化学发光试剂鲁米诺的一种特殊合成方法

鲁米诺反应原理

鲁米诺反应原理1. 背景介绍鲁米诺反应是一种特殊的化学发光反应，以发光强度大、发光时间长、检测敏感准确等优点而被广泛应用于分析化学领域。

鲁米诺反应原理基于化学荧光的产生过程，在特定条件下形成单次电子氧化还原反应，生成激活态的鲁米诺分子，从而释放出荧光光子。

2. 化学反应鲁米诺反应的化学过程包括底物氧化、荧光发射等步骤，主要离子包括鲁米诺、过氧化氢和碱性条件下的氧。

其反应方程式如下所示：3O2−+C13H8N2O2→13CO2+10H2O+2N23. 反应机理鲁米诺反应的机理涉及鲁米诺分子和过氧化氢的反应，主要过程如下： 1. 过氧化氢与鲁米诺反应生成二氧化鲁米诺离子。

2. 二氧化鲁米诺离子通过光电荷分离得到激发态鲁米诺分子。

3. 激发态鲁米诺分子通过发射荧光光子完成化学反应。

4. 应用领域鲁米诺反应广泛应用于环境监测、生物医学以及农业等领域，主要用于检测和分析含氧化还原物质的样品。

其高灵敏度、迅速反应及定量测量的特点，使其在实际应用中具有重要意义。

5. 结论鲁米诺反应原理基于化学发光的特性，通过鲁米诺与过氧化氢的反应产生荧光现象，实现了对氧化还原物质的快速检测和分析。

该反应的机理复杂而又有足够的可预测性，为科研和应用领域提供了可靠的分析手段。

6. 参考文献1.Smith, A.M., Mancini, M.C. & Nie, S. (2009). Bioimaging: Secondwindow for in vivo imaging. Nature nanotechnology, 4(11), 710-711.2.Liu, J., Lu, Y., & Zhang, S. (2006). The early days of chemistry andphysics of luminescent nanocrystals: from discovery to the recentadvancements. Language science, 20(12), 881-892.。

鲁米诺化学发光分析研究综述

鲁米诺化学发光分析研究综述化学发光是化学反应体系中的某些分子，如反应物、中间体或反应产物吸收了化学反应释放出的化学能，由基态跃迁至激发态，当其从激发态返回基态时所产生的光辐射[1]。

化学发光法则是根据化学反应的发光强度或发光总量确定相应组分含量的一种分析方法。

同荧光法相比，化学发光法不需要外来的光源，减少了拉曼散射和瑞利散射，降低了噪音信号的干扰，提高了检测的灵敏度[4]，扩大了线性范围。

鲁米诺（5-氨基-2，3-二氢-1，4-二杂氮萘二酮，也称3-氨基邻苯二甲酰肼）因其结构简单、易合成、水溶性好，以及发光量子效率高等特点，鲁米诺是最常用的液相化学发光试剂之一。

自从1928年albrecht首次报道了鲁米诺与氧化剂在碱性溶液中的化学发光反应以来，人们对该化学发光体系的研究就一直十分活跃，使得该化学发光体系被应用于许多领域之中。

white等通过比较鲁米诺体系的化学发光光谱和3-氨基邻苯二甲酸根离子的荧光光谱，提出鲁米诺化学发光反应的发光体。

在碱性条件下，鲁米诺首先被氧化为叠氮酮，然后形成桥式六元环过氧化物中间体，分解后以光子的形式释放出能量产生化学发光。

下面笔者简要介绍鲁米诺化学发光反应的机理，详细地总结近五年来鲁米诺化学发光体系的应用进展。

鲁米诺化学发光体系的分析应用主要基于以下几个方面。

鲁米诺-过氧化氢化学发光体系应用最为广泛。

许多过渡金属离子对鲁米诺-过氧化氢化学发光反应具有很好的催化作用。

李正平等发现铁蛋白催化，产生很强的化学发光信号，建立简便灵敏的检测铁蛋白的化学发光方法。

方法的线性范围为0.5～10μg/l，检出限为0.36μg/l，为铁蛋白作为纳米粒子标记物及直接检测提供一种新的途径。

戴路等报道了一种新的测定雌性激素的流动注射化学发光方法。

在碱性条件下，金银复合纳米粒子能显著地增强鲁米诺-过氧化氢化学发光，而雌性激素能明显地抑制该体系的化学发光强度，建立了测定天然雌激素（雌酮、雌二醇和雌三醇）的化学发光方法。

