常用饲用酶制剂检测方法介绍(精品课件)
生物药物分析与检验--酶分析法 ppt课件
ppt课件
23
酶促反应速度的测定方法
[P]
产
V0
物
浓
度
VX
反应初速度 Vo
提问：为什么反应速度会随 时间减小？ 答案：1.[S]降低；
2.酶受到产物抑制
提问：用哪一个速度来表示
该酶促反应的速度特征呢？
0
初 X产物浓度变化曲线时 间 T 反应
速度表示酶活力。
提问：仅用反应初速度大小对比酶活力行吗？
答案：不行，还与酶的加入量及条件有关。
1 U = 1 umol／min。
ppt课件
21
酶的比活力(specific activity)
比活力:每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示， 比活力=活力U／mg蛋白=总活力U/总蛋白mg 有时用每g酶制剂或每m1酶制剂含有多少个活力单位来表示(U／
g或U／ml)。 比活力大小的含义：可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。
ppt课件
10
共同点：原理和方法相同，以酶 的专一高效催化某化学反应为基 础，通过测定酶反应的速率或生 成物浓度来检测相应物质的含量。
ppt课件
11
第一节 酶活力测定法
一、基本概念 二、酶促反应的条件 三、酶活力的测定方法 四、测定过程中应注意的问题
ppt课件
12
一、基本概念
1.酶活力：指酶催化一定化学反应的能力。 2.酶活力的测定：是测定一个被酶所催化的化学反应的速度。 3.酶活力测定的目的：通过酶反应速度的测定，求得酶的浓度或含
2和指示酶反应偶联的定量法以脱氢酶为指示剂1磷酸葡萄糖6磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖变位酶16二磷酸葡萄糖6磷酸葡萄糖nadp6磷酸葡萄糖醛酸nadphh6磷酸葡萄糖脱氢酶d2磷酸甘油酸磷酸烯醇丙酮酸烯醇化酶磷酸烯醇丙酮酸adp丙酮酸激酶丙酮酸atp丙酮酸nadhh乳酸脱氢酶乳酸nad以脱氢酶以外的酶为指示剂d葡萄糖的定量测定葡萄糖葡萄糖醛酸h4氨基安替比林酚醌亚胶色素4h葡萄糖氧化酶过氧化物酶反应速度法是在一定条件下一定ph值和温度测定反应的初速度而反应的初速度与被测物质的浓度成正比关系因此可根据初速度计算被测物质的量也可利用标准品对照法计算被测物质的量
高一生物酶活力测定的一般原理和方法PPT精品课件
(2)该蛋白酶的提取工艺流程如下：
课题：探究酶保护剂的最适浓度和提取液的最适pH
单位时
提取液的pH
间内底
物的消 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.0.05 浓 度 0.06
【解析】 （1）审题结合图形和文字，在题目中已经提供了信息“食 品种类多，酸碱度范围广”，所以选择的食品添加剂应该有 较广的酸碱适应范围。从图形中，可以看出木瓜蛋白酶的适 应范围最广，所以可以选作食品添加剂。酶的活力，一般用 酶催化的底物消耗量或者产物生成量来表示。 （2）实验设计，应该明确实验目的：探究酶保护剂的最适 浓度和提取液的最适pH值，所以可以将酶保护剂的浓度和提 取液的pH值作为自变量，因变量为单位时间内底物的消耗量 。
10
20
30
40
50
组别
甲 乙 丙 甲 乙 丙 甲 乙 丙 甲 乙 丙 甲乙丙
清除血渍时间(min) 67 66 88 52 51 83 36 34 77 11 12 68 9 11 67
清除油渍时间(min) 93 78 95 87 63 91 82 46 85 75 27 77 69 8 68
（4）加酶洗衣粉中的酶是特殊的化学物质包裹的，遇水后 包裹层很快溶解，释放出来的酶迅速发挥催化作用。请说明 这是否运用了酶的固定化技术及其理由。
29 ．（16分）食品种类多，酸碱度范围广。生物兴趣小组拟 探究在食品生产应用范围较广的蛋白酶，查阅相关文献，得知：
(2)该蛋白酶的提取工艺流程如下：
“汉水丑生的生物同行”超级群大型公 益 活动：历年高考题PPT版制作。本课
件为公益作品，版权所有，不得以任 何形式用于商业目的。2012年1月15日 ，汉水丑生标记。
饲料添加剂酶制剂检测方法汇总
饲料酶活性测定方法上海欧耐施生物技术有限公司品控部编制目录附录A 木聚糖酶酶活力活力测定方法 (1)附录B β-葡聚糖酶活力测定方法 (5)附录C甘露聚糖酶酶活力测定方法 (9)附录D 纤维素酶酶活力测定方法 (13)附录E 果胶酶酶活力测定方法 (17)附录F α-淀粉酶酶活力测定方法 (20)附录G 蛋白酶酶活力测定方法 (30)附录H α-半乳糖苷酶酶活力测定方法 (35)附录I 植酸酶酶活力测定方法 (38)附录J 糖化酶酶活力测定方法 (42)附录K 真菌α淀粉酶酶活力测定方法 (44)附录L 脂肪酶酶活力测定方法 (46)附录M 木瓜蛋白酶酶活力测定方法 (49)常用标准溶液的配制和标定 (52)附录A木聚糖酶活力的测定方法（GB/T23874-2009）A1 应用范围本标准规定了用分光光度法测定饲料添加剂中木聚糖酶的活力。
