吉姆萨染色鉴定细胞凋亡实验方法

吉姆萨检测细胞凋亡实验方案

1 材料及器具

吉姆萨染料（粉剂）、甘油、甲醇、KH2 PO4、Na2 HPO4、蒸馏水、封闭型棕色瓶

2 试剂配制

吉姆萨母液：吉姆萨染料粉剂0.75g

甘油50ml

甲醇50ml

将粉剂放于甘油内搅匀，放入60℃温箱24h，经常摇匀，取出待冷再加甲醇混匀，配成母液，封闭棕色瓶保存。

吉姆萨工作液：使用时以原液10ml加入pH为6.4-6.8的磷酸盐缓冲液100ml稀释成工作液。

磷酸盐缓冲液：A液Na2HPO4 0.946g，蒸馏水100ml

B液KH2PO4 0.907g，蒸馏水100ml

临用时取A液40ml，B液60ml混合，pH值约为6.64。

3 染色步骤

（1）常规脱蜡至水；

（2）蒸馏水洗；

（3）在37℃温箱中吉姆萨染色30min；

（4）蒸馏水洗2min；

（5）PBS分色适度；

（6）将切片从PBS中拿出，甩掉切片上的水分，放在空气中略干燥，以肉眼观察组织上的水分消失为度；

（7）入100%酒精中30s至1min；

（8）二甲苯透明5min；

（9）中性树胶封片。

4 预期结果

背景淡蓝色，核为深蓝色，凋亡细胞为深蓝色。

5 体会

在染色中第6步是关键，不经过此步骤直接入100%酒精脱水，脱色会很严重，无法控制，使染色失败；在第6步后入95%的酒精中脱水，脱色也非常快；若将切片从PBS中拿出，甩掉切片上的水分，放在空气中略干燥，以肉眼观察组织上的水分消失后再入100%酒精脱水，效果良好。因此，用吉姆萨染料染料检测细胞凋亡操作简便、色彩鲜艳、对比度好、细胞核和凋亡细胞着色清晰，能够长期保存、不褪色，为一种值得推广的方法。

参考文献：《吉姆萨染色法对大脑组织凋亡细胞的染色》-徐广有，2005年