高效液相色谱仪操作规程-岛津

1 技术参数
LC-20AT低压梯度泵
梯度方式：低压混合
混合溶剂数：4液
混合浓度准确度：1%以下
SIL-20AC自动进样器：
进样量：0.1μL~100μL
进样量准确度：1%以下
进样量精密度：RSD：0.3%以下（10mL 进样时指定条件下）
2 适用范围
适用于药物的分离、定性、定量分析
3 操作步骤
3.1 仪器组成：由DGU-20A5脱气机、LC-20AT低压梯度泵、SIL-20AC自动进样器、CTO-20A 柱温箱、SPD-20A紫外-可见检测器、RF-20A荧光检测器、CBM-20A系统控制器、LC Solution 工作站等组成。

3.2 开机
①在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相，标样及样品。

流动相抽滤后超声脱气15分钟，标样和样品0.45um膜过滤。

②接通电源，依次开启A泵、B泵、柱温箱、自动进样器、检测器、系统控制器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。

③泵排空操作：打开LC-20AT泵排空阀（逆时针90度以上），按Purge键，泵开始排空运行。

检查流动相入口Teflon管路没有气泡后，再按Purge键停止排空。

自动进样器排气操作：按Purge键，自动进样器开始排气，系统默认排气时间为25min，且自动进样器排气过程中可同时进行其他操作。

（除进样外）
压力调零：按LC-20ATvp泵Func键选择CONTROL 项，按FUNC键直至屏幕显示 ***ml ZERO ADJ项，按Enter键，再按CE键，即完成调零。

然后关紧排空阀（顺时针旋紧）。

④再双击Operation∈Analysis 1~4进入实时分析窗口：（根据不同的检测器选择）
在开机画面中，User ID选中Admin，不需输入Password，点击OK（可听到峰鸣一声）＊在下面操作中A∈B表示在A菜单下选择B，以此类推。

选中□表示在□中打√号。

3.3参数设置
①在左侧助手栏给出了引导顺序操作的图标，自上而下顺序执行即可：（可以跳过执行）●System configuration系统配置（第一次安装或更换检测器时配置，通常跳过不操作）●System Check编辑仪器检查参数：并且RUN运行检查。

通常不操作（跳过）
●点击Data acquisition进入采集数据编辑方法界面
点击Instrument Parameter进入仪器参数设置界面：
⊙选中Normal（通用简单）或Advanced（高级详细）项，分别设定Pumps泵参数，Oven柱箱参数，Detecter检测器参数，Controller系统控制器参数，Time Program时间程序参数等。

仪器配置不同，控制单元项的数目多少不同。

⊙Pumps泵参数：Mode控制方式，Flow流速，B，C，D C onc各项浓度，P Max最大压力⊙Oven柱箱参数：Oven设定温度，T Max最大保护温度
⊙Detecter检测器参数：Cell设定池温。

Wavelength设定波长。

⊙Controller系统控制器参数：
⊙Data acquisition选中Acquisition Time后，设置分析时间，等等
⊙LC Time Prog时间程序参数：编辑泵梯度洗脱程序，也可以控制柱箱，检测器，等等。

●点击Method∈Data Analysis Parameter编辑积分参数：
设置 Width峰宽，Slope斜率，Min Area最小峰面积等等。

新建方法推荐使缺省值，待分析完样品后再设置此项参数，得到优化的色谱数据结果后，将参数保存在当前方法中。

●保存方法：点击File∈Save Method as
起文件名*****保存后，该方法即作为当前运行的方法。

下载方法：点击Down Load 键，向仪器传送参数。

3.4运行方法：
点击图标（Instrument On/Off 系统开/关）
系统开始运行，检查各单元参数应与方法设定一致。

等待系统平衡。

一般情况下，由于流动相不同，交换平衡时间不定。

可以观察Detecter检测器吸收变化,如果吸收值稳定不变，即认为接近平衡，可以调零等待，确认不变后，准备进样分析。

可以通过改变衰减⊕或⊕予览基线观察基线变化，待基线平稳，准备进样操作。

3.5进样分析：
⊙单针进样分析：点击Single Start图标：
编辑样品参数：Sample ID样品信息，Method Name 方法文件名，Data Path 数据存储路径，Data Name 数据文件名，Vial样品瓶号(无)，Tray#架号(无)，Injection进样量等。

