吉姆萨染色鉴定细胞凋亡实验方法
原代贴壁细胞吉姆萨染色法
原代贴壁细胞吉姆萨染色法原代贴壁细胞吉姆萨染色法染液制备：1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油；2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合，研磨至无颗粒；3. 将剩余的甘油倒入研钵，于56℃保温2h；4. 加入33ml纯甲醇混匀，即为吉姆萨母液，将其保存于棕色试剂瓶内；5. 取9份pH6.80—7.38的Soreen缓冲液和1份吉姆萨母液混合即得染色液；贴壁细胞染色步骤：1. 去除培养器皿内的培养液，用平衡盐溶液反复漂洗单层培养物2次；2. 加入平衡盐溶液，再逐滴加入等体积甲醇，边加边混合，静置10mi n；3. 将50%甲醇-混合液丢弃，加入新鲜的甲醇液浸泡固定细胞10min，然后用甲醇漂洗细胞1次；4. 将瓶内细胞干燥后储存或直接染色；5. 按2ml/cm2的比例滴加吉姆萨染液，覆盖细胞层，染色2min；6. 移除染液，用自来水冲洗掉粉红色背景后，再用去离子水冲洗细胞；7. 用显微镜观察单层潮湿细胞。
若细胞已干，可重新使细胞潮湿后再观察；结果：细胞核被染成紫红色或紫蓝色，而细胞质则被染成浅红色；吉姆萨染色法注意事项：1. 染液宜现用现配，旧染液染色效果不佳。
染液保存时间不宜超过48 h；2. 吉姆萨对pH极敏感，因此，缓冲液pH要准确，否则染色效果不佳。
如用染色缸染色时，随染色时间的延长，在染液表面常形成一层氧化膜（发亮）易附着在玻片上形成污秽，且不易除掉。
因此在用染色缸染色，尤其用的不是现配者时，染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。
染色完毕，应把标本浸入水中漂洗染液；提供：5. 原代细胞总蛋白质抽提物；6. 原代细胞总RNA；7. 原代细胞总DNA。
吉姆萨染色方法及结果
1.材料
1g的姬姆色素染料加入66ml甘油，混匀，60度保温溶解两小时，再加入66ml甲醇混匀，即配成姬姆色素原液，此原液用前用PBS（6.8）稀释十倍左右就可以使用（此为姬姆萨工作液）。
工作液可保存一个月左右，Camon固定液（3体积乙醇+1体积冰乙酸）；
PBS缓冲液配制：在基因工程手册里，网上的不大准确！
2.方法
①涂片的制作与固定：用移液枪吸取10-20μL待检溶液滴在载玻片上,均匀涂布,室温下阴干后,用Camon固定液固定涂片10min。
②染色：置姬姆萨工作液30min。
③洗脱：染色完成后,涂片立即用ddH2O洗脱。
④显微镜观察：用甘油压片,指甲油封固。
在100×油镜下观察。
常见细胞凋亡检测的方法与注意事项
大家常把细胞凋亡和细胞坏死混淆，其实两者是不同的细胞死亡形式，大家可以在死亡细胞的形态、生化和分子指标上将二者区分开来，细胞凋亡检测的方法不少，这里就总结下几种常用的检测方法。
细胞凋亡检测更多详情，点击查看不可不知的细胞检测方法——MTT
一、细胞凋亡的形态学检测
根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。
参考文献Brown,D.G., Sun, X.M., and Cohen, G.M.(1993) Dexamethasone-induced apoptosis involves cleavage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation. J. Biol.Chem. 268, 3037-3039
线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM)等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
2贴壁培养的细胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。
3爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。
结果：
注意事项
1.整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。
2.操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测。
三、线粒体膜势能的检测
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告随着个人的素质不断提高，报告不再是罕见的东西，多数报告都是在事情做完或发生后撰写的。
你还在对写报告感到一筹莫展吗？下面是小编为大家收集的细胞生物学实验报告，仅供参考，欢迎大家阅读。
细胞生物学实验报告1一、实验目的：1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。
2.了解细胞凋亡的生物学意义3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法二、实验原理：1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。
2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。
