凝胶电泳缓冲液的配制
琼脂糖凝胶电泳 配方与步骤
�RNA琼脂糖凝胶电泳：配制：1.0.5M EDTA（pH=8.0）：100ml：称取18.61g Na2EDTA·2H2O（分子量372.24），加80ml ddH2O剧烈搅拌，用NaOH调节PH值至8.0（约需2g NaOH）.高压灭菌，室温保存。
2.50×TAE loading buffer:（Tris acetate-EDTA buffer）电泳缓冲液组分：2M Tris-乙酸；100mM EDTA（pH=8.0）500mL:称121.1g Trisbase（分子量121.14），加800ml ddH2O溶解，加57.1ml乙酸和50ml0.5M EDTA溶液（pH=8.0），搅拌，ddH2O定容至500mL.室温保存。
3.1×TAE loading buffer:取20ml50×TAE，ddH2O定容至1L.室温保存。
4.100×Sybergreen：500ul：取495ul1×TAE于1.5ml离心管，加入5ul Sybergreen原液混匀，4℃锡纸避光保存。
注意：Sybergreen原液需稀释10000倍；6×DNA loading buffer上样缓冲液需稀释六倍，最终稀释倍数应不小于1×。
步骤：1.制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml，我们用30ml):称0.3g琼脂糖置于100ml锥形瓶中，加入30ml1×TAE，瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸3次，至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液。
2.胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.3.加样:样品制备：（10ul体系/样品槽）于0.25ml离心管中样品RNA（最后加）:2ul/3ul/5ul6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul100×Sybergreen：0.1ulDEPC水：至10ul(注意:加样前要先记下加样的顺序).分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个枪头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.4.电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.5.电泳完毕后,取出凝胶,利用科212凝胶成像系统,在紫外灯（trans UV）下观察拍照保存.DNA存在则显示出红色荧光条带.RNA完美提出应该是三条带：28，18,5.8。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳试剂：溴酚蓝指示剂点样缓冲液，电泳缓冲液（TAE），40 mmol/L Tris-乙酸，1 mol/L EDTA (配制方法：24.2克Tris碱，5.71ml冰乙酸，10ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，定容至5000ml），0.8% 琼脂糖凝胶（配制方法：称取琼脂糖0.4克，加入50ml TAE电泳缓冲液）实验步骤1．调节电泳槽平面至水平。
检查稳压电源与正负极的线路。
2．选择孔径大小合适的点样梳子，垂直架在电泳胶模的一端，使点样梳子底部离电泳胶模底部的距离为1.0mm。
3．制备0.8%琼脂糖凝胶，100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀。
4．用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好，防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生渗透。
待琼脂糖凝胶冷却至60℃左右时，摇匀，轻轻倒入电泳胶模中，琼脂糖凝胶的厚度在3～5mm。
倒胶时要避免产生气泡，若有气泡可用吸管小心吸去。
5．琼脂糖凝胶凝固后，在室温放置20分钟，小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板，保持点样孔的完好。
6．将电泳胶模放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面1～2mm。
如点样孔内有气泡，用吸管小心吸出，以免影响加样。
7．将蛋白样品与1/5体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合。
上样缓冲液不仅可以提高样品的密度，使样品均匀沉到样品孔内，还可以使样品带颜色，便于上样和估计电泳时间和判断电泳的位置。
8．用微量移液器将样品小心加入加样孔内，记录样品点样秩序。
9．盖上电泳槽，开启电源开关，80V恒压电泳30-60分钟，使蛋白从负极向正极移动，电泳完毕后关闭电源，戴一次性塑料手套取出凝胶，考马斯亮蓝染色。
脱色液配制1L：600ml去离子水，无水乙醇300ml，冰醋酸100ml。
凝胶电泳缓冲液的配制
2．测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与D owexXG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用What man 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
