生物技术制药 整理

多克隆抗体（polyclonal antibody）:指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。如:免疫血清。

单克隆抗体（monoclonal antibody McAb）:单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。由于这种抗体是针对一个抗原决定族的抗体，又是单一的B 淋巴细胞克隆产生的，故称为单克隆抗体。

简述基因工程操作流程答：

基因工程的操作流程：

（1）分：分离目的基因；

（2）切：对目的基因和载体适当切割；

（3）接：目的基因与载体连接；

（4）转：重组DNA转入受体细胞；

（5）筛：筛选出含有重组体的受体细胞；

（6）表：目的基因在受体细胞中表达，受体细胞成长为基因改造生物。

简述微生物发酵制药的基本流程。答：微生物发酵制药基本流程：

菌种选育（自然界选种、诱变育种、基因工程、细胞工程）培养基配制（根据培养基的配制原则制备，实践中需多次试验配方）灭菌（杀灭杂菌（胞体、孢子及芽孢）扩大培养和接种

发酵过程（检测进程，满足营养需要；严格控制温度、pH、溶氧、转速等）分离纯化（菌体：过滤、沉淀；代谢产物：蒸馏、萃取、离子交换）

简述生物药物的优点和缺点。

答：生物药物是指利用各种生物材料，综合采用各种生物技术的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。

优点：

（1）用量少，药理活性高；

（2）特异性强，治疗的生理生化机制合理，疗效可靠；（2）毒副作用小、价值高；（3）缺点：

（1）成分复杂：大多数是混合物；（2）不稳定：易变性，易失活，易降解。（3）提取纯化工艺复杂、生产技术难度高；（4）生理副作用常有发生。

第二章基因工程制药

填空题

1.基因工程药物制造的主要步骤是：目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验。

2.目的基因获得的主要方法是反转录法、反转录-聚合酶链反应法和化学合成法。

3.基因表达的微生物宿主细胞分为2大类。第一类为原核细胞，目前常用的主要有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉素；第二类为真核细胞，常用的主要有酵母、丝状真菌。

4.基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定性的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定性和结构不稳定性；基因工程菌的不稳定性至少维持 25 代以上。

