启动子分析流程

“螺旋课堂”2008 年第十一课----“基因启动子分析基本流程”
四：CHIP 实验在体内验证顺式作用元件同反式作用因子的结合 当 EMSA 实验得到阳性结果后,还是不能最后肯定该反式作用因子和该顺式作用元件 有结合.毕竟体外的结合并不能代表生理条件下的结合.接下来就要用染色质免疫沉淀(ChIP) 技术来证实在体内的生理条件下该顺式作用元件和该反式作用因子是有结合的.
五：过表达和干扰反式作用因子情况下用 RT-PCR 验证目的基因的表达情况 那么,反式作用因子和顺式作用元件有结合,就一定会影响该基因的表达吗?很多时候 很多转录因子一起形成复合体才有调控作用,于是我们要在过表达和干扰该反式作用因子的 条件下,做 RT-PCR 看目的基因的表达是否有变化.这个才能最后说明反式作用因子和顺式作 用元件结合后真的能够调控目的基因的表达, 对于以上很多的实验,选取细胞系是非常重要的,在不同的细胞系,目的基因的表达是 有区别的,因此,只有在某种细胞系才会得到理想的结果. 祝福大家好运!