2015.3《动物细胞培养技术》复习思考题
《动物细胞培养》思考题
《动物细胞培养》思考题1、细胞培养的一代生长过程如何？答：原代培养的过程就是动物细胞培养的第一代细胞。
原代培养是这样的：取出动物胚胎或者幼龄动物组织或器官后用胰蛋白酶使其分散为单个细胞，然后配置成一定浓度的悬浮液放入培养瓶（其液体培养基含动物血清）中置于培养箱中培养。
2、什么是原代培养、传代培养？答：原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。
传代培养是指当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。
3、细胞生长需要满足哪些条件？4、操作人员如何保持无菌？5、无菌操作的要点是什么？6、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？7、器材包装有何要求？8、叙述超净工作台的工作原理？9、正压过滤器为何会除菌？10、配制后液体呈黄色意味着液体的ph发生了什么变化？11、用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D－Hanks液或PBS液配制？Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。
因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。
12、L－谷氨酰胺在营养液中有何作用？L－谷氨酰胺属于生长因子的一种，是细胞生长所必需的。
13、营养液配制后为什么要小剂量分装？避免污染后全军覆没。
14、你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。
用筛网滤掉未消化的组织块。
2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计数并用培养液调整细胞密度。
3）、用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。
4）、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。
5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。
15、培养瓶移入CO2恒温培养时，瓶盖为何要稍松？拧紧瓶盖无法进行气体交换，瓶盖稍松才能为细胞生长提供必要的氧气和二氧化碳，尤其是二氧化碳特别重要，细胞在酸性培养液中生长的更好16、如何初步判断胰蛋白酶的消化时间？17、细胞培养到一定时间为何要传代？18、你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污染？19、你认为组织培养成功需要哪些条件？20、原代细胞和传代细胞培养有哪些区别？。
高考生物一轮复习资料动物细胞培养和核移植技术
开躲市安祥阳光实验学校高考生物一轮复习资料第16讲动物细胞培养和核移植技术【知识要点】1．简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
2．简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。
3．比较动物细胞培养与植物组织培养的异同点。
【典型例题】1．动物细胞培养和植物组织培养的主要区别是（）A．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同B．动物细胞培养是培养单个细胞，植物组织培养是培养组织C．动物细胞培养可以传代培养，而植物组织培养不能传代培养D．动物细胞培养过程中可发生遗传物质的改变，而植物组织培养不能2．下图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答：（1）若A、B细胞为动物细胞，从A 和B细胞到C细胞的过程中，常用作为诱导剂来诱导融合。
A、B 融合为C的过程说明了细胞膜具有特性。
（2）若A 、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解脱掉了。
这种酶可能是酶，由此生成的A和B细胞称为。
A、B到C细胞的过程中，常用的物理方法是；融合完成的标志是；形成的D细胞还要应用_________ ______技术把D培养成植株。
（3）若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为B淋巴细胞，那么D细胞称为细胞。
由D细胞连续分裂产生大量细胞的过程，称为过程。
这种细胞既能无限繁殖，又能产生。
（4）若该过程是制备单克隆抗体的过程，在A、B到C的过程中，所形成的C有种，用来培养的D 细胞应该是。
从中选择出它的方法是培养。
3．世界上第一只克隆绵羊“多利”的培育程序如右图所示。
请看图后回答：（1）写出图中 a 、b 所指的细胞工程名称:a ，b 。
（2）实施细胞工程a 时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是：。
（3）“多利”面部的毛色是，请根据遗传学原理说明判断的原因是：。
（4）继植物组织培养之后，克隆羊的培育成功，证明动物细胞核也具有。
