新生牛血清检测要求
新生牛血清病毒检测细胞培养法
细胞培养法检测新生牛血清病毒1原理某些病毒在其敏感的宿主细胞内增殖时，可引起细胞病变，即出现细胞变圆、细胞破裂、细胞融合等现象。
细胞培养法的主要特点是：广泛的适用性、操作方法简单、成本较低并且该技术方法成熟。
主要缺点是：特异性差、敏感性较低、检测速度慢。
该方法首先使用无病毒血清对实验用Vero细胞进行培养增值，然后分别制备阴性供试品、阳性供试品以及待测试供试品。
将Vero细胞均匀分为至少3份，分别加入以上供试品。
然后再适宜的温度条件下培养，每日进行观察，最多观察21天并记录细胞病变情况。
2材料和方法2.1材料2.1.1病毒牛腹泻病毒；狂犬病毒；牛腺病毒、牛细小病毒、牛副流感病毒、呼肠孤病毒。
2.1.2细胞Vero细胞(非洲绿猴肾细胞系)：购自中国生物制品检定所2.1.3试剂无病毒污染的新生牛血清：阴性对照品使用；MEM培养基：细胞基础培养基；胰蛋白酶：消化细胞。
2.1.4仪器设备①专门的病毒实验室:生物安全柜(CBK一D201)操作，符合国家生物安全要求；②洁净工作台；③倒置显微镜；④冰箱；⑤离心机；⑥离心管、注射器、吸管。
2.1.5阳性病毒将BVDV等，六种病毒在Vero细胞上连续传代至病毒滴度为5.0lgCCID50/mL以上时进行合并，分为若干批，零下70℃冻存，作为阳性病毒对照液。
2.2方法2.2.1非血吸附病毒检查是指利用传统的细胞培养或利用其他的对不具有动物血细胞吸附性质的病毒进行检测方法的统称。
2.2.2细胞制备以细胞密度为2~3×105/mL的Vero细胞，接种到适宜的细胞培养瓶后置于37℃培养箱培养，每天镜下观察细胞的分裂增殖情况，并记录形成良好单层的时间(镜下观察细胞生长成片率达90%以上为良好单层)。
注意将制备的细胞及时进行编号和标注，以免造成混淆。
2.2.3供试品检测取良好单层细胞培养瓶，弃掉Vero细胞旧营养液，在方瓶中分别加入胰蛋白酶消化液0.8mL，待可见细胞面呈松散状态，弃掉胰蛋白酶消化液，方瓶中分别加入适量生长液将所有细胞都从方瓶壁上吹打下来，再轻轻吹打几次，使细胞尽量分散成单个状态。
新生牛血清中乙脑抗体的检测及其方法的建立
测定方法 。 具有灵敏度高 、 重复性好等优点 ， 可真实
反映牛血清 中抗体中和乙型脑炎病毒（ 简称乙脑病 毒） 的能力。对 ｌ ６个批号 的新生牛血清用该方法 进行了抗乙脑病毒抗体的测定 ， 并对其结果进行 了
分析 比较 。
Ｐ Ｕ法 ， 中国生物制品规程》ຫໍສະໝຸດ 进行。 Ｆ 按《 ¨ ６ 待检血清
控标准》 进行质控外， 还应进行乙脑抗体的检测。
关键词 ： 蚀斑减少 中和试验 ； 乙脑病毒抗体 ； 新生牛血清 中图分类号 ：３ ３ ３ Ｒ ７ ． １ 文献标 识码 ： Ａ 文章 编号 ： ０ —６ ３（０ ６ ０ ４ ４ －３ １ ５５ ７ 。２０ ） １） ３０ ０ ０
Ｐａ ｕ ｅ ｕ ｔ ｎｎ ｕｒｌ ａｉｎｔｓ（ ＲＮ ｌｑ ｅｒｄ ｃ ｏ ｅ ｔａ ｚｔ ｅｔ Ｐ Ｔ）ｉ ｄｔｃ ｏ ｆ ｎｉ ａ ａ ｅｅｅ ｃｐ ａｉｓａ ｔ ｏ ｉｓｉ ｅ ｂ ｒ ｏ ｉ ｉ ｏ ｎ ｅｅｔ ｎｏ ｔＪｐ ｎｓ ｎ ｅｈ ｌｉ ｎｉ ｄｅ ｎ ｗ ｏｎ ｂ ． ｉ ａ — ｔ ｂ ｎ
维普资讯
屋 ０ ６年第 ３ ０ ４卷第 １ 期
Ｐｏ ｃｏｉ ｍ ｕ ｏ Ｆｂ ２ ０ Ｖ １ ４Ｎ ． ｒｇｉ Ｍｉ ｂｏ Ｉ ｍ ｎｌ ｅ ． ０６． ０ ｎ ｒ ｌ ．３ ｏ １
新生牛血清中乙脑抗体的检测及其方法 的建立
王 静， 李裕惠， 栗克喜 （ 成都生物制品研 究所 ， 成都 ６ ０２ ） １０３
ｓ ｏ ｌ ｅ ｔｓｅ ｎ ｎ ｗｂ ｒ ｏ ｉｅ ｓ ｌ ｉ ． ｈ ｕ ｄ ｂ ｅ ｔ ｄ ｉ ｅ ｏ ｌ ｂ ｖｎ ｅ－ １ ｌ ｕ１
Ｋｅ ｒ ｓ ｌｑ ｅｒｄ ｃｉｎ ｎ ｕｒｌ ａｉｎｔｓ；Ａｎｉ ａ ａ ｅｅｅ ｃ ｐ ａｉｓａ ｔ ｏ ｉｓ ｙ ｗｏ ｄ ：Ｐａ ｕ ｅ ｕ ｔ ｅ ｔａｉ ｔｏ ｅｔ ｏ ｚ ｔ． ｐ ｎ ｓ ｎ ｅ ｈ ｌ ｉ ｎｉ ｄｅ ；Ｎｅ ｏｎ ｂｖｎ ｅｔ ｌ Ｊ ｔ ｂ ｗｂ ｒ ｏ ｉｅｓ ｒｎ ｌ
大肠杆菌噬菌检验操作SOP
1.目的规定新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测方法。
指导操作者按本程序进行新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测操作。
2.适用范围本程序包括大肠杆菌菌种培养、样品培养、点样、判定标准和增殖试验。
适用于新生牛血清中大肠杆菌噬菌体检定操作的全过程。
3.职责3.1．质量管理部：负责本程序的起草。
3.2．质量管理部QC：负责本程序的操作。
3.3. 总经理：负责本程序的批准。
4.定义无5.引用标准《中华人民共和国药典》四部 2015版6.材料及设备6.1 供试品及参考品/标准品6.1.1 供试品：新生牛血清。
记录批号。
6.1.2 参考品/标准品：大肠杆菌C3000菌种，记录批号。
6.2 化学药品及试剂6.2.1 普通肉汤培养基， 1-2支/批血清，记录批号、数量及效期。
6.2.2 阳性血清，1-2ml,记录批号、效期。
6.2.3 阴性血清，1-2ml,记录批号、效期。
6.2.4 营养琼脂培养基平皿，1-2个/批，记录批号、数量及效期。
6.3 设备资料整理6.3.1 生物安全柜。
6.3.2 振荡培养箱。
