细菌内毒素检查常见异常结果分析
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BET常见异常
结果分析
湛江安度斯生物有限公司
2016年7月
实验助手APP授权发布
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BET常见异常结果分析
凝胶法
灵敏度复核不符合规定
阳性对照阴性供试品阳性
对照阴性
阴性对照
阳性
供试品一
阳一阴
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1.阴性对照为阳性
✓实验环境-有扬尘;
✓实验操作不规范-人为污染;
✓配套用品(移液管、反应管、吸头污染或没有完全除热原)
✓试剂性能-鲎试剂或水出问题
✓设备-恒温水浴,水滴进反应混合液中
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2.阳性对照为阴性
✓标准内毒素溶液的制备是否准确;
✓试剂性能(内毒素标准品、鲎试剂和检查用水的质量和是否匹配);
✓配套用品(移液管、稀释管、反应管、吸头是否有干扰);
✓操作是否规范;
✓设备-恒温孵育的温度和时间是否合适;✓实验环境;
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3.供试品阳性对照为阴性
阳性对照为阴性,供试品阳性对照为
阴性—参考实验结果出现异常的分析2) 阳性对照为阳性,供试品阳性对照为
阴性
✓供试品阳性对照溶液配制是否正确;
✓供试品有抑制干扰作用;
✓配套用品(稀释管、反应管、移液用
具是否有干扰);
✓其他
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4.阴性对照正常,供试品为阳性
供试品内毒素含量不符合规定;
污染
✓配套用品(稀释管、反应管、刻度吸管、吸头);
✓试验操作、环境、试剂等
假阳性-增强干扰作用
•凝胶法中,没有对照项可以判断供试品是否存在增强作用。
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4.阴性对照正常,供试品为阳性
假阳性
的判断
凝胶法
检测
配套稀释液抗增液
复溶鲎
试剂
特异性
鲎试剂
光度法
检测
分析内
毒素含
量
反应动
力学曲
线分析
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5.同一供试品结果有时阳性,有时阴性
样品
✓供试品内毒素含量在1/2L左右;
✓供试品存在干扰
试剂-不同试剂,抗干扰能力不同
试验条件(环境、人员操作技能、恒温孵育温度和时间)
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6.灵敏度复核不符合规定
参照案例分析(二)鲎试剂灵敏度复核不符合规定原因调查。
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BET常见异常结果分析
光度法
标准曲线的线性不合格
变异系数大内毒素回收率
不合格
阴性对照不合
格
不正确的预设
Rt或OD值,
导致的异常结
果
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1.线性不足
标准内毒素
•某个标准内毒素浓度制备误差•标准品旋涡混合不充分
•标准品储存不当或用具干扰试剂
•污染
•检测能力不足
仪器设置
•不正确的预设Rt/OD值
不正确的反应时间
•终点法
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2.阴性对照不合格
配套用品激活(污染)鲎试剂
✓塑料吸头和吸管可激活或污染鲎试剂 反应试管或孔没有完全除内毒素
操作污染
✓细菌内毒素检查用水
✓鲎试剂
✓反应试管或孔受污染
试剂灵敏度不足或不合适的预设Rt/OD
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3.变异系数偏大
气泡试剂
质量加样
误差
试管/
孔受
污染
移液
管/吸
头污
染
样品
沉淀
或悬
浮
内毒
素添
加的
量不
准确
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4.回收率问题
标准内毒素溶液制备或加入不准确 试剂加入不准确
样品
✓内毒素浓度太高
✓抑制作用
✓增强作用
✓工艺、原辅料的改变
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5.不正确的预设Rt或OD值,导致的异
常结果
预设Rt/OD值指光度变化值,是一个参考值,一般由鲎试剂生产厂家提供。
合适的预设Rt/OD值
✓标准曲线最低点浓度在设定时间内能达到预设
Rt/OD值
✓标准曲线最低点浓度在设定时间内反应时间和阴性对照有差异
✓标准曲线的相关系数|r| ≥ 0.980
预设Rt/OD值的取值范围越宽,鲎试剂的稳健性越好(安度斯光度法试剂的特征)
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光度变化预设值的影响
预设OD值0.02
相关系数-0.9990
0.0024
供试品内毒素含量
(EU/ml)
回收率92.9%
50.50.050.00
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光度变化预设值的影响
预设OD值0.05
相关系数-0.9984
<0.0038
供试品内毒素含量
(EU/ml)
回收率102.3%
50.50.050.00
5
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