臭氧对4种细菌的灭活作用

［摘要］ 目的： 观察不同浓度臭氧在不同作用时间下对金黄色葡萄球菌、变形链球菌、表皮葡萄球菌和肺炎链球菌的灭
活作用。方法： 用碘滴定法测定打开臭氧发生器不同机组及不同时间时的臭氧浓度， 按载体定量杀菌试验， 将经臭氧
作用的载体 与 相 同 环 境 下 未 经 臭 氧 作 用 的 载 体 上 的 细 菌 洗 下 ， 各 取 洗 脱 液 ５０μｌ， 接 种 于 ＴＳＡ 平 板 并 置 厌 氧 箱（９０％
１．２．３ 载体定量杀菌试验 用微量加样器吸取每 种菌液 １０μｌ， 分别滴染于 ５ 片 １０ｍｍ×１０ｍｍ 大小已 高 温 、高 压 消 毒 的 玻 璃 片 上 ， ３７℃干 燥 ３０ｍｉｎ， 制 成 菌片备用。将 ３ 片相同菌种的菌片放入 １ｍ３ 安全玻 璃柜内， 分别打开臭氧发生器的 １ 组、２ 组、３ 组机 电， 各作用至 １５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、４５ｍｉｎ 后 ， 取 出 菌 片 ， 放 入含 ５ｍｌ ０．０３ｍｏｌ／Ｌ 磷酸盐缓冲液的无菌试管中， 在 漩涡混合器上振荡 １ｍｉｎ， 洗 脱 菌 片 上 的 细 菌 ， 各 取 洗脱液 ５０μｌ， 接种于 ＴＳＡ 平板。对照组为未经臭氧 处理的同批菌片， 相同条件下放置规定时间后， 用相 同方法洗下细菌， 接种于 ＴＳＡ 平板。将所有平板放 入 厌 氧 箱（９０％ Ｎ２， １０％ ＣＯ２， ３７℃）培 养 ２４～４８ｈ 后 ， 进行活菌菌落计数， 计算杀灭率， 实验重复 ３ 次。杀 灭率＝（对照组－ 试验组）／对照组×１００％。 １．３ 统计学处理
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上海口腔医学 ２００８ 年 ２ 月 第 １７ 卷 第 １ 期 Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１７ Ｎｏ．１ Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８
［ 文章编号］ １００６－７２４８（２００８）０１－００９２－０４
臭氧对 ４ 种细菌的灭活作用
汪饶饶 １ ， 尚光伟 １， 胡林凤 ２， 王小平 ２， 黄雯 ２ ， 李鸣宇 ３， 朱彩莲 ３ （ １．上海市第十人民医院 口腔科， 上海 ２０００７２； ２．同济大学口腔医院 口腔内科， 上海 ２０００７２； ３．上海交通大学医学院附属第九人民医院， 上海市口腔医学研究所， 上海 ２０００１１）
医院诊室及手术室消毒常规采用紫外线照射或
甲醛熏蒸。但紫外线辐射有局限性， 容易形成消毒死 角， 且其直接照射到人体， 易引起电光性眼炎和皮肤 红斑。而甲醛蒸汽法消毒时间长， 残余气体对人体有 害［１］。因此， 这 ２ 种消毒方法对设备多、气雾污染严
［收稿日期］ ２００７－ ０３－ １６； ［修回日期］ ２００７－ １１－ ２８ ［作者简介］ 汪饶饶（ １９５９－ ） ， 男， 在职博士研究生， 副主任医师 ［通讯作者］ 王小平， Ｔｅｌ：０２１－ ６６３１３７２０， Ｆａｘ：０２１－ ６６５２４０２５， Ｅ－ ｍａｉｌ：ｗｘｐ９９０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ ｃ ２００８ 年版权归《上海口腔医学》编辑部所有
［关键词］ 臭氧； 细菌； 灭菌作用
［中图分类号］ Ｒ７８０．２
［文献标识码］ Ａ
Ｔｈｅ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｏｚｏｎｅ ｏｎ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒ ｉａ ＷＡＮＧ Ｒａｏ－ ｒａｏ１， ＳＨＡＮＧ Ｇｕａｎｇ－ ｗｅｉ１，ＨＵ Ｌｉｎ － ｆｅｎｇ２ ， ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ ｐｉｎｇ２， ＨＵＡＮＧ Ｗｅｎ２ ， ＬＩ Ｍｉｎｇ－ ｙｕ３， ＺＨＵ Ｃａｉ－ ｌｉａｎ３． （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｎｔｉｓｔｒｙ，Ｔｈｅ １０ｔｈ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ．Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００７２；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｄｏｄｏｎｔｉｃｓ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ， Ｔｏｎｇｊｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００７２；３． Ｎｉｎｔｈ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏ Ｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ．Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００１１ ，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒ ａｃｔ］ ＰＵＲＰＯＳＥ： Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｏｚｏｎｅ ｏｎ ４ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ： Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ， Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ， Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ ａｎｄ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ． ＭＥＴＨＯＤＳ： Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｚｏｎｅ ｔｈａｔ ｗａｓ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ ｂｙ ｏｚｏｎｅ ｇｅｎｅｒａｔｏｒ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｉｏｄｉｎｅ ｔｉｔｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ ａｓｓａｙ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｖｅｈｉｃｌｅ， ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｎ ｔｈｅ ｏｚｏｎｉｚｅｄ ｖｅｈｉｃｌｅｓ ａｎｄ ｕｎｏｚｏｎｉｚｅｄ ｖｅｈｉｃｌｅｓ ｗａｓ ｗａｓｈｅｄ， ５０μｌ ｅｌｕａｎｔ ｗａｓ ｓｅｅｄｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ＴＳＡ ｐｌａｔｅｓ． Ｔｈｅ ＴＳＡ ｐｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｐｕｔ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ａｎａｅｒｏｂｉｏｔｉｃ ｉｎｃｕｂａｔｏｒ （９０％ Ｎ２， １０％ ＣＯ２， ３７℃）． Ａｆｔｅｒ ２４ ｔｏ ４８ ｈｏｕｒｓ， ｔｈｅ ＣＦＵ ｏｎ ｔｈｅ ｐｌａｔｅ ｗａｓ ｃｏｕｎｔｅｄ．Ｔｈｅ ｄａｔａ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｏｎｅ－ ｗａｙ ＡＮＯＶＡ ｗｉｔｈ ＳＡＳ ６．１２ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ． ＲＥＳＵＬＴＳ： Ｔｈｅ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｄｅｐｅｎｄｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｏｚｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔｉｍｅ． Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ４ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ２．７３ｍｇ／Ｌ ｏｚｏｎｅ ｆｏｒ ４５ ｍｉｎｕｔｅｓ， ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｌｉｖｅ． ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮＳ： Ｏｚｏｎｅ ｈａｓ ｏｂｖｉｏｕｓ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ４ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｚｏｎｅ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ］ Ｏｚｏｎｅ； Ｂａｃｔｅｒｉａ； Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊ Ｓｔｏｍａｔｏｌ，２００８，１７（１）：９２－９５．
１ 材料与方法
１．１ 材料 参照我科诊室空气采样分析结果， 选用诊室内