【当堂反馈】一、单项选择题1．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件( )A细胞B细胞C细胞D细胞①无毒的环境②无菌的环境③合成培养基需加血浆④温度与动物体温相近⑤需要02，不需要 C02⑥C02能调培养液pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D．①②③④⑥2．动物细胞培养的特点是( )①细胞贴壁②有丝分裂③分散生长④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养一般传代1～10代A．①②④⑥B．②③④⑤ C．①③④⑥ D．③④⑤⑥3．在动物细胞培养过程中下面哪种物质不是必需的（）A．单糖B．核苷酸C．氨基酸D．无机盐4．试管婴儿、试管苗和克隆羊三者均属于生物工程技术的杰出成果，下面叙述正确的是A．都属于无性生殖能保持母本性状B．都是细胞工程的技术范围C．都充分体现了体细胞的全能性D．都不会发生基因重组和变异5．英国生物学家首次用羊的体细胞成功地克隆出小羊“多莉”。
《动物细胞培养技术及其应用》 知识清单
《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的基本概念动物细胞培养，简单来说，就是在体外模拟体内的环境，让动物细胞生长、繁殖和发挥功能的技术。
这可不是一件简单的事情，需要精心创造一系列适宜的条件。
细胞从生物体中取出后，要放在特制的培养基中。
培养基就像是细胞的“美食”，包含了细胞生长所需的各种营养物质，如氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等。
同时，还得调节好环境的温度、pH 值、氧气和二氧化碳的浓度，给细胞一个舒适的“家”。
二、动物细胞培养的基本流程1、取材首先得从动物体内获取要培养的细胞。
这可以是从胚胎、幼体组织，也可以是成体的某些器官。
但取材的过程得小心翼翼，不能损伤细胞，还要保证细胞的活性。
2、原代培养将取得的细胞放入培养瓶或培养皿中，这就是原代培养的开始。
在这个阶段，细胞会慢慢适应新的环境，开始生长和分裂。
3、传代培养当原代培养的细胞长满了培养容器的表面，就需要把它们分成小份，转移到新的容器中继续培养，这就是传代培养。
4、细胞的冻存与复苏为了长期保存细胞，会把细胞放在低温下冻存。
等到需要的时候，再通过特定的方法让它们复苏，恢复活性。
三、动物细胞培养所需的条件1、无菌环境这是至关重要的一点，任何细菌、真菌或病毒的污染都可能导致细胞培养的失败。
所以，实验操作要在无菌的超净工作台中进行，培养基和培养用具也要经过严格的灭菌处理。
2、合适的培养基培养基的成分要精心调配，既要满足细胞的营养需求，又要维持合适的渗透压和 pH 值。
3、温度和气体环境一般来说，细胞培养的温度在 37℃左右，同时要提供适量的氧气和二氧化碳。
氧气用于细胞呼吸，二氧化碳则有助于维持培养基的 pH 稳定。
4、贴壁和悬浮培养有些细胞需要附着在培养容器的表面才能生长，称为贴壁细胞；而有些细胞可以在培养基中自由悬浮生长。
四、动物细胞培养技术的应用1、生物制品的生产比如疫苗、抗体、生长因子等。
通过大规模培养动物细胞，可以高效地生产这些生物制品，满足医疗和预防疾病的需求。
安立国第二版动物细胞工程思考题参考答案
哺乳动物的克隆方法：胚胎干细胞核移植、胚胎细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植、体细胞核移植。
第一章绪论课后习题答案1. 动物细胞工程主要有哪些内容？这些技术有何用途？答：1. 组织和细胞培养技术2. 细胞融合与单克隆抗体技术3. 细胞核移植技术4. 胚胎工程技术5. 干细胞技术6. 转基因技术7. 染色体工程细胞工程的应用有：A. 单克隆抗体的应用：疾病诊断与治疗、微量大分子物资的检测、贵重生物活性物的分离与提纯、特殊疾病治疗、与药物交联治疗疾病；B. 转基因技术的应用：建立疾病的动物模型、品种改良和抗病育种、“乳腺生物发应器”、基因代替治疗、异种器官移植、基因功能研究；C. 细胞与组织替代治疗；D. 治疗人类不孕症；E. 优良品种繁育；F. 生产转基因家畜；G. 保护濒危动物。
2.追踪动物细胞工程研究与应用的最新进展，并预测其发展趋势。
第二章细胞培养1、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？答：体外培养的细胞根据其生长方式，主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。
离体细胞必须贴附于底物上才能生长的细胞称为贴壁生长型细胞。
有机体的绝大部分细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长。
动物细胞培养中，大多数细胞必须贴附在固相表面才能生长，当细胞布满表面后即停止生长。
从生长表面脱落进入液体得细胞通常不再生长而逐渐退化，这种细胞称为单层附壁细胞。
贴壁生长的细胞在活体体内时，形态各异，而体外培养状态下则在形态上比较单一而失去其在体内时原有的特征。
按照培养细胞的形态，主要可分为以下几类：成纤维细胞型、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞；少数细胞类型在体外培养时不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，如血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞等，这些细胞在悬浮中生长良好，可以是单个细胞或为细小的细胞团，观察使细胞呈圆形。
由于悬浮生长于培养液中，因此其生存空间大，具有能够提供繁殖大量细胞、传代方便、易于收获细胞等优点，易于大规模生产，便于过程的控制。
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第六次
