实验一谷胱甘肽

4/21/2014
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含量测定
1.在试管中加入1g硫酸铵粉末，1ml谷胱甘肽
待测液，3ml硫酸铵饱和溶液，摇匀 2.加0.5ml1%亚硝基铁氰化钠，再加入 0.7ml8mol/L氨水溶液，混合 3.用分光光度计在525nm进行比色，读取吸光 度 4.根据公式计算出谷胱甘肽的浓度 Y=4.0914X+0.0028 Y是光密度值，x是谷胱甘 肽的浓度，单位mg/l
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相关应用
医学：1其巯基以螯合重金属、氟化物、芥子气等毒素中毒 2在肝炎、溶血性疾病以及角膜炎、白内障和视网膜疾病 等，作为治疗或辅助治疗的药物。 3近来日本学者发现谷胱甘肽具有抑制艾滋病毒的功能 4养颜美容护肤，防止皮肤老化及色素沉着，减少黑色素 的形成 食品 1加入到面制品中，缩短面包制造时间并起到食品营 养的强化作用及其他功能 2加入到酸奶和婴幼儿食品中，相当于维生素C，可起到 稳定剂的作用 3加到肉制品和干酪等食品中，具有强化风味的 效果。
从酵母中提取谷胱甘肽
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实验目的
• 掌握从干酵母中粗提谷胱甘肽的各种方法； • 掌握谷胱甘肽含量测定的方法。
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实验材料
• 试剂：活性干酵母粉，1mol/L盐酸， 0.25mol/L氢氧化钠，硫酸铵饱和溶液，固体 硫酸铵，8mol/L氨水，1%亚硝基铁氰化钠 001×7树脂 （凝胶型苯乙烯强酸性阳离子交 换树脂） 仪器：真空抽滤机 分光光度计 层析
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提取方法介绍
1. 热水提取法：1g 干酵母，加15mL 热水，95度水浴10min，立即冷却， 取8mL离心（5000rpm，15min），取5mL上清液滴定，记录滴定体积。 2. 冷冻研磨处理后有机酸搅拌提取：1g 干酵母，先在研钵中研细，加 入10mL蒸馏水混匀，－20度冷冻呈半固体状，研磨5min，加入5mL36 ％乙酸，室温下搅拌提取15min，取8mL离心（5000rpm，15min），取 5mL上清液滴定，记录滴定体积。 3. 酸热处理酸水搅拌提取：1g干酵母，加入15mL 2％ H2SO4，60度水浴 下搅拌抽提15min，立即冷却，取8mL离心（5000rpm，15min），取 5mL上清液滴定，记录滴定体积 4. 有机酸－稀醇搅拌提取：1g 干酵母，加入15mL 乙酸－乙醇混合液 （v:v=2:1），室温下搅拌抽提15min，取8mL离心（5000rpm，15min） 取5mL上清液滴定，记录滴定体积。 注：待滴定的谷胱甘肽提取液置4度冰箱保存，防止其被氧化
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实验结果记录与分析
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柱
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实验原理
• 谷胱甘肽的性质
• 从活性干酵母中提取谷胱甘肽的原理 及评价方法优劣的指标 • 提取的注意事项 • 工业上提取谷胱甘肽的流程
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谷胱甘肽的性质
1. 谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽Fra Baidu bibliotek 半胱氨酸侧链基团上连有一个活泼的巯基决定了其有氧 化型（GSSG）和还原型（GSH）两种形式。 2. 谷胱甘肽的分子量为307.2，等电点为5.93，溶于水、 稀醇、有机酸、酯类，不溶于醇、醚、丙酮；在水溶液 中易被氧化，在pH3.0~7.0环境下较稳定。 3. 谷胱甘肽广泛存在于动、植物和微生物体内，干酵母中 含有约1％谷胱甘肽，是提取谷胱甘肽最常用的原料。 • 生理功能 抗氧化、清除自由基、解毒（CO、重金属）等。
酵母 高产酵母 热水抽提 离心去残渣
pH4.5左右的磷 酸盐缓冲液洗脱
吸附层析法： 壳聚糖做吸附 剂
提取液调 pH7.0左右
浓缩
脱色
喷雾干燥
成品
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注意事项
• • • • 提取时间要尽量短，防止其被氧化； 提取温度要尽量低，但反复冻融谷胱甘肽易分解 谷胱甘肽在偏酸性的条件下易保持还原态； 适当的固液比，既保证尽量多的谷胱甘肽被溶出 也保证提取液中谷胱甘肽的浓度较高，便于后续的 分离纯化。 • 适当的搅拌速度，既保证适当的传质速度，便于 谷胱甘肽扩散到溶剂中，也保证工业生 产中能耗适当。
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原理
• 提取原理
谷胱甘
肽是小分子物质，且在水中的溶解度较大， 故可选择一些温和的方法从干酵母中提取谷 胱甘肽。 在细胞不完全破碎的条件下，只要细 胞壁表面出现一些裂缝，谷胱甘肽就可以扩 散到水中
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工业上提取谷胱甘肽的流程
诱变剂：亚硝基胍、紫外线