6.4 玻璃器皿及辅助用具/易耗品6.4.1 灭菌效期内的尖毛细吸管1-2支6.4.2 1ml吸管，4-6支/批供试品6.4.3 有效期内的一次性使用无菌注射器，2支/批供试品6.4.4 有效期内的一次性无菌滤器（0.45μm)，1个/批供试品6.4.5 操作服，1件/人6.4.6 无菌帽、无菌口罩和橡胶检查手套，1副/人6.4.7 白金耳1个6.4.8 酒精灯1个6.4.9 砂片1片6.4.10 点火枪一把或火机6.4.11 效期内75%酒精棉（见《75%酒精棉配制程序》）7.流程图无8.内容8.1准备8.1.1 尖毛细吸管﹑1ml吸管、操作服经蒸汽高压灭菌，记录高压设备运行流水号8.1.1.1 将试验所需物料放入物料缓冲间。
8.1.1.2 人员按无菌操作室的要求更衣进入操作室，参见《人员进出QC洁净区程序》。
8.2 检测程序8.2.1 大肠杆菌C3000菌种启封、传代。
血清在细胞培养中的作用和质量要求
天津市灏洋生物制品科技有限责任公司血清在细胞培养中的作用和质量要求现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。
细胞工程领域更离不开细胞培养技术，杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
细胞培养的发展，培养基的质量是关键，而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。
在动物血清中牛血清的应用又是最广泛的，所以牛血清的质量好坏直接影响生物制品的质量和安全性，保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
一、牛血清的主要成分牛血清是一种成分复杂的混合物，其大部分成分已为人所知，但还有一部分仍不清楚，而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。
牛血清主要成分有以下几类：1、蛋白质类除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外还有白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白（抑制胰蛋白酶的作用）、胎牛血清中含胎球蛋白（促进细胞附着）、转铁蛋白（能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用）、纤维粘连素（促进细胞附着生长）等；2、多肽类主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子，最主要的生长因子是血小板生长因子，还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，虽然在血清中含量很少，但对细胞的生长和分裂也起着重要作用；3、激素类激素对细胞的作用是多方面的。
包括：胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关；类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用：促生长激素：促进细胞增殖的效应；氢化可的松：血清中含有微量该成分，它可能具有促细胞贴附和增殖作用。
dfsservice解读《中国兽药典》三部
四、通则和附录
新增附录
v 半数保护量（PD50）测定法 v 病毒半数致死量、感染量（LD50、ELD50、ID50、
EID50、TCID50）测定法 v 生物制品生产和检验用新生牛血清质量标准 v 兽用液体疫苗用塑料瓶质量标准 v 禽网状内皮组织增生症病毒（REV）检测（IFA法）
四、通则和附录
五、主要修订内容、修订原因及 应注意的问题
v 5.将血清抗体效价的表述方式均统一为用比号 表示，如：4 log2改为1∶16等。
v 6.在液体疫苗的检查项中统一增加了【装量检 查】项。“【装量检查】 按附录53页进行检 验，应符合规定。”
v 7.将所有XX抗原、阴阳性血清的名称均统一为 “XX抗原、阳性血清和阴性血清”，并将其英 文名称和汉语拼音名称也做相应修改。
v （4）剩余水分测定法：
v
删除费休氏法，仅保留真空烘干法。
通则的修订情况
v 1.将兽用生物制品通则做了修订； v 2.将通则细化为5个规定。
附录的修订情况
v 1.将病毒半数致死、感染量（LD50、ELD50、ID50、 EID50、TCID50、PD50）的测定法：修订为2个方法 ：“病毒半数致死量、感染量（LD50、ELD50、ID50 、EID50、TCID50）测定法”和“半数保护量（ PD50）测定法”。
六、“凡例”和“通则”及应 注意的问题
凡例： v （1）不得使用上版标准或已公布废止的原标
准进行检验。 v （2）中文通用名必须与新版兽药典一致。 v （3）应根据要求增加【装量检查】项。 v （4）应制定内控标准，内控标准不得低于兽
药典标准。 v （5）室温统一为15－25℃。
六、“凡例”和“通则”及应 注意的问题
最新新生牛血清病毒检测血吸附法
血吸附法检测新生牛血清病毒1原理有些病毒在其敏感宿主细胞中增殖，并不引起细胞病变，但在细胞表层存在病毒蛋白质，用一定百分比的红细胞悬液覆盖细胞表面，置于不同温度条件下一定时间，显微镜下观察，即可出现红细胞被吸附的现象。
血吸附法的技术主要特点是:敏感性高、速度快、成本低。
主要缺点是:病毒特异性检查问题尚未解决，结果判定的客观性较差，是间接检查病毒存在的方法，技术程序也还比较陈旧。
该方法首先使用无病毒血清对实验用Vero细胞进行培养增值，然后分别制备阴性供试品、阳性供试品以及待测试供试品。
取两瓶细胞，分别加入供试品。
然后在适宜的条件下处理，然后观察实验结果。
2材料和方法2.1材料2.1.1病毒牛副流感病毒。
