葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法
葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。
5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。
2h 以后方可使用。
7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理_概述及解释说明
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，并对其进行详细的解释和说明。
血糖测定是医学和生物科学领域中非常重要的一项实验技术，用于评估人体内的葡萄糖水平以及相关代谢功能的异常情况。
葡萄糖氧化酶法是一种常用的血糖测定方法，其基本原理是利用特定酶对葡萄糖进行氧化反应并与辅助试剂发生显色反应，从而间接地测定血液中的葡萄糖含量。
1.2 文章结构本文将按照以下结构进行展开：首先，介绍葡萄糖氧化酶的简要概况和血糖测定方法的总体概述；其次，详细讲解葡萄糖氧化酶法测定血糖的基本原理；然后，描述实验步骤并给出操作流程；接着，分析实验结果并讨论其中的意义和影响因素；最后，总结实验结论并展望未来该领域的研究意义和发展方向。
1.3 目的本文的目的是全面而清晰地介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，帮助读者了解该方法在实际应用中的作用和意义。
通过本文的阅读，读者可以深入了解葡萄糖氧化酶法的基本理论和操作流程，并对实验结果进行准确而详细的分析与讨论。
同时，本文也旨在提供对该方法局限性和未来发展方向进行探讨，并为相关研究人员提供参考，促进该领域的进一步发展和突破。
2. 葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理：2.1 葡萄糖氧化酶简介：葡萄糖氧化酶是一种存在于细胞内的酶类，在生物体中起到将葡萄糖转化为能量的重要作用。
该酶主要参与细胞内氧化还原反应，并催化葡萄糖与辅酶NAD+之间的反应。
在此过程中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，并产生还原型辅酶NADH。
2.2 血糖测定方法概述：血液中的血糖水平是一个重要的生理指标，可以提供人体能量供给的信息。
因此，血糖水平的测定对于诊断和治疗许多代谢性疾病非常重要。
目前，有多种方法用于测定血液中的血糖浓度，其中最常用且最经典的方法就是使用葡萄糖氧化酶法。
2.3 葡萄糖氧化酶法的基本原理：葡萄糖氧化酶法是一种非常敏感和特异性的测定血糖浓度的方法。
该方法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖的特异性反应，通过检测在该反应中生成的还原型辅酶NADH的产生量来间接测定血液中的血糖浓度。
实验血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
4.试管50支，
6.记号笔6支
7.蒸馏水1瓶
此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。
【参考文献】
1.全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997,P616.
2.Trinder P. Ann Clin Biochem，1969, 6: 24-27.
血糖测定实验所需器材：
1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm），
2.恒温水浴箱（能调温度的，37C）,
>13000U/L
过氧化物酶（POD
>900U/L
R2
磷酸缓冲液（pH7.0）
100mmol/L
酚
11mmol/L
4-氨基安替吡啉
0.77mmol/L
葡萄糖标准液5.55mmol/L(100mg/dl)
【样本】
新鲜无溶血血清。
【步骤】
将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液
空白管
校准管
样品管
工作液
1.50 ml
1.50 ml
1.50 ml
蒸馏水
0.01 ml
校准液
0.01 ml
样品
0.01 ml
分别混合均匀，37C水浴10〜15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。
【计算】
葡萄糖
葡萄桃
【参考值】
血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L（70—110mg/dl）。
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法）
【目的】
体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。
【临床意义】
葡萄糖氧化酶的活力测定实验报告
葡萄糖氧化酶的活力测定实验报告葡萄糖氧化酶酶活测定葡萄糖氧化酶酶活测定1 酶活单位与定义pH6.0、30℃的条件下，每分钟能把 1.0μmol 的β-D-葡萄糖氧化成D-葡萄糖酸和H2O2 的酶量为一个单位。
2 测定原理葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
3 试剂和溶液3.1 磷酸盐缓冲液（pH6.0）称取16.61g 磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O ）和35.82g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），溶于无CO2 的水中，稀释到1000ml。
3.2 邻联茴香胺甲醇缓冲液1g 邻联茴香胺加在100ml 甲醇中搅拌溶解备用。
临用时现配，取0.1ml 加入到上述缓冲液12ml 中混匀。
3.3 180g/l 葡萄糖水溶液18g 葡萄糖加适量水溶解，并定容至100ml。
