凝血酶原时间PT测定-检验科临检室作业书

凝血酶原时间PT测定

1.实验原理

凝固法确定量的血浆（50微升）样本经一定时间加温后，加入PT 试剂，采用波长660nm的光照射样本，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过标准曲线求出凝血酶原时间，再通过参数计算得出凝血酶原活动度及INR值。

2.标本采集

2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。

2.2

3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。

3.标本存放：1小时内(3000r/min×15min)分离血浆，室温放置不超过2小时，2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月），只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。

4.标本运输：低温条件下运输。

5.标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。

6.实验材料：

6.1德国DadeBehringMarburg公司凝血酶原测定试剂，每瓶加4ml 蒸馏水溶解(40人份)，未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过5天。

6.2DadeControl质控血浆.用蒸馏水1ml溶解后放置30分钟，才能使用或分装。复溶后，室温保存2小时，2～8℃4小时。

7.仪器设备：

7.1仪器名称：SysmexCA-1500全自动血液凝固分析仪

7.2仪器厂家：日本Sysmex公司

7.3仪器型号：SysmexCA-1500

7.4仪器技术参数：

7.4.1速度：最快检测速度180测试/小时，组合检测约140测试/小时。

7.4.2试剂位：36个，具冷藏功能。

7.4.3样本位：50个，可自动连续添加。

7.5仪器校准程序：

7.5.1校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。

7.5.2校准操作：设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)。

8.操作步骤：

8.1检查前准备：

8.1.1清空废液瓶，清空反应杯抛弃槽。

8.1.2添加足够反应杯(不能超出警告线)。

8.1.3添加清洁液试剂，清洗用蒸馏水等。

8.2开机：先开打印机再开主机，开机后仪器自检，约15分钟，屏幕上方“NotReady”变为“Ready”，表示仪器预热完成，进入系统准备工作状态，可进行测定。

8.3输入工作清单：从主菜单选WorkList→出现第一架样本工作清

单输入画面，选IDNOEntry输入第一个样本号→按相应实验项目名称键PT，并同时输入此标本的其他测试项目，若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按Profile#1组合选项选择，选中项目相应位置标记为“○”，选完项目后按ENTER确认，要删除某项目时只需按该项目（按键如PT○变为PT-）即可，→用↑↓键，同样输入其他标本编号项目。（快速输入可用Repeat键，输入重复标本数，复制同样项目的输入。

8.4放置样本：按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上，并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)

8.5按Start键开始测定：盖好遮光盖，确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按Start键，进样开始，→测定进行，仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”，此时可重复8.3，8.4，继续输入其他架样本工作清单，按Rigester，继续确认测试任务，添加样本架继续测试，→测定完成，测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态。8.6每日维护：完成每日的测定后，关机前维护。

8.6.1冲冼针RinseProbe

8.6.2清空废液瓶，和已使用过的反应杯。

8.6.3将试剂架连用试剂放入冰箱。

8.7关机：先关主机，再关打印机。

9.检验结果的判断与分析：

9.1仪器测定PT的线性范围在5-600秒，测定完成后仪器显示PT

秒数、PT活动度、INR值等参数。若不能对参数进行正确计算，将出现下列信息：

﹡﹡﹡.﹡出现错误，不能得到分析数据

ˉˉˉ.ˉ不能计算参数

＋＋＋.＋数值超出线性范围.

9.2仪器设定PT参考范围在10-14秒，如果得不到一个正常数值，在数据的左侧将出现下列标记：

﹡出现错误信息

<数据低于可报告的低限

>数据高于可报告的高限

10.质量控制：每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则详见室内质控作业指导书。

11.临床意义：PT是用于筛查外源性凝血系统（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）及口服抗凝药物剂量（如华发令、双香豆素等）的检测项目。

11.1参考范围：秒数S：10-14S（患者结果超过正常对照35以上有临床意义）

活动度：80-120％

国际标准化比值INR：0.8-1.5

11.2PT延长见于先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏；低（无）纤维蛋白原血症；获得性见于DIC、原发性纤溶症、维生素K缺乏、肝病、血循环中有抗凝物质（如口服抗凝剂、肝素）。

11.3PT缩短：见于先天性凝血因子V增多、口服避孕药、高凝状态

（DIC早期、急性心肌硬塞等）、血栓性疾病（脑血栓形成、急性血栓性静脉炎）、多发性骨髓瘤、洋地黄中毒、乙醚麻醉后。

11.4监测口服抗凝药（如华发令、双香豆素等）的重要指标。

一般要求：PT(S)：18-24SINR：2.5-3.5，不同疾病不同值。

12.变异的潜在来源

12.1抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查

12.2标本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异。

12.3纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。

12.4超剂量使用肝素使凝固时间延长。

12.5FDP增加使凝固时间延长。

12.6某些药物，如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。

13.操作注意事项：干粉试剂及质控血浆溶解

13.1确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书要求使用。

13.2溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。

13.3复溶后，室温放置5-10分钟方可使用。

14.仪器维护与保养

14.1日常维护（见8.6）

14.2每周维护

14.2.1液路冲洗：仪器在“Ready”状态下，从主菜单按SpecialMenu →按Maintain→按Rinse﹠Prepare→按Execute键运行此程序→完成后