它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。
3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。
三、实验步骤：细胞中过氧化物酶的显示1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。
5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。
7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100×）细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min4、PBS缓冲液洗2次5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液7、普通光学显微镜下观察。
细胞凋亡常见的检测方法
细胞凋亡常见的检测方法
细胞凋亡常见的检测方法包括：
1. 细胞形态观察：细胞凋亡时，细胞会出现形态改变，如细胞体积减小、细胞核变小、细胞膜起泡等，可以通过显微镜观察细胞形态的改变来判断细胞是否发生凋亡。
2. 核染色观察：通过核染色技术，如单染色或双染色，可使用碘化丙啶、DAPI等荧光染料或Giemsa染色等方法，观察细胞核的形态和染色情况，从而判断细胞是否发生凋亡。
3. DNA损伤分析：通过DNA断裂、破碎等损伤的检测方法，如凝胶电泳分析、单细胞凝胶电泳分析、TUNEL染色等，可以检测细胞DNA的完整性，判断细胞是否发生凋亡。
4. 细胞膜的磷脂外翻：通过荧光标记磷脂的外露，如荧光标记的Annexin V结合细胞膜上翻暴露的磷脂，可以评估细胞凋亡程度。
5. 细胞色素C的释放：细胞凋亡时，线粒体膜破裂导致细胞色素C的释放，可以通过免疫荧光染色或Western blot等方法检测细胞色素C的定位及含量，来判断细胞是否发生凋亡。
6. caspase酶活性检测：Caspase酶是细胞凋亡过程的关键执行酶，通过检测Caspase活性、测定Caspase相关蛋白的水解活性，如Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9等，可以判断细胞是否发生凋亡。
7. Annexin V/PI染色：通过Annexin V与细胞膜外露的磷脂结合，并使用胞内核酸染料PI进行双染色，可以实现对活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞的区分和定量。
细胞凋亡 染色种类
细胞凋亡染色种类
细胞凋亡染色有多种方法，包括以下几种常见的染色种类：
1. HE染色：这是一种常用的细胞凋亡染色方法，使用苏木素-伊红染料对细胞进行染色。
在光学显微镜下观察，凋亡细胞会呈现圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状的现象。
2. Giemsa染色：Giemsa染色也是一种常见的细胞凋亡染色方法。
正常细胞的核色泽均一，而凋亡细胞的染色质会浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状和凋亡小体等。
3. AO/PI双染色法：吖啶橙(AO)是一种荧光染料，能透过细胞膜使核DNA和RNA染色。
在荧光显微镜下观察，活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
碘化丙啶(PI)是一种DNA 结合性染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。
因此，通过AO/PI双染色法可以区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。
4. Hoechst染色：Hoechst染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。
在紫外光激发下，活细胞核呈均匀淡蓝色荧光，凋亡细胞则呈现亮蓝色，或核呈分叶状、边集的荧光。
5. TUNEL染色：这是一种检测细胞凋亡中DNA断裂的方法。
在细胞凋亡过程中，会激活DNA内切酶，导致DNA断裂。
TUNEL 染色可以标记这些断裂的DNA，从而检测细胞凋亡。
以上信息仅供参考，如需了解更多关于细胞凋亡染色的信息，建
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常用细胞凋亡检测方法