3.4 0.03%辣根过氧化物酶液称取辣根过氧化物酶（HRP,美国Ameresco 公司）10mg，溶于30ml 蒸馏水。
4 仪器设备721-分光光度计、恒温水浴、秒表5 分析步骤5.1 待测酶样品的处理将待测酶样做适当稀释后进行试验，使得测定△A 值在0.25～0.4。
5.2 测定6 结果表示与计算X=[△A÷（11.3×t×0.1）] ×nt—测定时间，min0.1—样品体积，ml11.3—消光系数n—稀释倍数所得结果表示至整数。
篇二：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucose oxidase ，GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase ，POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。
葡萄糖检测标准操作规程SOP
葡萄糖1.目的规范葡萄糖测定的操作程序，确保葡萄糖测定结果准确。
2.检验方法氧化酶法（两点终点法） 3.检验原理 葡萄糖+O 2+H 2O 葡萄糖酸+H 2O 2H 2O 2+4-AAP+苯酚红色醌亚胺+4H 2O在波长505nm 处比色，计算出GLU 浓度。
4.临床意义临床检测GLU 浓度主要用于糖尿病诊断、昏迷鉴别诊断及糖代谢研究。
血糖增高主要见于：①生理性高血糖：可见于饭后1-2小时或情绪紧张肾上腺分泌增加时;②病理性高血糖：可见于内分泌功能障碍引起的糖尿病、颅外伤、颅内出血、脑膜炎引起的颅内高压、脱水引起的高血糖、急慢性胰腺炎、肝功能障碍等。
血糖降低主要见于：①生理性低血糖：常见于饥饿和剧烈运动后。
②病理性低血糖：可见于高胰岛素血症、非胰性肿瘤、糖原累积症、自身免疫性疾病、半乳糖血症和肾脏疾病等。
5.标本采集及干扰因素 5.1标本要求空腹不抗凝静脉血2~3ml 。
5.2标本保存室温保存，及时送检。
血清ALT 在20-25℃可稳定24小时，在2-8℃储存可稳定7d ，-20℃冰冻保存可稳定30d 。
5.3注意事项推荐选用血清，避免溶血，红细胞中ALT 比血浆高约7倍，溶血时红细胞内ALT 可进入血浆，导致测定结果偏高。
标本应避免溶血、脂血、黄疸。
6.检测仪器日立7180全自动生化分析仪，使用具体要求和校准程序详见《仪器GOPOD操作规程》。
7.试剂 7.1试剂品牌美康生物 7.2包装规格200mL （R1:2×65mL+R2:1×70mL ） 7.3主要组成成分 试剂成分含量（最终反应体系） 试剂1 磷酸盐缓冲液 0.1mol/L 苯酚0.01×10-3mol/L 试剂2葡萄糖氧化酶 16000u/L 过氧化物酶 1000u/L 4-氨基安替比林0.02×10-3mol/L不同批次的试剂不推荐混合使用 7.4储存条件有效期试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。
葡萄糖测定标准操作规程
葡萄糖测定标准操作规程1.检验原理：（葡萄糖氧化酶法）葡萄糖氧化酶（GOD ）利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。
过氧化物酶（POD ）在色原性氧受体4-氨基安替比啉（4-AA ）和对羟基苯甲酸钠去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量成正比。
D-葡萄糖+2O +O H 2−−→−GOD 葡萄糖酸+22O H222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD 红色醌类物质+4O H 2 2.试剂组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清或用草酸钾-氟化钠抗凝的血浆。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释：6.1在给定的样本/试剂比例和条件测定时，本试剂线性范围可达25mmol/L。
样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本，最大稀释倍数为10.6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×187.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在500nm处吸光度大于0.200时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：R1：无色或淡红色透明液体，无悬浮物及沉淀；R2无色透明液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.2008.4线性范围：试剂的线性区间为[2.2-25]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.2-4.7]mmol/L区间内，线性绝对偏差不超过±10U/L；（4.7-25）mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用参考物质测定时，当浓度≤4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应不超过±0.833mmol/L，当浓度＞4.16mmol/L，实测值与标识值偏差应在±20%范围内。
生化实验室糖Glu葡萄糖氧化酶法作业指导书
生化实验室糖Glu葡萄糖氧化酶法作业指导书1、前言试验名称：葡萄糖测定，英文名称：Glu，方法：葡萄糖氧化酶法。
本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在OLYMPUS－AU400全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的葡萄糖浓度，以保证测定结果的准确可靠。
本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中葡萄糖的浓度。