2.1.2细胞Vero细胞(非洲绿猴肾细胞系)：购自中国生物制品检定所；2.1.3试剂无病毒污染的新生牛血清：阴性对照品使用；MEM培养基：细胞基础培养基；0.85%生理盐水：洗脱血细胞；胰蛋白酶：消化细胞；鸡血；豚鼠血。
2.1.4仪器设备①专门的病毒实验室：生物安全柜(CBK一DZOI)操作，符合国家生物安全要求；②洁净工作台；③倒置显微镜；④冰箱；⑤离心机；⑥离心瓶、注射器、吸管。
2.1.5阳性病毒将牛副流感病毒在Vero细胞上连续传代至病毒滴度为5.0lgCCID50/ml以上时进行合并，分为若干批，零下70℃冻存，作为阳性病毒对照液。
2.2方法2.2.1细胞制备以细胞密度为2~3×105/mL的Vero细胞，接种到适宜的细胞培养瓶后置于37℃培养箱培养，每天镜下观察细胞的分裂增殖情况，并记录形成良好单层的时间(镜下观察细胞生长成片率达90%以上为良好单层)。
注意将制备的细胞及时进行编号和标注，以免造成混淆。
2.2.2红细胞悬液配制取体重300一500g豚鼠，心脏采血2一3mL放入内含3一5mL生理盐水的离心管中，盖栓、轻摇。
豚鼠血加入生理盐水洗三次，800一1000转/分钟离心10一15分钟，压积血球，备用。
生物活性测定法
生物活性测定法
重组人促红素体内生物学活性测定法 网织红细胞法) (网织红细胞法)
本法系依据人促红素(EPO)可刺激网织红 可刺激网织红 本法系依据人促红素 细胞生成的作用,给小鼠皮下注射EPO后, 细胞生成的作用,给小鼠皮下注射 后 其网织红细胞数量随 EPO注射剂量的增加 注射剂量的增加 而升高. 而升高.利用网织红细胞数对红细胞数的 比值变化,通过剂量-反应平行线法检测 比值变化,通过剂量 反应平行线法检测 EPO体内生物学活性. 体内生物学活性. 体内生物学活性
按标准品说明书, 标准品溶液的制备 按标准品说明书, 标准品复溶, 将EPO标准品复溶,用稀释液将 标准品复溶 用稀释液将EPO标准 标准 品稀释成高, 个剂量EPO标准溶 品稀释成高,中,低3个剂量 个剂量 标准溶 液. 供试品溶液的制备 用稀释液将供试 品稀释成高, 个剂量与EPO标准 品稀释成高,中,低3个剂量与 个剂量与 标准 溶液单位相近的供试品溶液. 溶液单位相近的供试品溶液.
然后弃去细胞培养板中的上清液, 然后弃去细胞培养板中的上清液,每孔 加染色液50ul 室温放置30分钟后, 50ul, 30分钟后 加染色液50ul,室温放置30分钟后,用 流水小心冲去染色液,并吸干残留水分, 流水小心冲去染色液,并吸干残留水分, 每孔加入脱色液100ul 室温放置3 100ul, 每孔加入脱色液100ul,室温放置3～5分 混匀后,用酶标仪以630nm 630nm为参比波 钟.混匀后,用酶标仪以630nm为参比波 在波长570nm处测定吸光度, 570nm处测定吸光度 长,在波长570nm处测定吸光度,记录测 定结果. 定结果. 试验数据采用计算机程序或四参数回归 计算法进行处理. 计算法进行处理.并按下式计算试验结 果:
生物活性测定法
按标准品说明书, 标准品溶液的制备 按标准品说明书, 标准品复溶, 将EPO标准品复溶,用稀释液将 标准品复溶 用稀释液将EPO标准 标准 品稀释成高, 个剂量EPO标准溶 品稀释成高,中,低3个剂量 个剂量 标准溶 液. 供试品溶液的制备 用稀释液将供试 品稀释成高, 个剂量与EPO标准 品稀释成高,中,低3个剂量与 个剂量与 标准 溶液单位相近的供试品溶液. 溶液单位相近的供试品溶液.
将配制完成的标准品溶液和供试品溶液 移入接种WISH细胞的培养板中,每孔加 移入接种WISH细胞的培养板中, WISH细胞的培养板中 100ul. 37℃, 入100ul.于37℃,5%二氧化碳条件下 培养18 24小时 18～ 小时. 培养18～24小时.弃去细胞培养板中的 上清液.将保存的水泡性口炎病毒(VSV (VSV, 上清液.将保存的水泡性口炎病毒(VSV, 70℃保存 用攻毒培养液稀释至100 保存) -70℃保存)用攻毒培养液稀释至100 每孔100ul 100ul. 37℃, CCID50,每孔100ul.于37℃,5%二氧 化碳培养24小时(镜检标准品溶液的50 24小时 化碳培养24小时(镜检标准品溶液的50 病变点在lIU/m1) lIU/m1). %病变点在lIU/m1).
重组人白介素重组人白介素-2生物学活性测定法 (CTLL- 细胞/MTT比色法) /MTT比色法 (CTLL-2细胞/MTT比色法)
本法系根据在不同白介素-2 (IL-2)的 本法系根据在不同白介素- (IL-2)的 浓度下,其细胞依赖株CTLL CTLL浓度下,其细胞依赖株CTLL-2细胞存活 率不同,以此检测IL 的生物学活性. IL率不同,以此检测IL-2的生物学活性.
试剂 RPMI1640培养液 1640培养 (1) RPMI1640培养液 取RPMI 1640培养 基粉末1 规格为1L) 1L), 基粉末1袋(规格为1L),加水溶解并稀释至 1000ml,加青霉素10 IU和链霉素 和链霉素10 IU, 1000ml,加青霉素105IU和链霉素105 IU, 再加碳酸氢钠2.1g,溶解后,混匀,除菌 再加碳酸氢钠2.1g,溶解后,混匀, 2.1g 过滤,4℃保存 保存. 过滤,4℃保存. 取新生牛血清(FBS) (2) 基础培养液 取新生牛血清(FBS) 10ml, 1640培养液90ml.4℃保存 培养液90ml 保存. 10ml,加 RPMl 1640培养液90ml.4℃保存. (3)完全培养液 取基础培养液100ml 100ml, (3)完全培养液 取基础培养液100ml, 加重组人自介素- 至终浓度400 800IU. 400～ 加重组人自介素-2至终浓度400～800IU. 4℃保存 保存. 4℃保存.