鲁米诺的制备实验报告

鲁米诺的制备实验报告实验报告：鲁米诺的制备实验一、实验目的本实验旨在通过化学反应制备鲁米诺，并观察其发光性质。

二、实验原理鲁米诺是一种发光化合物，通常用于化学发光实验。

鲁米诺分子结构中含有苯并噻吩和吡咯环，它们共同构成了鲁米诺分子的核心结构。

实验中，我们将使用一系列化学试剂和反应条件将苯并噻吩和吡咯反应，制备鲁米诺。

三、实验步骤1. 在实验室通风橱中，准备试剂与设备。

2. 将50 mL 的无水四乙酸铊溶液倒入200 mL的圆底烧瓶中，并加入约0.2 g 的苯并噻吩。

加适量的四氢呋喃溶剂使得苯并噻吩完全溶解。

3. 在实验室通风橱的适当位置，将2.5 g 的溴溶液（48％溴溶液）滴加到苯并噻吩溶液中。

4. 缓慢加入0.4 g的吡咯、6 mL的浓氢氧化钠溶液和30 mL 的无水乙醇。

此时，反应溶液呈暗红色，通入氮气。

继续搅拌30 min。

5. 使用橡皮塞封住烧瓶口，并将其浸入水浴中。

在85C下搅拌反应液60分钟。

6. 在适当的位置用水冷却，然后将反应液转移到500 mL锥形瓶中。

7. 加入适量的浓HCl ，产生大量气泡。

8. 使用酸性石炭酸钠溶液中和反应液。

9. 过滤过滤杂质，然后将过滤液放在冷柜中冷藏12小时。

10. 准备稻草酸钠溶液，用稻草酸钠溶液洗涤上锥形瓶中的粉末沉淀三次，每次30毫升。

11. 将纯净的鲁米诺粉末置于真空干燥器中，干燥12小时，最后将其称重，得到制备的鲁米诺产量。

四、实验结果通过上述实验步骤可以制备出一定量的鲁米诺产物。

经过称量，得到鲁米诺的产量为x克。

五、实验讨论与思考鲁米诺的制备实验是一个较为复杂的化学反应过程。

在实验中，苯并噻吩与吡咯在适当的反应条件下，经过一系列的反应步骤，得到了鲁米诺产物。

通过测定鲁米诺的产量，我们可以评估反应的效果。

由于实验中使用的试剂和反应条件较多，实验中需要注意操作方法的准确性和谨慎性，避免对人体产生伤害和化学品的浪费。

同时，鲁米诺在储存和使用过程中需要注意防潮、防晒和避免高温等因素，以保证其性质和效果的稳定性。

化学发光-吖啶酯，鲁米诺

化学发光-吖啶酯，鲁米诺化学发光 (ChemiLuminescence ，简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。

化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。

体系产生化学发光，必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。

一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件：第一是：该反应必须提供足够的激发能（对于蓝光发射需300kj.mol-1,红光需150kj.mol-1），导致电子从基态跃迁至激发态。

第二是：化学反应的能量至少能被一种物质所说接受并使之生成激发态。

第三是：处于激发态的分子或原子必须具有一定的化学发光量子效率时期能释放出光子，或能转移它的能量给另一个分子使之处于激发态并使发出光子化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。

对于一般化学发光反应，值约为 10 － 6 ，较典型的发光剂，如鲁米诺，发光效率可达 0 . 01 ，发光效率大于 0 。

01的发光反应极少见。

现将几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。

1. 鲁米诺及其衍生物鲁米诺（3—氨基—邻苯甲酰肼,1）,异鲁米诺（2）及其衍生物（如氨基丁基乙基邻苯甲酰肼，ABENH,3）在发光分析中被使用。

鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。

在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。

最常用催化剂是金属离子，在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏度。

化学发光剂鲁米诺的合成及其发光试验

化学发光剂鲁米诺的合成及其发光试验
苏宇;钟增培
【期刊名称】《川北医学院学报》
【年(卷),期】1993(0)1
【摘要】鲁米诺是一种化学发光物质。

作为化学发光分析法中的一种重要试剂。

它广泛地应用于工农业生产中,在医学、药学方面也有较高的应用价值。

本文介绍了作者从邻苯二甲酸酐开始合成鲁米诺的方法以及产品的红外、核磁共振、质谱的分析结果和发光试验。

【总页数】3页(P15-17)
【作者】苏宇;钟增培
【作者单位】[1]川北医学院化学教研室;[2]中山大学化学系
【正文语种】中文
【中图分类】R
【相关文献】
1.抗氧化剂对鲁米诺—亚硫酸钠化学发光体系发光强度的影响 [J], 高宏峰
2.化学氧化合成聚（苯胺_鲁米诺）复合纳米线的电化学发光特性研究 [J], 王艳杰;李桂新;郑行望
3.还原剂与鲁米诺化学发光反应的研究：Ⅲ.钼（Ⅲ）—鲁米诺化学发光反应 [J], 吕九如;张新荣
4.恒电位电生还原剂与鲁米诺化学发光分析研究 [J], 杨玲娟;王小芳;吕九如
5.还原剂与鲁米诺化学发光反应的研究(Ⅱ)——钒(Ⅱ)-鲁米诺化学发光反应 [J], 吕九如;张新荣;朱智甲;章竹君;李美青
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鲁米诺实验的原理和步骤