点击OK后，开始进样操作。

（★重复单针进样，重复执行此步骤即可★）每个样到时间分析结束，根据方法中的积分参数，所有色谱数据会自动进行积分处理。

⊙批量分析：点击批处理图标 Batch Processing，点击New新建批处理文件，点击向导Wizard，设定新建、文件方法、试样开始位置、进样量，点击下一步；设定试样名、试样瓶数、进样次数，并选择是否打印报告后，点击完成。

待系统平衡，基线稳定后，点击批处理开始图标Batch start即可。

需变更在执行中的分析时间时，点击分析时间变更图标，设定数值。

需分析中止时，点击中止图标。

需批处理分析暂停时点击暂停/重开图标，可对批处理表进行变更，点击暂停/重开图标（批处理实时分析重新开始）。

3.6报告预览和打印：
⊙点击Top 返回上级引导操作栏。

点击Post Run Analysis 进入数据后处理界面：
点击report 进入报告界面：
点击report format进入格式界面：
调入报告格式文件，也可以自己编辑报告格式
然后点击Data打开数据文件，将左侧数据文件拖入右侧报告栏即可。

关于报告格式，可以通过内容选择图标，在报告中确定位置后，添加即可。

右键功能很强大，用户可以参考说明书灵活使用。

选择快捷图标的预览或打印图标执行报告预览或打印。

3.7关机步骤：
●更换洗液清洗流路系统（如用缓冲液，先用水清洗1小时，再用有机溶剂清洗30分钟以上），最后用有机溶剂封存。

●清洗结束后，停止系统运行，在LC SOLUTION工作站中，按Instrument on/off键即停止所有单元工作。

●退出LC SOLUTION（可听到峰鸣一声），再完全退出。

●关系统控制器CBM-20A电源开关
●关主机SPD-20A（或RF-20A）检测器，LC-20AT泵，CTO-20A柱箱电源开关。

清洗流路系统要求：
⊙如果使用缓冲液，先用水更换缓冲液，清洗1小时，然后更换甲醇清洗40分钟，⊙如果使用有机溶剂（水），直接更换甲醇清洗40分钟即可。

4 注意事项
4.1如果使用前色谱柱中保存的流动相为纯甲醇或纯乙腈，而新流动相中含有缓冲盐时，应先用纯水冲洗色谱柱十分钟左右再使用流动相，以免盐析出损坏系统。

4.2流动相的pH值应在2.3~9.5之间。

如系统为正相和反相交换使用，应先将所有管路用异丙醇清洗后再更换新流动相使用。

四氢呋喃和氯仿等不可长期停留在塑料管道内。

4.3流动相应过滤，不要使用存放超过两天的水相。

液相本身的溶剂过滤头不能超声。

4.4注意不同厂家接头问题，防止漏液和损坏柱子或接头。

4.5检测器的灯应节约使用时间，但不要频繁开关灯。

必要时进行波长校准，废液管不可以剪短。

5 仪器维护
5.1 每三个月至少清洗一次溶剂过滤头（35%硝酸浸泡1小时后用水冲洗至中性）
5.2 根据情况更换purge阀内的滤芯（纯水5ml/min排液时，压力超过10Bar应更换）5.3 经常使用盐溶液时，定期用水冲洗所有通道。

5.4 保持自动进样器的传动杆、针座的清洁，平时关门防尘。

5.5 定期进行仪器的诊断程序，检查仪器状态。

6 期间核查
6.1 在两次检定之间，如较长时间不用，或使用过程中发现有可疑现象时，应对本仪器
进行期间核查。

6.2 采用与本所另外的液相色谱仪比对方式进行，两台仪器测定值相对标准偏差小于
1.5%时，可判定仪器期间核查合格。

6.3 可根据国家技术监督局JJG705-90“实验室液相色谱仪检定规程”（详见中检所《实
验室仪器检定规程》），用于自检。

7 相关记录
7.1 仪器使用登记表 DGSYJ/CX-23-06-05 7.2 设备期间核查记录表 DGSYJ/CX-25-01-05。