生物制品生产和检验用新生牛血清质量标准
生物制品生产和检验用新生牛血清质量标准用于生物制品生产的牛血清应为从出生14小时内未进食初乳的新生小牛采血分离血清，经除菌过滤制成。
主要用于细胞培养。
【性状】为淡黄色澄清稍黏稠的液体，无溶血或异物。
【无菌检验】按附录页进行检验，应无菌生长。
【支原体检验】按附录页进行检验，应无支原体生长。
【外源病毒检验】将被检血清按10%浓度加入MEM培养基中，接种48孔细胞培养板培养的VERO、BHK21、PK15、牛睾丸细胞单层，每种细胞接种8孔，同时设立牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（BVDV）对照各2孔，37℃培养5日，观察细胞病变，细胞均不得出现细胞病变。
培养至第5日时，对每种细胞的2孔及病毒对照孔，用PBS洗涤3次，每孔加入80%丙酮0.5ml，4℃以下固定30分钟，弃丙酮后自然干燥，每孔加入BVDV荧光抗体染色0.3ml，室温染色30分钟，弃荧光抗体并用PBS洗涤3次，荧光显微镜观察，被检血清孔不得出现荧光染色。
剩余的6个细胞孔,前3孔，每孔加入0.2%豚鼠、人O型、鸡红细胞等量混合液0.3 ml，2～8℃作用30分钟，另3孔同样加入红细胞后室温作用30分钟。
倒置显微镜观察，均不得出现红细胞吸附现象。
【特异性抗体测定】生产企业应根据血清的使用对象确定测定的抗体种类，测定方法采用中和抗体测定法，如有适用的的ELISA方法，也可采用。
如用于生产口蹄疫疫苗的血清不得含有口蹄疫病毒抗体，用于生产猪瘟疫苗的血清不得含有BVDV抗体等。
【细菌内毒素测定】用凝胶法或细菌内毒素检测仪测定，按照鲎试剂或内毒素检测仪操作程序测定，每毫升血清的内毒素含量应低于10 EU。
【细胞增殖试验】取生长良好的Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞，弃营养液，用无血清MEM配成每毫升30万～50万细胞悬液，计数细胞后，用无血清MEM在96孔细胞板上作1:200、1:400、1:800、1:1600稀释，每稀释度加8孔，每孔0.1ml，每孔再分别补加0.1ml含20%标准血清或20%被检血清MEM营养液，置5％CO2培养箱37℃培养至48小时，倒置显微镜下计数，取每孔克隆数均在30～50之间的稀释度的8个孔，求和计为总克隆数。
胰岛素测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求frrk
胰岛素测定试剂盒（化学发光免疫分析法）适用范围：用于体外定量测定人血清中胰岛素的浓度水平。
1.1规格96T。
1.2 组成2.1 外观a)包装标签应清晰、无磨损;b)试剂盒各组份应齐全、包装完好，液体无渗漏。
2.2 线性本试剂盒线性范围为：[1，320]μIU/mL。
线性相关系数r≥0.9900。
2.3空白限不大于1 μIU/mL。
2.4准确度用参考物质作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应在±10%范围内。
2.5重复性重复检测质控品Q1和 Q2各10次，其批内变异系数（CV）应不大于10%。
2.6批间差用三个批号的试剂盒检测质控品Q1和 Q2，三批号试剂盒之间的批间变异系数（CV）应不大于15%。
2.7质控品赋值有效性质控品测量值应在质控范围内。
2.8特异性2.8.1与人胰岛素原的交叉反应检测浓度为320μIU/mL的人胰岛素原, 交叉反应率应小于1%。
2.8.2与白蛋白的交叉反应检测浓度为320μIU/mL的白蛋白, 交叉反应率应小于1%。
2.8.3与C-肽的交叉反应检测浓度为320μIU/mL的C-肽, 交叉反应率应小于1%。
2.9稳定性规定产品2℃～8℃储存，有效期6个月。
取到效期后的样品检测准确度、空白限、线性、重复性，应符合2.2～2.5的要求。
2.10溯源性根据《GB/T 21415—2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供校准品的来源，赋值过程以及不确定度等内容，校准品溯源至中国食品药品检定研究院标准品（150519）。
药典干扰素测定方法
供试品溶液的制备 将供试品按标示量溶解后，用测定培养液稀释成每1ml约含1000IU。在96孔细胞培养板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个稀释度做2孔。在无菌条件下操作。
（2）完全培养液 量取新生牛血清10ml，加MEM或RPMI 1640培养液90ml。4℃保存。
（3）测定培养液 量取新生牛血清7ml，加MEM或RPMI 1640培养液93ml。4℃保存。
（4）攻毒培养液 量取新生牛血清3ml，加MEM或RPMI 1640培养液97ml。4℃保存。
（5）消化液 称取乙二胺四乙酸二钠0.2g、氯化钠8.0g，氯化钾0.2g、磷酸氢二钠1.152g、磷酸二氢钾0.2g，加水溶解并稀释至1000ml，经121℃、15分钟灭菌。
标准品溶液的制备 取重组人干扰素生物学活性测定国家标准品，按说明书复溶后，用测定培养液稀释至每1ml约含10000IU。在96孔细胞培养板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个稀释度做2孔。在无菌条件下操作。
供试品溶液的制备 将供试品按标示量溶解后，用测定培养液稀释成每1ml约含10000IU。在96孔细胞培养板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个稀释度做2孔。在无菌条件下操作。
测定法 使WISH细胞在培养基中贴壁生长。按（1：2）~（1：4）传代，每周2~3次，于完全培养液中生长。取培养的细胞弃去培养液，用PBS洗2次后消化和收集细胞，用完全培养液配制成每1ml含2.5×105~3.5×105个细胞的细胞悬液，接种于96孔细胞培养板中，每孔100μl，于37℃、5%二氧化碳条件下培养4~6小时；将配制完成的标准品溶液和供试品溶液移人接种WISH细胞的培养板中，每孔加入100μl，于37℃、5%二氧化碳条件下培养18~24小时；弃去细胞培养板中的上清液，将保存的水泡性口炎病毒（VSV，-70℃保存）用攻毒培养液稀释至约100CCID50，每孔100μl，于37℃、5%二氧化碳条件下培养24小时（镜检标准品溶液的50%病变点在1IU/ml）；然后弃去细胞培养板中的上清液，每孔加入染色液50μl，室温放置30分钟后，用流水小心冲去染色液，并吸干残留水分，每孔加入脱色液100μl，室温放置3~5分钟。混匀后，用酶标仪以630nm为参比波长，在波长570nm处测定吸光度，记录测定结果。
新生犊牛血清生产工艺验证方案
新生犊牛血清生产工艺验证方案文件类别：技术方案制定、批准正文1.目的为了确认新生牛血清生产工艺是否符合质量牛血清标准，特制定本方案以验证目前的生产工艺的可行性和稳定性。
2.范围和责任2.1.范围：适用于牛血清生产工艺的确认。
22 责任1. 2.1. 验证委员会：负责验证方案的审批；验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施；验证数据及结果的审核；负责验证报告的审批；222.生产管理部：负责本验证方案、报告的起草与实施，并做好相应的记录；在验证过程中对验证相关SoP进行确认。