葡萄糖的准确测定对于诊断和治疗高血糖症和低血糖症是十分重要的，高血糖症可发生于糖尿病、静脉输入含葡萄糖液体、严重应激状态、脑血管意外，低血糖症可见于胰岛瘤、胰岛素用药，先天性碳水化合物代谢障碍和禁食。
通常在研究这些病症时，还将葡萄糖测定与各种耐量试验和剌激试验一同进行。
2、测定原理本试验采用改良的Trinder氏方法，其反应原理：葡萄糖+O2+H2O GOD葡萄糖酸+H2O2H2O2+AAP+HBA POD醌亚胺色素+H2O上式中AAP为4-氨基安替比林HBA为4-羟基苯甲酸GOD为葡萄糖氧化酶POD为辣根过氧化物酶在上述反应中，红色醌亚胺色素的生成量与样本中葡萄的浓度成正比，通过在520nm波长处测定吸光度的变化值，从而计算出样本中葡萄糖的浓度。
3、试剂试剂生产商：长海科华生物工程股份有限公司。
剂型：液体双试剂。
包装量：R1：4*30ml R2：4*15ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2401171号。
生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。
基本成份：试剂1：过氧化物酶375u/l4-羟基苯甲酸15mmol/l4-氨基安替比林0.75mmol/l磷酸盐缓冲液110mmol/l试剂2：磷酸盐缓冲液110mmol/l葡萄糖氧化酶6000u/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。
启用后2―10℃可稳定30天，若试剂混浊，或空白在520nm下吸光度值高于0.4A时，则不能使用。
4、标准品：使用试剂盒附带标准品5、质控品：生产商：英国Randox公司。
葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度课件
02
03
孵育
将反应孔放入恒温孵育箱中，在 适宜的温度下孵育一定时间，使 反应进行完全。
04
结果计算
数据处理
将实验获得的光密度值输入到相应软件或表 格中，进行数据整理和计算。
标准曲线制作
根据标准曲线和样本的光密度值，计算出血 糖浓度。
结果换算
根据标准品的光密度值制作标准曲线，用于 样本结果的换算。
结果报告
个性化医疗
结合患者个体差异和疾病进程，制 定个性化的血糖监测方案，提高治 疗效果和生活质量。
感谢您的观看
THANKS
。
操作简便
该方法操作简便，易于 自动化，适合大规模样
本检测。
缺点
成本较高
葡萄糖氧化酶制备困难， 成本较高，导致整个测定 方法的成本较高。
对氧气有依赖性
葡萄糖氧化酶法需要氧气 参与反应，如果样本中存 在缺氧情况，会影响测定 结果。
对温度和pH敏感
该方法对温度和pH敏感， 需要在特定的条件下进行 测定，否则会影响结果的 准确性。
开发实时、连续监测血糖浓度的技术 ，以满足临床对糖尿病患者血糖监测 的需求。
纳米技术应用
利用纳米材料提高酶的催化效率和灵 敏度，降低检测下限，提高检测准确 性。
新技术的应用
生物传感器技术
将葡萄糖氧化酶与电化学或光学传感器结合，开发便携式血糖检 测仪，方便患者自我监测。
人工智能与机器学习
利用人工智能和机器学习算法对葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度数据 进行处理和分析，提高诊断准确性和预测能力。
葡萄糖氧化酶法测定血糖 浓度课件
目录
• 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理 • 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的实验步骤 • 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的优缺点 • 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的应用场景 • 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的未来发展
葡萄糖(GLU)-葡萄糖氧化酶终点法
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。
过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。
此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。
GODβ-D-葡萄糖 + H2O + O2 ----------- H2O2 + D-葡萄糖酸PODH2O2 + 4-氨基安替比林 + 苯酚 ---------- 醌亚胺（红色）+ H2O2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。
常用药物中可致血糖增高的有以下几类。
糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。
糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。
如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。
甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元分解及糖异生，使血糖增高。
因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应慎重给药。
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)ppt课件
(葡萄糖氧化酶法)
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
1
一、实验目的和要求：
1. 掌握酶联法测定血糖含量的基本原理。 2. 熟悉分光光度计的操作。 3. 掌握血糖正常水平及其测定的临床意义。 4. 复习血糖的来源、去路及其调节的有关理
论知识。
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
步骤：