鲁米诺实验的原理和步骤
鲁米诺实验是一种观察光的发射与吸收现象的实验方法。

其原理基于化学发光反应，在化学发光反应中，化学反应的放出的能被固体颗粒吸收，然后再重新辐射出来，使得固体颗粒呈现出短暂的发光现象。

鲁米诺实验的步骤主要包括以下几个部分：
1. 准备试剂：鲁米诺试剂和氧化剂。

鲁米诺试剂是一种具有发光性质的有机化合物，可以在受激发前或后发光。

氧化剂可以提供能量激发鲁米诺试剂。

2. 混合试剂：将鲁米诺试剂和氧化剂混合均匀。

3. 显示发光现象：当试剂混合后，开始发生化学反应，释放出能量，使鲁米诺试剂激发发光。

实验中可以观察到闪光或弱发光的现象。

4. 分析发光现象：通过调整试剂的浓度或添加其他物质，可以分析影响发光强度和发光时间的因素。

鲁米诺实验的原理和步骤是基于光的发射与吸收现象进行的，通过化学反应的放出能量来激发鲁米诺试剂的发光。

这种实验可以用于研究化学反应动力学、凝聚态物理学以及环境与化学分析等领域。

鲁米诺与化学发光

不断搅拌，5 min后，稍微冷并加入2.6 mL冰醋酸，冰水浴冷却至室温，
析出黄色晶体，过滤、洗涤后收集产品。
鲁米诺的化学Leabharlann 光在100 mL磨口锥形瓶中依次加入4 g KOH、20 mL DMSO和0.2 g未干燥的鲁米诺，塞上瓶塞。剧烈摇荡使溶液与瓶内空气充分接触，此时，在暗处就能观察到锥形瓶中发出微弱的蓝色荧光；继续摇振并不时打开塞子让新鲜空气进入，瓶中荧光会越来越亮。将不同荧光染色剂（1-5 mg）分别溶于2-3 mL水中，并加入到鲁米诺的二甲亚砜溶液就可观察到不同颜色的荧光。无染料：蓝白色；曙红：橙红色；罗丹明B：绿色；荧光素：黄绿色。
鲁米诺与化学发光
陕西师范大学化学化工学院
实验目的
掌握鲁米诺制备所涉及的酰胺化、硝基还原基本实验操作。了解鲁米诺发光的原理。
实验原理
鲁米诺制备鲁米诺化学发光
鲁米诺的制备
1.3 g 3-硝基邻苯二甲酸和2 mL 10% 水合肼加入装有温度计和回流冷凝管的100 mL三口烧瓶中，三口烧瓶的另一支口通过安全瓶与水泵相连。电热帽加热至固体溶解后，加入4 mL二缩三乙二醇。开启循环水泵并快速加热三口瓶，使反应体系温度维持在210-220oC约2 min，打开安全瓶旋塞使体系与大气相通，停止加热并关闭水泵。反应液冷却至100oC，加入约20 mL热水，进一步冷却至室温，过滤，收集黄色晶体3-硝基-邻苯二甲酰肼中间体。将3-硝基-邻苯二甲酰肼中间体转移至100 mL烧杯，加入6.5 mL10% NaOH溶液，搅拌使固体溶解，加入4 g 水合连二硫酸钠，加热至沸腾并

化学发光剂鲁米诺的合成

化学发光剂鲁米诺的合成化学发光剂?鲁米诺的合成一、实验目的学习芳烃硝化反应的基本理论和硝化方法，加深对芳烃亲电取代反应的理解，进一步掌握重结晶操作技术;了解鲁米诺化学发光原理。

二、实验原理3-硝基-邻苯二甲酸(3-Nitrophthalic Acid)是制备化学发光剂鲁米诺的原料，经脱水后得到的3-硝基-邻苯二甲酸酐可用于有机合成和醇类测定。

邻苯二甲酸酐经直接硝化，既可获得3-硝基-邻苯二甲酸，同时也会得到4-硝基-邻苯二甲酸。

在3-硝基-邻苯二甲酸分子中，硝基对邻位羧基影响很大，它和羧酸会形成分子内氢键，加上相邻二羧基之间存在的分子内氢键，对整个羧酸分子的离解产生显著的抑制作用，从而导致其水溶性下降。

在4-硝基-邻苯二甲酸中，硝基与羧酸之间难形成分子内氢键，因而，它在水中的离解度相对要大一些，水溶性也好一些。

邻苯二甲酸酐硝化后产生的异构体的分离正是利用它们在水溶性上的差异加以解决的。

反应式:许多化学反应都是以热的形式释放能量，也有一些化学反应主要是以光的形式释放能量，鲁米诺(Luminol)在碱性条件下与氧分子的作用就是一个典型的化学发光例子。

一般认为，鲁米诺在碱性溶液中转变为二价负离子，后者与氧分子反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定而发生分解，导致形成一种具有发光性能的电子激发态中间体。

其过程如下:现已证实，发光体是3-氨基-邻苯二甲酸盐二价负离子的激发单线态。

当激发单线态返回至基态，就会产生荧光。

激发态中间体也可将能量传递至激发态能量较低的受体分子，受激发的受体分子再通过发出荧光释放能量恢复到基态。

不同受体分子的激发态能量的差异使其发出的荧光各不相同，这些现象在本实验中可观察得到。

三、药品邻苯二甲酸酐、二缩三乙二醇、10,水合肼、二水合连二亚硫酸钠、二甲亚砜、浓硫酸、发烟硝酸、冰醋酸、10,氢氧化钠、氢氧化钾四、实验操作1、3-硝基-邻苯二甲酸的合成在100mL三口烧瓶上，配置磁力搅拌器、温度计、冷凝管和滴液漏斗，分别加入12ml浓硫酸和12g邻苯二甲酸酐。

