生理实验报告3

实验三：坐骨神经——腓肠肌标本的制作

张博伦 131140046

一．实验目的：

1.了解动物实验：急性；慢性

2.掌握锌-铜弓的刺激原理，了解电刺激的极性法则

3.掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备方法

4.熟知剪刀的正确握法及其他器材的应用

5.了解可兴奋组织的静息电位/动作电位

6.了解任氏液的作用

二．实验原理：

1.蛙类的一些基本生命活动规律与温血动物相似，而维持其离体组织正常活动所需的理化条件比较简单，易于建立和控制。因此，在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观察兴奋与兴奋性、刺激与肌肉收缩等基本生命现象和过程。

2. 任氏液（Ringer's solution)也叫林格氏液，也称复方氯化钠。在溶液中除了含有氯化钠成分，还含钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯离子及乳酸根离子。这种溶液是一种比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时间、保持两栖类其他离体组织器官生理活性等。其浓度约为0.67～0.70%。哺乳动物的浓度是0.9%左右。

3.锌铜弓原理：

细胞的静息膜电位为外正内负，电刺激可改变可兴奋细胞的膜电位差。膜电位减小时，细胞去极化，细胞兴奋；膜电位增大时，细胞超极化，细胞兴奋性被抑制。

蘸有任氏液的锌铜弓接触活组织时，锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。而在Zn的里面则形成负离子。Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。当锌铜弓接触组织时，电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。

原电池：负极：Zn-2e- = Zn2+

正极：Cu2+ 2e-=Cu

4. 动物实验分成急性慢性两种，急性动物实验是短时间内对动物生理活动或对外界反应进行进行实验，实验通常是破坏性的、不可逆的，可能会造成实验动物的死亡；慢性动物实验，指在长时间内对动物生理参数和反应等的长期实验和观测。一般采取温和的，非致死性的实验方法。动物存活时间长。

5. 坐骨神经腓肠肌示意图如下：

三.动物与器材：

实验材料：蟾蜍

实验器材：手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、滴管、培养皿、玻璃分针锌铜弓、污物缸、粗棉线、任氏液

四.方法与步骤：

1. 复习双毁髓，处死蟾蜍：

取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。

2. 剪除躯干上部及内脏：在骶骼关节水平以上1～2cm处剪断脊柱，左手握住蟾蜍后肢，用拇指压住骶骨，使蟾蜍头与内脏自然下垂，右手持普通剪刀，沿脊柱两侧剪除一切内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、脊柱以及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经。剪除过程中注意勿损伤坐骨神经。

3.剥皮：左手握紧脊柱断端（注意不要握住或压迫神经），右手握住其上的皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢的皮肤。把标本放在盛有任氏液的培养皿中。将手及用过的剪刀、镊子等全部手术器械洗净，再进行下面步骤。如图所示：

4.分离两腿：用镊子夹住脊柱将标本提起，背面朝上，剪去向上突起的尾骨（注意勿损伤坐骨神经）。然后沿正中线用剪刀将脊柱和耻骨联合中央劈开两侧大腿，并完全分离，注意保护脊柱两侧灰白色的神经。将两条腿浸任氏液中。如图所示：

5. 游离坐骨神经和剪断股骨：认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位，用剪刀剪断梨状肌及其周围的结缔组织，左手提着神经上的细线，右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细心剥离，直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经放在下腿上，沿膝关节的周围将大腿的所有肌腱剪断，并用剪刀刮净股骨下段附着的肌肉，在股骨上三分之一处剪去上段股骨及所附的肌肉，这样制成的称为坐骨神经下腿标本。

6. 游离腓肠肌：在坐骨神经下腿标本的基础上，用剪刀将跟腱的下端剪断，在跟腱与肌肉交界处扎一条细线，左手提线，右手用剪刀游离腓肠肌，直到膝关节。最后用粗剪刀在膝关节下将小腿剪去，留下的即为坐骨神经腓肠肌标本。做好的标本用锌铜叉的两极轻轻接触坐骨神经，如腓肠肌立即收缩，表示标本的兴奋性良好，然后将标本放入任氏液中，待其兴奋性稳定后再进行实验。如图所示：

7. 检查标本兴奋性：用经任氏液湿润的锌铜弓轻轻接触一下坐骨神经，如腓肠肌发生迅速而明显的收缩，则表明标本的兴奋性良好。

五.实验结果：

六.实验结论：

用湿润的锌铜弓轻触坐骨神经时，可明显观察到腓肠肌的收缩。

七.思考与讨论：

1.实验注意事项：

分离神经时，一定要用玻璃分针，不能随便用刀、剪进行操作。

不能过分牵拉神经，以免造成损伤。

标本制备过程中应时刻用任氏液湿润标本。

避免用手指或金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分。

2.为什么要用玻璃分针代替手或金属器材？

人体或金属器材上有大量的静电荷，会对神经的静息电位造成去极化的影响，从而使神经不能再对刺激做出反应。

3.如何保持标本的机能正常？

金属器械不要碰及、损伤神经或腓肠肌，以及实验者不要触碰到肌肉；过程中要保持腓肠肌的湿润，常加任氏液；在第一次电刺激后，需要让肌肉休息一段时间，在进行下一次刺激。

4. 剪刀的正确握法？

如图所示：

八．参考文献：

1.《生理学》（第八版）朱大年、王庭槐人民卫生出版社

2.《脊椎动物比较解剖学》（第二版）杨安峰、程红、姚锦仙北京大学出版社

2. 部分图片来自网络