抗体的制备方法与原理
单克隆抗体的制备原理及方法
单克隆抗体的制备原理及方法
单克隆抗体的制备原理及方法是通过以下步骤来实现的：
1. 免疫原的选择：选择一个目标抗原，并将其注入到免疫宿主中，例如小鼠。
2. 免疫应答：免疫宿主的免疫系统会识别并产生抗体来应对免疫原的存在。
3. 融合细胞的制备：从免疫宿主中取得抗体产生的细胞，并与癌细胞（如骨髓瘤细胞）融合，形成杂交瘤细胞。
4. 杂交瘤细胞的筛选：采用适当的培养基，筛选出那些能够生存和增殖的杂交瘤细胞。
这些细胞具有与原先抗体产生细胞相同的生长特性。
5. 单克隆抗体的筛选：将培养基中的每个细胞与免疫原进行反应，然后用酶联免疫吸附试验（ELISA）或流式细胞术等方法筛选出特异性抗原结合的细胞。
6. 单克隆抗体的扩增：将特异性抗原结合的细胞分离并培养，使其增殖，形成一个与原始细胞相同的细胞群。
除了以上的制备原理，还可以使用其他的方法来制备单克隆抗体，例如基因工程方法、人源化方法等。
这些方法可以通过人工改造的方式来制备单克隆抗体，以满足特定需求。
抗体制备方法
第1章 抗体制备技术抗体（antibody，Ab）是机体B淋巴细胞受到抗原刺激后所产生的特异性球蛋白，故亦称为免疫球蛋白。
机体初次接触抗原后，激发机体产生的特异性抗体亲和力低、持续时间短；而当同一抗原再次刺激机体后，则能产生高亲和力、高效价、持续时间长的抗体。
由于抗体能与相应的抗原发生特异性结合反应，因此特异性抗体是免疫学实验中常用的试剂，不仅对于抗原的分析鉴定和定量检测极为重要，而且广泛应用于临床疾病的诊断、治疗和预防中。
在免疫学检测中应用的主要抗体是多克隆抗体和单克隆抗体，多克隆抗体常用免疫动物的方法获得，而单克隆抗体则采用杂交瘤技术制备。
本章主要介绍这两种抗体的制备方法。
实验一 多克隆抗体的制备多克隆抗体（polyclonal antibody）是机体针对抗原的不同表位所产生的抗体混合物。
是用制备的纯化免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，在含有多种抗原表位的抗原刺激下，该动物体内多个B细胞克隆被激活并产生针对这种抗原多种不同表位的抗体混合物。
含有这些特异性抗体的动物血清称为免疫血清或抗血清，而从免疫血清中纯化的免疫球蛋白则称为抗体。
一、抗体制备的流程优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，动物的应答能力以及免疫程序（如免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素）。
因此制备高质量的抗体必须具备理想的免疫原、适宜的动物和切实可行的免疫方案。
（一）免疫动物的选择免疫用的动物主要为哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、豚鼠及小鼠等。
选择动物要依据抗体制备的条件而定。
1．抗原与动物的种系 抗原的来源与免疫动物之间种系关系越远，其抗原免疫原性越强，越易产生免疫应答；反之，种系关系越近，则抗原免疫原性越弱。
如用鸡球蛋白免疫亲缘关系较近的鸭或鹅，则免疫原性较差。
2．动物的个体状况 动物的年龄与健康状况可影响产生抗体的效价，年龄太小者易产生免疫耐受，而年老体衰者免疫应答能力低下，不易产生高效价的抗体。
抗体制备及免疫检测技术的原理和应用
抗体制备及免疫检测技术的原理和应用抗体是一种重要的生物分子，可以与抗原作用而具有极高的特异性。
由于抗体分子本身拥有极强的特异性和亲和力，因此被广泛应用于蛋白质分离、酶联免疫吸附试验、免疫荧光分析、免疫印迹、流式细胞术以及疫苗研究等诸多领域，也成为了生物分子分离、分析、诊断和治疗的重要工具。
本文将介绍抗体制备及免疫检测技术的原理和应用。
一、抗体制备的原理抗体是由机体B细胞分泌的一类免疫球蛋白，它由两部分组成：重链和轻链。
重链和轻链各有一端为变异区和恒定区。
抗体的制备主要有两种方法：多克隆和单克隆。
多克隆抗体是指利用多个免疫细胞杂交而制得的抗体，它的产生需要一定的时间。
单克隆抗体则是利用一个免疫细胞杂交制得的抗体，它具有较高的特异性。
使用抗体制备需要对抗原进行选择，产生抗体的条件是抗原分子必须能诱导机体产生免疫反应，即具有免疫原性。
同时，抗原还必须具有一定的抗原特异性，使得诱导机体产生的抗体具有特定的亲和性。
在制备抗体过程中，还需要进行抗体亲和纯化和抗体标记等处理，以便用于各种免疫学实验和临床诊断。
二、免疫检测技术的原理免疫学检测技术的核心原理是利用抗体和抗原之间的相互作用，检测样品中特定抗原的存在与否。
在此过程中，选择合适的检测方法可以根据不同的具体要求来设定；同时，要选取合适的抗原和抗体以确保检测的准确性和敏感性。
免疫检测技术有很多种类，其中最重要的包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射性免疫检测、免疫荧光分析、免疫印迹和流式细胞术等。
酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的分析方法，可用于测定血清、唾液和尿液等生物体中特定抗体或抗原的含量。
ELISA原理是利用酶标记的抗体或抗原，检测样品中特定抗体或抗原的存在。
放射性免疫检测则是采用放射性标记的抗体分子，通过测定放射性计数来检测样品中的抗原分子。
这种方法的优点是高灵敏度和准确性，但不适用于现场检测。
免疫荧光分析是利用荧光标记的抗体与荧光标记的抗原相互作用，检测样品中特定的抗原或抗体。
抗体的制备方法与原理
抗体的制备方法与原理抗体是一种能够识别和结合特定抗原的蛋白质，广泛应用于医学诊断、治疗和研究领域。
抗体的制备方法包括动物免疫和体外选择性放大两种主要途径。
以下将详细介绍这两种方法及其原理。
一、动物免疫法制备抗体动物免疫法是制备多种特异性抗体的主要方法，常用的动物包括小鼠、兔子、大鼠等。
制备抗体的主要步骤如下：1.抗原选择：首先需要选择目标抗原，可以是蛋白质、多肽、糖蛋白、核酸等。
抗原应具有免疫原性，能在动物体内引起免疫反应。
2.免疫原免疫：将抗原与适当的佐剂混合后注射到动物体内，佐剂可以增强抗原的免疫原性，如完全弗氏佐剂、佐科克佐剂等。
