常用饲用酶制剂检测方法介绍(精品课件)

特点：专一性不高，易受其他淀粉酶（主要是β-淀粉酶） 的干扰，因此，碘淀粉显色法应用较多。
精品 PPT 可修改
7
B. 蛋白酶
1. Folin法 原理：蛋白酶水解酪蛋白，产生酪氨酸等酚基氨 基酸，在碱性条件下，酚基氨基酸与Folin试剂反 应生产蓝色物质，于680nm比色测定光吸收值， 计算酶活力。
17
E. 植酸酶
1.国标法（钒—钼酸铵法）
原理：利用植酸酶水解植酸钠产生无机磷，再 加入酸性钼钒试剂终止反应，同时与无机磷反 应生成黄色钒钼磷络和物，在415nm比色测定 含磷量，再以标准植酸酶为参照物，间接计算 被测样品中植酸酶的含量。
精品 PPT 可修改
18
E. 植酸酶
2.硫酸亚铁—钼蓝法
原理：利用植酸酶可以水解植酸酶释放无机磷 的原理，通过加入盐酸使水解反应停止，然后 加入钼酸铵及FeSO47H2O的混合液使溶液显色， 在720nm波长下测定其吸收值，以标准酶为参照 物，间接计算被测样品中植酸酶的含量。
精品 PPT 可修改
12
1. 还原糖法
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单 糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖， 其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是 非还原糖。
精品 PPT 可修改
13
2. 粘度法
原理：酶作用于具粘性的非淀粉多糖底物，使 粘度下降，通过粘度计测定流速改变来计算酶 活力。该法灵敏度较高，可形象反映外切酶在 动物体内的作用方式，较适宜于饲用酶活性的 测定。
几种酶制剂检测方法介绍
精品 PPT 可修改
1
饲料酶制剂
现市场上常见的饲料酶制剂多为复合酶，其成 分木聚糖酶、α-淀粉酶、（酸性或中性）蛋白酶、 甘露聚糖酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶中的几种。
如何准确检测其中的一种酶制剂的活性？
精品 PPT 可修改
2
酶制剂检测原理
酶与一般催化剂最主要的区别之一
是它具有高度的专一性。
特点：测定а-淀粉酶的碘淀粉显色法是专一性较高、操作 较简便、准确性也较高的方法。
精品 PPT 可修改
6
A. а-淀粉酶
2. DNS显色法
原理：淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，将3， 5–二硝基水杨酸试剂还原生成3–氨基–5–硝基 水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深 浅与糖的浓度成正比，故可求出麦芽糖的含量。
4. VC—钼蓝法 原理：该方法是利用植酸酶可以水解植酸磷释放 无机磷的原理，通过加入三氯乙酸使反应停止， 然后加人钼酸铵与VC的混合液，使溶液显色，在 820nm波长下测定吸光度，再以标准磷溶液的吸 光度及磷溶液浓度对应的酶活单位建立直线回归 方程，最后以待测样品吸光度代人方程，计算出 酶活性。
吸光值（540nm）
0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0
0
木聚糖酶标准曲线07.5.10
y = 0.7339x - 0.0403 R2 = 1
0.2
0.4
0.6
0.8
木糖含量（mg/ml）
精品 PPT 可修改
线性
1
1.2
5
A. а-淀粉酶
1.碘淀粉显色法
利用淀粉遇碘变蓝的反应，检测出未被淀粉酶 分解的淀粉，运用分光光度计测定碘反应蓝值的 变化，然后查表读取酶活。
特点：灵敏度高，是还原糖法的100倍，测定所需样品 量微，无需特殊设备。
精品 PPT 可修改
15
4. 可溶性的染色底物
原理：人工合成的含色原基团的底物在酶的作 用下释放出有色物质，利用分光光度计比色测 定有色物质含量，计算酶活力。
特点：重复性好，操作简便，灵敏度较高 ，但合成底
物与天然底物有区别，对结果的准确性可能有影响 ，
特点：重复性差 ，费时、操作复杂、单位难以 换算成国际单位 。
精品 PPT 可修改
14
3. 琼脂平板扩散法
原理：将NSPS 底物与琼脂混融制成琼脂平板， 将酶样点于琼脂板上的小孔中，培养一定时间， 选用能与底物发生显色反应的显色剂染色，显 示出染色背景区和无色透明的水解区，水解区 直径与酶量的对数呈正相关，由水解区直径计 算酶活力。
精品 PPT 可修改
3
酶制剂检测原理
样品检测：
酶制剂检测应用酶对底物专一性的特点，采用 高纯度底物，专一检测某种酶制剂对底物的降 解，然后测定产物含量（分光光度计）。
标准曲线：
通过用其高纯度的产物制作标准曲线，通过分 光光度计的读数查出对应的产物含量，然后计 算酶活。
精品 PPT 可修改
4
酶制剂检测原理
并且底物昂贵。
精品 PPT 可修改
16
D. 脂肪酶
原理：脂肪酶在一定条件下 ，能使甘油三酯 水解成脂肪酸、甘油二酯和甘油，所释放的 脂肪酸，可用标准碱溶液进行中和滴定，用 pH或酚酞指示反应终点，根据消耗的碱量， 计算其酶活。
反应式为： RCOOH + NaOH → RCOONa + H2O
精品 PPT 可修改
该法的准确性及灵敏度都较高，在国内已得到 公认，是应用最广的方法，我国的部颁标准及各 大酶制剂生产企业都采用该法。
精品 PPT 可修改
8
B. 蛋白酶
2. 紫外分光光度法
原理：蛋白酶水解酪蛋白，产生酪氨酸等酚基氨 基酸，利用酪氨酸在280nm处有特征性吸收峰,测 定计算酶活。
特点：紫外线操作比Folin法简便，但灵敏度仅为Folin 法的1/10。
精品 PPT 可修改
19
E. 植酸酶
3.丙酮—磷钼酸铵法
原理：磷酸盐与过量的钼酸铵在酸性条件下混合 后，可慢慢生成黄色磷钼酸铵，加入丙酮后使黄 色物质提出来，在355nm波长处测吸光度，灵敏 度增加10倍。
特点：钒—钼酸铵法灵敏度最高，丙酮法稳定性最好， 抗干扰能力较强。
精品 PPT 可修改
20
E. 植酸酶
精品 PPT 可修改
9
C. 产还原糖酶制剂
现今采用的还原糖法通常是比色法，黄色 的3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在 碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3氨基-5-硝基水杨酸。显色反应与不同聚合度 同源寡糖还原性末端的含量成正比。
特点：易于操作，价格低廉，方便快速，重复 性好
精品 PPT 可修改
10
C. 产还原糖酶制剂
能产生还原糖的酶有：包括纤维素酶、半纤维 素酶和淀粉酶等。 半纤维素酶是分解半纤维素(包括各种降戊糖 与聚己糖)的一类酶的总称,主要包括β-葡聚 糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶和甘露聚糖酶。
精品 PPT 可修改
11
C. 产还原糖酶制剂
Baidu Nhomakorabea
1. 还原糖法 2. 粘度法 3. 琼脂平板扩散法 4. 可溶性的染色底物