无创产前筛查

通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数 量，经过计数与比较： 正常胎儿 或者 21-三体胎儿
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无创产前基因检测流程
医 院
枫 林 龙 鼎 实 验 室
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无创产检的优势
早孕期筛查(检出率85%) 10-13.5周
中孕期筛查 (检出率81%) 15-20周 16-22周 羊水穿刺 （流产率0.5-1%） 12-24周 24-28周 脐带血取样 （流产率1-3%）
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样本储存与运输 1、全血样本在冰袋(4 ℃)条件下运输，且在4小时内 送达样本接收处，样本接收后要立即完成血浆分 离。 2、血浆样本在干冰（-20 ℃ ）条件下运输，并确保 样本送达时有干冰剩余，到达后及时存放于-80 ℃冰箱中，禁止将样本在室温下放置。 【注意事项】 1）泡沫箱的规格：壁厚6cm、外径长39cm、外径宽 32cm、外径高35cm。 2）干冰用量：10公斤/2-3天；15公斤/4-5天；根据 运送时间的长短，相应增加干冰用量。
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样本采集 抽取孕妇外周血5 mL，采用 EDTA 抗凝； 采血完毕后，轻微颠倒采血管4次，并及时将 采血管放置于4℃冰箱中，在4小时内进行血浆 分离工作。 【注意事项】 采血时孕妇无需空腹； 采血管为 5 mL EDTA 抗凝管。做7项检测需要 用10ml抗凝管； 颠倒混匀时动作不能太剧烈，防止溶血。
16世纪
7世纪
考古学家挖掘出 典型唐氏综合征 体征颅骨。 素描画中见到具 有唐氏综合征样 面容的儿童。
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染色体非整倍体疾病临床表现
• 21、18、13-三体综合征是人类最常见的三种染色 体疾病，患儿面容特殊，绝大多数为严重智力障 碍及器官畸形，对家庭和社会造成巨大危害和负 担。现代医学对胎儿染色体疾病尚无有效治疗方 法，最好的方法是在孕期通过产前筛查及诊断， 发现异常并及时采取相应措施
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传统筛查方式的缺陷
唐氏综合征胎儿 真阳性 （TSP）
筛查结果阳性 （SP）7,000
400 340 60
假阴性 （FSN）
产前筛查（ S ） 100,000 筛查结果阴性 （SN）93,000
非唐氏综合征胎儿 假阳性（FSP）
99,600 6,660
真阴性 （TSN）
重大出生缺陷无创产前筛查
内容提要
一 常见染色体疾病概述 二 染色体非整倍体病发病机理
三 传统产前筛查与诊断技术介绍
四 无创产前项目工作流程
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一、染色体非整倍体概述（唐氏综合征为例 ）
BRCA1
1959年 1866年
John Langdon D own 医生第一次 对唐氏综合征的典 型体征进行完整的 描述并发表。 Down’s syndrome. 法国遗传学家 (Jerome LeJeune) 发现唐氏综合征 是由人体的第21 号染色体的三体 变异造成的现象。
2、上述血浆 4 ℃ 16000转/分离心10 min，冰盒上将上清转入已编号的 2支2.0ml EP 管中，每个离心管转入600ul血浆。同时在每个2.0ml离心 管上标记样本编号、血浆体积、分离日期。 【注意事项】 1）严格核对样本编号、确保样本编号唯一； 2）开启离心管管盖时，不能碰到离心管内盖； 3）将分离好的血浆贴上对应的条码并用封口膜密封，密封结束后立即将血 浆放入-20 ℃或-80 ℃冰箱中，避免反复冻融。 【注意事项】 全血须保证在4小时内进行血浆分离； 分离后的血浆在-20 ℃冰箱中可保存3天，长期保存需存放于-80 ℃冰箱。
以21-三体为例：100 DNA单位 /毫升血浆。其中，95个单位来源于母亲， 5个单位来源于胎儿
母亲
Chr 21： 95×2=190
正常胎儿
Chr 21： 5×2=10
母亲
Chr 21： 95×2=190
21-三体胎儿
Chr 21： 5×3=15
母体外周血中 Chr 21=190+10=200
母体外周血中 Chr 21=190+15=205
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样本前处理
1、将采血管在4 ℃环境下 1600转/分离心10分钟，上清（血浆）分装到置 于冰盒上且已编号的2.0ml的 EP 管中。 【注意事项】 1）严格核对样本编号、确保编号唯一； 2）开启离心管时，不能碰到管内盖； 3）吸取血浆过程中不要吸到中间层的白细胞。
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母血浆DNA+高通量测序
母体和胎 儿ＤＮＡ 的混合物
on chromosomes:
1
2
3
4 5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
X Y
Unique reads (单一序列读 取 ）: no mismatch, one location
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—
100%
100%
100%
100%
100%
100%
100%
报告式样
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无创产前基因检测 （准确率>99%）
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适应症和禁忌症
适应症： 1、经B超确认的单胎、活胎孕妇 2、孕周在12周至24周之间 3、可同时检测18三体，13三体，45,X，47,XXY， 47,XYY，47,XXX等多种染色体非整倍体疾病 禁忌症： 1、双胎或多胎 2、孕妇本人是染色体非整倍体患者 3、孕妇接受过异体输血、移植手术、干细胞或免疫细胞 治疗
92,940
英国的统计显示，1996-2002年全国因羊水穿刺导致的抬儿流失数为 5619名
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无创产筛技术原理的提出
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胎儿DNA来源和特点
来源： 1 胎儿细胞通过胎盘渗透到母血中，被 母体免疫系统破坏，胎儿DNA残留下来； 2 胎儿细胞凋亡； 3 胎盘滋养层细胞的凋亡 基本特点： 1 含量有一定的变化规律。妊娠第4周开 始可检出胎儿游离DNA，随着孕周增加而 增加，存在个体差异，平均浓度。 2 分娩后短时间内消失，平均半衰期为 16.3min (4-30min)， 2h就无法检出。 再次妊娠不影响检测结果。 3 DNA片段较小，平均166bp左右。常规 技术很难检测
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无创产检的可信度研究
样本数 T21 T18 T13 XO XXY XXX XYY
样本总数
核型分析 假阳性 假阴性 检出率
26619
3476 — — —
272
191 1 0 100%
89
63 1 0 100%
15
10 0 0 100%
13
8 1 0 100%
7
6 0 0 1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ0%
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21三体核型分析图
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21三体形成原因
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21三体发病率与产妇年龄关系
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三、现有的产前筛查与诊断手段
产前筛查
母血清学筛查 颈项透明膜厚度筛查 风险计算
产前诊断
羊水穿刺 绒毛取样 脐静脉穿刺 侵入性诊断方式
5
4 0 0 100%
3
3 0 0 100%
假阳性率
阳性预测值 假阴性率
—
— -
0.03%
99.48% 0%
0.03%
98.44% 0%
0.00%
100% 0%
0.02%
88.89% 0%
0.00%
100% 0%
0.00%
100% 0%
0.00%
100% 0%
阴性预测值
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