变异机理、理化因素及生物因素对医学微生物的影响。
3.熟悉病原微生物的主要传播途径、致病性及免疫性。
学会对各类病原性微生物感染的常用实验室诊断方法。
4.明确病原微生物感染的特异性防治和药物治疗原则。
5.掌握常见的微生物所致疾病的临床症状和诊断指标6.了解对各类病原微生物的防治原则。
（二）能力、技能方面1.熟练掌握显微镜的使用和保养。
2.正确阐述常见的病原微生物的生物学性状，致病物质，主要传播途径及引起疾病的类型。
3.掌握常见的病原微生物感染的诊断方法。
4.将理论知识与具体的实验操作相结合，熟练掌握各种基本的医学微生物学诊断方法的机理，熟练各种基本实验的操作。
5.能运用学到的微生物学及微生物学检验专业知识，对各类临床标本进行病原微生物学的鉴定，及时地发出规范、准确的鉴定报告。
三、课程教学内容和要求第一篇微生物学检验基础绪论（1学时）1.教学内容及基本要求【教学内容】（1）微生物与微生物学（2）医学微生物学发展简史（3）微生物学及微生物学检验【基本要求】：掌握:微生物的定义与特点;微生物的分类。
实验诊断2016粪脑等-PPT文档资料
a.用干燥洁净的容器留取新鲜标本，不得混有尿液或其他物质。 b.有脓血时，应取脓血及粘液部分涂片检查，外观无异常的
粪便要多点取样检查。 c.无粪便而又必须检查时可经肛门指诊取粪便。 2.寄生虫检查标本
a.对某些寄生虫及虫卵的初筛检测，应采取三送三检。 b.检查痢疾阿米巴滋养体等寄生原虫，应注意保温，30 min内送检。 3.隐血试验 患者应于素食三天.禁食铁剂、维生素C。
。 透性及脑脊液中糖酵解速度的影响
参考值 ： 成人 2.5-4.5mmol／L 儿童 2.8-4.5mmol／L
临床意义： １）脑出血、血脑屏障破坏、血糖增高时可使csf中的葡萄糖增高 ２）细菌、微生物感染时可消耗csf中的葡萄糖，细胞破坏释放葡萄糖酵解 酶，使葡萄糖减少。 ３）恶性肿瘤：癌细胞酵解csf中的葡萄糖，使csf 中的葡萄糖减少。
阿米巴痢疾 血为主，血中带脓， 呈暗红色稀果酱样，
细菌性痢疾
黏液及脓为主，脓中带血。
脓性及脓血样 肠道下段的病变，如痢疾，结核、结肠炎、直肠癌
米泔水样
霍乱与副霍乱
粘液便
各类肠炎、痢疾
稀糊状或水样便 各种感染性和非感染性腹泻
细条样便
直肠狭窄，多见于直肠癌
小儿肠炎时粪便 呈绿色稀糊状， 大量黄绿色稀汁样便 并含有膜状物时 见于假膜性肠炎
脑膜炎、出血、药物中毒
脑神经系统病变使屏障通透性增加 内分泌及代谢性疾病
脑脊液循环障碍 如：脑部肿瘤、椎管内梗阻 ↑↑↑
鞘内免疫球蛋白增加伴血脑屏障通透性增加（胶原血管疾病、慢性炎症性脱髓鞘性多发
性神经根病等 （糖尿病性神经病变、甲状腺及旁腺功能减退、尿毒症等）
粪便检验
（二）胃肠道出血的锝标的红细胞法定位诊断
1.原理：
当胃肠道出血时,锝标的红细胞或胶体随血液进入胃 肠道。
2.方法
静脉注射显像剂后以2-5分钟一帧的速度连续显像0.51小时,必要时延迟显像。但胶体不能进行延迟显像。
3.临床应用
适应于活动胃肠道出血的诊断和大致定位。急性活动 出血用锝标胶体显像,间歇出血者用锝标RBC显像。诊 断准确率在80%左右,能够探测出血率高于每分钟0.1ml 的消化道出血。 尽管同位素方法的灵敏度和特异性无可非议，甚至 还可以对出血点进行准确的定位，但临床很难接受将 一种应用放射性同位素的、操作复杂的、需要特殊仪 器的方法普遍用来进行一个没有特异性的指标的检验。
一、粪便基因筛检的分子生物学 基础
肿瘤的产生是多能干细胞向正常细胞增殖、 分化的过程中，受环境因素和遗传因素的影响， 相关基因发生改变的结果。 肿瘤细胞的基因与基因表达与正常细胞有显 著区别，因此如能检出这种基因改变就能为肿 瘤的诊断和预防提供条件。 肿瘤不是单基因疾病，肿瘤的发生发展是肿 瘤相关基因的多阶段积累的改变过程，涉及到 多种癌基因激活和多种抑癌基因失活。如能在 早期检出基因突变信息，就可以获得细胞癌变 的信号，从而对肿瘤的早期诊断和预防带来积 极意义。
