版中国药典微生物限度检查方法验证方案

人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案

下表用于记录修订/变更主要内容及历史。

目录

1. 概述

2. 验证目的和范围

3. 组织及职责

4. 验证进度计划表

5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认

6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认

7.验证项目和验证方法

7.1试验菌株

7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备

7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法

7.5控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法

8.偏差与漏项控制

9.验证报告会审

1. 概述

我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊，产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。通过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用。

人工牛黄甲硝唑胶囊处方中含有甲硝唑、人工牛黄以及常用辅料成分，文献资料介绍甲硝唑对细菌有抑菌特性，对霉菌和酵母菌无抑菌活性。甲硝唑在水中微溶，可以通过离心沉淀-薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响。本验证方案通过试验菌株的回收率测试，首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查；如常规倾注平皿法不适用，则进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查。

本验证方案根据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

2. 验证目的和范围

验证该产品的微生物限度检查方法的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。本验证方案采用3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊，进行微生物限度检查方法的验证。

3.组织及职责

3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准

验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。验证方案实施完成后，由QC组负责汇总微生物限度检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负

责人批准报告。

3.2验证方案的培训

验证方案在经质量负责人批准后，，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。

3.3验证方案实施过程中的变更和偏差

验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。

3.4 验证工作小组成员表

4. 验证进度计划表

本次微生物限度检查方法验证的计划安排时间是2015年12月至2016年1月。

5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认

5.1.主要检验仪器设备确认表

检查人/日期：复核人/日期：

5.2.验证所需文件的确认表

检查人/日期：复核人/日期：

6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认

6.1.试验菌种检查表

检查人/日期：复核人/日期：

6.2试验所需的培养基检查

检查人/日期：复核人/日期：

6.3.检验样品确认表

检查人/日期：复核人/日期：

7.验证项目和验证方法

7.1试验菌株

人工牛黄甲硝唑胶囊需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证所用的菌株为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；控制菌检查方法验证所用的菌株为大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌。试验菌株的传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

7.2 需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备

分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～

10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液备用。

接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3天，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，制成50～100cfu/ml的菌悬液备用。

接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面上，20～25℃培养5～7天，直到获得丰富的孢子。加入3～5ml含有0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸至无菌试管中，取1ml加含有0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，制成50～100cfu/m的孢子悬液备用。

菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃,在验证过的贮存期内使用。

验证时，对各试验菌的回收率逐一进行验证。

7.3. 需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.3.1.供试液的制备

取供试品10g，加0.9%无菌氯化钠溶液至100ml，振摇，制成1：10的供试液。

7.3.2.试验组

取1：10的供试液1ml和7.2项下制备的50～100cfu的试验菌，分别注入平皿中，立即倾注不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml混匀，每株试验菌株平行制备2个平皿。置30～35℃培养箱中培养3天（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌），或培养5天（白色念珠菌、黑曲霉），点计菌落数。