化学发光剂鲁米诺的合成

化学发光剂鲁米诺的合成化学发光剂?鲁米诺的合成一、实验目的学习芳烃硝化反应的基本理论和硝化方法，加深对芳烃亲电取代反应的理解，进一步掌握重结晶操作技术;了解鲁米诺化学发光原理。

二、实验原理3-硝基-邻苯二甲酸(3-Nitrophthalic Acid)是制备化学发光剂鲁米诺的原料，经脱水后得到的3-硝基-邻苯二甲酸酐可用于有机合成和醇类测定。

邻苯二甲酸酐经直接硝化，既可获得3-硝基-邻苯二甲酸，同时也会得到4-硝基-邻苯二甲酸。

在3-硝基-邻苯二甲酸分子中，硝基对邻位羧基影响很大，它和羧酸会形成分子内氢键，加上相邻二羧基之间存在的分子内氢键，对整个羧酸分子的离解产生显著的抑制作用，从而导致其水溶性下降。

在4-硝基-邻苯二甲酸中，硝基与羧酸之间难形成分子内氢键，因而，它在水中的离解度相对要大一些，水溶性也好一些。

邻苯二甲酸酐硝化后产生的异构体的分离正是利用它们在水溶性上的差异加以解决的。

反应式:许多化学反应都是以热的形式释放能量，也有一些化学反应主要是以光的形式释放能量，鲁米诺(Luminol)在碱性条件下与氧分子的作用就是一个典型的化学发光例子。

一般认为，鲁米诺在碱性溶液中转变为二价负离子，后者与氧分子反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定而发生分解，导致形成一种具有发光性能的电子激发态中间体。

其过程如下:现已证实，发光体是3-氨基-邻苯二甲酸盐二价负离子的激发单线态。

当激发单线态返回至基态，就会产生荧光。

激发态中间体也可将能量传递至激发态能量较低的受体分子，受激发的受体分子再通过发出荧光释放能量恢复到基态。

不同受体分子的激发态能量的差异使其发出的荧光各不相同，这些现象在本实验中可观察得到。

三、药品邻苯二甲酸酐、二缩三乙二醇、10,水合肼、二水合连二亚硫酸钠、二甲亚砜、浓硫酸、发烟硝酸、冰醋酸、10,氢氧化钠、氢氧化钾四、实验操作1、3-硝基-邻苯二甲酸的合成在100mL三口烧瓶上，配置磁力搅拌器、温度计、冷凝管和滴液漏斗，分别加入12ml浓硫酸和12g邻苯二甲酸酐。

鲁米诺

鲁米诺（luminol），又名发光氨，英文名5-Amino-2，3-dihydro-1，4-phthalazinedione。

它常温下是一种黄色晶体或者米黄色粉末，是一种比较稳定的化学试剂。

它的化学式是C8H7N3O2 结构式在下面的图图里面有。

同时，鲁米诺又是一种强酸，对眼睛、皮肤、呼吸道有一定刺激作用。

法医学上，鲁米诺反应又叫氨基苯二酰一胼反应，可以鉴别经过擦洗，时间很久以前的血痕。

生物学上则使用鲁米诺来检测细胞中的铜、铁及氰化物的存在。

3-硝基邻苯二甲酸可作为鲁米诺的合成原料。

3-硝基邻苯二甲酸与肼在高沸点溶剂（如二甘醇）中发生缩合反应，失去一分子水，生成3-硝基邻苯二甲酰肼。

然后以保险粉还原3-硝基邻苯二甲酰肼中的硝基，得到3-氨基邻苯二甲酰肼，即是鲁米诺。

鲁米诺只有用氧化剂处理过才会发光。

通常使用双氧水和一种氢氧化物碱的混合水溶液作为激发剂。

在铁化合物催化下，双氧水分解为氧气和水：2 H2O2 → O2 + 2 H2O实验室中常以铁氰化钾作为催化剂铁的来源，而法医学上的催化剂则恰好是血红蛋白中的铁。

很多生物系统中的酶也可催化过氧化氢的分解反应。

鲁米诺与氢氧化物反应时生成了一个双负离子（Dianion），它可被过氧化氢分解出的氧气氧化，产物为一个有机过氧化物。

该过氧化物很不稳定，立即分解出氮气，生成激发态的3-氨基邻苯二甲酸。

激发态至基态转化中，释放的能量以光子的形式存在，波长位于可见光的蓝光部分。

在检验血痕时，鲁米诺与血红素（hemoglobin，血红蛋白中负责运输氧的一种蛋白质）发生反应，显出蓝绿色的荧光。

鲁米诺的灵敏度可以达到一百万分之一。

即1滴血混在999，999滴水中时也可以被检验出来。

不过它与其他具有氧化性的物质也发生反应，但是显示的颜色和显色的时间长短都是不同的。

即使犯罪现场的血迹已经被擦过或清除过，调查者依旧可以使用鲁米诺找到它们的位置。

实际上，调查者在要调查的区域内喷洒鲁米诺和激发剂溶液，血中的铁立即催化鲁米诺的发光反应，使其产生蓝色光芒。

高考化学羧酸与羧酸衍生物一轮复习小题训练(原卷版)