常用细胞凋亡检测方法更新日期：2009-03-23受关注度：324920 [ 哪个强 : 丁香园医学搜索引擎搜狗有道百度谷歌 ]∙上一篇：细胞冻存、解冻方法与细胞计数∙下一篇：没有了∙挑错∙推荐∙打印生物医学药学信息产业实验机构人物论坛, 分子生物学,基因芯片,细胞生物学,神经生物学,细胞,分子,基因,研究动态,生物产业,人才,招聘,求职,神经科学,生物学,功能基因组学,基础医学,功能蛋白组学,生物信息学,生命科学,生物技术,生物芯片,基因芯片,基因工一的形态学检测1 光学显微镜和倒置显微镜（1）未染色细胞：凋亡细胞的体积变小变形，细胞膜完整但出现发泡现象，晚期可见凋亡小体贴壁细胞出现皱缩变圆脱落（2）染色细胞：常用姬姆萨染色瑞氏染色等凋亡细胞的染色质浓缩边缘化，核膜裂解染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判的进展情况常用的DNA特异性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258)， DAPI三种种染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T 碱基区紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光Hoechst是与DNA特异结合的活性染料，储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用时用PBS稀释，终浓度为10ug/mlDAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色储存液用蒸馏水配成1mg/ml 的浓度，使用终浓度一般为10ug/ml结果评判：过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased），部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚边缘化；Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体图1：3 透射电子显微镜观察结果评判：凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象（cavitations）的空泡结构图2：；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚边缘化；的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体二磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法）磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）正常位于细胞膜的内侧，但在的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中图3：Annexin-V是一种分子量为35～36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合将Annexin-V进行荧光素（FITC PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测的发生碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来方法：1 悬浮细胞的染色：将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5～1×106）用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V（20ug/ml）10ul，室温避光30min，再加入PI（50ug/ml）5ul，避光反应5min后，加入400ul Binding Buffer，立即用FACScan进行流式细胞术定量检测（一般不超过1h），同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照2 贴壁培养的细胞染色：先用0.25%的胰消化，洗涤染色和分析同悬浮细胞3 爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察结果图4图5：注意事项：1 整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞2 操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测时主要的生化特征是其染色质发生浓缩，染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂，形成50～kbp长的DNA大片段，或180～200bp整数倍的寡核苷酸片段，在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（DNA ladder）细胞经处理后，采用常规方法分离提纯DNA，进行琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色，在凋亡细胞群中可观察到典型的DNA ladder如果细胞量很少，还可在分离提纯DNA后，用32P-ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移（TdT）使DNA标记，然后进行电泳和放射自显影，观察凋亡细胞中DNA ladder的形成1 大分子染色体DNA片段的测定的早期,染色体断裂成为50～kbp长的DNA大片段所有超过一定分子量大小的双链DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度相同线性DNA的双螺旋半径超过凝胶半径时，即达到分辨力的极限此时凝胶不再按分子量的大小来筛分DNA，DNA像通过弯管一样，以其一端指向电场一极而通过凝胶，这种迁移模式称之为"爬行"因此，早期产生的50～kbp长的DNA大片段不能用普通的琼脂糖凝胶电泳来分离通常采用脉冲电泳技术可圆满地解决这一问题这个方法是在凝胶上外加正交的交变脉冲电场每当电场方向改变后，大的DNA分子便滞流在爬行管中，直至新的电场轴向重新定向后，才能继续向前移动DNA分子量越大，这种重排所需要的时间就越长当DNA分子变换方向的时间小于电脉冲周期时，DNA 就可以按其分子量大小分开参考文献Brown,D.G., Sun, X.M., and Cohen, G.M.