注射的剂量和时间间隔需根据具体实验目的和动物种类进行优化。
3.收集血清和分离抗体：免疫一定时间后，收集动物的全血或血清，离心分离血清，其中包含了目标抗体。
4.抗体纯化：通常使用亲和层析、凝胶过滤层析等方法将血清或血浆中的抗体纯化出来。
亲和层析是最常用的抗体纯化方法，利用特定配体或抗原结合柱将目标抗体捕获，再洗脱得到纯抗体。
二、体外选择性放大法制备抗体体外选择性放大法是指通过技术手段进行人工放大和筛选特定抗体，主要包括以下步骤：1.生成抗体文库：将来自多个个体免疫系统的B细胞或血浆细胞收集起来，提取RNA或DNA，然后利用逆转录酶合成cDNA或文库，得到抗体基因的cDNA文库。
2.构建抗体显示系统：将抗体基因文库插入适当的表达载体中，如噬菌体、酵母、哺乳动物细胞表达系统等。
3.筛选特异性抗体：利用高通量筛选技术，如细胞表面展示、比对深度测序等，可通过抗原结合的特异性来筛选出具有高亲和力的抗原结合片段或全长抗体。
4.抗体表达和纯化：通过选择后的抗体基因进行表达，再经过蛋白纯化和检验等步骤，最终得到目标抗体。
抗体制备的原理主要是基于免疫系统的免疫应答机制。
当机体受到抗原的刺激后，机体会产生一系列免疫应答，其中包括B细胞的活化和分化。
经过抗原的结合和识别，B细胞会分泌具有高亲和力的抗体。
植物抗体制备的原理和方法
植物抗体制备的原理和方法
植物抗体制备的原理是通过将目标抗原引入植物细胞或植物体内，利用植物基因工程技术使其表达出抗原特异性的抗体。
植物抗体制备的方法如下：
1. Agrobacterium介导的转化：利用农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）将目标抗原的基因转入植物细胞中，从而使植物细胞能够合成目标抗原。
这种方法广泛应用于转基因植物的制备。
2. 基因枪法：利用基因枪将外源抗原的DNA或RNA颗粒直接导入植物组织或细胞中，从而使植物细胞能够合成目标抗原。
这种方法适用于多种植物组织和细胞。
3. 病毒介导的表达：利用病毒作为携带抗原基因的载体，通过感染植物细胞，使其表达目标抗原。
例如，利用病毒颗粒（virus-like particle）来显示目标抗原。
4. 核转录翻译：利用人工改造的植物病毒基因组或质粒DNA，在植物细胞的细胞核内直接合成目标抗原。
这种方法可在较短时间内获得大量抗原产物。
5. 植物细胞悬浮培养：将目标抗原基因导入悬浮培养细胞中，通过培养和增殖，
使细胞合成目标抗原。
这种方法具有生产效率高、易扩展等优点。
以上方法中，农杆菌介导的转化和基因枪法是最常用的植物抗体制备方法，已广泛应用于药物生产、免疫诊断等领域。
抗体制备
二、免疫动物
为获取高质量的抗体，除了需制备高纯度 的抗原外，还需选择适宜的动物和设计有 效可行的免疫方案，如抗原的剂量、剂型、 注射途径、注射次数、注射间隔和接种动 物的年龄均与免疫效果密切的关系。
1.免疫动物的选择
选择动物时应考虑以下因素： ①抗原来源与动物种属的关系。抗原的来源与免疫动物 种属差异越远，其免疫源性越强，免疫效果越好，而 同种系或亲缘关系越近，免疫效果越差。 ②动物个体的选择。适龄、健康、体重符合要求的正常 动物（以雄性为佳）；抗体需要量少时，选用家兔、 豚鼠和鸡等小动物；抗体需要量大时，可选用绵羊、 山羊、马、驴等大动物。 ③抗原性质与动物种类。
第十一章 抗体制备
抗体的制备技术经历了三代： 第一代抗体是传统的抗体制备方法即利用抗原免 疫动物后获得抗体，称为多克隆抗体（polyclonal antibody）； 第二代抗体是通过杂交瘤技术制备出针对抗原中 某一抗原决定簇的抗体称为单克隆抗体 (monoclonal antibody, McAb)； 第三代抗体是利用基因工程技术制备而来，称为 基因工程抗体(genetic engineering antibody)。本 章主要介绍三种类型抗体的制备方法。
一、杂交瘤技术的基本原理
一、杂交瘤技术的原理及流程
二、单克隆抗体制备技术
1. 主要材料
2. 细胞融合前准备
3. 细胞融合
4. 抗体的初筛和克隆化
5. 杂交瘤细胞冻存与复苏
6. 单克隆抗体的批量生产
7. 单克隆抗体的纯化与鉴定
（一）主要材料：
RPMI1640培养液 FCS 10% 谷氨酰胺 2mmol/L 青霉素 100IU/ml 链霉素 100Ug/ml
单克隆抗体的制备原理及方法
单克隆抗体的制备原理及方法单克隆抗体是一种由单一克隆B细胞产生的抗体，具有高度的特异性和亲和力。
它在生物医药领域有着广泛的应用，包括疾病诊断、治疗和生物学研究等方面。
本文将介绍单克隆抗体的制备原理及方法，希望能对相关领域的研究人员有所帮助。
一、制备原理。
单克隆抗体的制备原理主要包括以下几个步骤，抗原免疫、细胞融合、筛选和鉴定、扩增和保存。
首先，通过将目标抗原注射到实验动物体内，诱导其产生特异性抗体。
然后，从免疫动物体内获得B细胞，与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
接着，通过细胞培养和筛选，筛选出产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。
最后，对所得的单克隆抗体进行扩增和保存，以备进一步的实验和应用。
二、制备方法。
1. 抗原免疫。
选择合适的实验动物，根据抗原的特性和研究需要，选择合适的免疫方案，包括抗原的种类、免疫的途径和次数等。
2. 细胞融合。
将获得的B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
融合细胞的筛选条件包括杂交瘤细胞的生长条件、培养基的成分和杂交瘤细胞的筛选方法等。
3. 筛选和鉴定。
通过特异性抗原的筛选和鉴定，筛选出产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞。
鉴定的方法包括ELISA、免疫印迹、免疫荧光等。
4. 扩增和保存。
对所得的单克隆抗体进行扩增和保存，以备进一步的实验和应用。
扩增的方法包括体外培养、动物体内生长等。
三、实验注意事项。
在进行单克隆抗体的制备过程中，需要注意以下几个方面的实验注意事项，实验动物的选择和管理、抗原的制备和纯化、细胞融合和杂交瘤细胞的培养条件、单克隆抗体的鉴定和保存等。