补5.1.胚胎干细胞（embryonic stem cell， ES）是从早期胚胎内细胞团分离出来的， 能在体外培养的一种高度未分化的多能干细 胞
补5.2.细胞融合（cell fusion)，又称体细 胞杂交（somatic hybridiazation），是 指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合 形成单个细胞的过程
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第八次：
补8.1. 培养基中可能含有血清的是：A A动物细胞培养基 B植物细胞培养基 C愈伤
组织培养基 D微生物培养基 补8.2. 植物细胞的组织培养条件要求含有
全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、 无菌环境、略高的PH以及适时的光照。×
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补8.3电融合法的优点：
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补5.3. 干细胞可连续分裂几代，但是难以 在较长时间内处于静止状态。×
补5.4．细胞融合的常用方法:仙台病毒法、 聚乙二醇（PEG）法、电融合法
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第七次：
补7.1．已知显微镜分辨率的公式为: R=0.61λ /N．A． 其中 N．A．＝ｎsinα/2
（n=介质折射率；α=镜口角；N.A.=镜口率； λ＝入射光波长）
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补4.4．一般把目的片段在器官或组织中表 达的转基因动物叫动物生物反应器 （bioreactor）.
补4.5．细胞直接摄取外源DNA的过程叫： B
A.转导 B.转化 C.转移 D.转入
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第五次：
补5.1．下列细胞不具全能性的是：D
动物细胞培养
4.干细胞的应用 （1）应用原理：有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、 器官的发育、再生和修复等密切相关。 （2）应用实例： 造血干细胞：治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的 造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
加培养液
细胞悬液
转入
培养瓶内培养 （原代培养）
（ 细胞贴壁长成单层细胞,有接触抑制现象）
1.取动物组织 （1）取材:一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。 （2）取材原因: 细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养
2.制成细胞悬液
（1）将组织分散成单个细胞
①方法: 机械法 用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间
细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物的细胞增殖能 力强，有丝分裂旺盛，老龄动物的细胞则相反。所以，一般来 说，幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞易于培养。同样，分化 程度越低的细胞，增殖能力越强，所以更容易培养。
2.动物细胞培养和植物组织培养有什么相同和不同之处？
思考-讨论:
（1）培养前为什么分散成单个细胞？
②原因: Ⅰ.从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼 此限制了生长和增殖； Ⅱ.能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
（2）用培养液将细胞制成细胞悬液。
去掉组织
（一）
动 物
动物胚胎或 幼龄动物的 组织、器官
间蛋白 胰蛋白酶
单个细胞
剪碎
加培养液
细胞 悬浮液
细
分化程度低， 增殖能力强
胞
①成块组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长与增殖 ②利于与培养液充分接触，保证O2与营养供应和代谢物及时排出。
细胞培养复习题
细胞培养复习题名称解释细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。
组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。
有时泛指所有的体外培养。
器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。
合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。
无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。
完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。
接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。