223.质量管理部：负责验证过程中的组织协调，并对验证过程的偏差处理进行审核；224.质量管理部经理：批准验证文件。
3.人员确定确定参与本次验证的人员并要求所有参与人员签名确认。
5.设备/系统描述牛血清生产工艺分为初制血清的生产和精制血清的生产。
初制血清由基地采集出生14小时以下新生牛的血液，经大容量低温离心机300OrPm离心后、分离血清等步骤获得。
初制血清经检验合格后再通过混合、过滤除菌、分装、压塞、帖签包装而获得精制血清。
血清生产过程复杂，环节较多，厂房设施、空调系统、水系统均应符合生产工艺的需要。
过滤系统、高压灭菌设备达到灭菌标准。
所以本验证是在厂房设施验证、空调系统安装运行验证、工艺用水验证、设备验证、设备清洗验证、无菌生产验证已完成的基础上进行。
6.风险因素分析详见《纯化水系统部件关键性评估报告》7.参考文件7.12010版《中国药典7.22010版《药品生产质量管理规范》8.内容8.1文件检查确认8.1.1目的：确认文件资料已经完备，并且是当前最新版本。
8.1.2测试方法：检查最新版本的文件，现场不能出现旧文件。
8.1.3可接受标准：文件资料已经完备，并且是最终批准版本。
8.1.4记录：见附件18∙2培训检查确认8.2.1目的：确认参与验证的人员都经过此方案的培训8.2.2测试方法：检查培训记录8.2.3可接受标准：验证执行前，参与验证的人员已进行此方案的培训。
新生牛血清 药典标准
新生牛血清药典标准新生牛血清是一种重要的生物制品原料，广泛应用于医药、保健品、生物技术等领域。
为了保证新生牛血清的质量和安全性，制定了一系列的药典标准，以规范其生产和使用。
本文将对新生牛血清的药典标准进行介绍，希望能够对相关行业人士有所帮助。
首先，新生牛血清的药典标准主要包括对其生产过程、质量指标、储存条件等方面的规定。
在生产过程中，必须符合相关的生产规范和操作流程，确保产品的纯度和活性。
质量指标方面，主要包括对蛋白质含量、内毒素水平、微生物菌落等指标的要求，以及对可能存在的有害物质的限量标准。
此外，新生牛血清在储存和运输过程中，也有一系列的条件要求，以确保其在使用前的质量稳定性。
其次，新生牛血清的药典标准是根据国际上的相关规定和标准进行制定的，以确保其在国际贸易中的通用性。
这些标准的制定是经过了广泛的讨论和专家的审查，具有很高的权威性和科学性。
因此，符合药典标准的新生牛血清可以更好地满足国际市场的需求，提升产品的竞争力。
再者，新生牛血清的药典标准对于生产企业和使用单位都具有重要的指导意义。
对于生产企业来说，遵循药典标准可以帮助其建立健全的质量管理体系，提高产品质量，降低生产风险。
对于使用单位来说，选择符合药典标准的新生牛血清可以更好地保证实验结果的准确性和可重复性，降低实验风险，提高工作效率。
最后，新生牛血清的药典标准是一个动态的过程，随着科学技术的发展和行业的需求，会不断地进行修订和更新。
因此，生产企业和使用单位都需要密切关注最新的药典标准，及时调整生产和使用的相关流程，以确保产品的质量和安全性。
总之，新生牛血清的药典标准对于保证产品质量和安全性，提升产品竞争力，促进行业健康发展具有重要的意义。
希望本文对相关行业人士有所帮助，也希望大家能够共同遵守药典标准，共同推动新生牛血清行业的发展。
新生牛血清达标认证检查手册
生牛血清生产企业达标认证检查手册说明：本手册共分机构与人员、厂房与设施、设备、物料、卫生、验证、文件、生产治理、质量治理、产品销售与收回、投诉与处理、内部审核等十二 个局部，共 162 项，其中一般工程 62 项，重要工程〔＊〕87 项，拒绝工程〔△〕13 项。
√为增条款，⊙为原条款修改序号 条款 检 查 内 容1.机构与人员〔13 项，其中△1 项，＊7 项〕企业必需经工商登记注册，具有独立法人资格。
企业应建立生牛血清生产和质量治理机构，明确各级机构和人员的职责。
企业应配备肯定数量的与生牛血清生产相适应的具有相应的专业学问、生产阅历及工作力量，应能正确履行其职责的治理 人员和技术人员。
主管生产和质量治理的企业负责人应具有医药或相关专业大专以上学历，并具有 2 年以上牛血清或其它生物制药生产和质量治理阅历，或其它专业大专以上学历，并具有 5 年以上牛血清生产和质量治理实际工作阅历，应对 GMP 标准的实施和产品质量负责。
专职的生产治理和质量治理的部门负责人应具有医药或相关专业大专以上学历，并具有 2 年以上牛血清或其它生物制药生产和质量治理的实践阅历，有力量对生牛血清生产和质量治理中的实际问题做出正确的推断和处理。
生牛血清生产治理部门和质量治理部门负责人不得相互兼任。
企业应建有对各级员工进展GMP 标准和专业技术、岗位操作学问、安全学问等方面的培训制度、培训打算和培训档案。
企业负责人和各级治理人员应定期承受药品治理法律法规培训，并具有培训档案。
从事生牛血清生产操作的人员应通过相应的专业技术培训后上岗，具有根底理论学问和实际操作技能，并具有培训档案。
从事初制生牛血清生产的人员应承受有关生产特定操作的学问培训，并具有培训档案。
1⊙1.1 2* 1.2 3⊙ * 1.3 4⊙ △ 1.4 5⊙ * 1.5 6⊙ * 1.6 7√ * 1.7 8√ * 1.8 9⊙ 1.9 10√1.1011⊙12√13√* 1.111.121.13从事生牛血清质量检验的人员应通过相应专业技术培训后上岗，具有根底理论学问和实际操作技能，并具有培训档案。
小牛血清和胎牛血清的区别
小牛血清和胎牛血清的区别点击次数：730 发布时间：2011-4-28来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。
血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。
解冻血清时，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。
胎牛血清，小牛血清和新生牛血清三种之间的区别：这三种血清的成份，总体没有什么明显差别，只是有一些成分与其生存环境有关，如上述有人说的抗体很等少。
此外，因生长发育的需要，有些成分在小牛出生后会发生一些变化。
不过还没有搞清楚它与其它的血清之间的差别。
有一点可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白与小牛血清中的含量有差别。
最为重要的一点是，胎牛本身生活在一个洁净环境当中，其血清与外界隔绝，只要生产工艺科学规范，其质量肯定要比后两者好。
根据牛出生时间和血清采制分离方法分为：1、胎牛血清：八月龄胎牛心脏穿刺取血；2、新生牛血清：出生12-24小时新生牛静脉采血；又可细分为：a.高级新生牛血清：采血后静置自然析出的血清；b.标准新生牛血清：c.经离心分离的血清；d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清；3.小牛血清：出生三月龄小牛动脉采血分离血清；血清是血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。
细胞生长促进试验筛选新生牛血清
参考文献
[1] 马忠仁, 冯玉萍, 李倬, 等 反复冻融新生 牛血清对促细胞 生 长效应的影响 [ J] . 中国兽医科技, 2002, 32 ( 11) : 32~ 33.