羧酸与羧酸衍生物1．下列物质中，属于饱和一元脂肪酸的是()A．乙二酸B．苯甲酸C．硬脂酸D．石炭酸2．下列叙述中，错误的是()A．CH3COOCH3的名称是乙酸甲酯B．酯的官能团是酯基。

C．乙酸乙酯分子中含有甲基、乙基和酯基D．酯的分子中一定有—COOH3．下列各项结构简式与名称不相符的是( )A．CH3COOCH3乙酸甲酯B．HCOOC2H5 甲酸乙酯C．乙烯酸甲酯CH2=CHCOOCH3 D．甲酸甲酯CH3OOCH4．某有机物的结构简式为，则它是()A．饱和二元羧酸B．芳香酸C．脂环酸D．高级脂肪酸5．某羧酸酯的分子式为C18H26O5,1 mol 该酯完全水解可得到1 mol羧酸和2 mol乙醇，该羧酸的分子式为()A．C14H18O5B．C14H16O4 C．C16H22O5D．C16H20O56．下列有机物中，互为同系物的是()A．甲酸与油酸B．乙酸和丙烯酸C．硬脂酸和油酸D．甲酸与硬脂酸7．乙酸乙酯在NaOH的重水(D2O)溶液中加热水解，其产物是()A．CH3COOD、C2H5OD B．CH3COONa、C2H5OD、HODC．CH3COONa、C2H5OH、HOD D．CH3COONa、C2H5OD、H2O8．有关“油”的说法正确的是( )A．油脂包括矿物油、植物油与动物油B．油脂的氢化与油脂的皂化都属于加成反应C．植物油能使碘酒褪色D．油脂属于高分子化合物，可以发生水解反应9．油脂水解后的一种共同产物是()A．硬脂酸B．甘油C．软脂酸D．油酸10．某些高温油炸食品含有丙烯酰胺。

过量的丙烯酰胺可引起食品安全问题。

关于丙烯酰胺叙述不正确的是( )A．能使酸性KMnO4溶液褪色B．能发生加聚反应C．能与乙醇发生酯化反应D．能与氢气发生加成反应11．近期，我国科学家合成了一种高能量密度材料，该成果发表在《Nature》上。

合成该材料所需主要原料为草酰二肼(结构如图所示)。

下列有关草酰二肼的说法正确的是( ) A．分子中含有三种官能团B．同时具有碱性C．完全水解可得2种有机化合物D．与联二脲()互为同系物1．将－CH3、－OH、－COOH、四种原子团两两组合，所得化合物的水溶液呈酸性的共有()A．3种B．4种C．5种D．6种2．分子式为C5H10O2并能与饱和NaHCO3溶液反应放出气体的有机物有(不含立体异构)()A．3种B．4种C．5种D．6种3．有机物A的结构简式是，下列有关A的性质的叙述中错误的是()A．A与金属钠完全反应时，两者物质的量之比是1∶3B．A与氢氧化钠完全反应时，两者物质的量之比是1∶3C．A能与碳酸钠溶液反应D．A既能与羧酸反应，又能与醇反应4．如图为实验室制取少量乙酸乙酯的装置图。

增强化学发光法(ECL)

增强化学发光法(ECL)Ecl 显色原理：鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。

在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。

试验步骤：1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。

2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。

3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。

4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。

5）显影、定影。

6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到最佳结果。

注意：荧光在一段时间后会越来越弱。

记得全程手套操作，一则避免手印污染影响结果，二则保护自己（未交联的丙烯酰胺、甲醛等等虽不立即致命但都会慢慢毒害你的身体）1. 如果WB前没有可参考的资料--比如不知道是否有表达，比如抗体少还要摸条件（稀释度），可以用剪膜剩下的边角料来先做几组点杂交摸条件，省点时间省点试剂；2. 去掉积层胶后，预染的Marker可用以识别胶上下方向和膜的正反面（预染M arker如果照着说明书用量，有可能在电泳时看不到条带，但转膜时有浓缩效应而且背景白就可以看到了。

如果要电泳能看到就要参考电泳的那个用量，或者多加1-2倍的量）；如果目标蛋白小，指示剂也可以指示方向，但是如果蛋白大，指示剂已经跑出去了，就要留意分清胶上下方向，切个小角是常用的方法。

膜和滤纸一起裁最好（不过滤纸上下叠多了膜不好剪，硝纤膜容易裂，用利刀+尺子+垫厚报纸划比较容易）尽量和胶一样大小，胶用纯水冲洗一下后用电泳缓冲液平衡过再量。

我自己通常剪的时候会故意长宽各比胶少1mm，保证膜和胶不会碰到对方背后的滤纸就好。

3. 对于特别小的蛋白，tricine SDS-PAGE电泳有助于提高蛋白大小在1KD-20 KD间的分辨率，不用甘氨酸，丙烯酰胺的浓度也不用太高（可参考2004年中国生物工程杂志上有一篇文章（有效分离1kD小肽的Tricine-SDS-PAGE方法）4. 转膜前胶要在转移缓冲液里平衡一下防止胶变形，也有助于进一步去掉可能有碍转膜的杂质。

