细菌对抗菌药物敏感性与耐药性
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第二节 抗菌药物敏感试验
二、纸片扩散法
1.水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂厚度4mm， 直径90mm的平板
2.挑取孵育16～24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中，振荡 混匀后校正浓度至0.5麦氏标准
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第二节 抗菌药物敏感试验
二、纸片扩散法
3.用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液 4.在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后 沿平板内缘涂抹1周 5.平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或纸片分配器将含 药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm，纸片距平 板内缘大于15mm
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药敏纸片 抗生素浓度
第二节 抗菌药物敏感试验
三、稀释法
以一定浓度的抗菌药物与培养基进行一系列不同倍数稀释，经 培养后观察被试菌株的最低抑菌浓度，根据CLSI提供的MIC解释标准 判断细菌对抗菌药物的敏感程度。稀释法中使用肉汤培养基为肉汤 稀释法，使用琼脂培养基为琼脂稀释法
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第二节 抗菌药物敏感试验
我国主要遵循美国临床实验室标准化委员会（CLSI）制定的抗 菌药物选择原则。
A组：包括对特定菌群的常规试验并常规报告的药物； B组：只在A组药物耐药、过敏、无效时选择性报告; C组：在A、B组药物过敏或耐药时选用；
U组：仅用于治疗泌尿道感染的药物。
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返回章内容
第二节 抗菌药物敏感试验
一、概述
256
128
椭圆形
细菌生长
抑制区
8
判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
016
第二节 抗菌药物敏感试验
四、 E-test法
1.菌液制备及接种均同纸片扩散法 2.于90mm平板上可放E试验试条1 ～ 2条，140mm平板最多可放6条 3. 孵育、温度及时间同纸片扩散法 4.读取椭圆形抑菌环与E试条的交界 点值即为MIC
2．熟悉 耐药表型检测；β-内酰胺酶检测方法；超广谱β-内 酰胺酶（ESBLs）检测方法
3．了解 临床常用抗菌药物种类；药敏试验中药物选择原则
本章重点：★纸片扩散法（K-B法）的操作方法及结果判断
★药敏试验的临床意义
精品课件
第一节 临床常用抗菌药物
一、抗菌药物分类
1.β-内酰胺类：抑制转糖基酶、转肽酶、D-羧肽酶、 内肽酶，从而细菌细胞壁合成。
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作 用的方法称为抗菌药物敏感试验（AST）
抗菌药物敏感试验方法
纸片扩散法
百度文库
稀释法
E-test法
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第二节 抗菌药物敏感试验
抗菌药物敏感试验结果
敏感（S） 菌株被推荐剂量治疗感染部位可达到的抗菌药物浓度抑制 中介（I） 药物在生理浓集部位有临床效果，还代表敏感与耐药之间缓冲区 耐药（R） 菌株不能被常规剂量抗菌药物可到达的浓度所抑制
微生物学检验
精品课件
国家卫生和计划生育委员会规划教材
《微生物学检验》
第六章 细菌对抗菌药物敏感性与耐药性
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本章内容
1 第一节 临床常用抗菌药物 2 第二节 抗菌药物敏感试验 3 第三节 分枝杆菌的药物敏感试验 4 第四节 细菌的耐药性检查
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学习目标
学习目标：
1．掌握 抗菌药物敏感试验常用方法，纸片扩散法（K-B法） 的操作方法、结果判断及实验质量影响因素
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第二节 抗菌药物敏感试验
二、纸片扩散法
含有定量抗菌药物纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸 片中所含药物吸收琼脂中水分溶解后向纸片周围区域扩散，形成 递减的梯度浓度。纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑 制，形成透明抑菌圈。抑菌圈大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系。
2.氨基糖苷类：抑制mRNA的转录和蛋白质的合成。 3.喹诺酮类：作用于DNA旋转酶，干扰细菌DNA复制、修 复和重组。 4.大环内酯类：结合细菌核糖体50S大亚基，抑制细菌 蛋白质合成和肽链延伸。 5.糖肽类：阻断肽聚糖合成，阻阻碍细胞壁合成。
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第一节 临床常用抗菌药物
一、抗菌药物分类
6.磺胺类：竞争性与二氢叶酸合成酶结合，使核酸合 成抑制。
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第二节 抗菌药物敏感试验
四、E-test法
