浅议制药废水致泥鳅遗传及生理毒性作用

【关键词】 泥鳅;微核率;谷丙转氨酶;谷草转氨酶;遗传毒性
Study on physiological toxicity and genotoxicity of pharmacy wastewater in loach YUE Yuanyuan,XIAO Zhen,CHEN Jianjun，et al.College of Life Sciences,Henan Normal University(Xinxiang 453007,China)
1 材料与方法 医学论文网
1.1 材料 泥鳅(Loach)200尾(新乡市宏达市场)，发育状况相似，平均体长12 cm。实验前用曝气的自来水驯养1周，每天换水1次，整个驯养和染毒过程都不添加任何饲料，实验时挑选外观健康的正常个体进行处理。水样取自新乡市某制药厂处理过的废水，50 L。
1.3 统计分析 采用SPSS软件进行分析;微核试验结果用u检验。
2 结 果
2.1 不同浓度废水对泥鳅红细胞微核检出率(表1) 由表1可见，对照组微核率为0.8‰。试验组(原液)的平均微核率为7.30‰，为对照组的9倍。试验组B、C、D的平均微核率分别为5.20‰，4.10‰，1.30‰，均高于对照组。经统计学检验，实验组与对照组间微核率差异有统计学意义(P<0.01)。
ห้องสมุดไป่ตู้
3 讨 论
鱼类外周血红细胞微核试验是一种监测水环境中三致物质综合诱变作用的简单有效方法，已得到广泛应用〔7，8〕。鱼体吸收了水环境中致变物质，致使鱼造血系统的干细胞部分有丝分裂发生异常，细胞染色体发生断裂，断片残留于胞浆中成为微核，少数可形成2个以上的微核，从微核率多少反映了机体细胞染色体受损伤的程度〔9〕。另外，在正常情况下血清转氨酶活性值较小，当组织中毒发生病变，或者受损伤的组织范围较大，可引起血清中GPT和GOT浓度上升或活性突然持续性增强〔10〕。当肝细胞受到外来物质的操作时，细胞膜的通透性加大，大量GPT和GOT渗入血液，肝睥GOT和GPT活性明显下降，而血液中GPT和GOT活性升高〔11〕。本次试验还显示，随着染毒天数的增加，泥鳅血清GOT活力在前4 d呈升高趋势，可能是由于肝组织受损，细胞内的转氨酶释放到血浆中，致使血清GOT活性升高，4 d后呈降低趋势，可能是药厂废水的毒性增加到一定程度后，使泥鳅的生命力下降，从而引起GOT活性降低。而泥鳅血清中GPT活力呈下降趋势，说明此药厂废水对泥鳅毒性较大，在很短的时间内就使泥鳅的生命力明显下降，其血清GPT活力也呈下降趋势。从GPT和GOT不同变化趋势可以看出，2种酶对此药厂废水的敏感性不同，GPT更敏感些。结果表明，此制药废水对泥鳅有较强的生理和遗传毒性。
1.2.3 血涂片及匀浆制备 取泥鳅，吸干体表水，在躯干与尾巴连接处断尾，取血，涂片，自然晾干，用甲醇固定液固定15 min，用磷酸盐缓冲液(pH=6.8)稀释的吉姆萨(Giemsa)(5∶1)染液染色10 min，水洗，晾干。取肝脏，用生理盐水冲洗，吸干，按质量体积比1∶99，加生理盐水，常规方法剪碎、研磨，分别于2 500，3 500 r/min条件下离心取上清，待测。血清可用生理盐水按血清：生理盐水=1∶49稀释，待测。
2.2 不同浓度废水对泥鳅血清和肝脏中GPT、GOT活性影响(表2) 由表2可见，实验组肝脏组织中GPT酶活力均有所降低。其中A组、B组和C组中泥鳅肝组织内GPT与对照表1 不同浓度废水致泥鳅红细胞微核检出率
2.3 不同染毒天数泥鳅血清GPT和GOT活性变化 分别在第2，4，6 d对泥鳅血清中GPT和GOT活力进行测定分析。结果随着天数的增加，泥鳅血清中GPT活力下降50%，而GOT活力则是先升高后降低，第4 d上升22%，至第6 d下降78%。表2 不同浓度废水对泥鳅血清和肝脏中GPT、GOT活性影响
1.2.4 泥鳅外周红细胞微核试验 每尾泥鳅镜检10 000个红细胞，计算红细胞微核率(‰)〔1〕。
1.2.5 肝脏与血清中GOT、GPT的测定 GOT、GPT的匀浆活力分别用谷草转氨酶试剂盒(赖氏法)、谷丙转氨酶试剂盒(赖氏法)测定，组织蛋白含量用考马斯亮蓝(试剂盒南京建成生物工程研究所)法测定。
Key words： loach;micronuclei rate;GPT;GOT;heredity toxicity