5.基因工程菌的培养方式主要有分批培养；补料分批培养；连续培养；透析培养和固定化培养；

6.高密度发酵一般是制培养液中工程菌的浓度在 50g DCW/L 以上，理论上的最高值可达 200g DCW/L 。

7.影响高密度发酵的因素有培养基；溶氧浓度； PH ；温度和代谢副产物。

8.基因工程药物的分离纯化一般不应超过5个步骤，包括细胞破碎；固液分离；浓缩与初步纯化；高度纯化和成品加工。

9.在基因工程药物分离纯化过程中，分离细胞碎片比较困难，可用离心；膜过滤和双水相分配的方法，使细胞碎片分配在一相，目标药物分配在另一相从而达到初步分离的目的。

10. 人工化学合成DNA新形成的核苷酸链的合成方向是 3’→ 5’，合成的DNA 5’末端是磷酸酯键， 3’末端是 -OH

选择题

1、凝胶过滤法是依赖（A ）来分离蛋白组分。 A、分子大小 B、带电状态 C、分子质量 D、解离状态

2、在工程菌发酵过程中，选用那种糖会对lac启动子有阻遏作用。（A ） A、甘油 B、葡萄糖 C、甘露糖 D、饴糖

3. 可用于医药目的的蛋白质和多肽药物都是由相应的（ B ）合成的 A RNA B 基因 C 氨基酸 D 激素

4. 用反转录法获得目的基因，首先必须获得（D） A tRNA B cDNA C rRNA D mRNA

5.那一类细菌不属于原核细胞（ C ） A 大肠杆菌 B 枯草芽孢杆菌C 酵母D 链霉菌

6.基因工程菌的生长代谢与（ D ）无关 A 碳源 B RNA聚合酶C 核糖体 D产物的分子量

7.基因工程菌的稳定性至少要维持在（B ）以上 A 20 B 25 C 30 D 40

8.基因工程菌的高密度发酵过程中，目前普遍采用（ A ）作为发酵培养基的碳源

A 葡萄糖

B 蔗糖

C 甘油 D甘露醇

9. 基因工程药物多为胞内产物，分离提取时需破碎细胞。化学破碎法是常用的方法，但（ D ）不是化学破碎细胞的方法。 A 渗透冲击B 增溶法C 脂溶法D 酶溶法

10 下列那种色谱方法是依据分子筛作用来纯化基因工程药物（C） A 离子交换色谱 B 亲和色谱C 凝胶色谱 D气相色谱

名词解释

1.基因工程技术

也可称为DNA重组技术，将所要重组对象的目的基因插入载体、拼接、转入新的宿主细胞，构建工程菌，实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。 2.基因工程药物

利用DNA重组技术生产出来的药物被称为基因工程药物。 3.基因表达

基因表达是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。 3.高密度发酵

一般是指培养液中工程菌的菌体浓度在 50g DCW/L 以上的发酵过程，理论上的最高值可达 200g DCW/L。

简答题

1.简述基因工程生产药品的优点

（1）利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽，为临床使用建立有效的保障；

（2）可以提供足够数量的生理活性物质，以便更深入的进行研究，从而扩大这些物质的应

用范围；

（3）可以挖掘更多的内源性生理活性物质；

（4）可对内源性生理活性物质的不足之处进行改造；（5）可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。

2. 根据真核基因在原核细胞中表达的特点，表达载体必须具备那些条件？表达载体必须具备下列条件：（1）能够独立的复制；

（2）具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选；（3）应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RAN聚合酶所识别；（4）应具有阻遏子（5）应具有很强的终止子

（6）所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。

3.简述影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素：（1）外源基因的剂量

（2）外源基因的表达的表达效率（3）表达产物的稳定性（4）细胞的代谢负荷（5）工程菌的培养条件

4.为了提高基因工程菌的质粒稳定性，可采用那些主要方法？为了提高基因工程菌的质粒稳定性，可采取：（1）选择合适的宿主菌；（2）选择合适的载体；（3）选择压力；

（4）分阶段控制培养；（5）控制培养条件；（6）固定化技术。

5.影响基因工程菌培养工艺的主要因素有那些？主要因素有：

（1）培养基的影响（2）接种量的影响（3）温度的影响（4）溶解氧的影响（5）诱导时机的影响

（6）诱导表达程序的影响（7）PH的影响

6.建立基因工程药物分离纯化工艺时，应该考虑那些因素？应考虑下列因素：

（1）含目的的产物的初始物料的特点；（2）物料中杂质的种类和性质；（3）目的产物特性；（4）产品的质量要求

7.基因工程技术生产的目标产物是多肽和蛋白质类化合物，这些产品有什么特点？

（1）目的产物在初始物料中含量低（2）含目的产物的初始物料组成复杂

（3）目的产物的的稳定性差，对酸碱热等外界因素敏感；（4）种类繁多

（5）产品的质量要求

8、基因工程菌的发酵与传统的微生物发酵有什么不同？简单分析其温度对发酵的影响。

9.分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有那些？它们的原理是什么？

分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有：离子交换色谱，疏水色谱，亲和色谱和凝胶过滤色谱；

离子交换色谱，以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子和交换剂上的平衡离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种色谱方法；

疏水色谱，利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异对蛋白质组分进行分离的色谱方法；

亲和色谱：利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质；

凝胶过滤色谱，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相色谱方法。

10. 影响高密度发酵的因素有那些？（1）培养基为满足菌体生长和外源蛋白表达的需求，常需投入几倍于生物量的基质，为了达到理想的效果，需要对培养基的营养物质的配比进行优化。（2）溶氧浓度溶解氧的浓度过高或过低都会影响细菌的代谢，因而对菌体生长和产物表达影响很大。要保持适宜的溶氧浓度，需要确定发酵罐的通气量和搅拌速度。（3）