E-test法（epsilometer test）结合了扩散法和稀释法的原 理和特点，对抗菌药物直接测量MIC。E试条为宽5mm、长50mm的无 孔试剂载体，一面固定有浓度呈连续指数增长的抗菌药物，另一 面有所含药物浓度的刻度
细菌生长区
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E test 塑料条
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第二节 抗菌药物敏感试验
二、纸片扩散法
6.平板置35±2℃孵育箱，16～18小时后判读结果。苛养菌应 在含5%CO2环境中培养20～24小时
7.用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径。按照CLSI标准判读， 报告敏感、中介、耐药
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第二节 抗菌药物敏感试验
纸片扩散法图解
敏感
耐药
细菌生长
抑菌圈 细菌菌落
7.四环素类：结合细菌30S核糖体亚基，抑制蛋白质合 成。
8.氯霉素类：作用细菌70S核糖体的50S亚基，抑制蛋 白合成。
9.林可酰胺类：结合细菌核糖体50S大亚基，抑制蛋白 质合。
10.其他抗菌药物：硝基肤喃类、硝基咪唑类、链阳霉 素类、噁唑烷酮类等。
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第一节 临床常用抗菌药物
二、常规药敏试验药物选择原则
三、稀释法
1. 肉汤稀释法
浓度 4
8
混
16
32
64
128 256 μg/ml
清
抗菌药物素倍比稀释，接种菌105CFU/ml ， 孵育温度35℃， 16～20h，判读结果。
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第二节 抗菌药物敏感试验
三、稀释法
2.琼脂稀释法
浓度 16 128
32
64
256 μg/ml
制备含对倍抗生素浓度梯度的平板，制备菌悬液，点种菌， 104/每点，孵育35℃，16～20h ，判读结果
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第二节 抗菌药物敏感试验
五、质量控制
1.影响纸片扩散法的因素 (1) 培养基厚度 (2) 细菌浓度 (3) 抗菌药物含量、扩散性 (4) 温度，预孵育时间 (5) 判定标准 (6) 质控标准菌株
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第二节 抗菌药物敏感试验
五、质量控制
2.质量控制的要求 （1）质控菌：标准菌株来源国家微生物菌种保藏中心。标 准菌株应每周在MH琼脂上传代一次，4℃保存 （2）质控方法：在同一条件下，将新鲜传代质控菌株用与 常规实验相同的测定药物进行相同的操作方法后，测定质控菌 株的抑菌环，以便对照监测 （3）抑菌圈质控范围：标准菌株的抑菌圈应落在规定范围 内，范围为95%的可信限
第二节 抗菌药物敏感试验
二、纸片扩散法
1.水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂厚度4mm， 直径90mm的平板
2.挑取孵育16～24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中，振荡 混匀后校正浓度至0.5麦氏标准
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第二节 抗菌药物敏感试验
二、纸片扩散法
3.用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液 4.在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后 沿平板内缘涂抹1周 5.平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或纸片分配器将含 药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm，纸片距平 板内缘大于15mm
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药敏纸片 抗生素浓度
第二节 抗菌药物敏感试验
三、稀释法
以一定浓度的抗菌药物与培养基进行一系列不同倍数稀释，经 培养后观察被试菌株的最低抑菌浓度，根据CLSI提供的MIC解释标准 判断细菌对抗菌药物的敏感程度。稀释法中使用肉汤培养基为肉汤 稀释法，使用琼脂培养基为琼脂稀释法
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第二节 抗菌药物敏感试验
我国主要遵循美国临床实验室标准化委员会（CLSI）制定的抗 菌药物选择原则。
A组：包括对特定菌群的常规试验并常规报告的药物； B组：只在A组药物耐药、过敏、无效时选择性报告; C组：在A、B组药物过敏或耐药时选用；
U组：仅用于治疗泌尿道感染的药物。
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第二节 抗菌药物敏感试验
一、概述
256
128
椭圆形
细菌生长
抑制区
8
判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
016
第二节 抗菌药物敏感试验
四、 E-test法
1.菌液制备及接种均同纸片扩散法 2.于90mm平板上可放E试验试条1 ～ 2条，140mm平板最多可放6条 3. 孵育、温度及时间同纸片扩散法 4.读取椭圆形抑菌环与E试条的交界 点值即为MIC
2．熟悉 耐药表型检测；β-内酰胺酶检测方法；超广谱β-内 酰胺酶（ESBLs）检测方法
3．了解 临床常用抗菌药物种类；药敏试验中药物选择原则
本章重点：★纸片扩散法（K-B法）的操作方法及结果判断
★药敏试验的临床意义