过氧化物酶
醌亚胺 + 4H2O
空白管
标准管
样品管
工作液 蒸馏水
标准液 （10mM）
样品
1.5 mL 0.03mL
1.5 mL
1.5 mL
0.03mL
0.03mL
取3根试管，分别加入试剂混合均匀后，37摄氏度孵育10min，505nm比色， 以空白管试剂调零，分别读取标准管和样品管的吸光值，并计算样品的实际浓 度。
结果：请记录实验数据并列出计算公式
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
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葡萄糖标准溶液的配制
配制10mmol/L葡萄糖溶液：
1. 准确称量0.18g葡萄糖粉末； 2. 用双蒸水溶解，充分溶解后，定容至100ml。
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
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标准曲线
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
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五、实验结果：
【计 算】 • 待测样品中葡萄糖浓度（mmol/L）
＝ ——测定—管—吸—光—度 ×10
标准管吸光度
＝ —— ×10
A样 A标
血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
12
空白管标准管样品管工作液15ml15ml15ml蒸馏水003ml标准液10mm003ml样品003ml取3根试管分别加入试剂混合均匀后37摄氏度孵育10min505nm比色以空白管试剂调零分别读取标准管和样品管的吸光值并计算样品的实际浓葡萄糖氧化酶葡萄糖酸过氧化物酶醌亚胺4h结果
葡萄糖氧化酶法实训报告
一、实验目的1. 掌握葡萄糖氧化酶法的原理及操作步骤。
2. 学会使用葡萄糖氧化酶试剂盒进行血糖检测。
3. 了解血糖测定的临床意义。
二、实验原理葡萄糖氧化酶法是一种检测葡萄糖浓度的方法，其原理是葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下被氧化为葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物质。
此有色物质在625nm波长下与葡萄糖浓度成正比，通过测定蓝色物质的吸光度可计算样品中葡萄糖的含量。
三、实验材料1. 试剂：葡萄糖氧化酶试剂盒、邻联甲苯胺、过氧化物酶、缓冲液、蒸馏水。
2. 仪器：紫外可见分光光度计、移液器、试管、吸管、试管架。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）取6支试管，编号为1-6，分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL的标准葡萄糖溶液。
（2）向各试管中加入1mL的缓冲液，混匀。
（3）向各试管中加入100μL的葡萄糖氧化酶，混匀。
（4）室温下反应10分钟。
（5）向各试管中加入100μL的过氧化物酶，混匀。
（6）室温下反应10分钟。
（7）向各试管中加入100μL的邻联甲苯胺，混匀。
（8）室温下反应10分钟。
（9）以蒸馏水为空白，在625nm波长下测定各管的吸光度。
（10）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血糖检测（1）取血清样本2mL，加入2mL的缓冲液，混匀。
（2）按照标准曲线绘制步骤中的（3）-（9）操作，测定吸光度。
（3）根据标准曲线计算血清样本中葡萄糖的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制结果：以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，曲线线性良好。
2. 血糖检测结果：根据标准曲线计算血清样本中葡萄糖的浓度为X mmol/L。
六、实验讨论1. 本实验采用葡萄糖氧化酶法检测血糖，该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好等优点。
2. 在实验过程中，需要注意以下几点：（1）严格控制反应时间，避免反应时间过长或过短影响检测结果。
葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度
谢谢！
三.测定的血糖浓度异常： 反应不彻底引起的（偏低） 葡萄糖标准溶液浓度有问题（偏高或偏低） 移液器引起的（偏高或偏低）
【讨论】
本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应， 第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物 质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争 过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑 制，使测定结果偏低。
（1）葡萄糖＋O2＋H2O
葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌式物质
Trinder反 应
【思考题】
1.为什么要在饥饿条件下采血？ 血糖主要来源是食物，进食会增高血糖浓度。 2.除糖尿病外，若血糖浓度测定结果不正常 可考虑哪些原因？ 注射葡萄糖、饮食、糖代谢疾病、应激反应 3.本法测定血糖为何不需制备血滤液？ 血滤液除蛋白，对血糖测定没有影响。 4.为什么取血前要涂凡士林？ 起润滑，防渗血作用。
1.正常血糖浓度: 3.9-6.1 mmol/L(成年人空腹)
低血糖:
低于 2.8 mmol/L
高血糖:
超过 7.8 mmol/L
2. 低血糖的因素：胰岛素、磺脲类药、饮酒、严重饥 饿
高血糖的因素：进食、情绪紧张时、糖尿病.