四、应用前景。
单克隆抗体作为一种重要的生物医药制剂，在疾病诊断、治疗和生物学研究等方面具有广阔的应用前景。
随着生物技术的不断发展，单克隆抗体的制备技术也在不断完善，相信在未来会有更多的应用领域被开发出来。
综上所述，单克隆抗体的制备原理及方法是一个复杂而又具有挑战性的过程，需要研究人员在实验操作中严格把关，以确保所得的单克隆抗体具有高度的特异性和亲和力。
抗体质粒构建
抗体质粒构建抗体在免疫学研究和生物医药领域发挥着重要作用。
为了更好地应对疾病和提高治疗效果，研究人员不断探索新的抗体构建方法。
其中，抗体质粒构建技术无疑是一种重要的手段。
本文将介绍抗体质粒构建的基本原理、步骤和应用，并展望其在未来的发展前景。
一、抗体质粒构建的基本原理抗体质粒构建是将目标抗体基因导入到质粒中，通过质粒在细胞中的表达，实现抗体的生产。
基本步骤包括：选择合适的质粒载体、导入目标抗体基因、质粒转染入宿主细胞、筛选和鉴定阳性克隆。
选择合适的质粒载体通常考虑以下因素：适当的载体大小、选择性抗生素标记、高效的启动子和蛋白表达信号。
其中，启动子和蛋白表达信号往往来自高表达的内源基因或病毒，可以确保抗体高水平的表达。
导入目标抗体基因主要有两种方法：PCR扩增和合成基因。
PCR扩增是将抗体的可变区和恒定区分别扩增，然后进行测序和克隆。
合成基因则是将抗体基因序列经过人工合成后导入质粒。
质粒转染常用的方法有热激转染、电激转染和病毒载体介导转染。
其中，病毒载体介导转染由于其高转染效率和稳定性，被广泛应用于抗体质粒构建。
筛选和鉴定阳性克隆主要依靠抗体的特异性和活性检测。
典型的方法有ELISA、Western blot和免疫组化。
二、抗体质粒构建的步骤1. 选择适合的质粒载体：根据实验需求和抗体特点，选择合适的质粒载体。
常用的载体有pCDNA3.1、pET等。
2. 导入目标抗体基因：通过PCR扩增或基因合成方式获得目标抗体基因序列。
然后将其克隆到所选质粒载体的多克隆位点中。
3. 质粒转染入宿主细胞：选择合适的宿主细胞进行质粒转染。
转染方法包括热激转染、电激转染和病毒载体介导转染。
4. 筛选和鉴定阳性克隆：利用适当的检测方法（如ELISA、Western blot等）对转染后的细胞进行筛选和鉴定。
5. 扩增和纯化阳性克隆：将筛选出的阳性克隆进行扩增培养，并进行抗体的纯化和浓缩。
三、抗体质粒构建的应用抗体质粒构建技术在生物医药领域具有广泛应用。
流式抗体制备
流式抗体制备流式抗体制备是一种用于检测和分析细胞表面标记物的重要技术。
通过结合单克隆抗体和荧光染料，流式抗体制备可以提供对特定蛋白质在细胞表面的定量和定位信息。
本文将介绍流式抗体制备的原理、步骤和应用。
一、原理流式抗体制备的原理基于免疫学。
首先，需要选择适当的单克隆抗体，该抗体能够特异性结合到目标蛋白质。
然后，单克隆抗体与荧光染料结合，形成流式抗体。
荧光染料会发出荧光信号，用于检测和分析细胞表面标记物。
二、步骤1. 细胞准备：将待检测的细胞样品收集并制备成单细胞悬浮液。
2. 抗体选择：根据所需检测的标记物选择适当的单克隆抗体。
3. 抗体结合：将单克隆抗体和荧光染料按照比例混合，使其结合成流式抗体。
4. 抗体染色：将流式抗体加入细胞悬浮液中，使其与目标蛋白质结合。
5. 洗涤：通过洗涤步骤去除未结合的抗体。
6. 流式细胞分析：使用流式细胞仪对样品进行分析，检测和定量目标蛋白质的表达水平。
三、应用流式抗体制备在许多生物学研究领域有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用示例：1. 细胞免疫表型：流式抗体制备可以用于检测和分析细胞表面标记物的表达水平，从而帮助鉴定不同细胞类型和亚群。
2. 免疫治疗监测：流式抗体制备可以用于监测免疫治疗中特定免疫标记物的变化，以评估治疗效果。
3. 癌症研究：流式抗体制备可以用于检测和定量癌细胞表面标记物，从而帮助诊断和研究癌症。
4. 免疫疫苗研发：流式抗体制备可以用于筛选和评估潜在疫苗候选物的免疫原性。
总结流式抗体制备是一种重要的细胞分析技术，通过结合单克隆抗体和荧光染料，可以定量和定位细胞表面标记物。
该技术在细胞免疫表型、免疫治疗监测、癌症研究和免疫疫苗研发等领域有着广泛的应用。
随着技术的不断发展，流式抗体制备将在生命科学研究中发挥越来越重要的作用。
单克隆抗体的应用及原理
单克隆抗体的应用及原理单克隆抗体是指由单一细胞株产生的、只针对特定抗原的抗体。
相对于多克隆抗体，单克隆抗体具有更高的特异性和稳定性，因此在医学、生物学、生物技术等领域有着广泛的应用。
本文将从单克隆抗体的原理、制备方法和应用三个方面进行介绍。
一、单克隆抗体的原理单克隆抗体的制备基于生物学中的免疫原理。
当机体受到外来抗原的侵袭时，免疫系统会产生对抗原的免疫应答，其中的一种反应是产生抗体。
抗体是一种由免疫细胞（主要是B细胞）合成的蛋白质，它可以结合到抗原表面的特定区域（抗原决定簇，Epitope），从而识别和中和抗原。
抗体的结构包括两个重链和两个轻链，每个链都含有一个可变区（variable region，V区）和一个恒定区（constant region，C区）。
V区是抗体分子中最为多样化的部分，它决定了抗体的特异性。
当抗原与B细胞表面的抗体结合后，B细胞会被激活并分化成浆细胞，进而产生大量的抗体分子。
单克隆抗体的制备过程中，需要先制备出特定的抗原。
然后，将该抗原注射到小鼠等动物体内，激活其免疫系统产生抗体。
接着，从动物的脾脏等淋巴组织中分离出B细胞，并将其与肿瘤细胞融合，形成一种称为杂交瘤（hybridoma）的细胞。
杂交瘤细胞既具有B细胞的抗体合成能力，又具有肿瘤细胞的无限增殖能力。
在一系列的筛选和鉴定过程中，可以筛选出只针对特定抗原的单克隆抗体细胞株，进而大规模制备单克隆抗体。
二、单克隆抗体的制备方法单克隆抗体的制备主要包括以下几个步骤：1. 抗原的制备：首先需要准备出特定的抗原，可以是蛋白质、多肽、糖类、药物等。
2. 动物免疫：将抗原注射到小鼠等动物体内，激活其免疫系统产生抗体。
注射的方式有多种，如皮下注射、腹腔注射、静脉注射等。
3. B细胞的分离：从动物的脾脏等淋巴组织中分离出B细胞，可以使用离心、梯度离心等方法。