微生物学实验目录(PPT)
革兰氏阴性菌其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂 质含量高。
第十五页，共九十三页。
四、实验 步骤 (shíyàn)
1、涂片：将大肠杆菌和八叠球菌 分别涂片、枯燥 、固定
2、染色(rǎnsè)： 〔1〕初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟， 水洗
第二十八页，共九十三页。
实验 四 (shíyàn)
显微镜测微技术(jìshù)
第二十九页，共九十三页。
一、实验 目的 (shíyàn)
1〕学习用测微尺测量微生物细胞大小。 2〕掌握台镜测微尺和目镜测微尺的使用
方法。 (shǐyòng)
第三十页，共九十三页。
二、材料 与仪器 (cáiliào)
第四十八页，共九十三页。
1、啤酒酵母 2、显微镜、物镜(wùjìng)测微尺、目镜测微尺
第三十一页，共九十三页。
三、根本 原理 (gēnběn)
微生物细胞大小，是其形态特征重要 标志之一。每一种微生物在一定条件下， 有其相对固有的大小形态。它是分类鉴定 的依据之一。其大小测定可用测微尺测量 (cèliáng)。测微尺分为目镜测微尺和物镜测微 尺两局部。
第三页，共九十三页。
二、实验 器 (shíyàn) 材
❖显微镜
❖玻片标本(biāoběn) ❖酵母菌
❖载玻片、盖玻片、擦镜纸 ❖香柏油、二甲苯、
第四页，共九十三页。
三、实验 内容 (shíyàn)
1.光学 显微镜的 (guāngxué) 构造
✓ 机械系统局部
✓ 光学系统局部 ✓ 照明(zhàomíng)系统局部
二、实验器材(qìcái)
酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片， 无菌毛 细管，吸水纸
实验五微生物的分离、培养
学会使用微生物分离、培养的实验技术
选择适当的培养基
根据目标微生物的特性和生长需求，选择适宜的培 养基配方和制备方法。
无菌操作技术
在实验过程中，严格遵守无菌操作原则，防止外来 杂菌污染。
微生物接种与培养
掌握微生物的接种方法，包括划线法、涂布法、倾 注法等，并控制适当的培养温度和湿度。
了解微生物在自然界中的分布和作用
采集方法
根据微生物生长环境的不 同，采用适当的采集方法， 如挖掘、过滤、无菌操作 等。
样品保存
采集后的样品应立即进行 保存，以保持微生物的活 性，常用的保存方法有低 温、干燥、真空等。
微生物的分离
样品处理
将采集的样品进行预处理， 如破碎、研磨、离心等， 使微生物从样品中分离出 来。
培养基选择
根据分离的微生物种类和 实验目的，选择适宜的培 养基，以满足微生物生长 的需求。
实验设计不够严谨
本实验在对照设置方面存在不足，未设置空白对照组以排除非特异性污染的影响。在未来的实验中，应完善实验设计 ，增加对照组以增强实验说服力。
实验结果分析不全面
在实验结果分析中，我只关注了微生物的形态和生长情况，未对微生物的生理生化特性进行深入研究。 建议在后续实验中增加相关分析，以更全面地了解微生物的特性。
培养结果分析
根据观察结果，对微生物的生长情 况进行分析，得出相应的结论。
04
实验结果与分析
微生物的形态观察
总结词
通过显微镜观察，记录微生物的形态特征，如形状、大小、颜色、运动性等。
详细描述
在实验中，我们观察到了多种微生物的形态特征。例如，细菌呈球形、杆形或螺旋形，大小通常在0.5-5微米之 间；霉菌呈丝状或网状结构，有分枝和无分枝，大小因菌种而异；原生动物通常比细菌大，形态多样，如变形虫、 草履虫等。对未来实验的展望Fra bibliotek1 2
实验四-尿标本的微生物学检验
没有过多的生气，因为这只是一个很 普通的 杯子， 也不值 什么钱 。摔碎 了就摔 碎
了，自己刚好还可以换一个新的杯子 。
汪娟不好意思地拿出一个一模一样 的