鱼类作为水环境污染的一种合理监测指示物已日益受到重视〔1，2〕。而泥鳅由于其生命力强，取材容易，对污染物敏感等特点，可以作为一种理想的毒性实验材料。外周血红细胞微核率及肝脏血清中的谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)等指标，作为水污染的检测指标已经被广泛应用〔3-6〕。本研究选用泥鳅作为研究对象，对主要有机合成药物、无机合成药物、抗生素和中成药生产废水的河南省新乡市某制药废水的生理和遗传毒性进行了研究，为环境水污染与人群健康预警研究提供参考。
浅议制药废水致泥鳅遗传及生理毒性作用
【摘要】 目的 了解某制药厂处理废水的污染物遗传及生理毒性状况。方法 选用泥鳅为受试对象，进行微核外周血红细胞微核率、谷丙转氨酶、谷草转氨酶检测。结果 染毒6 d后，原液鱼外周红细胞微核率与对照组比较，增长了89%。同时，随药液浓度增加，肝脏谷丙转氨酶(PGT)和谷草转氨酶(GOT)活力下降，原液的酶活性值达到最低水平，均值分别为36.645 3和66.303 1，与对照相比降低了76.90%和80.61%，而血清GTP和GOT活力呈上升趋势，原液的酶活性值达到最高水平，平均值分别为501.042 3和639.167 0，与对照组比升高了83.34%和96.09%。结论 此制药厂废水致泥鳅有明显的遗传毒性与生理毒性。
Abstract： Objective To detect physiological toxicity and genotoxicity of pharmaceutical factory wastewater.Methods The biochemical indices(the red blood cells micronuclei rate,GPT,GOT) in locah treated with the waste water were detected.Results After 6 days of treatment,the red blood cell micronuclei rate in exposure group was remarkably higher that that of the control group.At the same time,the GPT and GOT activity in liver decreased with the increasing of concentration of wastewater.The value of enzyme activity of the stock solution was 36.6453 and 66.3031,respectively,with reductions of 76.90% and 80.61% compared with the control.However,the activity of the enzymes in the serum was enhanced and the highest average values of enzyme activity of the stock solution were 501.0423 and 639.1670 with the increases of 83.34% and 96.09% compared with the control.Conclusion The pharmaceutical factory wastewater has signifcant genotoxicity and physiological toxicity on loach.
1.2 方法
1.2.1 实验分组 对照组：曝气后的新乡市自来水。实验组：新乡市某制药厂废水，此水样分为4个浓度：废水(A组)、含废水50%(B组)、含废水33.3%(C组)、含废水25%(D组)，用曝气后自来水配制，每组饲养密度为20只/1500mL。
1.2.2 染毒 挑选体长和发育状况相似的泥鳅随机放下每一试验水样中，每一浓度水样放养20尾，分别于开始染毒后的第2，4，6 d，从每一浓度中随机取3尾泥鳅，断尾取血，涂片，观察。试验组与对照组泥鳅均于染毒结束时(染毒时间均为1周)，取肝脏与血清，分别制成组织匀浆与血清稀释液，待测。