无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。
注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。
但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。
不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。
原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。
培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。
2）一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型，最常见的为前两种。
兽医细胞生物学章节思考题及答案
第一章细胞概述8.请简述病毒的生活史。
答：病毒的生活史分为5个基本过程:吸附(absorption): 病毒对细胞的感染起始于病毒蛋白外壳同宿主细胞表面特殊的受体结合，受体分子是宿主细胞膜或细胞壁的正常成分。
因此，病毒的感染具有特异性。
侵入(penetration): 病毒吸附到宿主细胞表面之后，将它的核酸注入到宿主细胞内。
病毒感染细菌时，用酶将细菌的细胞壁穿孔后注入病毒核酸；对动物细胞的感染，则是通过胞吞作用，病毒完全被吞入。
复制(replication): 病毒核酸进入细胞后有两种去向，一是病毒的遗传物质整合到宿主的基因组中，形成溶原性病毒；第二种情况是病毒DNA(或RNA)利用宿主的酶系进行复制和表达。
成熟(maturation): 一旦病毒的基因进行表达就可合成病毒装配所需的外壳蛋白，并将病毒的遗传物质包裹起来，形成成熟的病毒颗粒。
释放(release): 病毒颗粒装配之后，它们就可从被感染的细胞中释放出来进入细胞外，并感染新的细胞。
有些病毒释放时要将被感染的细胞裂解，有些则是通过分泌的方式进入到细胞外。
第二章细胞生物学研究方法1．举例（3～5个）说明研究方法的突破对细胞生物学发展的推动作用。
答：①细胞培养技术，②离心分离技术，③流式细胞分离技术，④基因敲除技术，⑤干细胞培养技术，⑥……7．什么是细胞培养?答：在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。
第三章细胞质膜与跨膜运输14. 膜的流动性的生理意义何在？答：①细胞质膜适宜的流动性是生物膜正常功能的必要条件。
②酶活性与流动性有极大的关系，流动性大活性高。
③如果没有膜的流动性，细胞外的营养物质无法进入，细胞内合成的胞外物质及细胞废物也不能运到细胞外，这样细胞就要停止新陈代谢而死亡。
④膜流动性与信息传递有着极大的关系。
⑤如果没有流动性，能量转换是不可能的。
⑥膜的流动性与发育和衰老过程都有相当大的关系。
学案 练习：2.2.1 动物细胞培养 Word版含解析
第2节动物细胞工程一动物细胞培养必备知识·素养奠基一、动物细胞培养概念从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。
二、动物细胞培养的条件1.营养条件:(1)合成培养基:将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成。
(2)天然成分:血清等。
(3)一般使用液体培养基,即培养液。
2.无菌、无毒的环境:(1)培养液和培养用具灭菌处理。
(2)无菌环境下操作。
(3)培养液定期更换的目的:清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
3.温度、pH和渗透压:(1)适宜的温度:哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜。
(2)适宜的pH:多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。
(3)适宜的渗透压。
动物细胞培养能否体现动物体细胞的全能性?说明你的理由。
提示:不能。
动物细胞培养只是细胞的增殖,没有体现细胞的全能性。
4.气体环境:95%空气和5%CO2。
(1)O2作用:细胞代谢所必需的。
(2)CO2的主要作用:维持培养液的pH。
三、动物细胞培养的过程填一填:基于动物细胞培养的过程,完成下面的问题:(1)过程①处理方法有:机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理的方法。
(2)过程②为原代培养,培养的动物细胞有两类:①悬浮在培养液中生长增殖;②贴附于某些基质表面生长增殖。
(3)进行过程③时,悬浮培养的细胞直接用离心法收集;贴壁细胞需要使用胰蛋白酶等处理,然后用离心法收集。
(4)过程③为传代培养,进行过程③的原因主要有:细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏和接触抑制等。
四、干细胞培养及其应用1.干细胞分布:早期胚胎、骨髓和脐带等。
2.种类:胚胎干细胞和成体干细胞。
3.判一判:基于干细胞的类型和应用,判断下列说法的正误。
(1)胚胎干细胞和成体干细胞都具有形成机体的所有组织和器官,甚至个体的潜能。
(×)提示:成体干细胞具有组织特异性,只能分化成特定的细胞或组织,不具有发育成完整个体的能力。
动物细胞培养复习题精品.doc