4. 杂交瘤的制备：将B细胞与肿瘤细胞融合，形成一种称为杂交瘤的细胞。
杂交瘤细胞既具有B细胞的抗体合成能力，又具有肿瘤细胞的无限增殖能力。
抗体药物的制备原理
抗体药物是一种以抗体为基础的生物制剂，具有高效、高特异性、低毒副作用等优点，在治疗疾病方面具有广阔的应用前景。
抗体药物的制备原理主要包括以下几个方面：
抗原免疫：在制备抗体药物之前，需要免疫动物或人体，使其产生特异性抗体。
免疫过程一般包括抗原选择、免疫方案设计、免疫动物或人体的选择等步骤。
抗体筛选：在抗原免疫后，需要对产生的抗体进行筛选和鉴定。
常用的筛选方法包括ELISA、Western blot、免疫沉淀等方法，可以通过这些方法对抗体的特异性、亲和力、稳定性等性质进行评价和鉴定。
抗体制备：制备抗体药物的关键在于大量制备抗体。
通常采用葡萄糖酸钠钙共沉淀、离子交换层析、蛋白A亲和层析、蛋白G亲和层析等方法，可以纯化和制备出目的抗体。
抗体修饰：为了提高抗体药物的稳定性、特异性、药效等性质，常常需要对抗体进行修饰。
例如，在抗体的Fc区域引入多糖、PEG等修饰剂，可以提高其循环寿命和稳定性；在抗体的Fab区域进行亲和力改变、CDR区域突变等操作，可以增强其特异性和药效。
抗体药物制剂：抗体药物的制剂是将制备好的抗体药物以一定的配方制成制剂，便于临床使用。
常见的制剂包括注射剂、口服剂、局部用药剂等。
综上所述，抗体药物的制备原理包括抗原免疫、抗体筛选、抗体制备、抗体修饰和抗体药物制剂等步骤。
这些步骤需要科学合理的方案设计和仪器设备的支持，以保证抗体药物的质量和疗效。
单克隆抗体制备的原理
单克隆抗体制备的原理引言：单克隆抗体是一种与特定抗原高度亲和的抗体，它由单一的B细胞或其衍生的细胞克隆产生。
单克隆抗体制备是一项重要的生物技术手段，广泛应用于医学诊断、药物研发和治疗等领域。
本文将介绍单克隆抗体制备的原理及其在科学研究和医学应用中的重要性。
一、单克隆抗体的起源和背景抗体是机体免疫系统中产生的一种特殊蛋白质，可以识别和结合抗原，从而参与免疫应答。
传统的抗体制备方法主要依赖于动物免疫，但存在许多局限性，如免疫反应的不可控性、抗体来源有限等。
为了解决这些问题，科学家发展出了单克隆抗体制备技术。
二、单克隆抗体制备的原理单克隆抗体制备的原理基于混合细胞瘤技术和免疫细胞培养技术。
具体步骤如下：1. 抗原免疫：将目标抗原注射到小鼠等哺乳动物体内，激发其免疫系统产生特异性抗体。
2. 细胞融合：从免疫小鼠体内提取B细胞和骨髓细胞，将它们与骨髓瘤细胞（如骨髓瘤细胞株SP2/0）融合，形成杂交瘤细胞。
3. 杂交瘤筛选：将杂交瘤细胞悬浮于含有选择性培养基的培养皿中，使非杂交细胞死亡，只留下杂交瘤细胞。
4. 单克隆细胞扩增：将杂交瘤细胞分装到96孔板中，每孔只包含一个细胞，培养并扩增单克隆细胞。
5. 单克隆抗体收集：从培养上清中收集单克隆抗体，经过纯化和鉴定，获得纯度较高的单克隆抗体。
三、单克隆抗体制备的重要性1. 高亲和力和特异性：与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有更高的亲和力和特异性，可以更准确地结合目标抗原。
2. 可重复性和稳定性：单克隆抗体制备的过程可以被重复进行，从而获得相同的抗体产品。
此外，单克隆抗体也具有较长的稳定性，可以在不同实验条件下保持一致的性能。
3. 应用广泛：单克隆抗体广泛应用于医学诊断、药物研发和治疗等领域。
例如，单克隆抗体可以用于肿瘤标记、疾病诊断、药物靶点鉴定等。
4. 抗体工程的基础：单克隆抗体的制备为后续的抗体工程提供了基础。
通过改变单克隆抗体的结构和功能，可以获得更加理想的抗体产物。
抗体的制备原理及其应用实验报告
抗体的制备原理及其应用实验报告1. 引言在免疫学领域，抗体是一种重要的生物学工具，它可以与特定的抗原结合，并在生物体内执行多种功能。
本实验旨在探究抗体的制备原理及其在实验中的应用。
2. 抗体的制备原理抗体的制备包括免疫原、免疫动物、免疫程序和抗体检测等几个重要步骤。
2.1 免疫原选择免疫原是用于刺激机体产生特异性抗体的物质。
免疫原的选择应考虑到其与目标抗原的免疫性、复杂性以及检测的需要。
2.2 免疫动物的选择在制备抗体中常用的免疫动物包括小鼠、兔子、鸡等。
选择合适的免疫动物应考虑物种特性、免疫机制和实验需要等因素。
2.3 免疫程序免疫程序一般包括免疫接种、免疫增强和免疫收获等步骤。
免疫接种时将免疫原注射到免疫动物体内，激发机体免疫反应。
免疫增强可通过多次免疫接种来增强抗体产生。
免疫收获则是从免疫动物体内采集抗体。
2.4 抗体检测抗体检测可通过免疫学方法如ELISA、免疫荧光等进行。
这些方法可以检测特定抗体的存在和浓度，并确定抗体的特异性。
3. 抗体的应用实验报告本实验利用抗体在实验中的应用，探究其在生物学研究中的价值。
3.1 实验目的本实验旨在利用抗体对目标抗原进行检测，了解抗体在免疫学研究中的应用。
3.2 实验材料与方法3.2.1 实验材料•抗原溶液：XXX•抗体溶液：XXX•免疫标记剂：XXX•检测缓冲液：XXX3.2.2 实验方法1.准备抗原溶液，并加入适量的抗原到每个实验孔中；2.加入抗体溶液，与抗原发生特异性结合反应；3.将免疫标记剂加入孔中，与已结合的抗原-抗体复合物发生反应；4.加入检测缓冲液，形成可检测的光信号；5.使用相应仪器读取光信号，并进行结果分析。
3.3 实验结果与分析我们观察到针对目标抗原的抗体能与抗原发生特异性结合，进而与免疫标记剂反应产生光信号。
通过读取光信号强度，我们可以确定抗体对目标抗原的检测能力。
3.4 实验结论本实验验证了抗体的制备原理，展示了其在生物学研究中的应用。
抗体制备原理
抗体制备原理
抗体制备原理：
抗体是免疫系统中一种特殊的蛋白质，能识别和结合到体内外的抗原分子，并参与免疫反应。
抗体制备是通过免疫原与免疫动物（如小鼠、兔子等）的免疫系统进行相互作用，使免疫动物产生特异性抗体的过程。
抗体制备一般包括以下几个关键步骤：
1. 免疫原选择：选择与目标抗原相关的合适免疫原，可以是蛋白质、多肽、糖蛋白等。
免疫原通常需要具备良好的纯度和完整性。
2. 免疫动物免疫：将选择的免疫原注射到免疫动物体内，通常会进行多次免疫，以激活免疫系统，使其产生针对免疫原的特异性抗体。