杯子，她有些难为情地说，“对不起， 我今天 收拾的 时候摔 碎了你 的杯子 ，所以 我
买了一个一模一样的给你，我希望你 不要介 意。”
小凤也觉得不好意思，“这
定量培养
直接计数
BA、中国蓝或麦康凯平板（常规培养）
35 ℃ 18～24h
直接药敏试验
观察菌落形态、涂片染色镜检
血清学鉴定 生化鉴定 确定病原菌
药敏试验
发报告
• 检验程序：
革兰阴性杆菌
氧化酶（Oxi）
-
+
肠杆菌科细菌
非发酵菌
氧化酶阴性非发酵菌：不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌。 氧化酶阳性其他革兰阴性菌：巴斯德菌、气单胞菌、邻单胞菌
尿标本中细菌的计数，主要是根据尿中细菌的多少来判断是否感染。 一般认为，细菌计数：＜104/ml为污染
＞105/ml为感染 104~105/ml为可疑
目前认为由革兰氏阴性杆菌引起的菌尿，其菌数均可达到＞ 105/ml，而球菌所引起的菌尿，其菌数达到104/ml，即可作为尿 路感染的标准（因不同细菌繁殖速度快慢不一，在同一时间内 细菌繁殖数应该是：革兰氏阴性杆菌＞葡萄球菌＞肠球菌）。 为此，作菌尿计数时，必须与涂片染色结果结合，作出报告。
• 通常取晨起第一次尿送检。 • 由于治疗所用药物多数均通过尿液排泄，因此，无论
用何种方法采集尿液都宜在用药前进行。
• 尿液标本的采取和培养最大的问题是污染杂菌，故应 严格进行无菌操作
• 尿液标本中不得加防腐剂，否则会影响检出的阳性率。 • 尿液标本采集后要立即送检（常规2h内）或存放于
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二、结果观察：
１、菌落形态描述: 分别描述1#、2#、3#、4#、5#标本在SS、Mac上的
菌落形态。（可疑菌落与正常菌群菌落分别描述）
2、革兰染色： 3、触酶试验： 4、氧化酶试验： 5、细菌分纯：挑取生长于SS平板、MaC平板中的可疑
菌落3～5个分别接种3～5支KIA。37℃培养18—24小 时后，观察结果。
伤寒杆菌及其它沙门菌、志贺菌、弯曲菌、致病大肠埃希菌、霍 乱弧菌、副溶血弧菌 、气单胞菌、邻单胞菌、小肠结肠炎耶尔森 菌
白假丝酵母菌
病毒
轮状病毒
粪便标本的检验程序
粪便标本或肛拭子标本
直接涂片
革兰染色 抗酸染色
分离培养
（SS、MaC、TCBS、碱性 蛋白胨平板）
35℃18～24h
菌落形态、革兰染色
氧化酶试验
• 实验器材：
1、标本：已增菌模拟粪便标本1#、2#、3#、4#、5#。 2、培养基：SS、MaC、 KIA、蛋白胨水、枸橼酸盐斜面、尿素、苯丙
氨酸斜面、硝酸盐蛋白胨水、甘露醇半固体培养基。 3、试剂：革兰染液、氧化酶试剂、3%H2O2、靛基质试剂、甲基红试
剂、10%FeCl3、硝酸盐还原试剂甲液、硝酸盐还原试剂乙液。 4、诊断血清：
• 肛拭子法：不易获得粪便的患者或作厌氧菌培养时，常采用此法。将 无菌棉拭子用无菌生理盐水湿润后，插入肛门约4～5厘米（幼儿约 2～3厘米）处，轻轻旋转，擦取直肠表面粘液后取出，置无菌试管内 送检。除婴幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。
• 疑似痢疾患者应在发病初期、用药前采取标本；疑似伤寒患者应在发 病2～3周内采集粪便标本。
• 志贺菌属：若生化反应结果相符，则作玻片凝集反应： 1、做生理盐水对照, 看有无自凝。 2、用志贺氏菌属4种多价血清反应，若有凝集，再用单价
群诊断血清（福氏志贺菌多价诊断血清、宋内氏志贺菌 单价诊断血清）行凝集反应定群。 • 血清学试验结果判断： 血清凝集试验阳性：出现肉眼可见凝集颗粒 血清凝集试验阴性：液体呈乳状悬液
实验六
粪便标本的微生物学检验
• 实验目的： • 掌握粪便标本的采集与处理、常见病原菌
及一般微生物学检验程序。 • 掌握沙门氏菌和志贺氏菌的鉴定方法；熟