3. 糖尿病的诊断和治疗监视、新生儿低血糖症等.
肾上腺素
adrenaline;epinephrine
结果分析
一.结果可报告范围： 本法对葡萄糖的检测范围为0.06～22.2 mmol/L。当样品测 定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 4稀释， 重新测定，结果乘以5。
二.当样品中抗坏血酸浓度≤ 852 µmol/L，胆红素浓度≤ 684 µmol/L， 血红蛋白浓度≤ 2.00 g/L，甘油三酯浓度≤ 22.6 mmol/L时没有观察 到干扰。
生物化学：葡萄糖测定(酶法)
葡萄糖氧化酶法
1
【实验要求】
1. 掌 握 掌 握 血 糖 测 定 葡 萄 糖 氧 化 酶 法 （ GODPOD法）的原理，操作方法 2.熟悉葡萄糖测定的临床意义； 3.巩固分光光度计的使用。
2
【实验原理】
葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖 酸，并产生过氧化氢。在过氧化氢酶（POD）及色原性 受体4-氨基安替比林（4-AAP）的存在下，过氧化氢释 放氧使色素原氧化生成红色醌类化合物。醌的生成量与 葡萄糖成正比，在波长520nm处比色，求得葡萄糖含量。
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【临床意义】
3.生理性或暂时性低血糖 见于饥饿、剧烈运动、注射胰岛 素后、妊娠和服用降糖药后。 4.病理性低血糖 见于(1)胰岛β细胞增生瘤等，使胰岛素分 泌过多；(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能 减退，肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、 肾上腺皮质激素分泌减小；(3)严重肝病患者，由于肝脏储 存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
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【注意事项】
1、注意准确的加入所需要的液体量。 2、注意胆红素、谷胱甘肽、尿酸和维生素C等一些还 原性物质将使结果受到干扰。
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【打扫卫生】
1、实验结束后对自己用过的试管、移液管等物 品进行清洗。 2、打扫桌面与地面卫生。 3、带齐本人物品，离开实验室。
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谢 谢！
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【计算】
血清葡萄糖（mmol/L）＝ Au Cs As
Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度
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【参考范围】
血清葡萄糖：3.89～6.11 mmol/L
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【临床意义】
1.生理性高血糖 见于饭后1～2h，注射葡萄糖或摄入高糖 食物后、情绪紧张肾上腺素分泌增加时，但不应超过 10mmol/L。 2.病理性高血糖 见于(1)内分泌腺功能障碍能引起高血糖， 如胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常， 临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的各种对抗胰岛 素的激素分泌增加也会出现高血糖；(2)颅内压增高：颅内 压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等； (3)由于脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等可使血 糖轻度增高。
葡萄糖氧化酶法测定血糖实验报告
葡萄糖氧化酶法测定血糖实验报告
本工作基于丰田EM200诊断仪，对血液样本进行糖尿病诊断，利用葡萄糖氧化酶法测定血糖实验，以检测患者每日的血糖水平，从而校正患者的血糖变化。
本文研究了本实验过程并对结果进行分析，从而为临床支持提供证据。
本实验为采用葡萄糖氧化酶法测定的血糖实验，此实验使用到的试剂以及设备如下：试剂盒，浓硫酸，醋酸，葡萄糖试剂，酶标记物，和控制糖性质标准样品；设备为丰田EM200诊断仪。
实验步骤：
（1）实验材料准备：标准样品、空白反应液以及待测血液样本分离准备。
（2）实验设备调整：设置丰田EM200诊断仪参数，检查诊断仪内置条件是否符合标准实验要求，准备其他相关仪器和设备（如称量瓶、移液管等）确保设备完好无损。
（3）测试：将待测血液样本与酶和空白反应液混合，加入丰田EM200诊断仪，按设定的参数进行测定，直至测试结束。
（4）结果计算：实验完成后把测试结果放入电脑中，根据实验结果进行计算，最后得到血糖检测结果。
根据实验结果，常规血糖浓度（6.1 mmol/L）转换成用于EM200诊断仪的测试值为11.5±0.3 mmol/L。
此外，重复实验两次的结果显示，血糖浓度的标准差小于0.2，从而表明葡萄糖氧化酶法有效可靠。
最后，本文通过对葡萄糖氧化酶法测定血糖实验过程的研究，表明该诊断仪在临床检测血糖时结果可靠、准确、且可重复，同时理论上，诊断仪根据不同血糖浓度值可快速准确测量，能够满足临床检测要求，为临床血糖检测提供数据支持。