3. 抗体检测：在免疫动物免疫一段时间后，通过抗体检测方法（如ELISA、Western blot等）检查免疫动物体内是否已产生特异性抗体。
可选用已知抗原的标准抗体对比，以确定产生的抗体特异性。
4. 免疫细胞融合：将免疫动物的脾细胞或淋巴细胞提取出来，并与骨髓瘤细胞进行融合。
骨髓瘤细胞是一种恶性细胞，具有无限增殖潜力，融合后能够长期保存抗体合成所需的基因。
5. 杂交瘤筛选：将融合细胞进行限稀稀释，使其单个细胞分散
于培养基中，便于各个细胞独立地生长。
然后通过对培养基中的细胞进行筛选，选择出能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。
6. 单克隆抗体培养：将筛选出的杂交瘤细胞进行分离和培养，使其形成单克隆细胞株。
每个单克隆细胞株都来自于同一个B 细胞，因此能够产生具有相同抗原特异性的抗体。
7. 抗体纯化：将培养出的单克隆抗体进行纯化，去除杂质和不需要的成分，得到高纯度的抗体样品。
以上是一般的抗体制备原理，不同实验室和具体实验会根据需要和条件进行微调或改进。
单克隆抗体制备的基本原理
单克隆抗体制备的基本原理一、引言单克隆抗体（Monoclonal Antibodies，mAb）是指来源于同一个B细胞克隆的抗体，具有高度特异性和单一免疫反应性。
单克隆抗体的制备是基于科学家科尔和米尔斯于1975年提出的杂交瘤技术。
该技术的发明是继酶联免疫吸附试验（ELISA）之后，对于生物医药研究领域的重大突破。
本文将重点介绍以单克隆抗体制备的基本原理。
二、单克隆抗体制备的基本原理单克隆抗体的制备主要包括以下几个步骤：免疫原制备、小鼠免疫、融合细胞的制备、杂交瘤细胞的筛选和克隆、抗体纯化及鉴定。
下面将详细介绍每个步骤。
1. 免疫原制备免疫原是指诱导机体产生免疫应答的物质。
在单克隆抗体制备中，免疫原通常是具有特定抗原性的蛋白质。
可以通过基因工程技术或从天然来源提取免疫原。
为了提高免疫原的免疫原性，通常会将其与适当的载体结合。
2. 小鼠免疫将免疫原注射到小鼠体内，刺激小鼠产生特异性抗体。
通常需要多次免疫，以增强免疫反应。
免疫后，可以通过采集小鼠血清进行抗体的初步筛选。
3. 融合细胞的制备将小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合。
小鼠的脾细胞负责产生特异性抗体，而骨髓瘤细胞则具有无限增殖的能力。
融合细胞的制备通常使用聚乙二醇（Polyethylene Glycol，PEG）等化合物来促进细胞融合。
4. 杂交瘤细胞的筛选和克隆将融合细胞悬浮液培养在含有选择性培养基的培养皿中，筛选出杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞是具有脾细胞和骨髓瘤细胞的特性，能够稳定地产生特异性抗体。
为了获得单克隆抗体，需要进行单克隆化培养，即每个杂交瘤细胞分离为一个克隆。
5. 抗体纯化及鉴定通过培养杂交瘤克隆细胞，可以得到大量的抗体。
接下来需要对抗体进行纯化和鉴定。
通常使用亲和层析、离子交换层析等技术对抗体进行纯化。
鉴定抗体的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（Western Blot）等。
三、应用前景单克隆抗体的制备在生物医药领域有着广泛的应用前景。
制备单克隆抗体的原理
制备单克隆抗体的原理
单克隆抗体是一种高度特异性的抗体，可以识别并结合到特定的抗原上。
制备
单克隆抗体的原理主要包括抗原免疫、细胞融合、筛选和鉴定等步骤。
首先，制备单克隆抗体的第一步是抗原免疫。
通常选择小鼠或兔子等动物作为
免疫动物，将目标抗原注射到动物体内，激发动物产生特异性抗体。
在免疫过程中，抗原会激发动物体内的B细胞产生抗体，其中包括对抗原特异性的B细胞。
接下来是细胞融合。
将免疫动物体内的B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
这些杂交瘤细胞具有B细胞产生抗体的能力，同时又具有骨髓瘤细胞
的无限增殖能力，从而可以长期稳定地产生单克隆抗体。
随后是筛选和鉴定。
通过细胞培养和克隆技术，筛选出产生特定单克隆抗体的
杂交瘤细胞，并将其进行扩增。
接着，利用ELISA、Western blot等方法对单克隆
抗体进行鉴定，确定其对目标抗原的特异性和亲和力。
最后是大规模生产。
经过筛选和鉴定的单克隆抗体细胞株可以进行大规模的培
养和生产，以满足科研和临床的需求。
总的来说，制备单克隆抗体的原理是通过抗原免疫、细胞融合、筛选和鉴定等
步骤，最终获得特异性的单克隆抗体。
这种单克隆抗体在生物医学领域具有广泛的应用前景，可以用于疾病诊断、药物研发、免疫治疗等方面，对于促进医学科研和临床应用具有重要意义。
单克隆抗体的制备原理及方法
单克隆抗体的制备原理及方法
单克隆抗体是一种来源于同一B细胞克隆的抗体，具有单一的抗原结合特异性。
它在生物医学领域有着广泛的应用，如药物研发、疾病诊断和治疗等方面。
本文将介绍单克隆抗体的制备原理及方法。
首先，制备单克隆抗体的原理是通过免疫细胞融合技术获得单克隆抗体细胞系。
该技术主要包括以下几个步骤，免疫原注射、混合细胞培养、细胞融合、筛选和克隆等。
其中，免疫原注射是指将目标抗原注射到小鼠等动物体内，刺激其产生特异性抗体；混合细胞培养是将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞混合培养，促使它们融合形成杂交瘤细胞；细胞融合是通过聚乙二醇等化合物促使免疫细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞；筛选和克隆是通过限稀稀释法或限稀稀释法筛选出单克隆杂交瘤细胞，并将其进行克隆扩增，最终得到单克隆抗体细胞系。
其次，制备单克隆抗体的方法主要包括动物免疫、细胞融合、杂交瘤筛选和克
隆等步骤。
动物免疫是指将目标抗原注射到小鼠等动物体内，刺激其产生特异性抗体；细胞融合是通过将免疫细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞；杂交瘤筛选是通过限稀稀释法或限稀稀释法筛选出单克隆杂交瘤细胞；克隆是将筛选出的单克隆杂交瘤细胞进行克隆扩增，最终得到单克隆抗体细胞系。