3．常用的电泳缓冲液说明：①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。
目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4．2×SDS凝胶加样缓冲液100mmo l/L Tris·HCl(6.8)200mmo l/L二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
5．凝胶加样缓冲液使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2. 2倍，而与琼脂糖浓度无关。
聚丙烯酰胺凝胶电泳
8%聚丙烯酰胺凝胶电泳
50ml配方：
30%丙烯酰胺：13.33ml
10×TBE：5ml（或者5×TBE加10ml）
TEMED：25ul
10%过硫酸铵（新鲜配制）：250ul
ddH2O:补到50ml
丙烯酰胺30%为29：1（质量比，丙烯酰胺：双甲叉丙烯酰胺）
电泳槽中加入0.5×TBE
银染液的配制：
固定液: 100mL 冰乙酸加水稀释至1000mL，可重复使用；
染色液: 1g AgNO3、1. 5mL 37%甲醛, 加水至1000mL (4摄氏度预冷效果佳)，可重复使用，棕色瓶存放；
显色液: 30g Na2 CO3、1. 5mL 37% 甲醛、0. 2mL Na2S2O3(10mg/mL) , 加水至1000mL；
终止液：配方同固定液，10%冰乙酸，可以用回收的固定液进行终止。
染色：
1、加入固定液固定30min，水洗5-10min；
2、加入染色液染色30min，水洗2次，每次不超过30s；
3、加入显色液显色（条带清晰即可，一般不超过5min）；
4、加入终止液终止反应；
需要配制的溶液：
10%过硫酸铵：称取5g过硫酸铵溶解于50ml蒸馏水中。
37%甲醛：37ml甲醛和63ml蒸馏水混匀。
10mg/mL Na2S2O3：称取0.3g溶解于30ml蒸馏水中。
10%冰乙酸：100mL 冰乙酸加水稀释至1000mL，可重复使用。
5×TBE缓冲液：54gTris，27.5g硼酸，20ml 0.5M EDTA(pH8.0)，加水定容至1升。
琼脂糖凝胶电泳缓冲液的配制
琼脂糖凝胶电泳缓冲液的配制附录5:琼脂糖凝胶电泳缓冲液的配制有几种缓冲液适用于天然双链DNA的电泳。
它们包括Tris-乙酸盐和EDTA缓冲液(pH8.0，TAE，也称作E缓冲液)、Tris-硼酸盐缓冲液(TBE)或Tris-磷酸盐缓冲液(TPE)，工作液浓度约50nm0l/L，工作pH7.5-7.8。
各种电泳缓冲液通常配制成浓溶液存放(表5-3)。
表5-3 电泳缓冲液缓冲液工作液贮存液/LTAE 1 × 50 ×40 mmol/L Tris-乙酸盐 242 g Tris;37.2g NaEDTA.2HO; 221 mmol/L EDTA 搅拌溶解;57.1 ml冰乙酸;充分搅拌后定容至1000 ml。
TPE 1× 10 ×90 mmol/L Tris-磷酸盐 108 g Tris2 mmol/L EDTA 15.5 ml磷酸(85%，1.679)40 ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)TBE* 0.5 × 5 ×45 mmol/L Tris-硼酸盐 54 g Tris; 3.72g NaEDTA.2HO; 221 mmol/L EDTA 27.5 g硼酸;充分搅拌溶解后定容至1000ml。
* TBE通常作为5×或10×的贮存液配制和贮存。
这种浓的贮存液pH应为8.3左右，它在应用前稀释，并用同一种贮存液制备凝胶溶液和电泳缓冲液。
有些研究者习惯用更浓的TBE贮存液，如10×的。
但是5×的贮存液更稳定，因为贮存期间溶质不沉淀。
上述三种缓冲液都工作得很好。
三者之中TAE的缓冲容量最低，如长时间电泳会被消耗。
此时的凝胶的阳性一侧将发生酸性化，凝胶中向阳极迁移的溴酚蓝的顔色呈从蓝紫色到黄色的变化，故需定期更换缓冲液。
电泳琼脂糖凝胶的配制
电泳琼脂糖凝胶的配制
配制电泳琼脂糖凝胶的步骤如下：
1. 准备所需材料，包括琼脂糖粉、缓冲液、电解质溶液、蒸馏水等。
2. 根据实验的需要，根据琼脂糖的浓度选择适当比例的琼脂糖粉，一般浓度为0.8-2%。
3. 将所需缓冲液加入容器中，根据实验需要选择适当的缓冲液，例如Tris缓冲液、磷酸缓冲液等。
4. 在缓冲液中加入适量的琼脂糖粉，搅拌均匀，可以使用磁力搅拌器。
5. 根据实验需要，在琼脂糖溶液中添加适量的电解质溶液，例如SDS、尿素等，用于改变凝胶的性质。
6. 使用蒸馏水将溶液补充至所需体积，同时搅拌均匀，确保溶液中无颗粒。
7. 将准备好的琼脂糖溶液加热至70-80摄氏度，使其完全溶解。
8. 静置琼脂糖溶液至室温，或者加入适量冷却剂，如冰块，以加快冷却过程。
9. 将准备好的琼脂糖溶液倒入凝胶模板中，避免气泡的产生。
10. 等待凝胶完全固化，通常需要约30分钟至1小时。
11. 凝胶固化后，根据实验需要在凝胶上形成孔洞，以供电泳样品加入。
以上是电泳琼脂糖凝胶的简要配制步骤，具体的实验条件和步骤可以根据实验的要求进行调整。
SDS-PAGE电泳相关溶液的配置
电泳相关溶液的配置：1、30%丙稀酰胺混合溶液（100ml）：称取29g丙稀酰胺和1g bis丙稀酰胺，用水溶解定容到100ml，过滤，4摄氏度保存一个月。
2、5×SDS电极缓冲液：称取Tris base15.1g，甘氨酸94.g，SDS 5.g 加dH2O定容至1000ml。
3、2×样品缓冲液（10ml）：甘油2ml，溴酚蓝0.0202g，1MTris·Cl （pH6.8）1ml巯基乙醇0.14ml，10%SDS 4ml。
