细菌内毒素检查常见异常结果分析

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BET常见异常

结果分析

湛江安度斯生物有限公司

2016年7月

实验助手APP授权发布

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BET常见异常结果分析

凝胶法

灵敏度复核不符合规定

阳性对照阴性供试品阳性

对照阴性

阴性对照

阳性

供试品一

阳一阴

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1.阴性对照为阳性

✓实验环境-有扬尘;

✓实验操作不规范-人为污染;

✓配套用品(移液管、反应管、吸头污染或没有完全除热原)

✓试剂性能-鲎试剂或水出问题

✓设备-恒温水浴,水滴进反应混合液中

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2.阳性对照为阴性

✓标准内毒素溶液的制备是否准确;

✓试剂性能(内毒素标准品、鲎试剂和检查用水的质量和是否匹配);

✓配套用品(移液管、稀释管、反应管、吸头是否有干扰);

✓操作是否规范;

✓设备-恒温孵育的温度和时间是否合适;✓实验环境;

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3.供试品阳性对照为阴性

阳性对照为阴性,供试品阳性对照为

阴性—参考实验结果出现异常的分析2) 阳性对照为阳性,供试品阳性对照为

阴性

✓供试品阳性对照溶液配制是否正确;

✓供试品有抑制干扰作用;

✓配套用品(稀释管、反应管、移液用

具是否有干扰);

✓其他

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4.阴性对照正常,供试品为阳性

供试品内毒素含量不符合规定;

污染

✓配套用品(稀释管、反应管、刻度吸管、吸头);

✓试验操作、环境、试剂等

假阳性-增强干扰作用

•凝胶法中,没有对照项可以判断供试品是否存在增强作用。

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4.阴性对照正常,供试品为阳性

假阳性

的判断

凝胶法

检测

配套稀释液抗增液

复溶鲎

试剂

特异性

鲎试剂

光度法

检测

分析内

毒素含

反应动

力学曲

线分析

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5.同一供试品结果有时阳性,有时阴性

样品

✓供试品内毒素含量在1/2L左右;

✓供试品存在干扰

试剂-不同试剂,抗干扰能力不同

试验条件(环境、人员操作技能、恒温孵育温度和时间)

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6.灵敏度复核不符合规定

参照案例分析(二)鲎试剂灵敏度复核不符合规定原因调查。

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BET常见异常结果分析

光度法

标准曲线的线性不合格

变异系数大内毒素回收率

不合格

阴性对照不合

不正确的预设

Rt或OD值,

导致的异常结

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1.线性不足

标准内毒素

•某个标准内毒素浓度制备误差•标准品旋涡混合不充分

•标准品储存不当或用具干扰试剂

•污染

•检测能力不足

仪器设置

•不正确的预设Rt/OD值

不正确的反应时间

•终点法

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2.阴性对照不合格

配套用品激活(污染)鲎试剂

✓塑料吸头和吸管可激活或污染鲎试剂 反应试管或孔没有完全除内毒素

操作污染

✓细菌内毒素检查用水

✓鲎试剂

✓反应试管或孔受污染

试剂灵敏度不足或不合适的预设Rt/OD

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3.变异系数偏大

气泡试剂

质量加样

误差

试管/

孔受

污染

移液

管/吸

头污

样品

沉淀

或悬

内毒

素添

加的

量不

准确

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4.回收率问题

标准内毒素溶液制备或加入不准确 试剂加入不准确

样品

✓内毒素浓度太高

✓抑制作用

✓增强作用

✓工艺、原辅料的改变

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5.不正确的预设Rt或OD值,导致的异

常结果

预设Rt/OD值指光度变化值,是一个参考值,一般由鲎试剂生产厂家提供。

合适的预设Rt/OD值

✓标准曲线最低点浓度在设定时间内能达到预设

Rt/OD值

✓标准曲线最低点浓度在设定时间内反应时间和阴性对照有差异

✓标准曲线的相关系数|r| ≥ 0.980

预设Rt/OD值的取值范围越宽,鲎试剂的稳健性越好(安度斯光度法试剂的特征)

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光度变化预设值的影响

预设OD值0.02

相关系数-0.9990

0.0024

供试品内毒素含量

(EU/ml)

回收率92.9%

50.50.050.00

5

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光度变化预设值的影响

预设OD值0.05

相关系数-0.9984

<0.0038

供试品内毒素含量

(EU/ml)

回收率102.3%

50.50.050.00

5

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