(1993) Dexamethasone-induced apoptosis involves cleavage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation. J. Biol.Chem. 268, 3037-30392 DNA Ladder 测定方法：收获细胞（1′107）沉淀？细胞裂解液？10rpm′5min，收集上清？1%SDS和RnaseA（5mg/ml）56°C，2h？蛋白K（2.5mg/ml）37°C，2h？1/10体积3M醋酸钠和2.5倍体积的冷无水乙醇沉淀DNA，4°C过夜？14000rpm′15min？最后将沉淀溶解在TE buffer中，加DNA Loading Buffer？1.2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色并照相结果：图6：参考文献 Herrmannm M, Lorenz HM, Voll R et al. A Rapid and simple method for the isolation of apoptotic DNA fragments. Nucleic Acid Res. 1994; 22:5506-55073 凋亡细胞DNA含量的流式细胞计分析方法：收集细胞？70%冷乙醇（in PBS）4°C固定过夜？PBS洗涤，1000rpm′10min？RNase A（0.5mg/ml）37°C消化30min？PI（50mg/ml）染色，室温避光15min？FACScan分析DNA亚二倍体的形成及细胞周期的变化结果：图8：4 ApoAlertTM LM- Ladder Assay (CLONTECH)优点：敏感度高，适合于检测少量样本，小部分凋亡细胞如临床活组织检测。
姬姆萨染色法过程
姬姆萨染色法过程
姬姆萨（Giemsa）染色法简称姬氏染色，是用天青色素、伊红、次甲蓝混合而成的姬姆萨染料对血液、疟原虫、立克次体、骨髓细胞、脊髓细胞等标本进行染色的方法。
姬姆萨染色是病理学以及疾病研究中常用的染色剂，染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同，但该法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而细胞质和中性颗粒则着色较差。
姬姆萨染液可将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
样本处理：组织样本块经10%中性福尔马林溶液固定后，制备成石蜡组织切片，然后进行脱蜡、水化处理；贴壁细胞样本，让其在盖玻片上爬行生长，然后使用甲醇在室温下固定；悬浮细胞样本，离心收集细胞，涂片后用甲醇室温下固定。
姬姆萨染色：滴加Giemsa染色工作液，37℃染色20~30分钟；蒸馏水轻轻洗去染液，在室温条件下充分干燥。
然后在二甲苯中浸泡5分钟，去除杂质，待载玻片透明后，用中性树胶封片。
结果观察：在普通光学显微镜下观察细胞形态。
细胞死亡染色方法
细胞死亡染色方法细胞死亡是细胞生命周期的一个重要过程，包括程序性细胞死亡（凋亡）和非程序性细胞死亡（坏死）。
为了研究细胞死亡的机制和过程，科学家们开发了各种细胞死亡染色方法，用于检测和识别死亡细胞。
本文将介绍几种常用的细胞死亡染色方法。
1. 基于细胞膜通透性的染色方法细胞膜通透性的改变是细胞死亡的一个重要特征。
当细胞死亡时，细胞膜的完整性受到破坏，导致细胞内部的某些物质溢出到细胞外。
常用的细胞膜通透性染色方法包括乙酸酸性溴化酶（Acidic BrdU TUNEL Assay）和乙酰化酯酶（Acetoxymethyl Ester）染色。
这些方法通过染色剂与细胞内物质的相互作用，使死亡细胞呈现出明显的颜色变化。
2. 基于DNA断裂的染色方法DNA断裂是细胞凋亡的一个关键步骤。
为了检测细胞的DNA断裂情况，科学家们开发了多种DNA染色方法。
其中最常用的是术后DNA损伤标记染色法（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling assay，TUNEL assay）。
TUNEL法利用术后DNA损伤修复酶（TdT）的能力，在DNA断裂的末端加上一段标记物（如生物素、荧光染料等），从而实现对DNA断裂的检测。
通过观察染色结果，可以判断细胞是否发生凋亡。
3. 基于细胞蛋白酶活性的染色方法细胞凋亡过程中，半胱氨酸蛋白酶（caspase）家族蛋白酶的活性显著增加。
因此，通过检测细胞内caspase活性的变化，可以间接判断细胞是否发生凋亡。
现有的细胞蛋白酶活性染色方法主要包括荧光标记底物法、酶联免疫吸附检测法和荧光共振能量转移法。
这些方法通过特定的染色剂与caspase活性产生的产物结合，使死亡细胞产生荧光信号或颜色变化。