4、染色液的配制（1000ml）:用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸；在电子天平上称取0.125%考马斯亮蓝R250 1.25g，再将其一一加到1000ml锥形瓶中，用蒸馏水加以补足至1000ml。
加入的先后顺序为：考马斯亮蓝R250，甲醇或者乙醇，蒸馏水，乙酸。
充分混匀后进行过滤，收集滤液备用。
当过滤速度变慢时要更换滤纸，快速过滤完，不可隔夜以免影响染色效果。
5、脱色液（1000ml）:用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸、670ml蒸馏水加入烧杯中，待溶液混和均匀后加入盛脱色液的广口瓶；备用。
收集液的SDS-PAGE分析：1、取20ul收集液，加入5×样品缓冲液5ul，在80℃水浴锅中煮5min。
分离胶配方Resolving Gel (10ml)6%8%10%12%15%H2O 5.4 4.7 4.1 3.4 2.430% acrylamide mix 2.0 2.7 3.3454x resolving-gel buffer 2.5 2.5 2.5 2.5 2.520% SDS0.050.050.050.050.0520% APS0.050.050.050.050.05TEMED0.0080.0060.0040.0040.004浓缩胶配方（10ml）H2O 6.9 ml30% acrylamide mix 1.7 ml8x stacking-gel buffer1.25 ml20% SDS0.05 ml20% APS0.05 mlTEMED0.01 ml2、按照上面配方制SDS-PAGE凝胶，安装好电泳仪，在槽中加入电极缓冲液。
电泳缓冲液的配制和琼脂糖凝胶的配制
电泳缓冲液的配制和琼脂糖凝胶的配制常见的电泳缓冲液为TAE缓冲液（三乙酸-乙酰胺-乙酸缓冲液）和TBE缓冲液（硼酸-三乙酸-乙酰胺缓冲液）。
下面以TAE缓冲液为例，介绍一种常见的配制方法：所需试剂及材料：1.TAE缓冲液粉末2.蒸馏水3.磷酸氢二钠（NaH2PO4）4. 乙酸（Acetic acid）5. 乙酰胺（Amp-urea）6.称量器具7.搅拌器8.常温（25°C）高精度pH计配制步骤：1.根据实验需要，计算所需配制的缓冲液的体积。
2.准备用于配制的容器，并将其清洗干净。
3.称取相应质量的TAE缓冲液粉末，加入到容器中。
4.加入适量的蒸馏水，将粉末溶解均匀。
5.将NaH2PO4（磷酸氢二钠）溶解在蒸馏水中，搅拌至溶解均匀。
6.加入乙酸和乙酰胺，搅拌均匀。
7.使用pH计测量溶液的pH值。
8.如果pH值不在所需范围内（通常为8.0），可以加入适量的乙酸或乙酰胺进行调节，直到达到所需pH值。
9.最后，使用蒸馏水将溶液体积补足至所需配制的总体积。
琼脂糖凝胶的配制方法：琼脂糖凝胶是一种常用的电泳试剂，用于分离DNA、RNA或蛋白质等生物大分子。
它的主要成分是琼脂糖（Agarose），其配制方法如下：所需试剂及材料：1.琼脂糖粉末2.TAE或TBE缓冲液3.电泳仪4.中性漂洗液（例如盆子中洗涤剂）5.温度计6.凝胶模具7.干净容器配制步骤：1.准备用于配制琼脂糖凝胶的容器，并将其清洗干净。
2.根据实验需要，计算所需配制的琼脂糖凝胶的质量。
3.将琼脂糖粉末称取出来并加入容器中。
4.加入适量的TAE或TBE缓冲液，使其覆盖住琼脂糖粉末。
5.将容器密封，并放入微波炉中加热,或者可以使用传统的加热方法，将容器放进加热水浴中进行加热。
6.加热至琼脂糖完全溶解，通常需要3-5分钟。
7.轻轻摇晃或用棒子搅拌溶液，确保溶液均匀混合。
8.将溶液冷却至约55-60°C。
在冷却过程中，可以使用温度计不断监测温度。
凝胶电泳配胶配方
8%Gel5ml10ml15ml20ml30%Acr 1.3 2.7 4.0 5.3 1.5M Tris-HCl (8.8) 1.3 2.5 3.8 5.010%SDS0.050.10.150.2 10%APS0.050.10.150.2 TEMED0.0030.0060.0090.1210%Gel5ml10ml15ml20ml30%Acr 1.7 3.3 5.0 6.7 1.5M Tris-HCl (8.8) 1.3 2.5 3.8 5.010%SDS0.050.10.150.20 10%APS0.050.10.150.20 TEMED0.0020.0040.0060.00812%Gel5ml10ml15ml20ml30%Acr 2.0 4.0 6.08.0 1.5M Tris-HCl (8.8) 1.3 2.5 3.8 5.010%SDS0.050.10.150.20 10%APS0.050.10.150.2015%Gel5ml10ml15ml20ml30%Acr 2.5 5.07.510.0 1.5M Tris-HCl (8.8) 1.3 2.5 3.8 5.010%SDS0.050.10.150.20 10%APS0.050.10.150.20 TEMED0.0020.0040.0060.00830%Acr0.670.83 1.0 1.4 1.5M Tris-HCl (6.8)0.50.630.75 1.010%SDS0.040.050.060.08 10%APS0.040.050.060.08 TEMED0.0040.0050.0060.008SDS-PAGE标准化流程实验前准备：（1）30%丙烯酰胺溶液：2.9g丙烯酰胺+0.1g甲叉双丙烯酰胺，溶于5mLddH2O，定容至10mL。
4℃避光保存。
（2）10%SDS（十二烷基磺酸钠）：1gSDS，加6mLddH2O，加热至溶解，定容至10mL。
SDSPAGE所有详细试剂配方