本标准适用于饲料添加剂木聚糖酶产品，最低检出限为10.0U/g。
A2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注册日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注册日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
A3 木聚糖酶活力单位定义在37℃，pH 为5.5 的条件下，每分钟从浓度为5mg/mL 的木聚糖溶液中降解释放1umol 还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。
A4 测定原理木聚糖酶能将木聚糖降解成寡糖和单糖。
具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂发生显色反应。
反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。
因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中木聚糖酶的活力。
A5.试剂与溶液除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682 中规定的三级水。
饲用酶制剂(Enzyme)
水合非结晶纤维素 Cx1· Cx2 酶
纤维二糖酶 葡萄糖 纤维二糖+葡萄糖
Lactobacillus
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
4）果胶酶 果胶酶可裂解单糖之间的糖苷键，并脱去水分子， 分解包裹在植物表皮的果胶，促使植物组织的分
解，降低肠内容物的黏度。
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
2.蛋白酶 蛋白酶将蛋白质水解成为可被肠道消化吸收 的小分子物质。根据最适pH不同，将其分为酸 性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。由于动
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
1）淀粉酶 包括α和β—淀粉酶、糖化酶以及支 链淀粉酶和异淀粉酶。将淀粉水解为双糖、寡糖 和糊精，只能分解直链淀粉和支链淀粉的直链部 分。将淀粉也水解为双糖、寡和糊精。饲料中添 加多用β—淀粉酶，使用时应加少量的碳酸氢钠 或碳酸钠以中和胃酸，以利于淀粉酶的活化，防 止该酶在胃肠道失活。
几种饲料原料中的抗营养因子或难于消化的成分
江苏农林职业技术学院畜牧兽医系
一、酶的特性
（1）酶的作用对环境条件有特殊的要求，如狭窄的pH 值和温度范围； （2）酶的特异性或专一性； （3）酶的催化性。
底 物 酶
二、酶的种类
1、单一酶制剂
（1）非淀粉多糖酶(NSP酶)
半纤维素酶：（促进生长和提高饲料利用率）
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
2）半纤维素酶
包括木聚糖酶、甘露聚糖酶、阿拉伯聚糖酶和半乳聚糖
酶等，主要作用是将植物细胞中的半纤维素水解为多种 五碳糖，且降低半纤维素溶于水后的黏度。小麦和黑麦 等谷物中含有阿拉伯糖基木聚糖，可以吸收其自身重量 10倍的水，形成一种非常黏的液体。这种高黏性液体表 现对动物的影响就是减缓生长速度，降低饲料利用效率。
饲料检测方法 PPT
04 点滴试验和快速试验
点滴试验和快速试验
• 利用饲料成分的化学性质所进行的点滴试验，主要用作定 性分析，以快速判断饲料中是否存在某些特定的化学物质， 如淀粉、尿酶等，这些方法简便易行，在饲料厂和养殖场 均可使用。 • 淀粉检测： ‒ 原理：在少量饲料样品中加入碘—碘化钾溶液，若 有淀粉存在，则呈现深蓝色。 ‒ 例子：鱼粉、肉粉等动物性饲料中不应含淀粉，但 如果变蓝色，说明掺杂有淀粉或植物性成分。
• 尿素检测：
– 原理：尿素在尿素酶作用下生成氨，遇指示剂后变色。 – 操作：少量饲料样品加水搅拌后过滤，尿素溶于水， 滤出后加2～3滴甲基红指示剂，然后加2～3滴尿酶溶 液，若存在尿素则出现深红紫色，无尿素时呈现黄色。 – 例子：蛋白类原料厂商为了牟利，在蛋白饲料中掺入 尿素，在用粗蛋白检测时计入蛋白含量，但其为非蛋 白氮，属于粗蛋白检测方法漏洞，当年三聚氰胺也是 钻这个漏洞。
• 2、容重法：一定体积的饲料其质量也是一定的，这种一 定体积的质量称为体积质量，也称容重。
– 原理：容重法是根据一定体积的饲料原料都有一定的重 量，通过检测样品与标准样品容重的比较，可以初步判 断饲料原料的掺杂和含水量情况。 ‒ 方法：四分法取样倒入量筒至1000毫升刻度处，倒出称 重，重复3次，以 g/L计算取平均值即为该饲料的容重。
物理检测
• 4.水洗法
– 原理同比重法，比较常用。 – 不同的原料在水中的位置、状态不一样进行判断。 – 例子： » 玉米蛋白粉中掺入染色的其他物质：水洗掉色； » 豆粕中掺入泥土、沙土：水洗沉淀 » 麸皮、次粉中掺入滑石粉：水洗沉淀