较多见的 ４ 种细菌为实验对象， 其中 ２ 种为国际标 准 菌 株 ： 金 黄 色 葡 萄 球 菌 （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ） ＡＴＣＣ２９５７３、 变 形 链 球 菌 （Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ） ＡＴＣＣ２５１７５， ２ 种 为 临 床 分 离 菌 株 ： 表 皮 葡 萄 球 菌 （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、 肺 炎 链 球 菌 （Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）。菌种均由上海交通大学 医学院附属第九人民医院口腔微生物实验室提供。 其 他 主 要 材 料 与 器 械 有 Ｔｒｙｐｔｏｎｅ （Ｏｘｏｉｄ 公 司 ）， Ｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎｅ（日本制药株式会社）， ＰＥＭ００８ 电解式臭 氧发生器（浙江温州康桥环保设备有限公司）， ＧＳ－ 罗 马数字三 Ｂ 大气采样器 （上海宏宇环保应用研究 所）， ＥＲ－ １８２Ａ 电子分析天平（日本）， ＯＬＹＭＰＵＳ 高倍 光学显微镜 （日本）、ＵＶ－ １６０１ 分光紫外光度计 （日 本）、ＷＭＺＫ－ １０ 厌氧培养箱 （浙江义乌）， ＸＷ－ ８０Ａ 漩 涡混合器（上海）， ＳＷ－ ＣＪ－ ＩＦＤ 型净化工作台（苏州）。 １．２ 方法 １．２．１ 臭氧浓度的测定 分别打开臭氧发生器的 不同机组， 并通入 １ｍ３ 大小的安全密封柜内， 至预定 时间， 用大气采样器以 １００ｍｌ／ｍｉｎ 的流速采集臭氧 ５ｍｉｎ， 通入 ２００ｇ／Ｌ 的碘化钾吸收液中， 加 ３ｍｏｌ／Ｌ 的 硫酸 ５ｍｌ， 混匀， 置暗处 １０ｍｉｎ。然后加 ５ｇ／Ｌ 淀粉指 示剂 ２ｍｌ， 用 ０．０１ｍｏｌ／Ｌ 硫代硫酸钠标准溶液滴定至 无色即为终点。重复测定 ３ 次， 取平均值根据以下公 式计算臭氧浓度： ＣＯ３＝ＡＮａ×Ｂ×２４０００／Ｖ０ （ｍｇ／Ｌ）。其 中， ＣＯ３—臭氧浓度（ ｍｇ／Ｌ） ； ＡＮａ—硫代硫酸钠标准溶 液用量 （ ｍｌ） ； Ｂ —硫代硫酸钠标准溶液浓度（ ｍｏｌ／Ｌ） ； Ｖ０ — ——臭氧化气体取样体积（ ｍｌ） ［２］。 １．２．２ 菌液的制备 将厌氧培养 １８ｈ （９０％ Ｎ２， １０％ ＣＯ２， ３７℃）保 存 之 细 菌 复 苏 ， 经 生 化 鉴 定 后 ， 接 种 于 乳酪消化大豆胨琼脂平板（ＴＳＡ）， 挑取琼脂表面的单 个菌落， 混悬于相应液体培养基（胰蛋白大豆肉汤） 中（１ 个 １ｍｍ 菌落／ｍｌ）， 培养 １８ ｈ 后， 将菌液充分震 荡摇匀， 用紫外分光光度仪调整其 ＯＤ 值（λ＝５４０ｎｍ） 为 ０．１３， 作为实验菌液备用。
所 得 数 据 采 用 ＳＡＳ ６．１２ 软 件 包 进 行 χ２ 检 验 ， Ｐ＜０．０５ 为有统计学意义。
２ 结果
２．１ 臭氧浓度
Biblioteka Baidu
根据碘滴定法， 测得臭氧浓度最低为 ０．２４ｍｇ／Ｌ，
最高可达 ２．７３ｍｇ／Ｌ， 见表 １。
表 １． 三组臭氧发生器的臭氧浓度 （ｍｇ／Ｌ）
Ｔａｂｌｅ １． Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒ ａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｚｏｎｅ
重、人员流动频繁的口腔科诊室消毒均不尽人意。臭 氧（ Ｏ３） 属强氧化性气体， 具有广谱杀灭微生物的作 用， 其流动性佳且终产物为氧气与活性氧， 无二次污 染， 将其用于口腔诊室消毒应优于紫外线与甲醛。目 前， 在发达国家， 臭氧已广泛用于水产养殖、食品加 工 、医 药 等 领 域［２］。 虽 然 国 内 外 也 有 许 多 关 于 臭 氧 抗 菌方面的报道， 且已有臭氧治疗机用于龋病的治疗， 但尚未见臭氧用于口腔诊室消毒的报道。本实验在
Ｎ２， １０％ ＣＯ２， ３７℃）培养 ２４～４８ｈ 后， 进行活菌菌落计数。所得数据采用 ＳＡＳ ６．１２ 软件包进行 χ２ 检验。结果： 臭氧浓度 越高、作用时间越长， 杀菌效果越好。臭氧浓度 ２．７３ｍｇ／Ｌ、作用 ４５ｍｉｎ 时， 对 ４ 种细菌的杀灭率达 １００％。结论： 臭氧对
４ 种细菌有良好的灭活作用， 且杀菌效果有随臭氧浓度增加而增强的趋势。
汪饶饶， 等． 臭氧对 ４ 种细菌的灭活作用 ＷＡＮＧ Ｒａｏ－ ｒａｏ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｏｚｏｎｅ ｏｎ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ
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口腔诊室空气采样分析的基础上， 选择诊室内较多 见的 ４ 种细菌为实验对象， 探讨不同浓度的臭氧对 ４ 种细菌的灭活效果及可用于口腔诊室消毒的臭氧 浓度范围与有效作用时间。
作用时间
１组
２组
３组
１５ｍｉｎ
０．２４
０．５７
０．９６
３０ｍｉｎ
０．３８
０．７１
１．６８
４５ｍｉｎ
０．７２
１．５６
２．７３
注： 温度为 ２５℃， 相对湿度为 ５０％～７０％
２．２ 载体定量杀菌试验
臭氧 对 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、变 形 链 球 菌 、表 皮 葡
萄球菌和肺炎链球菌均有明显的杀菌效果。当臭