SDSPAGE所有详细试剂配方SDS-（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用于蛋白质分析的实验技术。
该技术通常涉及到几种试剂，如胶溶液、缓冲液、电泳缓冲液、染色溶液等。
下面是SDS-常见的试剂配方及其详细说明。
一、胶溶液配方：1. 30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）溶液- 在称量瓶中称取30g丙烯酰胺，并用蒸馏水调至100ml。
搅拌溶解直至均匀。
-这是制备聚丙烯酰胺凝胶的基础溶液。
2. 响应稀释液（Response diluent）-用于稀释聚丙烯酰胺溶液以获得不同浓度的凝胶。
-可通过将聚丙烯酰胺溶液与水按1:3体积比混合来制备响应稀释液。
二、缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine running buffer）-用于凝胶电泳盒中电解质的运行。
-配方为：3g Tris base （pH 8.8）14.4g glycine将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至8.8三、电泳缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine SDS running buffer）-用于在电泳过程中提供离子追踪剂。
-配方为：30g Tris base144g glycine10gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中。
2. 加速剂（stacking gel buffer）- 用于形成凝胶中的聚集堆积层（stacking layer）。
-配方为：30g Tris base （pH 6.8）144g glycine1gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至6.8四、样品处理缓冲液配方：1. 样品加载缓冲液（sample loading buffer）-用于处理蛋白样品，以便在凝胶上获得良好的分离效果。
-配方为：0.5M Tris-HCl（pH 6.8）20%（v/v）甘油10%（w/v）SDS0.05%（w/v）溴酚蓝（bromophenol blue）旋转混合并加入蛋白样品。
五、凝胶染色溶液配方：1. 吸附性染色剂（Coomassie blue staining solution）-用于染色聚丙烯酰胺凝胶上分离的蛋白质。
SDS-PAGE电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制SDSPAGE 电泳（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
在进行 SDSPAGE 电泳实验时，准确配制各种试剂是获得可靠实验结果的关键。
下面，让我们详细了解一下SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。
首先，我们来看看分离胶缓冲液的配制。
分离胶缓冲液一般是 15M TrisHCl（pH 88）。
要配制 100ml 的这种缓冲液，我们需要称取 1817g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调节 pH 值至 88。
这一步需要耐心和细心，因为 pH 值的准确性对电泳结果影响很大。
调节好 pH 后，将溶液定容至 100ml。
接下来是浓缩胶缓冲液，通常是 10M TrisHCl（pH 68）。
同样配制100ml，称取 1211g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调 pH 至68，最后定容至 100ml。
然后是 30%丙烯酰胺溶液。
这是 SDSPAGE 电泳中非常重要的试剂。
配制 100ml 该溶液，需要称取 29g 丙烯酰胺和1g N,N’亚甲双丙烯酰胺，用去离子水溶解后定容至 100ml。
丙烯酰胺是有毒物质，在配制和使用过程中要特别小心，避免接触皮肤和吸入粉末。
SDS 溶液的配制也不容忽视。
一般是 10%（w/v）的 SDS 溶液。
称取 10g SDS，加入适量去离子水搅拌溶解，然后定容至 100ml。
还有 10%过硫酸铵溶液。
称取 1g 过硫酸铵，加入 10ml 去离子水，现配现用。
过硫酸铵溶液容易失效，所以每次使用前都要新鲜配制。
TEMED（四甲基乙二胺）在凝胶聚合过程中起到催化作用。
由于它挥发性强，使用时要注意迅速加入。
电泳缓冲液也是必不可少的。
一般使用的是 Tris甘氨酸缓冲液。
配制 1L 缓冲液，需要称取 303g Tris 碱、1877g 甘氨酸和 1g SDS，用去离子水溶解后定容至 1L。
聚丙烯酰胺凝胶电泳实验试剂和操作步骤
聚丙烯酰胺凝胶电泳实验试剂和操作步骤实验试剂：试剂贮备液：1、 1mol/L HCl48ml，Tris36.6g，TEMED0.23ml，加蒸馏水配成100ml，pH8.9。
2、 1mol/L HCl48ml，Tris5.98g，TEMED0.46ml，加蒸馏水配成100ml，pH6.7。
3、 Acr28g，Bis0.735g，加蒸馏水配成100ml。
4、 Acr10g，Bis2.5g，加蒸馏水配成100ml。
5、核黄素4mg，溶于100ml蒸馏水中。
6、蔗糖40g，加蒸馏水配成100ml。
7、电极缓冲液：Tris6.06g，甘氨酸28.52g，加蒸馏水配成1000ml，pH8.3，用时稀释10倍。
8、过硫酸铵0.14g，加蒸馏水配成100ml。
9、溴酚蓝1mg溶于100ml蒸馏水中。