• 5.硬度测定
– 借助专用仪器来测定颗粒的相对硬度。在测定时，需测定 大量颗粒，以获得有代表性的平均数据。
百度文库-酶制剂检测
酶制剂检测（011发布）酶制剂是指从生物中提取的具有酶特性的一类物质，主要作用是催化食品加工过程中各种化学反应，改进食品加工方法。
酶制剂是指从生物中提取的具有酶特性的一类物质，主要作用是催化食品加工过程中各种化学反应，改进食品加工方法。
中国已批准的有木瓜蛋白酶、α—淀粉酶制剂、精制果胶酶、β—葡萄糖酶等6种。
检测酶制剂产品质量常用的指标一般是酶活性，但也不是唯一的指标。
（0829）【酶制剂检测原理】酶制剂检测应用酶对底物专一性的特点，采用高纯度底物，专一检测某种酶制剂对底物的降解，然后测定产物含量（分光光度计）。
标准曲线：通过用其高纯度的产物制作标准曲线，通过分光光度计的读数查出对应的产物含量，然后计算酶活。
【酶制剂检测产品】饲用酶制剂、食品工业酶制剂具体产品：淀粉酶、β－葡聚糖酶、糖化酶、蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、脂肪酶、植酸酶、角蛋白酶、木聚糖酶等。
【酶制剂检测项目】主要检测项目：酶活性其他常规指标：水分、粒度卫生指标：菌落总数、大肠杆菌、沙门氏【酶制剂检测相关标准】GB25594-2010食品安全国家标准食品工业用酶制剂NY/T722-2003中华人民共和国农业行业标准饲料用酶制剂通则QB1805.2一93中华人民共和国轻工行业标准工业用糖化酶制剂GBT20370-2006生物催化剂酶制剂分类导则GB8275-2009食品添加剂α-淀粉酶制剂GB274-87食品添加剂固定化葡萄糖异构酶制剂GB8276-2006食品添加剂糖化酶制剂QB1502-92食品添加剂果胶酶制剂GB20713-2006食品添加剂a-乙酰乳酸脱羧酶制剂QB1806一1993洗涤剂用碱性蛋白酶制剂NY/T722-2003饲料用酶制剂通则QB1805.2一93工业用糖化酶制剂QB1805.3-93工业用蛋白酶制剂QB2525一2001食品添加剂α-葡萄糖转苷酶QB/T1804一1993工业酶制剂通用检验规则和标志、包装、运输、贮存QB2526一2001食品添加剂真菌α-淀粉酶QB2583-2003纤维素酶制剂QB/T2306一1997耐高温α一淀粉酶制剂DB33/T459—2003饲料添加剂饲料用复合酶制剂QB/T1803一1993工业酶制剂通用试验方法GB/T18634一2002饲用植酸酶活性的测定分光光度法GBT5522-2008粮油检验粮食、油料的过氧化氢酶活动度的测定GBT5523-2008粮食、油料的脂肪酶活动度的测定GBT5521-2008谷物及其制品中α-淀粉酶活性的测定比色法GBT21498－2008大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定GB-T8622-1988大豆制品中尿素酶活性测定方法GBT5009.186-2003乳酸菌饮料中脲酶的定性测定GBT5413.31-1997婴幼儿配方食品和乳粉脲酶的定性检验GBT5009.183-2003植物蛋白饮料中脲酶的定性测定GBT17811-2008动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定过滤法GB05009-171保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性测定GB/T5521-89谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定比色法GB/T9826-88小麦粉破损淀粉测定法α-淀粉酶法GB/T18932.16-2003蜂蜜中淀粉酶值的测定方法分光光度法GB/T22252-2008保健食品中辅酶Q10的测定NY/T911-2004饲料添加剂beta-葡聚糖酶活力的测定分光光度法NY/T912-2004饲料添加剂纤维素酶活力的测定分光光度法SB/T10317-1999蛋白酶活力测定法SN/T0800.3-1999进出口粮食、饲料粗蛋白质检验方法SN/T0800.4-1999进出口粮食、饲料尿素酶活性测定方法CNCA∕CTS0016-2008调味品、发酵制品生产企业要求WST66-1996全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法羟胺三氯化铁法WST67-1996全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法硫代乙酰胆碱-联硫代双硝基苯甲酸法【检测流程】科标生物检测中心检测流程：1.咨询---申请人提供产品资料图片及描述。
饲料用酶PPT课件
Alkaline phosphatase domain
Calcium binding
• 磷酸酶结构域，植酸酶结构域，碱性磷酸酶结构域，和钙离子结合域
• 完整的蛋白和单独的植酸酶结构域都能有效的水解植酸
• 完整蛋白的比活性高于单个植酸酶结构域。作用机制还需要进一步的
研究。
.