动物细胞培养复习题一、名词解释：1、器官培养c 4-^ *fci*2、In亦圣3、生长液4、维持液5、动物组织培养6、天然培养基7、人工培养基8、胚胎分割9、胚胎干细胞10、核移植技术11、成体干细胞12、传代培养13、原代培养14、胚胎工程15、人工授精16、体外受精二、填空：1、动物细胞贴壁培养时，按照培养细胞的形态不同，主要可分为、、、四类：2、当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器,细胞中可溶性物质浓度升高, 并在细胞内形成。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结品会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。
复苏过程应,目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
3、动物器官培养可分为：、两类；培养原则：① 提供充足的氧气和养料，及时排除。
②抑制细胞从植块向外o4、常用的胚胎培养方法有、、、等5、早期胚胎性别鉴定方法主要有、、等6、人体干细胞从分化功能上可分为三种类型：、、o从来源上可分为两类：、7、干细胞形态特征：, , 具有较强的，因此具有较强增殖能力。
8、近年来已经陆续分离出了、、、等多种成体干细胞，有些成体干细胞已经应用于临床治疗。
9、体外细胞培养一般过程： -一一 f 等10、体外细胞生长过程包括：、、11、________________________________________________________ 动物细胞大规模培养技术是建立在贴壁培养法和________________________________________ 基础上，再融合了固定化细胞、流式细胞术、填充床、生物反应器技术以及等技术而发展起来的。
主要包括悬浮培养、微载体培养、、中空纤维法等。
12、胚胎工程采用的技术主要有:、胚胎移植、胚胎分割与融合、、卵核移植技术、胚胎冷冻保存技术和等。
13、细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了 (一般为预防剂量)，也可能因为而引起污染。
高中生物必修课---动物细胞工程(动物克隆技术)知识讲解及巩固练习题(含答案解析)
高中生物必修课---动物细胞工程（动物克隆技术）知识讲解及巩固练习题（含答案解析）【学习目标】1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
2、比较动物细胞培养与植物组织培养区别。
3、简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。
【要点梳理】要点一：动物细胞培养1、动物细胞培养概念（1）动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。
（2）动物细胞培养过程中的几个重要概念：①细胞贴壁：培养液中分散的细胞很快贴附在瓶壁上生长繁殖，称为细胞贴壁或贴壁生长。
②接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象。
③原代培养：将动物的器官或组织用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，分散成单个细胞，然后制成细胞悬液，放入培养瓶内，放在适宜的条件下培养，这种培养叫原代培养。
④传代培养：原代培养的细胞由于接触抑制不再分裂，还要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理后，再分瓶培养，让细胞继续增殖，这种培养叫传代培养。
2、动物细胞培养过程【高清课堂：动物细胞工程（动物克隆技术）369168动物细胞培养过程】（1）取材：动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织。
（2）过程：原代培养→传代培养→细胞株→细胞系（3）动物细胞培养过程：大多数死亡原代培养动物胚胎或幼龄单个细胞剪碎，胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理子代细胞50代危机绝大多数死亡可无限传代的细胞（连续细胞系）有限细胞系要点诠释①取自动物胚胎或幼龄动物器官、组织，是因为组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强。
②胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。
成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养。
③用胰蛋白酶处理组织块，可使细胞分散开，这样做的目的是使细胞与组织液充分接触，这也说明了细胞间的主要物质是蛋白质，但是由于细胞膜的主要成分之一也是蛋白质，因此要控制好处理的时间，不能太长，否则会损伤细胞。
高中生物(新人教版)选择性必修三同步习题：动物细胞培养(同步习题)【含答案及解析】