10、脱色溶液：甲醇5ml，冰醋酸9ml，加蒸馏水配成100ml。
11、蛋白质染色液：考玛斯蓝G─250 200mg，甲醇100ml，冰醋酸20m l，蒸馏水80ml，溶解后混合之。
12、过氧化物酶染色液：1) 染色液甲：联苯胺─抗坏血酸染色液，染色数分钟。
抗坏血酸70.4 mg，联苯胺溶液20ml（2g联苯胺溶于18ml用文火加热的冰醋酸中，再加蒸馏水 72ml），0.6%过氧化氢20ml，蒸馏水60ml。
2) 染色液乙：联茴香胺染色液，染色至少1小时。
0.1mol/L醋酸缓冲液，pH5.5（0.82g醋酸钠溶于80ml蒸馏水中，用醋酸调节至pH5.5，定容至100ml）。
30%H2O20.25ml溶于50ml蒸馏水中，用时新鲜配制。
邻联茴香胺（o─dianisidine）100mg，溶于100ml醋酸缓冲液(1)中。
用时取溶液（2）5ml，溶液（3）50ml，混合之。
实验步骤：凝胶的制备：1、清洗干净两块玻璃板，晾干后按要求装配好垂直电泳板，两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边，防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。
wb实验中电泳液配制方法
wb实验中电泳液配制方法
电泳液是用于电泳分析的胶状物质，一般由缓冲液和胶液组成。
下面是一种常见的电泳液配制方法：
1. 缓冲液配制：
- 加入适量的Tris缓冲液粉末到去离子水中，充分搅拌溶解。
- 调整pH值至所需的范围，一般为pH 7-8。
- 可根据需要添加其他试剂，如EDTA、糖等。
2. 胶液配制：
- 将适量的聚丙烯酰胺（polyacrylamide）粉末加入去离子水中，用搅拌器搅拌溶解。
- 如果需要制备原位聚丙烯酰胺凝胶，可添加适量的过硫酸铵（APS）和N,N,N",N"-四甲基乙二胺（TEMED），以促进聚合反应。
- 根据需要调整胶液浓度，一般为5-20%。
3. 最后将缓冲液和胶液按照所需比例混合即可得到电泳液。
需要注意的是，不同实验目的和样品特性可能需要不同的电泳液配方和浓度，具体配制方法可根据实验要求进行调整。
同时，制备电泳液时需要注意操作规范，避免对人体和环境造成危害。
SDS-PAGE电泳试剂配制
SDS-PAGE电泳试剂配制SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离技术，可以将蛋白质按照其分子量大小分离出来。
在这个过程中，需要使用一系列试剂来形成凝胶、还原并变性蛋白质样品、以及进行电泳。
下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制1. 蒸馏水将蒸馏水取2L，通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质，备用。
2. 均聚化溶液将40%（w/v）丙烯酰胺10mL，在干燥器中烘干2小时，然后加入蒸馏水固定容积至50mL。
将10%（w/v）N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中，搅拌30分钟至完全溶解。
3. 凝胶制备将均聚化溶液加入10%（w/v）的三甲基丙烯酰氨基甲基纤维素，搅拌5分钟后加入0.1%TEMED等待至少1小时凝胶化。
4. 等电聚焦凝胶制备将均聚化溶液加入3.33%（w/v）等电聚焦剂，根据需要调节pH值，搅拌5分钟后加入氨基甲酸1mL，搅拌2分钟至完全溶解。
加入TEMED及APS，混合倒入制好的除尘洞中，并插入梳子。
至少1小时后移除梳子，使凝胶完全凝固。
蛋白样品处理试剂配制1. SDS缓冲液将10%SDS 1.25mL加入pH6.8的磷酸盐缓冲液（1M），加入蒸馏水固定容积至100mL，搅拌10分钟至SDS完全溶解，备用。
2. β-巯基乙醇将β-巯基乙醇400μL加入1mL磷酸盐缓冲液（1M），备用。
3. 样品缓冲液将10%SDS 100μL，β-巯基乙醇50μL加入磷酸盐缓冲液1mL中，加入蒸馏水固定容积至10mL，轻轻搅拌即可。
4. 热变性载入缓冲液将4倍浓度的样品缓冲液加入β-巯基乙醇，于100℃水浴中加热5分钟。
冷却至室温，即可使用。
电泳相关试剂配制1. 电泳缓冲液将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 10g进行混合后，加入蒸馏水将其固定至2L，备用。
2. Anode buffer将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 5g进行混合后，加入蒸馏水将其固定至2L，备用。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳标准操作规程(12%胶)
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳标准操作规程（12%胶，）1电泳各试剂的配制1.1凝胶贮液：Acrylamide/Bis (30%T，%C)——为聚丙烯酰胺取丙烯酰胺acrylamide g、双丙烯酰胺N′N′-bis-methylene-acrylamide g至100mL量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀，过滤。
4℃避光储存。
即10%的过硫酸铵 10%APS（临用现配）称取过硫酸铵（ammonium persulfate）100 mg，加1mL去离子水溶解。
Tris-HCl，pH称取Tris base g 于量瓶中，加去离子水80mL，用HCl 调节pH ，再加去离子水至总体积100mL。
4℃储存。