悉它们的生物学性状。
• 粪便标本的采集与处理：
• 自然排便采集法：自然排便后，挑取粪便2～3克于无菌的容器内送检。硒酸盐增菌液： • 本培养基中的0．4%亚硒酸钠可抑制革兰氏阳
性菌的生长，对革兰氏阴性菌也有毒性，但磷 酸钠有中和此毒性的作用，能使肠道致病菌迅 速繁殖。磷酸氢二钠与磷酸二氢钠有缓冲作用， 有利于肠道致病菌生长。
• SS平板：是专用志贺菌、沙门菌分离培养用的一种强选 择性培养基。
• 胆盐能抑制革兰氏阳性菌生长，煌绿抑制大肠杆菌的生长。促进 志贺菌、沙门菌生长（对胆盐和煌绿等染料有抵抗力）。
KIA、MIU及其他生化反应、 血清学凝集、药敏试验
报告结果
增菌培养（ GN增菌、 亚硒 酸盐增菌液、碱性蛋白胨水）
注：①GN增菌液、亚硒酸盐增菌液用于志贺菌、沙 门菌的增菌。
②直接涂片只适应于疑为霍乱、肠结核及伪膜 炎肠炎患者。
• GN增菌液：本培养基含有胆盐、枸橼酸盐对革兰氏 阳性菌有抑制作用，而对革兰氏阴性菌有增菌作用， 接种标本6小时内，大肠杆菌、变形杆菌及假单胞 菌在此培养基中生长迟缓，而志贺菌、沙门氏菌生 长较迅速。故常于接种粪便6～8小时，再自此增菌 液内接种至SS平板、MaC平板中。
取1#、2#、3#、4#、5#标本细菌分别接种于蔗糖半固 体发酵管、蛋白胨水、尿素、苯丙氨酸斜面、硝酸 盐蛋白胨水，37℃培养18—24小时后，观察结果。
五、血清学试验:
• 沙门菌属：如生化反应符合沙门氏菌属，则可按下述步骤进行血清学 诊断：
1、先用A—F群O多价血清作玻片凝集试验（做生理盐水对照, 看有无自凝） 2、A—F群O多价血清凝集则用O因子血清定群：
• 若疑为霍乱患者，标本应置碱性蛋白胨水中。 • 若疑有耶尔森菌或弯曲菌等，标本应置卡～布运送培养基送检。 • 粪便标本如不能立即送检，可将标本放入甘油盐水保存液中或保存于
冰箱内（勿超过2h）
粪便标本中常见的病原微生物
种类
病原菌
革兰阳性菌 革兰阴性菌
真菌
金黄色葡萄球、厌氧链球菌、肠球菌、结核分枝杆菌、产气荚膜 梭菌、艰难芽胞梭菌、蜡样芽胞杆菌
六、实验结果：
1、KIA 结果：
KIA 标本号
乳糖 / 葡萄糖
• 胆盐、枸橼酸钠及硫代硫酸钠在一定比例时发挥联合抑菌作用。 • 硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺菌、沙门菌的有害作用并中和煌绿、
中性红的毒性作用。 • 本培养基除抑制肠球菌、革兰氏阳性菌外，还可抑制大部分大肠
艾希氏菌、产气肠杆菌等革兰氏阴性菌，对志贺菌、沙门菌也有 轻度的抑制作用。
• 由于该培养基抑制杂菌的能力强，故可以增加粪便接种 量而获得较高的阳性分离率。
三、KIA结果观察
KIA 菌名
福氏志贺菌 宋内氏志贺菌 甲型副伤寒杆菌 乙型副伤寒杆菌
伤寒杆菌
乳糖 / 葡萄糖
A/K A/K A/K A/K A/K
H2S
— — —/ + + +/—
动力
— — + + +
气体
— — + + —
分别描述1#、2#、3#、4#、5#标本的KIA结果。
四、生化反应： 根据KIA的结果进一步做生化反应。从KIA斜面上挑
O抗原有许多组成成分，有的是一种菌所独有的，有的是几种菌共 有的。将具有相同菌体抗原的沙门氏菌归属于同一组（群）。故O因 子血清只能定群。 3、A—F群O多价血清不凝集，做Vi因子血清凝集。如果凝集，需用生理 盐水制成浓稠菌悬液后隔水煮沸15～30分钟，再做凝集试验。（新分 离的伤寒及丙型副伤寒常带想此抗原。） 4、按照确定的O群分别用H因子血清检查H抗原。
• 志贺菌属：志贺菌四种多价诊断血清、福氏志贺菌多价诊断血清、 宋内氏志贺菌单价诊断血清。
• 沙门菌属：A—F群多价O血清、O因子血清（O2、O4 O9）、H因子血 清（Ha Hb Hd）、Vi血清。
• 实验方法：
一、分离培养 用无菌方法将1#、2#、3#、4#、5#模拟粪
便标本分别划线接种于SS、Mac上，置35℃ 培养18～24小时。