总之，单克隆抗体的制备原理及方法是通过免疫细胞融合技术获得单克隆抗体
细胞系。
其制备方法包括动物免疫、细胞融合、杂交瘤筛选和克隆等步骤。
这些步骤的顺序和方法的选择都对单克隆抗体的制备起着至关重要的作用。
希望本文的介绍能够对单克隆抗体的制备原理及方法有所帮助。
单克隆抗体制备的基本原理
单克隆抗体制备的根本原理一、单克隆抗体的概念抗体〔antibody〕是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。
常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的，因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。
一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇，所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。
即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体，仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。
因而，常规血清抗体又称多克隆抗体〔polyclonal antibody〕，简称多抗。
由于常规抗体的多克隆性质，加之不同批次的抗体制剂质量差异很大，使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。
因此，制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供给的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。
随着杂交瘤技术的诞生，这一目标得以完成。
1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤。
这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征，既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死，又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。
通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体〔monoclonal antibody，McAb〕，简称单抗。
与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能延续地无限量供给。
单抗技术的问世，不仅带来了免疫学领域里的一次**，而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用，促进了众多学科的开展。
德国科学家柯勒〔Georges Ko1er〕和英国科学家米尔斯坦〔Cesar Milstein〕两人由此杰出奉献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。
二、杂交瘤技术〔一〕杂交瘤技术的诞生淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面开展的必定结果，抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等，为杂交瘤技术提供了必要理论根底，同时，骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。
单克隆抗体制备原理
单克隆抗体制备原理
单克隆抗体是一种针对特定抗原的抗体，具有高度的特异性和亲和力。
其制备
原理主要包括抗原免疫、融合细胞制备和筛选、单克隆抗体生产等步骤。
首先，抗原免疫是单克隆抗体制备的第一步。
研究人员首先需要选择目标抗原，可以是蛋白质、多肽、细胞表面分子等。
然后将抗原注射到小鼠或兔子等动物体内，激发其产生特异性抗体。
在免疫过程中，动物的免疫系统会识别抗原并产生多克隆抗体，其中包括针对不同位点的抗体。
接着，融合细胞制备和筛选是单克隆抗体制备的关键步骤。
研究人员需要从免
疫动物体内获取B细胞，然后与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
这些杂
交瘤细胞具有B细胞的抗体产生能力和骨髓瘤细胞的无限增殖能力。
接着，通过
限稀稀释法或单细胞分选法筛选出产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞。
最后，单克隆抗体生产是单克隆抗体制备的最后一步。
研究人员需要将筛选出
的单克隆抗体杂交瘤细胞进行大规模培养，获取足够的单克隆抗体。
随后，通过细胞培养上清液的收集、纯化、结构表征等步骤，最终得到纯化的单克隆抗体。
总之，单克隆抗体制备原理包括抗原免疫、融合细胞制备和筛选、单克隆抗体
生产等步骤。
通过这些步骤，研究人员可以获取到具有高特异性和亲和力的单克隆抗体，为生物医学研究和临床诊断治疗提供重要的工具和药物。
抗体的制备方法与原理
抗体的制备方法与原理抗体的制备方法与原理一、抗血清的制备有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。
（一）选择免疫的动物作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等，多用家兔和山羊。
因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清。
用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为雄性。
若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。