%（w/v）溴酚蓝：溴酚蓝，去离子水定容至100mL。
Tris-HCl，pH ：称取Tris （三羟甲基氨基甲烷）6 g 于量瓶中，加去离子水60mL，用HCl 调节pH ，再加去离子水至总体积100mL。
4℃储存。
10%（w/v）SDS：称取10g SDS至100ml量瓶中，加90ml去离子水，缓慢搅拌至溶解，再加去离子水至刻度。
凝胶配制按下表比例配制凝胶分离胶及浓缩胶按上表比例配好后，均需脱气15 min。
临灌胶前，往分离胶中加入100 μl 10%APS及10 μl TEMED；往浓缩胶中加入100 μl 10%APS及20 μl TEMED（各试剂按比例增减）。
其中：TEMED为催化剂10×电极缓冲液，pH称取Tris base g、Glycine（甘氨酸） 144 g、SDS g于1000 mL量瓶中，溶解，加去离子水至刻度，不调pH。
4℃储存。
临用前，取出放至室温，10倍稀释，混匀，即为电极缓冲液。
样品溶解液S去离子水；0.5M Tris-HCl，pH ；glycerol （甘油）10% (w/v) SDS%（w/v）溴酚蓝总体积为 mL。
室温储存。
临用前加50 μlβ-巯基乙醇（β-Mercaptoethanol）于950 μl样品缓冲中，即为样品溶解液。
琼脂糖凝胶电泳配方与步骤(精)
� RNA 琼脂糖凝胶电泳:配制:1. 0.5M EDTA(pH=8.0 :100ml :称取 18.61g Na 2EDTA ·2H 2O (分子量 372.24 ,加 80ml ddH 2O 剧烈搅拌, 用 NaOH 调节 PH 值至 8.0(约需 2g NaOH . 高压灭菌,室温保存。
2. 50×TAEloading buffer:(Tris acetate-EDTA buffer 电泳缓冲液组分:2MTris-乙酸;100mM EDTA(pH=8.0500mL:称 121.1g Trisbase(分子量 121.14 ,加 800ml ddH 2O 溶解,加 57.1ml 乙酸和 50ml 0.5M EDTA 溶液(pH=8.0 ,搅拌, ddH 2O 定容至 500mL . 室温保存。
3. 1×TAEloading buffer:取 20ml 50×TAE, ddH 2O 定容至 1L. 室温保存。
4. 100×Sybergreen :500ul :取 495ul 1×TAE于 1.5ml 离心管,加入 5ul Sybergreen 原液混匀,4℃锡纸避光保存。
注意:Sybergreen 原液需稀释 10000倍;6×DNAloading buffer 上样缓冲液需稀释六倍,最终稀释倍数应不小于 1×。
步骤:1. 制备 1%琼脂糖凝胶 (大胶用 70ml, 小胶用 50ml ,我们用 30ml:称 0.3g 琼脂糖置于 100ml 锥形瓶中,加入 30ml 1×TAE ,瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸 3次,至琼脂糖全部融化,摇匀,即成 1.0%琼脂糖凝胶液。
2. 胶板制备 :取电泳槽内的有机玻璃内槽 (制胶槽洗干净 , 晾干 , 放入制胶玻璃板 . 取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好 , 形成模子 . 将内槽置于水平位置 , 并放好梳子 .将冷却到 65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上 , 使胶液缓慢展开 , 直到整个玻璃板表面形成均匀胶层 . 室温下静置直至凝胶完全凝固 , 垂直轻拔梳子 , 取下胶带 , 将凝胶及内槽放入电泳槽中 . 添加 1×TAE 电泳缓冲液至没过胶板为止 . 3. 加样 :样品制备:(10ul 体系 /样品槽于 0.25ml 离心管中样品 RNA (最后加 :2ul /3ul/5ul6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul100×Sybergreen :0.1ulDEPC 水:至 10ul(注意 :加样前要先记下加样的顺序 . 分别将样品加入胶板的样品小槽内 , 每加完一个样品 , 应更换一个枪头 , 以防污染 , 加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面 .4. 电泳 :加样后的凝胶板立即通电进行电泳 , 电压 60-100V , 样品由负极 (黑色向正极(红色方向移动 . 电压升高 , 琼脂糖凝胶的有效分离范围降低 . 当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约 1cm 处时 , 停止电泳 .5. 电泳完毕后 , 取出凝胶 , 利用科 212凝胶成像系统 , 在紫外灯(trans UV 下观察拍照保存 .DNA 存在则显示出红色荧光条带 . RNA 完美提出应该是三条带:28, 18, 5.8。
凝胶电泳各试剂配制
凝胶电泳各试剂配制（1）10000mg/L苄嘧磺隆母液：称取60%的苄嘧磺隆颗粒500mg于灭菌的棕色试剂瓶，再加入30mL灭菌的蒸馏水，每次使用前混匀再吸取。
（2）10000mg/L乙草胺母液：吸取500ul 89%的乙草胺，再加入49mL分析纯甲醇溶解。
（3）30%丙烯酰胺混合液（50ml）：称取丙烯酰胺14.5g，甲叉双丙烯胺酰胺O 30ml溶解，定容到50ml，于棕色瓶中4℃保存。
0.5g，加ddH2（4）1.5mol/L Tris-HCl pH 8.8(100ml):称取Tris18.17g于烧杯中加入ddH2O 80ml溶解，用浓盐酸于25℃下调pH为8.8，定容到100ml，高温灭菌室温保存。