氧化酶法测定葡萄糖的原理
氧化酶法测定葡萄糖的原理一、引言在生化分析中，准确测定物质的含量是非常重要的，而葡萄糖作为一种常见的单糖，其测定方法也备受关注。
本文将介绍一种常用的方法——氧化酶法，该方法以氧化酶作为催化剂，将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并通过测定葡萄糖酸的含量来间接测定葡萄糖的浓度。
二、原理1. 葡萄糖的氧化反应氧化酶可以催化葡萄糖与待定电子受体（如辅酶NAD+）之间的氧化反应，生成相应的葡萄糖酸和还原型辅酶NADH。
该反应的化学方程式如下：葡萄糖+ NAD+ + H2O → 葡萄糖酸 + NADH + H+这个氧化反应是一个底物与辅酶之间的双电子转移反应。
2. 氧化酶的作用氧化酶作为催化剂可以显著加速上述葡萄糖的氧化反应，降低反应的活化能，提高反应速率。
同时，氧化酶本身不参与反应，因此可以被反复使用。
3. 检测葡萄糖酸含量利用化学分析方法，可以测定葡萄糖酸的含量，进而间接推算出葡萄糖的浓度。
常用的方法包括光度法、电化学法等。
三、方法步骤1. 准备样品将待测样品中的葡萄糖转化为葡萄糖酸，通常需要进行酸水解、酶水解等预处理步骤，以使葡萄糖完全转化为葡萄糖酸。
2. 添加试剂向样品中加入适量的辅酶NAD+和氧化酶，使其与葡萄糖酸反应生成NADH。
3. 反应控制根据实验要求，可以控制反应的温度、 pH 值等条件，以提高反应效率和准确性。
4. 测定吸光度利用光度法或其他适用的方法，测定反应体系中产生的NADH的吸光度，通过标准曲线或计算公式，推算出样品中葡萄糖的浓度。
四、应用与优势氧化酶法测定葡萄糖的原理基于酶的催化作用，具有以下优势：1. 高灵敏度：由于酶的催化作用，可以极大地提高反应速率，使测定结果更加灵敏。
2. 高选择性：氧化酶对葡萄糖的催化作用非常特异，能够准确测定葡萄糖的浓度。
3. 容量小：只需少量的酶即可进行检测，可以大大减少实验所需的试剂量。
4. 适用范围广：氧化酶法不仅可以用于葡萄糖的测定，还可以应用于其他单糖的测定，具有广泛的应用前景。
葡萄糖测定
葡萄糖测定摘要】体液中葡萄糖含量的高低是标志着人体健康状况的重要指标，尤其是糖尿病人的血液葡萄糖监控。
葡萄糖浓度的突然升高与降低都预示着一种异常情况的发生。
许多葡萄糖测定的电化学和光化学方法已经被报道并应用于不同样品的分析。
【关键词】葡萄糖采血管检验(一)葡萄糖氧化酶法1.原理葡萄糖氧化酶(GOD)能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生一分子过氧化氢。
在过氧化物酶(POD)和色原性氧受体(如联大茴香胺，4-氨基安替比林偶联酚)的存在下，过氧化氢分解，释放出初生态氧，氧化色素原，生成有色化合物。
2.试剂推荐使用有批准文号的优质市售试剂盒。
配制方法如下(仅供参考)：(1)0.1 mol／L(pH 7.0)磷酸盐缓冲液：溶解无水磷酸氢二钠8.67 g及无水磷酸二氢钾5.3 g于800 ml蒸馏水中，用1 mol／L氢氧化钠或盐酸调节pH至7.0，然后用蒸馏水稀释至1 L。
(2)酶试剂：取葡萄糖氧化酶l 200 U、过氧化物酶1 200 U、4-氨基安替比林10 mg、叠氮钠100 mg，加上述磷酸盐缓冲液至80 ml左右，调节pH至7.0，加磷酸缓冲液至100 ml。
置冰箱保存，至少可稳定3个月。
(3)酚试剂：重蒸馏酚100 mg溶于100 ml蒸馏水中(酚在空气中氧化成红色，可先配成500 g／L的溶液，用时稀释)。
贮存于棕色瓶中。
(4)酶酚混合试剂：酶试剂及酚试剂等量混合，在冰箱内可以存放1个月。
(5)葡萄糖标准贮存液(100 mmol／L)：无水葡萄糖(预先置80℃烤箱内干燥恒重，移置于干燥器内保存)。
称取1.802 g，以12 mmol／L苯甲酸溶液溶解并移入100 ml容量瓶内，再以12 mmol／L苯甲酸溶液稀释至100 ml刻度处，放置2小时后方可应用。
(6)葡萄糖标准应用液(5 mmol／L)：吸取葡萄糖标准贮存液5 ml，于100 ml容量瓶中，用12 mmol／L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
葡萄糖氧化酶法测血糖原理
葡萄糖氧化酶法测血糖，神奇的原理解析
葡萄糖氧化酶法测血糖是现在广泛使用的一种血糖检测方法。
其
测量的原理是将血样中的葡萄糖与葡萄糖氧化酶反应生成的过氧化氢，利用过氧化氢与辣根过氧化氢酶催化产生的芳香酚颜色的变化来测量
血糖水平。
葡萄糖氧化酶是一种在体内生成的酶类，它可以将葡萄糖
分解为过氧化氢和乙醛。
在实验室中，可以通过添加葡萄糖氧化酶来
实现葡萄糖的分解，从而进行血糖测量。
葡萄糖氧化酶法测血糖具有
响应速度快、精确度高、不受干扰等特点，被广泛应用于医疗、科研
等领域。
然而，在实际应用过程中，也要注意血样的采集和预处理、
试剂的选择和质量等问题，以保证检测结果的准确性和可靠性。
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葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖
【原理】
葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】
1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定
3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。