[ 2] 中国生物制品标准化委员会. 中国生物制品 主要原辅材料质 控 标准 [ M ] . 北京: 化学工业出版社, 2000. 57.
[ 3] GIBCO. Product Catalogue and Reference Guide. 1995~ 1996: 5~ 3. [ 4] [ 英] R. J. 弗雷谢尼. 动物细胞培 养基本技 术指南 [ M] . 北
京: 科学出版社, 2006. 496~ 507. [5] 程宝鸾. 动 物细胞 培养技 术 [M ] . 广 州: 华南 理工大 学出 版
生长促进试验通 过减 少血 清的 浓度, 每 7d 传代 一次, 连续传代三次的方 式, 这样 可以 真实地 检测 出每批 血清 支 持细胞增殖的能力, 而不受预先使用的 残余培养 基的影响, 减少实验误差[ 6] 。本实 验结 果也说 明细 胞生长 促进 试验 比
细胞 倍增时间测定更能 客观 地反 映血清 促人 二倍体 细胞 的 生长能力, 是筛选适合 人二 倍体 细胞培 养的 血清的 较佳 方 法。
表 1 两种方法筛选新生牛血清结果
细胞倍增时间 血清编号
( h)1Βιβλιοθήκη 24 68相对生长率
(%) 91 4
细胞生长 细胞维持
ND
ND
2
22 15
92 3
ND
ND
3
23 77
94 5
ND
ND
4
20 36
97 6
+ ++ + + +
新生牛血清检测要求
附录ⅩIII D新生牛血清检测要求本品系从出生14小时内未进食的新生牛采血分离血清，经除菌过滤后制成。
牛血清生产过程中不得任意添加其他物质成分。
新生牛血清用于生产前应逐批进行以下检查，并应符合规定。
蛋白质含量应为3.5%～5.0%（附录ⅥB第一法）。
血红蛋白用氰化高铁法或其他适宜的方法测定。
应不高于0.02%。
大肠杆菌噬菌体采用噬斑法和增殖法检测。
不得有噬菌体污染。
摩尔渗透压（指标待定）无菌检查依法检查，应符合规定（附录ⅫA）。
支原体检查依法检查，应符合规定（附录ⅫB）。
细菌内毒素检查应不高于10EU/ml（附录ⅫE 凝胶限量试验）。
病毒检查1. 细胞培养法（1）非血吸附病毒检查将新生牛血清供试品分别接种到人源（如人二倍体细胞）、猴源（如Vero细胞）以及牛肾传代细胞三种细胞，采用的牛肾传代细胞系应证明无牛病毒的污染。
每种细胞至少接种6瓶，每瓶细胞悬液接种量不少于培养液总量的25%。
于36±1℃培养21天。
接种的每种细胞都应同时设立牛血清阴性对照和病毒阳性对照，（阴性对照用牛血清应证明无牛病毒污染）。
培养过程中可根据细胞生长情况更换细胞培养液，每次更换培养液前应观察（肉眼/显微镜）有无细胞病变出现。
培养到期后，阴性对照应无任何细胞病变出现，阳性对照应出现典型的细胞病变，试验成立。
供试品检查应不出现任何细胞病变为阴性，符合要求。
（2）血吸附病毒检查将上述接种供试品的每种细胞取2瓶进行血吸附病毒检查。
用0.2%~0.5%鸡和豚鼠红细胞混合悬液覆盖于细胞表面，置2~8℃分钟，然后置20~25℃30分钟，分别进行镜检，观察红细胞吸附情况，供试品检查结果均应为阴性。
试验同时应设立血吸附阳性对照。
2. 免疫荧光抗体检查法采用直接或间接免疫荧光抗体检查法，至少应对牛腹泻病毒，牛腺病毒、牛细小病毒、呼肠孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒进行检查，结果均应为阴性。
支持细胞增殖检查用Sp2/0 -Ag14或适宜的非贴壁传代细胞进行。
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》第四部(1)
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》的内容（以下红色标记的内容更需要关注）序号编码目录10100 制剂通则2 0101 片剂3 0102 注射剂4 0103 胶囊剂5 0104 颗粒剂6 0105 眼用制剂7 0106 鼻用制剂8 0107 栓剂9 0108 丸剂10 0109 软膏剂乳膏剂11 0110 糊剂12 0111 吸入制剂13 0112 喷雾剂14 0113 气雾剂15 0114 凝胶剂16 0115 散剂17 0116 糖浆剂18 0117 搽剂19 0118 涂剂20 0119 涂膜剂21 0120 酊剂22 0121 贴剂23 0122 贴膏剂24 0123 口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂25 0124 植入剂26 0125 膜剂27 0126 耳用制剂28 0127 洗剂29 0128 冲洗剂30 0129 灌肠剂31 0181 合剂32 0182 锭剂33 0183 煎膏剂（膏滋）34 0184 胶剂35 0185 酒剂36 0186 膏药37 0187 露剂38 0188 茶剂39 0189 流浸膏剂与浸膏剂400200 其他通则41 0211 药材和饮片取样法42 0212 药材和饮片检定通则43 0213 炮制通则44 0251 药用辅料45 0261 制药用水46 0291 国家药品标准物质通则47030048 0301 一般鉴别试验49 0400 光谱法50 0401 紫外-可见分光光度法51 0402 红外分光光度法52 0405 荧光分光光度法53 0406 原子吸收分光光度法54 0407 火焰光度法55 0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法56 0412 电感耦合等离子体质谱法57 0421 拉曼光谱法58 0431 质谱法59 0441 核磁共振波谱法60 0451 X射线衍射法610500 色谱法62 0501 纸色谱法63 0502 薄层色谱法64 0511 柱色谱法65 0512 高效液相色谱法66 0513 离子色谱法67 0514 分子排阻色谱法68 0521 气相色谱法69 0531 超临界流体色谱法70 0532 临界点色谱法71 0541 电泳法72 0542 毛细管电泳法730600 物理常数测定法74 0601 相对密度测定法75 0611 馏程测定法76 0612 熔点测定法77 0613 凝点测定法78 0621 旋光度测定法79 0622 折光率测定法80 0631 pH值测定法81 0632 渗透压摩尔浓度测定法82 0633 黏度测定法83 0661 热分析法84 0681 制药用水电导率测定法85 0682 制药用水中总有机碳测定法860700 其他测定法87 0701 电位滴定法与永停滴定法88 0702 非水溶液滴定法89 0703 氧瓶燃烧法90 0704 氮测定法91 0711 乙醇量测定法92 0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法93 0713 脂肪与脂肪油测定法94 0721 维生素A测定法95 0722 维生素D测定法96 0731 蛋白质含量测定法970800 限量检查法98 0801 氯化物检查法99 0802 硫酸盐检查法100 0803 硫化物检查法101 0804 硒检查法102 0805 氟检查法103 0806 氰化物检查法104 0807 铁盐检查法105 0808 铵盐检查法106 0821 重金属检查法107 0822 砷盐检查法108 0831 干燥失重测定法109 0832 水分测定法110 0841 炽灼残渣检查法111 0842 易炭化物检查法112 0861 残留溶剂测定法113 0871 甲醇量检查法114 0872 合成多肽中的醋酸测定法115 0873 2-乙基己酸测定法1160900 特性检查法117 0901 溶液颜色检查法118 0902 澄清度检查法119 0903 不溶性微粒检查法120 0904 可见异物检查法121 0921 崩解时限检查法122 0922 融变时限检查法123 0923 片剂脆碎度检查法124 0931 溶出度与释放度测定法125 0941 含量均匀度检查法126 0942 最低装量检查法127 0951 吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法128 0952 黏附力测定法129 0981 结晶性检查法130 0982粒度和粒度分布测定法131 0983 锥入度测定法132 1100 生物检查法133 1101 无菌检查法134 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法135 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法136 1107 非无菌药品微生物限度标准137 1121 抑菌效力检查法138 1141 异常毒性检查法139 1142 热原检查法140 1143 细菌内毒素检查法141 1144 升压物质检查法142 1145 降压物质检查法143 1146 组胺类物质检查法144 1147 过敏反应检查法145 1148 溶血与凝聚检查法1461200 生物活性测定法147 1201 抗生素微生物检定法148 1202 青霉素酶及其活力测定法149 1205 升压素生物测定法150 1206 细胞色素C活力测定法151 1207 玻璃酸酶测定法152 1208 肝素生物测定法153 1209 绒促性素生物测定法154 1210 缩宫素生物测定法155 1211 胰岛素生物测定法156 1212 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用测定法157 1213 硫酸鱼精蛋白生物测定法158 1214 洋地黄生物测定法159 1215 葡萄糖酸锑钠毒力检查法160 1216 卵泡刺激素生物测定法161 1217 黄体生成素生物测定法162 1218 降钙素生物测定法163 1219 生长激素生物测定法164 1401 放射性药品检定法165 1421 灭菌法166 1431 生物检定统计法1672000 中药其他方法168 2001 显微鉴别法169 2101 膨胀度测定法170 2102 膏药软化点测定法171 2201 浸出物测定法172 2202 鞣质含量测定法173 2203 桉油精含量测定法174 2204 挥发油测定法175 2301 杂质检查法176 2302 灰分测定法177 2303 酸败度测定法178 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法179 2322 汞和砷元素形态及其价态测定法180 2331 二氧化硫残留量测定法181 2341 农药残留量测定法182 2351 黄曲霉毒素测定法183 2400 注射剂有关物质检查法1843000 生物制品相关检查方法1853100 含量测定法186 3101 固体总量测定法187 3102 唾液酸测定法（间苯二酚显色法）188 3103 磷测定法189 3104 硫酸铵测定法190 3105 亚硫酸氢钠测定法191 3106 氢氧化铝（或磷酸铝）测定法192 3107 氯化钠测定法193 3108 枸橼酸离子测定法194 3109 钾离子测定法195 3110 钠离子测定法196 3111 辛酸钠测定法197 3112 乙酰色氨酸测定法198 3113 苯酚测定法199 3114 间甲酚测定法200 3115 硫柳汞测定法201 3116 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法202 3117 O-乙酰基测定法203 3118 己二酰肼含量测定法204 3119 高分子结合物含量测定法205 3120 人血液制品中糖及糖醇测定法206 3121 人血白蛋白多聚体测定法207 3122 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法208 3123 人免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法209 3124 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法210 3125 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法211 3126 IgG含量测定法212 3127 单抗分子大小变异体测定法（CE-SDS）2133200 化学残留物测定法214 3201 乙醇残留量测定法215 3202 聚乙二醇残留量测定法216 3203 聚山梨酯80残留量测定法217 3204 戊二醛残留量测定法218 3205 磷酸三丁酯残留量测定法219 3206 碳二亚胺残留量测定法220 3207游离甲醛测定法221 3208 人血白蛋白铝残留量测定法222 3209 羟胺残留量测定法2233300 微生物检查法224 3301 支原体检查法225 3302 外源病毒因子检查法226 3303 鼠源性病毒检查法227 3304 SV40核酸序列检查法228 3305 猴体神经毒力试验229 3306 血液制品生产用人血浆病毒核酸检测技术要求2303400 生物测定法231 3401 免疫印迹法232 3402 免疫斑点法233 3403 免疫双扩散法234 3404 免疫电泳法235 3405 肽图检查法236 3406 质粒丢失率检查法237 3407 外源性DNA残留量测定法238 3408 抗生素残留量检查法（培养法）239 3409 激肽释放酶原激活剂测定法240 3410 抗补体活性测定法241 3411 牛血清白蛋白残留量测定法242 3412 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法243 3413 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法244 3414 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法245 3415 类A血型物质测定法246 3416 鼠IgG残留量测定法247 3417 无细胞百日咳疫苗鉴别试验（酶联免疫法）248 3418 抗毒素、抗血清制品鉴别试验（酶联免疫法）249 3419 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法250 3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法251 3421 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法252 3422 人凝血酶活性检查法253 3423 活化的凝血因子活性检查法254 3424 肝素含量测定法255 3425 抗A、抗B血凝素测定法256 3426 人红细胞抗体测定法257 3427 人血小板抗体测定法258 3500 生物活性/效价测定法259 3501 重组乙型肝炎疫苗（酵母）体外相对效力检查法260 3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法261 3503 人用狂犬病疫苗效价测定法262 3504 吸附破伤风疫苗效价测定法263 3505 吸附白喉疫苗效价测定法264 3506 类毒素絮状单位测定法265 3507 白喉抗毒素效价测定法266 3508 破伤风抗毒素效价测定法267 3509 气性坏疽抗毒素效价测定法268 3510 肉毒抗毒素效价测定法269 3511 抗蛇毒血清效价测定法270 3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法271 3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法272 3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法273 