（5）1.5mol/L Tris-HCl pH 6.8（50ml）：称取Tris 9.08g于烧杯中加入O 30ml溶解，用浓盐酸于25℃下调pH为6.8，定容到50ml，高温灭菌室温ddH2保存。
（6）10%SDS：称取2gSDS粉末于20ml水中37℃1h水浴。
（7）TEMED（四乙基乙二胺）原液（8）10%过硫酸铵:称取0.15g过硫酸铵溶于1.5mldH2O中，4℃保存，一星期可用。
（9）2×样品缓冲液（10ml）：2.5ml 1.5mol/L的Tris-HCl(pH6.8),0.5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，2ml 1%溴酚蓝，2.5ml蒸馏水。
配好后按每管500ul分装好与-20℃保存待用。
（10）Tris-甘氨酸电极缓冲液（5×）：称取Tris 15.1g，甘氨酸94g，SDS 5g，加蒸馏水约800ml，溶解后用蒸馏水定容至1000ml。
临用前稀释10倍。
（11）50%甘油：水：甘油=1:1，高温灭菌，4℃保存。
（12）1%BPB（溴酚蓝）：称取100mgBPB加水10ml，4℃保存。
（13）考马斯亮蓝R250染色液：称0.5g考马斯亮蓝R250，溶于125ml异丙醇中，搅拌溶解后加入50ml冰醋酸，加水325ml混匀后过滤，室温保存。
跑核酸电泳胶
跑核酸电泳配制琼脂糖凝胶50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
Tris 242 gNa2EDTA·2H2O 37.2 g2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
用时稀释成1×TAE Buffer (pH8.5)Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。
加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。
小心摇动锥形瓶。
使琼脂糖充分均匀熔化。
此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。
必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。
熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。
5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入0.175µl goldwell,并充分混匀（一定要）。
注：goldwell是一种对皮肤和眼睛有刺激性物质。
使用含有goldwell的溶液时，请戴好手套。
6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。
凝胶厚度一般在3~5 min之间。
7.在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。
注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存2~5天。
琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围琼脂糖浓度最佳线形DNA分辨范围(bp)0.5%0.7%1.0% 1.2%1.5%2.0% 1,000~30,000 800~12,000 500~10,000 400~7,000 200~3,000 50~2,0006× Loading Buffer(DNA电泳用)组份浓度30 mM EDTA36%(V/V) Glycerol0.05%(W/V) Xylene Cyanol FF0.05%(W/V) Bromophenol Blue配制量500 ml配制方法 1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
常用电泳试剂配制方法
常用电泳试剂配制方法电泳试剂是在蛋白质或核酸电泳实验中使用的一系列化学试剂。
常用的电泳试剂包括缓冲液、凝胶、加载缓冲液、电泳盐溶液等。
以下是常用电泳试剂的配制方法。
一、缓冲液的配制方法：1.TAE缓冲液TAE缓冲液配方：0.04M缩醛酸，0.001M乙酸，0.001MEDTA，pH8.0。
配制方法：将缩醛酸溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值为8.0，加入乙酸和EDTA，再用蒸馏水稀释至适量。
2.TBE缓冲液TBE缓冲液配方：0.089M缩醛酸，0.089M硼酸，0.002MEDTA，pH8.3配制方法：将缩醛酸溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值为8.3，加入硼酸和EDTA，再用蒸馏水稀释至适量。
3. Tris-EDTA缓冲液 (TE缓冲液)TE缓冲液配方：10mM缩醛酸，1mMEDTA，pH8.0。
配制方法：将缩醛酸溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值为8.0，然后加入EDTA，再用蒸馏水稀释至适量。
二、凝胶的配制方法：1.聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶配方：30%丙烯酰胺，0.8%季铵盐，1M缓冲液，10%过硫酸铵。
配制方法：将丙烯酰胺溶解在适量的蒸馏水中，加入季铵盐，搅拌均匀后加入缓冲液，最后加入过硫酸铵，混合均匀后注射到凝胶板中，等待凝固。
2.熔融琼脂糖凝胶熔融琼脂糖凝胶配方：1%琼脂糖，1×TAE缓冲液。
