培养细胞中期染色体制备

培养细胞中期染色体制备

1. 试剂的准备

（1）10μg/ml 秋水仙素;

（2）0.075M 低渗液：2.795 KCl + 500ml 蒸馏水

（3）固定液——甲醇：冰醋酸=3:1（该试剂必需现配现用）

2. 实验方法

（1）当细胞系的融合达到约75-90%时，于每5ml 的培养基细胞中加入25-50μl 秋水仙素，继续培养30min 至2 h（培养时间决定于细胞的生长速度及不同种细胞系间的差异）；（2）按照常规的方法用胰蛋白酶进行细胞的消化；

（3）将低渗液于37℃水浴中预热；

（4）低渗：加入10ml 0.075MKCl 溶液，用力吹打散开，吹打100 次，37℃水浴低渗15 分钟。

（5）预固定：加1.5ml固定液并用吸管轻轻吹匀，进行预固定10分钟。

（6）离心：2000rpm 离心5 分钟，弃上清液。

（7）固定I：沿管壁慢慢加入固定液6ml，用吸管吹打成细胞悬液后，37℃水浴20 分钟。（8）离心：1000rpm 离心10 分钟，弃上清液。

（9）固定II：同固定I。

（10）离心同步骤9，离心去上清后，、加0.3-0.5ml 固定液，吸管吹打成细胞悬液。（11）滴片：用吸管取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，室温晾干，然后90℃烤箱烤片0.5 小时。