3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（E玫瑰花环形成抑制试验）274 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（淋巴细胞毒试验）275 3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法276 3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法277 3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法278 3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法279 3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法280 3522 重组人促红素体内生物学活性测定法281 3523 干扰素生物学活性测定法282 3524 重组人白介素-2生物学活性测定法283 3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法284 3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法285 3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法286 3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法287 3529 重组链激酶生物学活性测定法288 3530 鼠神经生长因子生物学活性测定法289 3531 尼妥珠单抗注射液生物学活性测定法290 3532 重组人白介素-11生物学活性测定法291 3533 注射用A型肉毒毒素成品效价测定法（平行线法）2923600 特定生物原材料/动物293 3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求294 3602 实验动物微生物学检测要求295 3603 实验动物寄生虫学检测要求296 3604 新生牛血清检测要求297 3605 细菌生化反应培养基2983700299 3701 生物制品国家标准物质目录3008000 试剂与标准物质301 8001 试药302 8002 试液303 8003 试纸304 8004 缓冲液305 8005 指示剂与指示液306 8006 滴定液307 8061 对照品对照药材对照提取物308 8062 对照品标准品3099000 指导原则310 9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则311 9011 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则312 9012 生物样品定量分析方法验证指导原则313 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则314 9014 微粒制剂指导原则315 9015 药品晶型研究及晶型质量控制指导原则316 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则317 9102 药品杂质分析指导原则318 9103 药物引湿性试验指导原则319 9104 近红外分光光度法指导原则320 9105 中药生物活性测定指导原则321 9106 基于基因芯片的药物评价技术与方法指导原则322 9107 中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则323 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则324 9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则325 9203药品微生物实验室质量管理指导原则326 9204 微生物鉴定指导原则327 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则328 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则329 9301注射剂安全性检查法应用指导原则330 9302 中药有害残留物限量制定指导原则331 9303 色素测定法指导原则332 9304 中药中铝、铬、铁、钡元素测定指导原则333 9305 中药中真菌毒素测定指导原则334 9501 正电子类放射性药品质量控制指导原则335 9502 锝［99mTc］放射性药品质量控制指导原则336 9601 药用辅料功能性指标研究指导原则337 9621 药包材通用要求指导原则338 9622 药用玻璃材料和容器指导原则339 9901 国家药品标准物质制备指导原则。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
附录ⅩIII D
新生牛血清检测要求
本品系从出生14小时内未进食的新生牛采血分离血清，经除菌过滤后制成。
牛血清生产过程中不得任意添加其他物质成分。
新生牛血清用于生产前应逐批进行以下检查，并应符合规定。
蛋白质含量应为3.5%～5.0%（附录ⅥB第一法）。
血红蛋白用氰化高铁法或其他适宜的方法测定。
应不高于0.02%。
大肠杆菌噬菌体采用噬斑法和增殖法检测。
不得有噬菌体污染。
摩尔渗透压（指标待定）
无菌检查依法检查，应符合规定（附录ⅫA）。
支原体检查依法检查，应符合规定（附录ⅫB）。
细菌内毒素检查应不高于10EU/ml（附录ⅫE 凝胶限量试验）。
病毒检查
1. 细胞培养法
（1）非血吸附病毒检查
将新生牛血清供试品分别接种到人源（如人二倍体细胞）、猴源（如Vero细胞）以及牛肾传代细胞三种细胞，采用的牛肾传代细胞系应证明无牛病毒的污染。
每种细胞至少接种6瓶，每瓶细胞悬液接种量不少于培养液总量的25%。
于36±1℃培养21天。
接种的每种细胞都应同时设立牛血清阴性对照和病毒阳性对照，（阴性对照用牛血清应证明无牛病毒污染）。
培养过程中可根据细胞生长情况更换细胞培养液，每次更换培养液前应观察（肉眼/显微镜）有无细胞病变出现。
培养到期后，阴性对照应无任何细胞病变出现，阳性对照应出现典型的细胞病变，试验成立。
供试品检查应不出现任何细胞病变为阴性，符合要求。
（2）血吸附病毒检查
将上述接种供试品的每种细胞取2瓶进行血吸附病毒检查。
用0.2%~0.5%鸡和豚鼠红细胞混合悬液覆盖于细胞表面，置2~8℃分钟，然后置20~25℃30分钟，分别进行镜检，观察红细胞吸附情况，供试品检查结果均应为阴性。
试验同时应设立血吸附阳性对照。
2. 免疫荧光抗体检查法
采用直接或间接免疫荧光抗体检查法，至少应对牛腹泻病毒，牛腺病毒、牛细小病毒、呼肠孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒进行检查，结果均应为阴性。
支持细胞增殖检查用Sp2/0 -Ag14或适宜的非贴壁传代细胞进行。
（1）细胞生长曲线的测定取供试品按10%浓度配制细胞培养液，按每1ml含104的细胞浓度接种细胞，每天计数活细胞，连续观察一周，并绘制生长曲线，细胞的最大增殖浓度应不低于每1ml含106。
（2）细胞倍增时间的测定按生长曲线计算细胞的倍增时间。
取细胞峰值前一天的细胞计数(Y)、接种细胞数(X)及生长时间(T)计算。
倍增时间=T/A A=log2Y/X
Sp2/0-Ag14细胞的倍增时间应不超过20小时。
1.（3）克隆率的测定按有限稀释法将细胞稀释，并按每孔1个细胞的浓
度接种于96孔细胞培养板，每板至少接种48孔，于37℃、5%二氧化碳培
养1周后计算克隆率，应不低于70%。
克隆率=A/B×100%
式中A为细胞生长阳性孔数；
B为接种细胞的总孔数。