配制方法：将琼脂糖溶解在适量的蒸馏水中，加热至完全融化，冷却至60-70°C后加入TAE缓冲液，混合均匀后倒入凝胶板中，等待凝固。
三、加载缓冲液的配制方法：1.6×加载缓冲液6×加载缓冲液配方：40%甘露醇，0.25%溴酚蓝，一定量的TAE或TBE缓冲液。
配制方法：先将甘露醇溶解在适量的蒸馏水中，加入溴酚蓝，搅拌均匀后加入适量的TAE或TBE缓冲液，混合均匀后即可。
四、电泳盐溶液的配制方法：1.DNA电泳盐溶液DNA电泳盐溶液配方：1×TAE缓冲液。
凝胶电泳缓冲液的配制
2．测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
混合床树脂不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
3．常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris碱0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris碱0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-硼酸（TBE）a0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris碱0.001mol/L EDTA 27.5硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 碱性缓冲液b1×:50mmol/L Na OH 1×:5ml 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)说明：①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
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2．测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
混合床树脂不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG
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共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
3．常用的电泳缓冲液
缓冲液使用液浓贮存液（每升）
Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris碱
0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris碱
0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）
40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-硼酸（TBE）a0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris碱
0.001mol/L EDTA 27.5硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 碱性缓冲液b1×:50mmol/L Na OH 1×:5ml 10mol/L NaOH
1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris
250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）
0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)
说明：
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。
目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4．2×SDS凝胶加样缓冲液
100mmol/L Tris·HCl(6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L
贮存液现加于上述缓冲液中。
5．凝胶加样缓冲液
缓冲液类型6×缓冲液贮存温度
Ⅰ0.25%溴酚蓝
4℃0.25%二甲苯青FF
40%（W/V）蔗糖水溶液
Ⅱ0.25溴酚蓝
室温0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(Ficoll400)
Ⅲ0.25%溴酚蓝
4℃0.25%二甲苯青FF
30%甘油水溶液
Ⅳ0.25%溴酚蓝
4℃40%(W/V)蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液:
300mmol/L NaOH
6mmol/L EDTA
Ⅴ18%聚蔗糖(Ficoll400)
4℃0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2. 2倍，而与琼脂糖浓度无关。
以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。
在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。
但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。