第2节动物细胞工程第1课时动物细胞培养基础过关练题组一归纳动物细胞培养的条件1.(2020河北沧州一中高二月考)一般来说,动物细胞体外培养需要满足以下哪些条件(易错)①无毒的环境②无菌的环境③合成培养基需加入血清④温度与动物体温相近⑤需要O2,不需要CO2⑥适宜的渗透压A.①②③④⑤⑥B.①②③④C.①③④⑤⑥D.①②③④⑥2.(2020江苏南通高三一模)在进行动物细胞培养时,需要(易错)A.用胃蛋白酶处理以获得细胞悬液B.充入5%CO2以刺激细胞正常呼吸C.加入经高压蒸汽灭菌的血清以提供营养D.定期更换培养液以清除代谢物题组二理解动物细胞培养的过程3.(2020山东章丘四中高三月考)动物细胞培养的顺序是()①原代培养②传代培养③胰蛋白酶处理组织,形成分散的悬浮细胞A.③①②B.①②③C.②①③D.①③②4.下列有关动物细胞培养的叙述,错误的是()A.细胞通常贴壁生长B.细胞进行有丝分裂和减数分裂C.细胞之间有接触抑制现象D.体外培养的动物细胞的分类:一类悬浮在培养液中生长增殖,另一类贴附于某些基质表面生长增殖5.(2020辽宁六校协作体高二期中)下列关于动物细胞培养的叙述,正确的是()A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶瓶壁上可形成多层细胞B.传代培养时,贴壁生长的细胞可直接用离心法收集C.细胞的传代培养次数通常是无限的D.动物细胞培养中定期更换培养液可以清除代谢物6.(2020江苏徐州一中高二开学考试)某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性,准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行细胞培养。
下列说法正确的是(易错)A.在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时,也可用胃蛋白酶处理B.细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行,CO2的作用是刺激细胞呼吸C.甲、乙细胞在持续的培养过程中,乙会出现停止增殖的现象D.仅用培养肝细胞的培养液也能用来培养乙肝病毒7.(2020云南师大附中高三二模)如图为动物细胞培养过程的示意图。
细胞工程思考题
细胞工程（动物部分）思考题生技1402 李静1402140105一、动物原代细胞培养应注意哪些问题?答：动物原代细胞培养分为取材、分离细胞、制备成可用于培养的组织块或细胞、接种到合适的无菌培养液中、在适宜的环境条件下进行体外培养等,每个阶段需要注意的问题如下：1)在取材阶段我们需要注意取材部位是否准确、所取材料是否保持活性、材料处理是否得当等问题，一般选择在动物幼小时取材。
整个取材过程一般要在超净工作台或其他工作台面上进行。
在无菌条件下取出组织和器官，放在BSS或培养液中，立即送往实验室。
如果不可避免的要延误时间，如去屠宰场或临床手术室取材时，解取的组织应立即冷却，然后尽快送往实验室;；2)在分离细胞时，由于组织均由多种细胞和纤维成分组成，一般体积大于1mm3 的组织块置于培养瓶后，处于周边的少量细胞可能生存和生长，而大部分细胞因营养物质穿透有限而代谢不良，且受纤维成分束缚而难以移出。
为获取较大量生长良好的细胞，必须把组织分散开，使细胞充分解离出来，但不伤害细胞本身；一定要注意多余水分的去除，水分若不除去，会使组织块剪切不细，消化后的细胞悬液清亮（细胞数少），并可见消化液中有线状或絮状物漂浮。
原代培养的贴壁细胞需控制消化时间。
吹打已消化的细胞应减少机械损伤。
3)在培养细胞时，为促进组织块尽快粘贴在培养瓶上，可以在接种前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。
细胞培养过程中，胶原中的促细胞贴附因子先吸附于培养瓶底壁上，悬浮的圆形细胞再与已吸附有促细胞贴附因子的底壁附着；4)用组织块培养时，要及时观察。
当发现细胞向外迁移出来后，要记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，因为已漂浮的组织块和那些细胞碎片已死亡，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长，要及时清除；5)加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。
6)组织块接种后的前3d，从组织块向外迁移的细胞数很少，组织块的粘附不牢固。
在观察和移动过程中，注意不要引起液体的振荡。
【课后集训】第2章 细胞工程 第2节 1动物细胞培养(含答案详解)
2019版生物选择性必修3 课后集训第1章细胞工程第2节 1动物细胞培养题组一动物细胞培养的条件1．下列不属于动物细胞培养的条件是()A．无毒、无菌的环境B．合成培养基通常需加血清、血浆C．pH＝7的中性环境D．提供细胞代谢所需的O22．动物细胞体外培养需要满足一定的条件，下列说法错误的是()A．细胞培养液通常会添加一定量的抗生素，以防止杂菌污染B．O2是细胞代谢所必需的，CO2有利于维持培养液pH的稳定C．使用合成培养基时，通常要加入血清、血浆等一些天然的成分D．多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4，适宜温度为25±0.5 ℃题组二动物细胞培养的过程3．下列有关动物细胞培养的叙述，正确的是()A．原代培养和传代培养前都可以使用胰蛋白酶B．培养过程中需将细胞置于含95%O2和5%CO2的混合气体的培养箱中C．配制合成培养基要加入糖、促生长因子、氨基酸、琼脂等成分D．培养液中添加适量的抗生素可为细胞提供无菌、无毒的培养环境4．小鼠的某种上皮细胞与某种淋巴细胞体外培养时，细胞周期基本相同，但上皮细胞在培养时，呈现扁平不规则多角形，且贴附在培养瓶内壁上；该淋巴细胞则常常悬浮在培养液中。