4. 基于细胞膜电位的染色方法细胞凋亡时，细胞膜电位的改变是一个重要的特征。
通过检测细胞膜电位的变化，可以间接判断细胞是否发生凋亡。
吉姆萨染色
吉姆萨（Giemsa）染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成。
染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。
因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。
配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。
一般性操作技术血涂片制备；细胞染色；显微检查；血液病诊断；染色不良；瑞特（Wright）染色法；酸性染料；伊红；碱性染料；亚甲蓝；吸附作用；PH对细胞染色的影响；甲醇；吉姆（Giemsa）染色法春天要常用润肤剂，它含有松香油脂酸和丰富维生素a，常用可加快皮肤血液循环，剌激面部细胞分泌，有效改善皮肤生理环境，减少气候对皮肤的危害。
第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，非凡是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判定仪器结果的简易方法。
比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量，借以作为仪器结果分析后质控的参考。
但积压涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。
例如，血膜过厚细胞重叠缩小，血膜太薄白细胞多集中于边缘，细胞分布不匀；染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。
因皮制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。
血涂片制备方法及注重事项将在实习指导中具体介绍。
细胞增殖凋亡检验方法汇总
细胞增殖、凋亡-检测方法汇总1.直接计数法面单粗暴、傻瓜式的检查方法！利用计数板或计数仪得出细该数目•然后对数目逬行比较。
方法需要对不同时间原的细胞分别固定•而后在光疑下计数,可绘制出细胞生长曲线。
而具不足之处在于无法区分壇蓿细胞与非增殖抵胞，下适合样品奴星參和评估特定亚群的情况。
2「H・TdR渗入法OH腺龜碇核百(TdR )是DNA持有的滅基「也是DNA合成的必需物氐用同位素中标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体渗入DNA合成代谢过程,通过液体闪烁计数器可迴走细胞的放射性强虐，间接放映出细胞增殖情况。
该方法优点在于敏感性高”客观性强,盍每性好.但是爲要一走设备集件，也存在放时性核素污染问题。
3、Brdu/EdU检测法Brdu&EdU均是胸腺嚅睫的衍生物r均可代替胸腺嚅噪在DNA合成期掺入细胞中。
不同的是J Brdu检测法可利用B「du专性抗体和具他細胞标记物对细'进行双重染色,可判断増殖细胞的种类及増殖速度，不仅适用于体外实验也能用于活体实验。
这个方法最大的缺点需要变性DNA才能与抗体结合,破坏了DNA双链结构r导致染色弥散、准确性降低等问题。
EdU检测法则基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性r适用于细胞増殖、细胞标记示踪筈方IEI的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,®田胞内很容易就扩散,无需DNA变性。
rdU与EdU检测优缺点综合比较BrdU EdU 检测分子大很小检测方式免疫反应化学反应影响其他标记是否DNA变性需要不需要实验时间过夜 2.5小时检测灵敏度一般灵敏4、WITT检测法&CCK8检测法MTT检测法反映细胞的能臺代谢「是检测细胞増殖活力的一种简便准确方法°其原理是在活纟田胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解为蓝紫色的水不溶性的甲瓒(Formazan ),并沉积在细胞中(死细胞无此功能。
荧光,吉姆萨染色
PBS (无Ca++ 、 Mg++)，PH 7.2
4%福尔马林、PBS配 荧光显微镜
步骤 1.单层培养细胞，用PBS洗2次； 2. 4%福尔马林固定10分钟后；用PBS洗1次 3.以5~10ug/mI Hoechst33258染色5~10分钟 水冲洗 4.荧光显微镜观察。 结果 凋亡细胞核呈强亮的兰色荧光及明显核形态， 正常细胞仅呈弱荧光，死细胞不被Hoechst332 染色。
细胞胞核H胞
克隆形成率计数
Giemas染色法
适用细胞染色和染色体染色
用品：
原液的配置:
Giemsa 甘油 甲醇 0.25g 2 5ml 25ml
缓冲液的配置:Ⅰ 1/15mol KH2PO4 Ⅱ 1/15mol Na2HPO4 Ⅰ:Ⅱ=4:6 pH=6.9
染色液配置:1份原液+9份缓冲液
步骤：
1.单层培养细胞，PBS洗二次；
2.甲醇固定 10分钟;
3. 用滴管将配好的染色液布满整孔;
4.染10分钟，用自来水冲去染液；
5.显微镜计数，统计克隆形成率。
凋亡细胞的荧光标记形态观察