02 化学发光剂─鲁米诺的合成

[3] 水合肼极毒并具有强腐蚀性，应避免与皮肤接触。 [4] 停止加热前，一定要先打开安全瓶上的活塞，使反应体系与大气相通，否则容易发生倒吸。
六、实验反思总结第一步控温很重要，一定注意不能超过 130°C，第一次加水溶解的时候一定要用冷水，防治主要产物溶解；肼化的时候温度一定不能高，200°C 沸腾一两分钟就行，太久了产率会下降很多。还原的时候最好用三氧化硫脲或者水合肼加三氯化铁，肼化的时候到 200°C 左右用余热可以，但是至少要沸腾一分钟。第一次做的产物是膏状的，不仅产率低，抽滤分离的时候也不好分离。所以又做了一次第二次做的时候，由于蛇形冷凝管漏水，导致硝酸、硫酸被稀释，产物 3-硝基邻苯二甲酸量明显减少且是絮状的，不是结晶的。（下次做实验前一定要检查仪器是否报废！）做到了 3-硝基邻苯二甲酸中间体下一步，肼化的时候由于加水量比第一次少得多，丙三醇没有加太多就很容易使温度达到了 200°C 左右，而且温度比较好控制，第二次肼化后用的是水合肼加三氯化铁还原的，效果比第一次的保险粉要好，用量较低。而且在一加入冰醋酸的时候马上就有鲁米诺晶体析出，在抽滤的率米诺滤液中，几乎检查不出鲁米诺的存在，更主要的是这次抽滤的时候非常快速，干净。
类别
编号 02
电石游泳实验室
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有机合成实验报告
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装
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化学发光剂─鲁米诺的合成
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… 订
Synthesis of chemiluminescent agent - Lumino
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学院名称：化学与环境工程学院

鲁米诺的合成方法

鲁米诺的合成方法鲁米诺又叫发光氨，CSA号为521-31-3。

化学名称为3-氨基-苯二甲酰肼。

在常温状态下呈现出黄色粉末，是一种很稳定，研发生产多年人工合成的有机化合物。

同时它也是刑侦的一种检测工具，可以在犯罪现场检测血迹，可以让肉眼没办法观察到的血液使其发光，呈现出血迹痕迹，方便于记录与侦查。

目前已公开的制备鲁米诺与异鲁米诺的工艺有多种，但是多种制备方法中要么存在废料污染，不符合绿色环保要求，要么就是工艺繁琐，设备要求高，要么原料成本高，要么存在不必要的人工成本，多多少少存在些问题，不能做到尽善尽美。

为适应鲁米诺类试剂的广阔市场需求，一种工艺简洁、成本低、绿色环保的工业化生产方式十分重要。

介绍一种最新报道的鲁米诺或异鲁米诺的合成方法。

这种利用一锅法合成鲁米诺或异鲁米诺的方法，具体步骤如下：步骤一：以3-硝基邻苯二甲酸或4-硝基邻苯二甲酸为起始原料，与尿素在有机溶剂中回流3-10小时，3-硝基邻苯二甲酸或4-硝基邻苯二甲酸与尿素的摩尔比为1:1-3，得到含3-硝基邻苯二甲酰亚胺或4-硝基邻苯二甲酰亚胺的混合产物A；步骤二：向混合产物A中加入水合肼水溶液，起始原料3-硝基邻苯二甲酸或4-硝基邻苯二甲酸与水合肼的摩尔比为1:1-3，加热回流1-5小时，得到含3-硝基邻苯二甲酰肼或4-硝基邻苯二甲酰肼的混合产物B；步骤三：向混合产物B中加入催化剂和还原剂，起始原料3-硝基邻苯二甲酸或4-硝基邻苯二甲酸与还原剂的摩尔比为1:1.5-4，在温度为30-50℃下还原反应3-8小时，得到含鲁米诺或异鲁米诺的混合产物C，混合产物C经精制后，得到鲁米诺或异鲁米诺。

这种制备方法将三步反应在同一锅内完成，且中间产物无需进行任何纯化处理，直接得到产物，不仅具有操作方便、工艺简洁的优点，而且得到的鲁米诺以及异鲁米诺的收率和纯度高，能充分满足产品工业化生产的需求以及市场的需求。

另外，这种合成方法所需的试剂均为常规试剂，制备过程中使用的设备也都是常规设备，原料成本和设备成本都较低，适合工业化化大生产。

化学发光试剂鲁米诺

化学发光试剂鲁米诺简介：鲁米诺(Luminol)，又名发光氨。

一种在犯罪现场检测肉眼无法观察到的血液，可以显现出极微量的血迹形态(潜血反应)。

化学名称为5-氨基-苯二甲酰肼。

常温下是一种蓝色晶体或者苍黄色粉末，是一种比较稳定的人工合成的有机化合物。

化学式为C8H7N3O2。

同时，鲁米诺是一种强酸，对眼睛、皮肤、呼吸道有一定刺激作用。

由于血红蛋白含有铁，而铁能催化过氧化氢的分解，让过氧化氢变成水和单氧，单氧再氧化鲁米诺让它发光。

所以鲁米诺广泛应用于刑事侦查、生物工程、化学示踪等领域。

法医学上，鲁米诺反应可以鉴别经过擦洗，时间很久以前的血痕。

生物学上则使用鲁米诺来检测细胞中的铜、铁及氰化物的存在。

NHNHONH 2鲁米诺【英文名】3-Aminophthalhydrazide【中文名】鲁米诺/3-氨基苯二甲酰肼/发光氨【CAS#】521-31-3【分子量】177.16【分子式】C8H7N3O2【外观】浅黄色粉末【形状】浅蓝粉末【含量】≥98%(HPLC)【熔点】>300°C(lit.)【沸点】309.07°C(rough estimate)【存储条件】室温，避光防潮【类别】有毒物品【毒性分级】中毒【储运特性】库房通风低温干燥【灭火剂】干粉、泡沫、砂土、二氧化碳,雾状水【化学性质】易溶于碱液，能溶于稀酸，几乎不溶于水，难溶于醇。