25
综合性质优良的植酸酶 Y4
❖ 目前b-葡聚糖酶、植酸酶、木聚糖酶等多个 酶种已得到了一定程度的应用
❖ 但与别的饲料添加剂相比, 饲料酶的应用还 处于婴儿期,. 全球只有不足30%饲料在应用5
原因
一、酶的性质不能满足要求
饲料用酶需同时具备以下优良性质:
❖ 热稳定性好而同时在常温下又具有高
活性
❖ 最适pH在酸性同时在整个酸性和中性
– 具有特殊性质的酶:
如低温酶、高温酶、高比活性酶、强酸性酶、强 碱性酶、抗蛋白酶降解的酶等
.
19
雪莲根部土壤低温脂肪酶基因片段进化树图谱
● HSL家族脂 肪酶作为参考 序列
进化树显示为五个独立分开的进化簇，说明冰川土壤中的脂肪
酶基因序列呈现出多样. 性的特点
20
Diversity of BPP gene fragments from grass carp digestive tracts
.
21
•F10
冰川土样中第10族木 聚糖酶多样性分析
•F37
.
22
•0.02
结构具有特点的植酸酶基因
• 类似于操纵子的Erwinia herbicola E3植酸酶 基因结构
• IMP基因和HAP基因，这两个基因共用一个启动子，IMP基因的终止密码 子TAA后，紧接着是HAP基因的起始密码子ATG， 在E. herbicola E5也存 在类似的结构
固态发酵饲用植酸酶酶活的快速测定法
固态发酵饲用植酸酶酶活的快速测定法
1. 引言
固态发酵饲用植酸酶酶活是非标准化和相互依存性的特性，广泛用于饲料行业，其功能受外界因素的影响，其不稳定性容易导致各种质量问题。
为了解决这一问题，本文提出一种快速、准确的固态发酵饲料植酸酶酶活测定方法。
2.材料与方法
2.1 试剂与仪器：蔗糖、脱水乳酸钠、无机盐混合物，热沉淀仪、加速器和水分热分析仪。
2.2 取样：采样样品的量必须在25-50g之间，通常在30g左右，应严格按程序要求获取样品。
2.3 准备实验室温度：将实验室温度调节到22-25℃，保持室内的温度稳定，保证测定的结果的可靠性和准确性。
2.4 酶活测定：将取样的样品置于热沉淀仪中，加入蔗糖和脱水乳酸钠，根据酶学原理，用加速器调节温度，在37℃~ 45℃温度下保持稳定温度进行搅拌20min，完成后改变用水温度冷却，把热水温度改变到4℃，再进行搅拌5min，然后用蒸馏水冲洗样品，取最后收集的液体放入无水盐混合物中，再用水分热分析仪测得样品的水分，由此算出酶活的数值。
3.结果
在经过上述步骤后，样品的固态发酵饲料植酸酶酶活结果为：82.4U/g，符合要求。
4.结论
通过本文提出的固态发酵饲料植酸酶酶活快速测定方法，操作简单，结果准确，可以有效解决固态发酵饲料行业中植酸酶酶活测定的问题。
饲用酶的应用PPT课件
放和消化。外源酶可破坏细胞壁的结构从而有利于被植物细胞
壁包裹的淀粉和蛋白质等细胞内容物的释放。
第7页/共12页
3 酶制剂的应用
• 1．4稻谷(大麦)型日粮
• 由于稻谷中20％成分为稻壳，其主要成分是木质 素，它与纤维素、半纤维素混杂在一起，作为粗纤 维主要成分难以消化，因此稻谷的粗纤维消化率特 别低。稻谷及其副产品(米糠)中含大量可溶性NSP， 主要为β-葡聚糖、木聚糖和纤维素。它们在肠道 中达到一定含量会提高内容物黏度，从而直接影响 养分的消化和吸收。外源添加相应酶一方面降解植 物细胞壁，另一方面可使可溶性β-葡聚糖部分水 解为低聚糖，从而降低内容物的黏度，提高养分与
第2页/共12页
2 饲用酶制剂的作用效果
• 2.2 改善日粮品质
• 某些饲料中含有的抗营养因子(如植酸、α-半乳糖苷等)， 植物细胞壁中含有的木聚糖、纤维素、β-葡聚糖、甘露聚糖、 果胶等难以消化的物质，不能被消化吸收，且干扰整个日粮其 他营养的消化吸收和利用，阻碍动物内源消化酶与细胞内营养 物质的作用，降低饲料中脂肪、淀粉和蛋白质营养价值，造成 动物对这些饲料的利用率下降、生长不良以及产生粘粪、污染 环境。
提高其它营养物质利用率。
第9页/共12页
4加酶预混料
• 5%预混料增加成本150元； • 4%预混料增加成本187.5元
第10页/共12页
敬请指正！
第11页/共12页
感谢您的观看！
第12页/共12页
•
②根据产品中所含酶的种类，饲用酶制剂一般可分为饲用单酶和饲用复合酶。
第1页/共12页
2 饲用酶制剂的作用效果
• 2.1 改善动物的生产性能