下列有关叙述错误的是()A．使用合成培养基培养动物细胞时通常需添加一些血清等天然成分B．培养基内加入适量的抗生素以防止培养过程中杂菌的污染C．相同次数分瓶培养所获得的两者细胞数目完全相同D．培养上皮细胞更易观察判断细胞是否具有接触抑制现象5．下列关于动物细胞培养过程的叙述，错误的是()①制作细胞悬液时，可以使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理②悬液中分散的细胞很快贴附在瓶壁上，细胞贴壁体现了细胞的适应性③10代以内的细胞能保持细胞正常的二倍体核型④细胞培养在含混合气体的培养箱中，其中的CO2可刺激细胞的呼吸⑤动物细胞培养需要在严格无菌的条件下进行⑥用胰蛋白酶处理动物组织后，可用无菌水稀释制成细胞悬浮液⑦根据培养时是否有接触抑制现象判断细胞是否癌变A．②③④B．②③⑥C．②④⑥D．④⑥6．如图所示为动物细胞培养过程中，动物细胞增殖情况的变化曲线(图中B、D两点表示经筛选后继续培养)，据图分析，下列说法错误的是()A．动物细胞培养需要使用液体培养基B．OA段的培养称为原代培养C．AB段可能发生了接触抑制现象，可用胰蛋白酶处理使细胞分散开来D．培养过程中，细胞可通过有丝分裂和减数分裂实现细胞增殖题组三干细胞的培养及应用7．下列关于胚胎干细胞的叙述，不正确的是()A．动物胚胎的每一个细胞都是胚胎干细胞B．胚胎干细胞具有分化为动物各种组织的潜能C．胚胎干细胞的遗传物质在质和量上与受精卵相同D．胚胎干细胞在体外可诱导分化为不同类型的组织8．胚胎干细胞是哺乳动物或人早期胚胎中的细胞，可以进一步分裂、分化成各种组织干细胞，再进一步分化成各种不同的组织。
动物细胞培养习题.doc
动物细胞培养习题名词解释1、细胞工程（cell engineering）是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。
2、细胞培养（cell culture）将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。
3、细胞核移植(nuclear transplantation)细胞核移植，就是将一个细胞核用显微注射的方法放进另一个细胞里去。
前者为供体，可以是胚胎的干细胞核，也可以是体细胞的核。
4、染色体工程(chromosome engineering )是人们按照一定的设计,有计划地消减,添加或代换同种或异种染色体,从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术.5、胚胎工程(embryonic engineering)胚胎工程：指在胚胎发育过程中进行的生物技术。
包括：胚胎移植、胚胎融合、胚胎分割、胚胎冷冻、胚胎性别鉴定、胚胎细胞核移植、转基因操作。
6、干细胞（stem cell）是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。
7、组织工程；组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。
8、初代培养也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。
9、继代培养对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养，就称为继代培养10、酶连免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术.它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定.测定的对象可以是抗体也可以是抗原.11、抗原抗原是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞结合，发生免疫效应的物质。
动物细胞工程
杂交瘤细胞
C 3、A是从小鼠的脾脏中取得 抗体 _______,该细胞能够产生______ B细胞 细胞融合 足够数量的细胞群 4、图中B为________过程，常用 灭活病毒 _________作为诱导剂，该细胞继 双亲细胞 承___________的遗传特性，既能 体外培养 注射到 分泌抗体 无限增殖 __________,又能___________。 小鼠腹腔 5、C过程指细胞培养，该过程包括 原代 传代 _____培养和_____培养两个阶段。
去 核
注 核
重组细胞
2、原理： 动物细胞核的全能性 胚胎细胞分化程 度低，恢复其全 能性相对容易。 动物体细胞分化 程度高，恢复其 全能性十分困难
3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。
4、核移植流程
供体：优质高产奶牛 受体：普通奶牛（卵 母细胞的采集与培养）
◆促融方法：
电刺激 妊娠、分娩
◆胚胎移植至
2、融合的原理：细胞膜的流动性
3、结果：形成杂交细胞（具有 原来两个或多个细胞遗传信息的 单核细胞）
融合完成的标志：细胞核融合
4、诱导融合的方法
病毒颗粒黏 附细胞表面
化学法：聚乙二醇PEG
物理法：电激等
生物法：灭活的病毒
细胞膜被 病毒颗粒打通
思考讨论：为什么细胞 融合过程中使用的病毒 需要灭活？
细胞膜连接
2.在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确 的是 （ B） A.结果是相同的 B.杂种细胞的形成过程基本相同 C.操作过程中酶的作用相同 D.诱导融合手段的手段相同
不能。
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
一、动物细胞培养
1.动物细胞培养的概念：
动物细胞培养：就是从动物有机体中取出 相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放 在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖.