中性或淡酸性溶液暴露在紫外光中时显强烈的亮蓝色荧光。

【用途】化学发光试剂，常用于化学发光免疫分析，如金属阳离子和血液检测。

作化学分析试剂、指示剂。

化学发光分析检测试剂(如测定金属阳离子或血)。

用于化学发光分析，如：金属阳离子、血液及糖皮质激素。

发光测试:化学发光试剂及指示剂，常用于化学发光分析，如金属阳离子、血液免疫等等。

【发光率检测】最适荧光波长为425nm（在60mMK2S2O8,100mK2CO3,PH11.5溶液中检测化学发光率）。

理论即使犯罪现场的血迹已经被擦过或清除过，法医依旧可以使用鲁米诺找到它们的位置。

高中化学选修三第五章《合成高分子》知识点

一、选择题1．高分子P是一种聚酰胺纤维，广泛用于各种刹车片，合成路线如图所示，下列说法正确的是A．化合物A的核磁共振氢谱有三组峰B．化合物B与乙二酸互为同系物C H N D．高分子P含有三种官能团C．化合物C的分子式为6102答案：D解析：A．由高分子P倒推，B为对苯二甲酸，A氧化生成B，则A为对二甲苯，结构对称，只有2种等效氢，所以核磁共振氢谱有二组峰，故A错误；B．化合物B为对苯二甲酸，分子中含有苯环，乙二酸分子中不含苯环，二者结构不相似，且二者分子组成不相差整数个CH2原子团，不互为同系物，故B错误；C H N，故C错误；C．对硝基苯胺被还原为对苯二胺，则C为对苯二胺，分子式为862D．由高分子P结构简式可知，分子中含有肽键、羧基、氨基三种官能团，故D正确；答案选D。

2．中国科学家率先合成出可降解塑料：聚二氧化碳，对其判断合理的是CO不同B．属于纯净物A．含碳量与2C．会产生白色污染D．结构可表示为答案：D解析：A．聚二氧化碳是通过二氧化碳加聚反应得到的，其含碳量与二氧化碳相同，A项错误；B．聚二氧化碳属于高聚物，是混合物，B项错误；C．聚二氧化碳是降解塑料，可以降解不会产生白色污染，C项错误；D．聚二氧化碳是通过二氧化碳加聚反应得到的，结构可表示为，D项正确；答案选D。

3．顺-1，4-聚异戊二烯，又称“天然橡胶”。

合成顺式聚异戊二烯的部分流程如图。

下列说法正确的是23Al O ①Δ−−−→N 催化剂Δ−−−−−→顺式聚异戊二烯 A ．N 是顺式异戊二烯B ．M 存在顺反异构体C ．N 分子中最多有10个原子共平面D ．顺式聚异戊二烯的结构简式为答案：D解析：A ．N 发生缩聚反应生成顺式聚异戊二烯，则N 为异戊二烯，不存在顺反异构，故A 错误；B ．双键上存在同一碳原子连接2个氢原子，则M 不存在顺反异构体，故B 错误；C ．N 为异戊二烯，碳碳双键为平面结构，旋转碳碳单键可以使碳碳双键形成的2个平面重合，甲基是四面体结构，可以使甲基中1个氢原子处于平面内，因此分子中最多有11个原子共面，故C 错误；D ．两个相同原子或基团在双键同一侧的为顺式异构体，故顺式聚异戊二烯的结构简式为，故D 正确；故选D 。

一种鲁米诺发光功能化的纳米银及其制备方法和应用[发明专利]

专利名称：一种鲁米诺发光功能化的纳米银及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：崔华,何毅
申请号：CN201110102526.7
申请日：20110419
公开号：CN102559170A
公开日：
20120711
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种鲁米诺发光功能化纳米银及其制备方法和应用。

本发明公开了一种功能化纳米银，由银纳米粒子与鲁米诺连接而成，所述鲁米诺通过共价键Ag-N连接在所述银纳米粒子的表面。

其制备方法利用鲁米诺在乙醇存在时直接还原硝酸银制备纳米银，合成过程中鲁米诺同时作为还原剂和保护试剂。

该方法具有简单、快速、廉价等优点，是一种温宽为25-40℃合成纳米银的新技术。

由该方法合成得到的纳米银的粒径和形貌，可以由硝酸银与鲁米诺的比例进行调控，并且所得的纳米银具有优良的化学发光特性。

本发明还公开了基于发光功能化的纳米银的生物分析探针，以及基于该探针的分析方法和试剂盒。

本发明的功能化纳米银及其生物分析探针、分析方法和试剂盒，可用于免疫分析、核酸分析、分子成像、传感器等领域。

申请人：中国科学技术大学
地址：230026 安徽省合肥市金寨路96号
国籍：CN
代理机构：中科专利商标代理有限责任公司
代理人：王旭
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异鲁米诺合成