• 动物自身可以合成各种酶，但不同动物或不同生长时期，体 内各种酶的分泌能力也不同。例如单胃动物几乎不能产生降解 非淀粉多糖的酶，有针对性添加一些非淀粉多糖复合酶可以适 当消除非淀粉多糖的抗营养作用。仔猪断奶阶段，体内淀粉酶、 胃蛋白酶和胰蛋白酶含量较低，高温、寒冷、转群和疾病等应 激状态时，动物分泌酶的能力较弱、内源消化酶分泌减少，因 此在日粮中添加外源性消化酶，有助于改善消化道内环境，平 衡内源酶的分泌，补充内源酶的不足。
饲料酶制剂测定方法
饲料酶制剂测定方法核心提示：酶制剂活性测定是酶制剂应用效果评价的重要组成部分，也是饲料生产者评价酶制剂的最直接、最经济且有效的方式。
对于不同酶制剂产品，在其测定方法和原理上存在着较大差别。
因此，本文就饲料中常用的几种酶制剂评价方法及其最新研究进展进行简单综述，以便为广大畜牧生产者使用和鉴定酶制剂产品时参考。
木聚糖酶活性的测定目前普遍使用的分析木聚糖酶的方法，主要包括还原糖法、黏度法和以染色底物为基础的方法。
①还原糖和黏度分析法：还原糖分析法没有专一性，不能用来测定饲料中少量木聚糖酶的活性。
但Nelson/Somogyi还原糖法仍然不失为测定纯木聚糖酶制剂的标准方法。
黏度分析法的底物通常是小麦木聚糖(黏度为20cSt～30cSt)，也有用其他的，如来源于燕麦和桦木的木聚糖底物的。
黏度分析法主要用来分析内切酶的活性。
②可溶性的显色底物法：已有各种染色底物用来分析内切1,4-β-D-木聚糖酶。
这些底物包括染色的燕麦木聚糖、桦木木聚糖、山毛榉木聚糖和小麦木聚糖。
比较三种可溶性染色木聚糖底物的相对灵敏度，azo-小麦阿拉伯木聚糖的灵敏度是最高的。
③不可溶显色底物法：通过染色和交链制备不可溶的木聚糖，这些木聚糖包括燕麦木聚糖、桦木木聚糖和小麦阿拉伯木聚糖，用这些木聚糖制备水不溶的有色底物。
④酶联吸附剂分析法：用来分析饲料中β-葡聚糖酶和木聚糖酶活力的酶联吸附剂分析法(ELSA)。
这种分析法的灵敏度比前面描述的所有方法都高。
β-葡聚糖酶活性的测定可以作用于β-葡聚糖的酶很多，包括内切真菌纤维素酶和细菌β-葡聚糖酶。
①还原糖法：采用还原糖法和黏度法，以纯的β-葡聚糖(从大麦或燕麦中提取)为底物可以直接用来测定β-葡聚糖酶和纤维素酶。
通常是比色法(即Nel-son/Somogyi法)，显色反应与不同聚合度的同源寡糖的还原性末端的含量成比例，由此可以测量酶活。
②黏度分析法：Nelson/Somogyi还原糖法是测定较纯的β-葡聚糖酶活性的理想方法。
常见饲用酶制剂测定方法
７ 饲用酶制剂对奶牛生产的应用效果
禽的不同基础日粮中， 都有一定的应用效果， 畜禽生产性能
试验数据表明， 复合酶制剂可提高奶牛的生产性能， 其
都有一定的提高。但不同的研究报告报道有不同幅度的提
中产奶量提高 ４．５％～４．８％， 饲料报酬提高 ４．３％。
高， 这不仅和使用酶制剂的性能有关， 也和试验基础日粮的
立即 放冰水浴中冷却至室温， 以 空 白 管 调 零 ， 在 ７２１ 分 光 光
蒸馏水混和， 再徐徐倾入煮沸蒸馏水中 ， 继续煮沸 ２ ｍｉｎ， 冷 度计 ５４０ｎｍ 处比色， 以所得光密度（ＯＤ）值为纵坐 标 ， 以 对 应
却， 加蒸馏水定容至 １００ｍＬ， 使用时配制。 ．
的标准葡萄糖溶液的浓度为横坐标， 绘制标准曲线。
９ 饲用酶制剂对鱼类生产的应用效果
量及健康状况和试验时间条件下进行试验， 方能得到比较
试验数据表明， 酶制剂可提高鱼类的生产性能， 其中日
客观的对比结果。
３５ !!２００５ 年第 ２１ 卷第 ６ 期
河北畜牧兽医
饲料天地
２ α－ 淀粉酶活力的测定
蒸馏水溶解， 定容至 １００ｍＬ。
淀粉酶可分为 α－ 淀粉酶、β－ 淀粉酶等， 存 在 于 动 物 消
２．０、４．０、６．０、８．０、１０．０ｍＬ 置于 １００ｍＬ 容量瓶中 （同时做一空
标 准 稀 碘 液 ： 量 取 碘 原 液 １５ｍＬ， 加 碘 化 钾 ８ｇ， 定 容 至 白）， 用 蒸 馏 水 制 成 每 毫 升 分 别 含 有 葡 萄 糖 ２００、４００、６００、
５００ｍＬ。
８００、１０００μｇ 的标准液。取不同浓度的葡萄糖标准液和蒸馏