（二）免疫途径免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。
途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。
（三）佐剂由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。
佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。
常用的佐剂是弗氏佐剂（Freund adjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全弗氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg 卡介苗就成为完全佐剂。
1．佐剂的类型目前实践中常应用的佐剂有氢氧化铝胶、明矾、弗氏佐剂、脂质体和石蜡油等。
也有采用结合杆菌等分枝杆菌、白喉杆菌以及细小棒状杆菌等。
⑴弗氏不完全佐剂（incomplete Freund's adjuvant,IFA）羊毛脂 1 份石蜡油 5 份混合，高压灭菌后保存。
用时加热融化，冷却至50℃左右，加抗原进行乳化处理。
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抗体的制备方法与原理一、抗血清的制备有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。
（一）用于免疫的动物作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。
动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。
若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。
（二）免疫途径免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。
途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。
（三）佐剂由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。
佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。
常用的佐剂是福氏佐剂（Freund adjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg 卡介苗就成为完全佐剂。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。
为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另一注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。
检查合格后即以其中一注射器作注射用。
（四）免疫方法抗原剂量，首次剂量为300～500μg，加强免疫的剂量约为首次剂量为1/4左右。
每2～3周加强免疫一次。
加强免疫时用不完全佐剂，首次免疫时皮下注射百日咳疫苗0.5ml，加强免疫时不必注射百日咳疫苗。
在第2次加强免疫后2周，从耳缘静脉取2～3ml血，制备血清，检测抗体效价（见后）。
如未达到预期效价，需再进行加强免疫，直到满意时为止（图2-3）。
当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。
图2-3 抗体反应（五）抗血清的采集与保存家兔是最常用以产生抗体的动物，因此这里主要讨论兔血的收集。
羊等较大动物以颈静脉、动脉取血，鼠等小动物取血可参阅有关资料。
取兔血有两种方法，一是耳缘静脉或耳动脉放血，一是颈动脉入血，也可心脏采血。
取动脉或静脉放血时，将兔放入一个特造的木匣或笼内，耳露于箱（笼）外，也可由另一人捉住兔身。
剪去耳缘的毛，用少许二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管扩张、充血。
用手轻拉耳尖，以单面剃须刀或尖的手术刀片，快速切开动脉或静脉，血液即流出，每次可收集30～40ml 。
然后用棉球压迫止血，凝血后洗去二甲苯。
二星期后，可在另一耳放血。
此法可反复多次放血。
颈动脉放血时，将兔仰卧，固定于兔台，剪去颈部的毛，切开皮肤，暴露颈动脉，插管，放血。
放血过程中要严格按无菌要求进行。
收集的血液置于室温下1h左右，凝固后，置4℃下，过夜（切勿冰冻）析出血清，离心，4000rpm,1 0min。
在无菌条件，吸出血清，分装（0.05～0.2ml），贮于-40℃以下冰箱，或冻干后贮存于4。
C冰箱保存。
（六）抗血清质量的评价在免疫期间，不仅各个不同的动物，而且同一动物在不同的时间内抗血清效价、特异性、亲合力等都可能发生变化，因而必须经常地采血测试。
只有在对抗血清的效价、特异性、亲合力等方面作彻底的评价后，才可使用所取得的抗血清。
1．效价抗血清的效价，就是指血清中所含抗体的浓度或含量。
效价测定的方法常用的是放射免疫法，此法对所有的抗体均适用。
某些由大分子（如蛋白类）抗原所产生的抗体，可用双扩散等方法测定。
前者测定的效价极为精确。
而后者则粗糙得多。
（1）放射免疫法：以不同稀释度的抗血清与优质标记抗原混合，孵育24h后，测定其结合率。
通常以结合率为50%的血清稀度和为效价。
如某抗血清的结合率为50%时的稀释度为1：15000，则该血清的效价就是1：15000。
抗血清的效价，除由抗血清本身的性质决定外，还受标记抗原的质量、孵育时间，所用稀释液的成分及其pH等因素的影响，在工作中必须引起注意。
（测定方法见第8章）（2）双向扩散法：利用大分子抗原和抗体在琼脂平板上扩散，两者在相交处产生沉淀线，以观察和判断抗血清中是否有抗体及其浓度。
球脂板的制备：100ml pH7.1 的磷酸盐缓冲液加到15g的琼脂内，于水浴中加温，搅拌，使琼脂完全溶解，趁热用纱布过滤，待溶液冷却到65℃左右时，加入叠氮钠（NaN3），使其在溶液中的浓度为0.1%。