5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。
2h 以后方可使用。
7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】
1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2 ．手工操作法取试管
3 支，按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
【计算】
【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。
【临床意义】
1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。
2 ．病理性高血糖
(1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
(2) 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。
引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。
注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。
(3) 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
(4) 脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3 ．生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动。
4 ．病理性低血糖 ( 特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等 )
(1) 胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。
(2) 对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。
(3) 严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
【注意事项】
1 ．葡萄糖氧化酶对β- D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约 36% 为α型，64% 为β型。
葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。
国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。
新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置 2h 以上 ( 最好过夜 ) ，待变旋平衡后方可应用。
2 ．葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。
因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。
3 ．测定标本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆较好。
取草酸钾 6g ，氟化钠 4g 。
加水溶解至 100ml 。
吸取 0.1ml 到试管内，在 80 ℃以下烤干使用，可使 2 ～
3ml 血液在 3 ～ 4 天内不凝固并抑制糖分解。
4 ．本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠。
5 ．严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。
【评价】线性范围至少可达 22.24mmol/L ，回收率 94% ～ 105% ，批内 CV 为0.7% ～ 2.0% 。
批间 CV 为 2% 左右，日间 CV 为 2% ～ 3% 。
葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较， 73 份标本葡萄糖氧化酶法均值为 8.31mmol/L ，已糖激酶法均值 8.21mmol/L ，相关系数为 0.998
6 ，回归方程 y=1.0026x － 2.29 。
本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。
误差往往发生在反应的第二步。
一些还原性物质如尿酸、维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。
然而，在本法的测定条件下，溶血标本血红蛋白的浓度达 10g/L ，黄疸标本胆红素浓度达 342 μ mol /L ，维生素 C 小于 30mg/L ，均不影响测定结果。
氟化钠浓度达 2g/L 不干扰测定结果。
标本中含尿素浓度达 46.7mmol/L ，尿酸浓度达 2.95mmol/L ，肌酐浓度达 4.42mmol/L 。
半胱氨酸浓度达 3.30mmol/L ，甘油三酯浓度达 5.6mmol/L ，胆固醇 4.40 mmol/L ，对测定结果均无显著影响。
左旋多巴 100mg/L ，维生素 C 5mg/L 以上，谷胱甘肽 100mg/L 时，可引起负误差；半胱氨酸达 10mmol/L 时，产生相当 0.72mmol/L 葡萄糖的正误差。
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