１ 蛋白酶活力的测定 １．１ 原理 由于蛋白质或水解产 物 中 含 有 酚 基 的 氨 基 酸（酪 氨 酸 、 色氨酸等）， 在碱性条件下可将福林试剂（磷钨酸与磷钼酸的 混合物）还原， 而呈蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混合物）。因此可 利用这一原理来测定蛋白酶活性， 即以酪蛋白为底物， 在一 定 ｐＨ 与温度下， 同酶液 反 应 经 一 定 时 间 后 ， 加 入 三 氯 乙 酸 以终止酶反应， 并使残余的酪蛋白沉淀而与水解产物分开。 过滤后， 取滤液 （即含有蛋白质水解产物的三氯乙酸液）用 Ｎａ２Ｃ０３ 碱 化 ， 再 加 入 福 林 试 剂 使 之 发 色 ， 比 色 测 定（蓝 色 反 应）光密度的变化。由于反应前后蓝 色 反 应 增 加 的 强 弱 ， 同 溶解在三氯乙酸中蛋白质水解产物的量成正比。因此， 就可 推测蛋白酶活性。该法的准确性及灵敏度都较高， 在国内已 得到公认， 是应用最广的方法。 １．２ 试剂制备 福 林 试 剂 制 备 ： 于 ２０００ｍＬ 磨 口 回 流 装 置 内 加 入 钨 酸 钠 （Ｎａ２ＷＯ４·２Ｈ２Ｏ）１００ｇ， 钼 酸 钠 （Ｎａ２Ｍｏ０４·２Ｈ２０）２５ｇ， 蒸 馏 水 ７００ｍＬ， ８５％的 磷 酸 ５０ｍＬ， 浓 盐 酸 １００ｍＬ， 文 火 回 流 １０ｈ， 加 入 硫 酸 锂（ｌｉ２ＳＯ４）１５０ｇ，蒸 馏 水 ５０ｍＬ， 混 匀 ， 在 冷 凝 器 中 加 入 几 滴 液 体 溴 ， 蒸 沸 １５ｍｉｎ， 以 驱 逐 残 溴 及 除 去 颜 色 ， 溶 液 应 呈黄色。若溶液有绿色， 需再加数滴液溴， 蒸沸除去， 冷却后 定 容 至 １０００ｍＬ， 然 后 用 细 菌 漏 斗 （Ｎｏ： ４～５）过 滤 ， 置 于 棕 色 瓶中保存， 此溶液使用时加 ２ 倍蒸馏水稀释。 ０．４ｍｏｌ ／Ｌ 的 三 氯 乙 酸 溶 液 ： 称 取 三 氯 乙 酸 ６５．４ｇ， 加 蒸 馏水定容至 １０００ｍＬ。 ０．８ｍｏｌ ／Ｌ 的 碳 酸 钠 溶 液 ： 称 取 无 水 碳 酸 钠 ８４．８ｇ， 加 蒸 馏水溶解， 定容至 １０００ｍＬ。
植酸酶的检测方法-饲用植酸酶活性的测定(精)
饲用植酸酶活性的测定分光光度法1范围本标准规定了以分光光度法测定饲用植酸酶活性的方法。
本标准适用于作饲料添加剂用的植酸酶产品，也适用于添加有植酸酶的配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料。
样品最低检出量为90U／kg。
2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准的最新版本的可能性。
GB／T 6682—1992 分析实验室用水规格和试验方法(neq ISO 3696：1987)3 植酸酶活性单位定义样品在植酸钠浓度为5.0 mmol／L、温度37℃、PH值5.00的条件下，每分钟从植酸钠中释放1μmol无机磷，即为一个植酸酶活性单位，以U表示。
4 方法原理植酸酶在一定温度和pH条件下，水解底物植酸钠，生成正磷酸和肌醇衍生物，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理会生成黄色的[(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3]复合物，在波长415nm 下进行比色测定。
5 试剂和溶液本标准中所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB／T 6682中规定的三级水。
清洗试验用容器不要用含磷清洗剂。
5.1 0.25mol／L 乙酸缓冲液(I)称取34.02g三水乙酸钠于1000mL容量瓶中，加入900mL水溶解，用冰醋酸调节pH至5.00±0.01，并用蒸馏水定容至1000mL，室温下存放2个月有效。
5.2 0.25mol／L乙酸缓冲液(Ⅱ)称取34.02g三水乙酸钠，0.5g TritonX-100,0.5g牛血清白蛋白（BSA）于1000mL容量瓶中，加入900mL水溶解，用冰醋酸调节pH至5.00±0.01，并用蒸馏水定容至1000mL，室温下存放2个月有效。
5.3 7.5mmol/L植酸钠溶液 c(C6H6O24P6Na12)为7.5mmol／L称取0.6929g肌醇六磷酸钠(C6H6O24P6Na12)于100mL。
配合饲料中饲用酶的加工稳定及检测方法
配合饲料中饲用酶的加工稳定及检测方法目前世界上很多国家，常向单胃动物的饲料中添加酶。
这明显是由于酶对单胃动物的生产性能有确定的改善作用，但要证明在商品饲料中有酶存在并非易事，对此，至今已进行了很多研究。
酶是蛋白质，它与全部其他的饲料蛋白质一样，对饲料加工处理特别敏感。