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第一节 临床常用抗菌药物
一、抗菌药物分类
1.β-内酰胺类：抑制转糖基酶、转肽酶、D-羧肽酶、 内肽酶，从而细菌细胞壁合成。
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作 用的方法称为抗菌药物敏感试验（AST）
抗菌药物敏感试验方法
纸片扩散法
百度文库
稀释法
E-test法
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第二节 抗菌药物敏感试验
抗菌药物敏感试验结果
敏感（S） 菌株被推荐剂量治疗感染部位可达到的抗菌药物浓度抑制 中介（I） 药物在生理浓集部位有临床效果，还代表敏感与耐药之间缓冲区 耐药（R） 菌株不能被常规剂量抗菌药物可到达的浓度所抑制
微生物学检验
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《微生物学检验》
第六章 细菌对抗菌药物敏感性与耐药性
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本章内容
1 第一节 临床常用抗菌药物 2 第二节 抗菌药物敏感试验 3 第三节 分枝杆菌的药物敏感试验 4 第四节 细菌的耐药性检查
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学习目标
学习目标：
1．掌握 抗菌药物敏感试验常用方法，纸片扩散法（K-B法） 的操作方法、结果判断及实验质量影响因素
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第二节 抗菌药物敏感试验
二、纸片扩散法
含有定量抗菌药物纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸 片中所含药物吸收琼脂中水分溶解后向纸片周围区域扩散，形成 递减的梯度浓度。纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑 制，形成透明抑菌圈。抑菌圈大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系。
2.氨基糖苷类：抑制mRNA的转录和蛋白质的合成。 3.喹诺酮类：作用于DNA旋转酶，干扰细菌DNA复制、修 复和重组。 4.大环内酯类：结合细菌核糖体50S大亚基，抑制细菌 蛋白质合成和肽链延伸。 5.糖肽类：阻断肽聚糖合成，阻阻碍细胞壁合成。
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第一节 临床常用抗菌药物
一、抗菌药物分类
6.磺胺类：竞争性与二氢叶酸合成酶结合，使核酸合 成抑制。
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第二节 抗菌药物敏感试验
四、E-test法
E-test法（epsilometer test）结合了扩散法和稀释法的原 理和特点，对抗菌药物直接测量MIC。E试条为宽5mm、长50mm的无 孔试剂载体，一面固定有浓度呈连续指数增长的抗菌药物，另一 面有所含药物浓度的刻度
细菌生长区
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E test 塑料条
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第二节 抗菌药物敏感试验
二、纸片扩散法
6.平板置35±2℃孵育箱，16～18小时后判读结果。苛养菌应 在含5%CO2环境中培养20～24小时
7.用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径。按照CLSI标准判读， 报告敏感、中介、耐药
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第二节 抗菌药物敏感试验
纸片扩散法图解
敏感
耐药
细菌生长
抑菌圈 细菌菌落
7.四环素类：结合细菌30S核糖体亚基，抑制蛋白质合 成。
8.氯霉素类：作用细菌70S核糖体的50S亚基，抑制蛋 白合成。
9.林可酰胺类：结合细菌核糖体50S大亚基，抑制蛋白 质合。
10.其他抗菌药物：硝基肤喃类、硝基咪唑类、链阳霉 素类、噁唑烷酮类等。
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第一节 临床常用抗菌药物
二、常规药敏试验药物选择原则
三、稀释法
1. 肉汤稀释法
浓度 4
8
混
16
32
64
128 256 μg/ml
清
抗菌药物素倍比稀释，接种菌105CFU/ml ， 孵育温度35℃， 16～20h，判读结果。
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第二节 抗菌药物敏感试验
三、稀释法
2.琼脂稀释法
浓度 16 128
32
64
256 μg/ml
制备含对倍抗生素浓度梯度的平板，制备菌悬液，点种菌， 104/每点，孵育35℃，16～20h ，判读结果
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第二节 抗菌药物敏感试验
五、质量控制
1.影响纸片扩散法的因素 (1) 培养基厚度 (2) 细菌浓度 (3) 抗菌药物含量、扩散性 (4) 温度，预孵育时间 (5) 判定标准 (6) 质控标准菌株
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第二节 抗菌药物敏感试验
五、质量控制
2.质量控制的要求 （1）质控菌：标准菌株来源国家微生物菌种保藏中心。标 准菌株应每周在MH琼脂上传代一次，4℃保存 （2）质控方法：在同一条件下，将新鲜传代质控菌株用与 常规实验相同的测定药物进行相同的操作方法后，测定质控菌 株的抑菌环，以便对照监测 （3）抑菌圈质控范围：标准菌株的抑菌圈应落在规定范围 内，范围为95%的可信限