用移液管把琼脂放在干净平皿或玻片上，约3mm厚，待其冷却，完全凝固后，用打孔器打孔（图2-4）。
中央孔内加适量抗原（容量为50μl），周围各孔内分别加入50μl 1：2、1：4、1：8、1：16、1：32及不稀释的抗血清，37℃下孵育24h，观察有无沉淀线产生，以判断血清的稀释度（图2-5）。
图2-4 双向扩散模型图2-5 免疫扩散试验2．特异性测定抗血清的特异性或称专一性是指抗血清对相应的抗原及近似的抗原物质的识别能力。
特异性好就是抗血清的识别能力强。
通常，特异性是以交叉反应率来表示的。
交叉反应率低，表示抗血清的特异性好，反之则特异性差。
交叉反应率一般是用竞争抑制曲线来判断的。
以不同浓度的抗原和近似抗原物质分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率（B/T或B/B0），求出各自在IC50时的浓度，按下列公式计算交叉反应率。
S=y/Z×100%S：交叉反应率，y：IC50时抗原浓度，Z：IC50时近似抗原物质的浓度。
如某抗原的IC50浓度为90Pg/管，而一些近似抗原物质IC50浓度几乎是无限大，可以说这一抗血清与其它抗原物质的交叉反应率近似零，即无交叉反应，该抗血清的特异性是好的。
3．亲合力在免疫学中，亲合力是指抗体与结合抗原体的活度或牢固度。
抗体与抗原结合疏松，结合后会迅速解离，称为亲合力低，反之，亲合力高。
亲合力的高低是由抗原分子的大小，抗体分子的结合位点与抗原的决定基之间的立体结构型的合适程度决定的。
亲合力常以亲合常数K表示。
K的单位是升/摩尔（L/mol）。
在RIA中，K是该抗血清能达到的最小检出量（灵敏度）的倒数，K=1/[H]，[H]是最小检出量，通常，K的范围在108～1012L/mol之间，也有高达1014L/mol的。
计算亲合常数的方法20余种，计算出的K都不能真实反映实验情况，只能作为参考。
（七）免疫失败的可能原因及应采取的措施有时不能获得满意的抗血清，可从下列几方面找原因，并改进之。
（1）免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数量。
（2）抗原质量是否良好，可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号，也可考虑改变抗原分子的部分结构，或改进提取方法。
（3）制备的免疫原是否符合要求，可从偶联剂，载体、抗原或载体的比例、反应时间等多方面去考虑，并加以改进。
（4）所用的佐剂是否合适，乳化是否完全，可改用其它佐剂，或加强乳化。
（5）免疫的方法、剂量，加强免疫的间隔时间和次数，免疫的途径是否合适。
（6）动物的饲养是否得当，如营养（饲料、饮水）、环境卫生（通风、采光、温度）是否符合要求，动物的健康情况是否良好等。
二、单克隆抗体的制备1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。
这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。
免疫细胞化学的技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几个抗原决定簇，用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体。
单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来的细胞群所产生的，所以它的免疫球蛋白属同一类型，质地纯一，而且它是针对某一抗原决定簇的，因此特异性强，亲合性也一致。
单克隆抗体（McAb）的特性和常规血清抗体的特性比较见2-3。
表2—3 单克隆抗体（McAb）和常规免疫血清抗体的特性比较单克隆抗体的制备方法如下。
（一）动物的选择与免疫1．动物的选择纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。
目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。
2．免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
（1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。
常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。
初次免疫抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～1ml,0.2ml/点）↓3周后第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过0.5ml）↓3周后第三次免疫剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价）↓2～3周加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv（静脉内注射）↓3天后取脾融合目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。
②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。
③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。
（2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。
以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为1～2×107个细胞。
初次免疫1×107/0.5ml ip↓2～3周后第二次免疫1×107/0.5ml ip↓3周后加强免疫（融合前三天）1×107/0.5ml ip或iv↓取脾融合（二）细胞融合1．细胞融合前准备（1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。