酶联免疫吸附(ELISA)试验的标准操作规程

酶联免疫吸附（ELISA）试验的标准操作规程（编号：002）

1.目的

该SOP是利用抗原抗体特异性结合的原理，将待检抗体/抗原和酶标抗原/抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原/抗体起反应。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，利用颜色反应放大反应效果从而定性或定量分析，从而使测定方法达到很高的敏感度。

2.适用范围

该SOP适用于测定抗原抗体的匹配程度，血清中的抗体滴度，利用已知抗体判定未知蛋白的生物学特性等。

3.主要仪器

酶标仪、洗板机、酶联条、微量移液器

4.试剂

0.05 M pH 9.6碳酸盐缓冲液、0.15 M pH 7.4 PBST、稀释液、封闭液、0.2M Na2HPO4、0.1 M 柠檬酸、0.1 M EDTA、底物反应液A、底物反应液B、终止液（2 M H2SO4）

具体的制备步骤见附件。

5.操作步骤

5.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）常规操作

5.1.1将重组蛋白用包被缓冲液按1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600稀释后，每孔加100μL，设两排平行孔和阴性对照孔，4℃过夜包被（12-18h）或37℃包被5h。

5.1.2 次日用封闭液 37℃封闭1h，PBST洗涤3次，每次2min。

5.1.3 加入100μL用稀释液1:1000稀释的一抗，37℃温育30min，再用PBST洗涤后，每次2min。

5.1.4 加入100μL 1:1000稀释的HRP标记的二抗兔抗马IgG，37℃温育15min，洗涤后分别加入ELISA显色A液和B液，各50μL，5min后再加入50μL终止液，最后测定其A450nm，以测定孔与阴性对照孔A450nm＞2.1判为阳性。

5.2 其他模式酶联免疫吸附试验（ELISA）步骤

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