目的： 观察细胞核形态，判别凋亡细胞。 原理：DNA荧光染料Hoechst33258能透过完好细
胞膜进入核内，凋亡细胞染色质致密，常呈月牙 形斑块或碎裂，并可见凋亡小体。非凋亡细胞核 染色较均匀，荧光较淡，死亡细胞不染色。
用品：
培养肺癌细胞(95D)
荧光染料Hoechst33258
细胞生物学实验-细胞凋亡观察
色加深，或核染色质聚集于核膜一边，呈新月状；晚期凋亡细胞胞核碎裂成大小 不等的原形小体，并被细胞膜所包绕，即凋亡小体。 ⑤ AO（吖啶橙）和EB（溴化乙锭）双染色：AO可以透过细胞膜完整的细胞而嵌入 核DNA呈绿色，EB只能透过细胞膜破损的细胞而嵌入核DNA呈红色。显微镜下 观察，活细胞为荧光深浅不一的结构样特征，核染色质为绿色；凋亡细胞染色强， 亮度高，核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体 或均匀一致的圆状或固缩团状结构。 ⑥ 透射电镜观察：凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形， 核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”，同时可以观察到凋亡 小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬。
细胞凋亡检测
保留的细胞
不健康的细胞
细胞开 始收缩
细胞崩 溃分解 成碎片
不健康的细胞已被除去， 组织内附近的细胞进行 有丝分裂，合上缺口
细胞凋亡检测
细胞凋亡的诱导试剂：
名称 Actinomycin D
Aphidocolin A23187 Caffeine
Camptothecin Cycloheximide Dexamethasone
溶剂 甲醇 二甲亚砜 二甲亚砜 沸水 二甲亚砜
水 乙醇
水
二甲亚砜， 热水 水
二甲亚砜 二甲亚砜 磷酸盐缓冲液
甲醇
细胞凋亡检测
细胞凋亡的检测方法：
细胞凋亡的检测方法及实验原理
张荣201028010642037 昆明植物研究所一形态学检测1、光学显微镜和倒置显微镜观察法未染色细胞：凋亡细胞体积变小、变形，膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体。
贴壁细胞出现皱缩，变圆，脱落。
染色细胞：姬姆萨染色，瑞氏染色等。
凋亡细胞染色质浓缩，边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状，形成凋亡小体。
2、荧光显微镜检测法—荧光染料例如，碘化丙啶(PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
选用536nm激发光，细胞核呈红色荧光3、电子显微镜收集细胞，2.5%戊二醛4°C固定24h，1%四氧化锇后固定，丙酮梯度脱水，经包埋剂浸透后环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸铀和枸橼酸铅双重染色，透射电镜观察。
凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象的空泡结构。
Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体4、激光扫描共焦显微镜技术FITC-AnnexinV+PI双染，观察凋亡过程中细胞膜PS表面的变化，并区分正常细胞（An-PI-），早期凋亡细胞（An+PI-），晚期凋亡细胞及坏死细胞（An+PI+），细胞收集过程中出现的损伤细胞（An-PI+）二、细胞凋亡的生化及分子生物学检测1、DNA断裂检测法如使用琼脂糖凝胶电泳检测，细胞凋亡时，核染色质凝聚，染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂。
凋亡早期可形成50～300kbp的DNA大片段，晚期核酸内切酶在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180～200bp整数倍的寡核苷酸片段。
2、膜联蛋白V法磷脂酰丝氨酸（PS）位于正常细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜表面。
Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与PS高亲和力。
将Annexin-Ⅴ进行荧光素或生物素标记，以标记了的Annexin-Ⅴ作为探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
吉姆斯实验
吉姆萨染色实验对细胞的染色可以（1）让细胞着色便于观察；（2）对凋亡细胞的检测。
实验方法原理：吉姆萨染液由天青，伊红组成。
染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。
PH对细胞染色有一些影响。
细胞里各种成分均不蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境里正电荷增多，易和伊红结合，染色为偏红；在偏碱性环境里负电荷增多，易和美蓝或天青结合，染色偏蓝。