高中生物选择性必修三 第2章 第2节 一 动物细胞培养
第2节动物细胞工程一动物细胞培养课后篇巩固提升基础巩固1.下列有关细胞工程的叙述,正确的是()A.动物细胞培养时,与幼龄动物的细胞相比,老龄动物的细胞更容易培养B.由于植物细胞具有全能性,所以分化程度不同的细胞全能性相同C.动物细胞培养前需要将组织、器官分散成单个细胞D.对原生质体的活力进行检测,可以采用质壁分离的方法答案C解析动物细胞培养时,幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞相比,更易于培养,A项错误;分化程度不同的细胞全能性不同,分化程度越高,其全能性越低,B项错误;动物细胞培养前需要将组织、器官分散成单个细胞,C项正确;原生质体没有细胞壁结构,D项错误。
2.如图表示动物细胞培养过程中,动物细胞增殖情况的变化曲线(图中B、D两点表示经筛选后继续培养),下列相关叙述错误的是()A.OA段的培养称为原代培养B.AB段可能发生了接触抑制C.BD段的培养需用胰蛋白酶处理和更换培养液D.动物细胞培养过程中,细胞可通过有丝分裂和减数分裂实现细胞增殖答案D解析OA段的培养称为原代培养,为动物组织经处理后的初次培养,A项正确;AB段细胞几乎不再增殖,可能发生了接触抑制,需要用胰蛋白酶等处理,使组织细胞分散开来,形成单个细胞才能继续培养,B 项正确;BD段的培养过程需用胰蛋白酶处理和更换培养液,C项正确;减数分裂是有性生殖生物形成配子的方式,而动物细胞培养是通过有丝分裂实现细胞增殖的,D项错误。
3.下列关于动物细胞培养的有关叙述,正确的是()A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等C.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理D.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白答案C解析细胞的癌变发生于传代培养过程中,A项错误;动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、动物血清等,不需要生长素,B项错误;动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理,使细胞分散,C项正确;动物细胞培养的目的是获得细胞产物或细胞群,D项错误。
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《动物细胞培养技术》复习思考题
1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果
器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？
2.叙述超净工作台的工作原理
鼓风机驱动空气通过高效过滤器得到净化，净化的空气徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，是工作区形成无菌环境。
3.正压过滤器为何会除菌
4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。
你认为精确配制各种溶液？
5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？
6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制
7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？
8.HEPES溶液与胰蛋白酶液的作用机理
9.平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？
10.营养液制备后为什么要小剂量分装？
11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法
12.细胞培养过程中对无菌的要求很高，你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污
染？请详细阐述。
13.你认为组织块培养成功需哪些条件？你们小组为了实验成功采取了哪些具体的措施？
你在本次实验中做了什么工作？
14.组织块培养的基本原理如何？
15.何时须更换培养基进行传代？可否使用与原先培养条件不同之血清种类来进行后期的
培养？
16.培养细胞时不用CO2或使用5 % 或10% CO2是否都可以？说明原因？
17.你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？你在其中参与了什么操作？有什么体
会？
18.培养瓶移入CO2恒温箱培养时，瓶盖为何要稍松？又如何避免细胞污染？如果细胞污
染有何挽救措施？
19.胰蛋白酶的消化原理如何？如何初步判断胰蛋白酶的消化时间？
20.细胞培养到一定时间为何要进行传代？能一直传代下去吗？阐述其机理。