土传病害生防菌哈茨木霉菌剂生产工艺的研究

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三、研究目标与内容
（二）研究内容
1、哈茨木霉固体发酵条件的研究 2、哈茨木霉固体发酵方式的研究 3、哈茨木霉固体发酵过程中营养成分的检测 4、哈茨木霉固体发酵产物的保存期及菌体稳定性检测 5、哈茨木霉菌剂的田间应用
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四、研究方法与技术路线
（一）研究方法——生防菌哈茨木霉固体发酵条件的研究
培养基配方 的筛选
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二、研究意义
➢ 本实验室已筛选出一株哈茨木霉菌FJAT-9040，研究表明Fra Baidu bibliotek 其对多种作物枯萎病有良好的防治作用。
➢为了该菌更好的产业化生产，利用微生物 发酵床养猪产生的副产物—垫料作为主要原 料进行固体发酵，形成哈茨木霉菌肥菌剂。 ➢一方面实现了资源的再利用，另一方面哈 茨木霉菌肥菌剂在应用中可起到增强植物抗 性及防病效果。
肖荣凤等对该菌株的GFP标记进行了研究，获得了1株荧光 性状稳定的菌株FJAT-9295；同时对该菌株土壤定殖示踪进行 了研究，研究表明菌株在育苗土中定殖最好， 泥土中定殖最 差；种植茄子的定殖效果比未种植的好。
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六、研究基础
（二）本实验研究基础
培养基配方的筛选——垫料与麸皮的比例
6.00E+07
8.00E+08
2.00E+08
4.00E+08
1.00E+08
0.00E+00 不加碳源 葡萄糖 蔗糖 乳糖
不同碳源
0.00E+00 0 0.1g 0.2g 0.3g 0.4g 0.5g
蔗糖质量
通过单因素方法筛选出了外加碳源为蔗糖，添加量为 0.1g/50ml。
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七、已具备的研究条件
该菌株的生物学特性、液体发酵条件、对不同枯萎病 病原菌的抑制作用已进行较为系统地研究。
平均孢子数（个/ml）
4.00E+07
2.00E+07
0.00E+00 10：0 9：1 8：2 7：3 6：4 5：5 0：10
垫料与麸皮（体积比）
通过单因素方法筛选出了垫料与麸皮的最佳产孢比例 垫料：麸皮＝9：1，产孢量为4.6×107个/ml。
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六、研究基础
培养基配方的筛选——麦粒含量的筛选
植株生长情况
•番茄、茄 子
枯萎病防效
•番茄、茄 子
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四、研究方法与技术路线
（二）技术路线
发酵条件 的研究
生防 菌哈 茨木
霉 FJAT9040
菌剂 生产 工艺 的研究
发酵方式 的研究
产物的 保存期 和稳定 性的检
测
菌剂 的田 间应 用
营养成分 的检测
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五、研究进度安排
2012年 2013年
培养条件 的筛选
垫料 麸皮 比例
麦粒 含量
碳源 及其 浓度
氮源 及其 浓度
含 水 量
接 种 量
培 养 温 度
培 养 时 间
响应面法筛选最佳配方 响应面法筛选最佳培养条件
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四、研究方法与技术路线
（一）研究方法——生防菌哈茨木霉固体发酵方式的研究
灭菌条件下对菌株生长的影响 固 体 发 酵 方 式 非灭菌条件下对菌株生长的影响
➢作物枯萎病是由尖孢镰刀菌引起的一 类土传性真菌病害。
➢病原菌从根部侵入植物，引起维管束 病变，引起萎蔫死亡。
➢目前，枯萎病的防治主要是化学药剂 防治法，抗病育种法以及轮作法。
➢化学药剂对环境的危害严重，抗病品 种培育费时费力，轮作又限制，生物防 治就成为最受青睐的办法。
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一、国内外研究现状与趋势
不同灭菌温度 不同灭菌时间
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四、研究方法与技术路线
（一）研究方法——生防菌哈茨木霉固体发酵方式的研究
浅盘培养法 固
体
发
酵
方 式
蘑菇菌棒培养法
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四、研究方法与技术路线
（一）研究方法——生防菌哈茨木霉固体发酵过程中营养 成分的检测
营养成分的 检测
碳源的 变化
氮源的 变化
水分的 变化
近红外光分析仪
3.00E+08
平均孢子数（个/ml）
2.00E+08
1.00E+08
0.00E+00 0
10% 20% 30% 40% 50% 麦粒含量（体积比）
通过单因素方法筛选出了外加麦粒的含量，40%（体积比） 产孢量为2.3×108个/ml。
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六、研究基础
培养基配方的筛选—碳源及其浓度的筛选
平均孢子数（个/ml） 平均孢子数（个/ml）
土传病害生防菌哈茨木霉菌剂 生产工艺的研究
指导老师：刘 波 博士、研究员 汇 报 人：曾庆才
福州大学、福建省农业科学院
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报告内容
一、国内外研究现状与趋势 二、研究意义 三、研究目标与内容 四、研究方法与技术路线 五、研究进度安排 六、研究基础 七、已具备的研究条件
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一、国内外研究现状与趋势
10-2013.3
4-5
2013年 6-7
2013年 8-10
2013年 11-2014.2
菌株FJAT9040固体 发酵条件 的研究
固体发酵 方式的研 究
固体发酵 过程营养 成分的检 测
固体发酵 产物保存 期及稳定 性的检测
菌剂的应 用
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六、研究基础
（一）实验室研究基础
张衡宇等对该菌株的研究主要包括生物学、液体发酵条件、 对不同枯萎病病原菌的抑制作用。
本实验室已成功对该菌株进行GFP标记，并具有一株 荧光性状较稳定的菌株。
本实验室仪器设备齐全，有经验丰富的老师指导，为 实验的顺利进行提供了保障。
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四、研究方法与技术路线
（一）研究方法——哈茨木霉固体发酵产物保存期及菌体 稳定性检测
保存期及稳
不同
不同
不同
定性检测
湿度
温度
时间
孢子萌发情况
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四、研究方法与技术路线
（一）研究方法——生防菌哈茨木霉FJAT-9040菌剂 的田间应用
菌剂的田间应用
种子出苗
•茄科：番 茄、茄子 •瓜类：黄 瓜、甜瓜
➢ 生防微生物主要有木霉菌、丛枝菌根真菌、非致病性 尖孢镰刀菌。其中，木霉菌对多种植物病害具有很好 的生防作用，被认为具有重要生防价值。
➢ 木霉菌已广泛用于各种作物枯萎病的防治中，如 Thangavelu, 2003; 杨春林, 2008; Ling N, 2009。
➢ 国内外已有商品化木霉制剂，较多为液体发酵液及其 孢子菌剂。采用固体发酵方式的较少。
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三、研究目标与内容
（一）研究目标
1、探究不同营养物质、培养条件对生防菌哈茨木霉产 孢的影响。
2、摸索生防菌哈茨木霉固体发酵的方式，为其扩大生 产提供可靠依据。
3、摸索生防菌哈茨木霉固体发酵过程中营养成分的变 化，为其发酵过程中补料提供技术参数。
4、探究生防菌哈茨木霉菌剂生产工艺流程，为生防菌
哈茨木霉菌剂工业化和商品化奠定基础。