但饲料蛋白质是以氨基酸为单位而发挥作用的，所以无需维持构型，而饲料酶在饲料加工过程中要么发生不可逆的变性，要么不再发挥作用。
因此，有必要检测协作饲料中酶的活性。
本文的重点不是争论现有的酶活的测定方法，而是阐述饲料中所用酶的特性，包括不同来源酶对体外热稳定性之间的差异、因酶与饲料基质的互作而给分析带来的难题（及消退这种效应的方法）、饲料加工试验的有关数据以及将来的发展趋势。
大多数猪禽协作饲料均需要进行一定程度的加工处理。
有些饲料需要制成颗粒，其加工过程是先通过蒸汽，对饲料混合物进行调质，然后经压摸挤压成颗粒。
制粒可以提高饲料的养分浓度，改善饲料的贮存特性，并削减饲料中的微生物含量。
制粒温度一般为65~90摄氏度（Gibson，1995），这样高的温度可以破坏对热敏感的养分素（包括酶）。
在过去几年中，人们对饲料源病原体以及影响制粒质量的因素的关心，促使饲料生产商提高饲料加工的温度、时间和压力，并将饲料进行二次制粒或膨化（Pickford，1992）。
饲料加工处理程度的加强使酶的稳定性更加重要。
目前已采取几种途径来克服这难题，包括通过在饲料颗粒冷却后添加液态酶以避免一起加工处理对酶活性的影响。
尽管可以在制粒后加酶，但饲料酶一般还是在加工处理前添加到粉状饲料中。
通过使用疏水性包被保护层或选用耐热性更强的酶，可以降低热处理的对酶活的影响。
至今公开发表的有关饲料酶活性保存率的研究资料仍旧有限（Chesson，1993）。
然而，酶的稳定性对于饲料生产商来说极其重要，必需保证在酶制剂销售之前进行酶的试验室评定。
1993年以来，在报刊或会议论文集上已有多项研究成果报道。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
17
E. 植酸酶
1.国标法（钒—钼酸铵法）
原理：利用植酸酶水解植酸钠产生无机磷，再 加入酸性钼钒试剂终止反应，同时与无机磷反 应生成黄色钒钼磷络和物，在415nm比色测定 含磷量，再以标准植酸酶为参照物，间接计算 被测样品中植酸酶的含量。
精品 PPT 可修改
18
E. 植酸酶
2.硫酸亚铁—钼蓝法
原理：利用植酸酶可以水解植酸酶释放无机磷 的原理，通过加入盐酸使水解反应停止，然后 加入钼酸铵及FeSO47H2O的混合液使溶液显色， 在720nm波长下测定其吸收值，以标准酶为参照 物，间接计算被测样品中植酸酶的含量。
几种酶制剂检测方法介绍
精品 PPT 可修改
1
饲料酶制剂
现市场上常见的饲料酶制剂多为复合酶，其成 分木聚糖酶、α-淀粉酶、（酸性或中性）蛋白酶、 甘露聚糖酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶中的几种。
如何准确检测其中的一种酶制剂的活性？
精品 PPT 可修改
2
酶制剂检测原理
酶与一般催化剂最主要的区别之一
是它具有高度的专一性。
特点：重复性差 ，费时、操作复杂、单位难以 换算成国际单位 。
精品 PPT 可修改
14
3. 琼脂平板扩散法
原理：将NSPS 底物与琼脂混融制成琼脂平板， 将酶样点于琼脂板上的小孔中，培养一定时间， 选用能与底物发生显色反应的显色剂染色，显 示出染色背景区和无色透明的水解区，水解区 直径与酶量的对数呈正相关，由水解区直径计 算酶活力。
特点：测定а-淀粉酶的碘淀粉显色法是专一性较高、操作 较简便、准确性也较高的方法。
精品 PPT 可修改
6
A. а-淀粉酶
2. DNS显色法
原理：淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，将3， 5–二硝基水杨酸试剂还原生成3–氨基–5–硝基 水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深 浅与糖的浓度成正比，故可求出麦芽糖的含量。
精品 PPT 可修改
பைடு நூலகம்
19
E. 植酸酶
3.丙酮—磷钼酸铵法
原理：磷酸盐与过量的钼酸铵在酸性条件下混合 后，可慢慢生成黄色磷钼酸铵，加入丙酮后使黄 色物质提出来，在355nm波长处测吸光度，灵敏 度增加10倍。
特点：钒—钼酸铵法灵敏度最高，丙酮法稳定性最好， 抗干扰能力较强。
精品 PPT 可修改
20
E. 植酸酶
该法的准确性及灵敏度都较高，在国内已得到 公认，是应用最广的方法，我国的部颁标准及各 大酶制剂生产企业都采用该法。
精品 PPT 可修改