实验材料：原位杂交玻片试剂、试剂盒：吉姆萨染色液、磷酸钠缓冲液、乙醇、二甲苯仪器、耗材：染色盘、培养箱、滤纸实验步骤：1.将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。
（1）1个盘：pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液，所配的25倍稀释的吉姆萨染液。
（2）3个盘：水。
（3）脱水系列溶液：①3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇。
②2个盘：盛有100%乙醇。
③3个盘：盛有二甲苯。
2.在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s（依染色时间决定染色的强弱），将玻片在水中浸泡3次，每次2 min。
3.连续用乙醇脱水系列溶液处理，每盘中浸泡2 min，将玻片移至二甲苯盘中，毎次浸泡2 min，共3次。
4.在通风橱中，按如下操作压片固定：用一平头镊（拿在左手），从二甲苯中取出一块玻片，夹住磨面端置水平。
加4滴Permount 的于另一端（切片所处位置），左手拿一干净的盖玻片，很缓慢地放在载玻片上（在加压片固定介质和盖玻片前，勿使玻片变干，因微小气泡会造成人为假象）。
5.用3MM 滤纸，沿盖玻片边缘，小心吸去多余固片介质/二甲苯，并擦拭载玻片背面（勿擦拭盖玻片）。
6.将玻片平放于一硬纸盒盘上，置42℃温孵箱2天使之凝固。
7.以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳，染料及固片介质。
细胞凋亡(apoptosis)的研究方法
细胞凋亡(apoptosis)的研究方法Important notes：Morphological data so far are most reliable and convincing ev idence for apoptosis， especially with electromicroscopy Morphological analysis should be included together with other parametersDifferent methods may suit different cell typesThe time-course of apoptotic events are important for selection of the methodsFlow cytometry is the most useful and powerful in apoptosis r esearch一、形态学研究方法（Morphological methods）：1、普通显微镜：凋亡细胞变小、变形、细胞膜完整、发泡现象，晚期可见凋亡小体。
Giemsa 核染料：染色质浓缩、凋亡小体。
2、电子显微镜：细胞质浓缩、核变小、晚期核碎片成凋亡小体。
3、操作步骤（Morphological methods）：（1）普通显微镜：将培养有细胞的24孔培养板于倒置显微镜下观察，观察经过诱导、和未诱导组的细胞形态、大小和细胞凋亡小体，照相记录。
（2）电子显微镜：5x106 细胞，加25%戊二醛固定，再用1%哦酸固定，将细胞置于丙酮：包埋基（1 ：1）中2小时，切片，透射电镜观察。
可见细胞膜完整，核变小，染色质浓缩并结块/沿核膜内侧排列，晚期核裂解为碎片产生凋亡小体。
二、生物化学研究方法：1、原理：染色质核小体单位断裂 50~300kb，或180~200 bp整倍数片段（DNA ladder）。
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吉姆萨检测细胞凋亡实验方案
1 材料及器具
吉姆萨染料（粉剂）、甘油、甲醇、KH2 PO4、Na2 HPO4、蒸馏水、封闭型棕色瓶
2 试剂配制
吉姆萨母液：吉姆萨染料粉剂0.75g
甘油50ml
甲醇50ml
将粉剂放于甘油内搅匀，放入60℃温箱24h，经常摇匀，取出待冷再加甲醇混匀，配成母液，封闭棕色瓶保存。
吉姆萨工作液：使用时以原液10ml加入pH为6.4-6.8的磷酸盐缓冲液100ml稀释成工作液。
磷酸盐缓冲液：A液Na2HPO4 0.946g，蒸馏水100ml
B液KH2PO4 0.907g，蒸馏水100ml
临用时取A液40ml，B液60ml混合，pH值约为6.64。
3 染色步骤
（1）常规脱蜡至水；
（2）蒸馏水洗；
（3）在37℃温箱中吉姆萨染色30min；
（4）蒸馏水洗2min；
（5）PBS分色适度；
（6）将切片从PBS中拿出，甩掉切片上的水分，放在空气中略干燥，以肉眼观察组织上的水分消失为度；
（7）入100%酒精中30s至1min；
（8）二甲苯透明5min；
（9）中性树胶封片。
4 预期结果
背景淡蓝色，核为深蓝色，凋亡细胞为深蓝色。
5 体会
在染色中第6步是关键，不经过此步骤直接入100%酒精脱水，脱色会很严重，无法控制，使染色失败；在第6步后入95%的酒精中脱水，脱色也非常快；若将切片从PBS中拿出，甩掉切片上的水分，放在空气中略干燥，以肉眼观察组织上的水分消失后再入100%酒精脱水，效果良好。
因此，用吉姆萨染料染料检测细胞凋亡操作简便、色彩鲜艳、对比度好、细胞核和凋亡细胞着色清晰，能够长期保存、不褪色，为一种值得推广的方法。
参考文献：《吉姆萨染色法对大脑组织凋亡细胞的染色》-徐广有，2005年。