化学发光试剂异鲁米诺的合成及其发光实验提要化学发光是指在一些特殊的化学反应中发出可见光的现象.其发光机理是反应体系中的某些物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁至激发态,从激发态返回基态时将能量以光辐射的形式释放出来,产生发光现象.在众多的化学发光试剂当中,鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰肼)因其具有较高的发光量子产率和较好的水溶性,可与多种氧化剂发生化学光反应,已成为应用最广泛的化学发光试剂.鲁米诺-过氧化氢化学发光反应是应用最为广泛的鲁米诺发光体系.Cu2+、Cr3+、Ni2+、Co2+和Fe2+等过渡金属离子对鲁米诺-过氧化氢化学发光反应有很好的催化作用,这一特点使得该化学发光反应获得了广泛的应用.如海水中微量铁的分析测定。

可采用8-羟基喹啉交换树脂对海水中微量铁进行在线富集浓缩后直接利用鲁米诺-过氧化氢流动注射体系分析,检出限为0.05 nmol·L-1.Timothy等人早在1975年就提出了金属离子与鲁米诺-过氧化氢化学发光反应的机理[2].如图1所示,M n+先与HO2-配位,生成的配合物再与鲁米诺发生氧化反应,M n+失去一个电子变成M(n+1)+,鲁米诺则被氧化成鲁米诺游离基,随后,鲁米诺游离基进一步被过氧化氢氧化成氨基邻苯二甲酸根离子并产生化学发光.鲁米诺-过氧化氢-M n+化学发光反应机理但是在鲁米诺的合成中，由于第一步硝化选择性低下（如下图），致使整个合成产率不足30%，故本实验采用不同的合成路线，合成4-氨基邻苯二甲酰肼（异鲁米诺）苯酐硝化制3-硝基邻苯二甲酸的产率摘自川北医学院学报1993年3月第8卷第1期实验1仪器与试剂仪器500ml三口烧瓶；冷凝管，电热套；恒压漏斗；温度计，磁力搅拌仪，布氏漏斗。

试剂邻苯二甲酸酸酐；尿素；发烟硝酸；浓硫酸；乙醇；氯化亚锡；浓盐酸；水合肼；30%过氧化氢；冰乙酸；氢氧化钠；赤血盐；二甲基亚砜；罗丹明B；荧光黄。

2合成路线3.实验步骤邻苯二甲酰亚胺的制备在装有温度计、回流冷凝器的500mL三口瓶中,加入37.1g苯酐，9.0g尿素,打开冷凝器夹套冷却水,加热升温,当温度升至133℃,保温反应30min,反应结束,冷却至室温,得邻苯二甲酰亚胺产品,其含量≥97%,收率≥98% (以苯酐计)。

发光底物

发光底物-鲁米诺郑金来，20090822北京科美生物技术有限公司目录前言HRP-鲁米诺发光及其增强剂自由基增强发光改变发光效率前言什么是化学发光鲁米诺之简介影响鲁米诺发光之因素化学发光？化学发光(chemiluminescence) 是利用化学反应产生的能量將发光物质的中间体或产物激发至电子激发态，并藉由光的形式将能量释放回到基态，此释放出的光即为化学发光常见的发光物质：虫荧光素、鲁米诺、光泽精、洛酚碱、dioxetane、peroxyoxalate鲁米诺鲁米诺(luminol )，又名发光氨。

化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼。

常温下是一种黄色晶体或者米黄色粉末，是一种比较稳定的人工合成的有机化合物。

化学式为C 8H 7N 3O 2，结构式见右图，溶液显强酸性，对眼睛、皮肤、呼吸道有一定刺激作用。

鲁米诺的合成3-硝基邻苯二甲酸可作为鲁米诺的合成原料。

3-硝基邻苯二甲酸与肼在高沸点溶剂（如二甘醇）中发生缩合反应，失去一分子水，生成3-硝基邻苯二甲酰肼。

然后还原硝基，得到3-氨基邻苯二甲酰肼，即是鲁米诺鲁米诺的发现鲁米诺早在1853年就被合成出来了。

1928年，化学家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性，它被氧化时能发出蓝光。

几年以后，就有人想到利用这种特性去检测血迹。

血液中含有血红蛋白，血红蛋白含有铁，而铁能催化过氧化氢的分解，让过氧化氢变成水和单氧，单氧再氧化鲁米诺让它发光。

在检验血痕时，显出蓝绿色的荧光。

这种检测方法极为灵敏，能检测只有百万分之一含量的血，即使滴一小滴血到一大缸水中也能被检测出来鲁米诺发光示意：化学发光反应大部分都在碱性溶液中进行，因此luminol 主要以LH−的形式存在。

在氧化剂存在下，luminol被氧化产生luminol自由基(L•−)，L•−和超氧离子(superoxide，O2•−；来自溶氧被还原)反应产生luminol endoperoxide(LO22−)，LO22−分解释放氮气并形成激态产物3-aminophthalate (3-AP)，激态3-AP 回到基态而产生化学发光。