8
B. 蛋白酶
2. 紫外分光光度法
原理：蛋白酶水解酪蛋白，产生酪氨酸等酚基氨 基酸，利用酪氨酸在280nm处有特征性吸收峰,测 定计算酶活。
特点：紫外线操作比Folin法简便，但灵敏度仅为Folin 法的1/10。
精品 PPT 可修改
3
酶制剂检测原理
样品检测：
酶制剂检测应用酶对底物专一性的特点，采用 高纯度底物，专一检测某种酶制剂对底物的降 解，然后测定产物含量（分光光度计）。
标准曲线：
通过用其高纯度的产物制作标准曲线，通过分 光光度计的读数查出对应的产物含量，然后计 算酶活。
精品 PPT 可修改
4
酶制剂检测原理
精品 PPT 可修改
12
1. 还原糖法
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单 糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖， 其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是 非还原糖。
精品 PPT 可修改
13
2. 粘度法
原理：酶作用于具粘性的非淀粉多糖底物，使 粘度下降，通过粘度计测定流速改变来计算酶 活力。该法灵敏度较高，可形象反映外切酶在 动物体内的作用方式，较适宜于饲用酶活性的 测定。
并且底物昂贵。
精品 PPT 可修改
16
D. 脂肪酶
原理：脂肪酶在一定条件下 ，能使甘油三酯 水解成脂肪酸、甘油二酯和甘油，所释放的 脂肪酸，可用标准碱溶液进行中和滴定，用 pH或酚酞指示反应终点，根据消耗的碱量， 计算其酶活。
反应式为： RCOOH + NaOH → RCOONa + H2O
精品 PPT 可修改
10
C. 产还原糖酶制剂
能产生还原糖的酶有：包括纤维素酶、半纤维 素酶和淀粉酶等。 半纤维素酶是分解半纤维素(包括各种降戊糖 与聚己糖)的一类酶的总称,主要包括β-葡聚 糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶和甘露聚糖酶。
精品 PPT 可修改
11
C. 产还原糖酶制剂
1. 还原糖法 2. 粘度法 3. 琼脂平板扩散法 4. 可溶性的染色底物
吸光值（540nm）
0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0
0
木聚糖酶标准曲线07.5.10
y = 0.7339x - 0.0403 R2 = 1
0.2
0.4
0.6
0.8
木糖含量（mg/ml）
精品 PPT 可修改
线性
1
1.2
5
A. а-淀粉酶
1.碘淀粉显色法
利用淀粉遇碘变蓝的反应，检测出未被淀粉酶 分解的淀粉，运用分光光度计测定碘反应蓝值的 变化，然后查表读取酶活。
特点：灵敏度高，是还原糖法的100倍，测定所需样品 量微，无需特殊设备。
精品 PPT 可修改
15
4. 可溶性的染色底物
原理：人工合成的含色原基团的底物在酶的作 用下释放出有色物质，利用分光光度计比色测 定有色物质含量，计算酶活力。
特点：重复性好，操作简便，灵敏度较高 ，但合成底
物与天然底物有区别，对结果的准确性可能有影响 ，
4. VC—钼蓝法 原理：该方法是利用植酸酶可以水解植酸磷释放 无机磷的原理，通过加入三氯乙酸使反应停止， 然后加人钼酸铵与VC的混合液，使溶液显色，在 820nm波长下测定吸光度，再以标准磷溶液的吸 光度及磷溶液浓度对应的酶活单位建立直线回归 方程，最后以待测样品吸光度代人方程，计算出 酶活性。
精品 PPT 可修改
9
C. 产还原糖酶制剂
现今采用的还原糖法通常是比色法，黄色 的3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在 碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3氨基-5-硝基水杨酸。显色反应与不同聚合度 同源寡糖还原性末端的含量成正比。
特点：易于操作，价格低廉，方便快速，重复 性好
精品 PPT 可修改
特点：专一性不高，易受其他淀粉酶（主要是β-淀粉酶） 的干扰，因此，碘淀粉显色法应用较多。
精品 PPT 可修改
7
B. 蛋白酶
1. Folin法 原理：蛋白酶水解酪蛋白，产生酪氨酸等酚基氨 基酸，在碱性条件下，酚基氨基酸与Folin试剂反 应生产蓝色物质，于680nm比色测定光吸收值， 计算酶活力。