第三章 石蜡制片实例
微波快速石蜡制片的实例运用
关键词 ： 波； 蜡切片 ； 微 石 美洲 商 陆 ； 剖 结 构 解
中图 分 类 号 ： ９４ Ｑ ４ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ８— ４ ７ ２ １ ）３— ２ １ ０ １０ ０ ５ （０ ２ ０ ０ ７ — ４
形 成层 是 由中柱鞘 细胞恢 复分 裂能力 形 成 的 ， 向 其 外 形成 木栓 ， 内形 成 薄 壁 组 织 ， 栓 内层 。维 管 向 即 组 织 由初生 木质部 、 初生 韧皮部 、 生韧 皮部 、 管 次 维
形 成层 和次 生木质 部组 成 。维 管束 呈散 射状 排 列 。
初 生 木质部 外 始式 发育 ， 原 型 ； 二 次生 结 构 中 主要
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１１１ ）并 确保 片段 完 全 浸 没在 固定 液 中 。将 ：：８ ，
小玻璃 瓶放 入塑 料烧 杯 中 ， 向塑料烧 杯 中倒 人跟 再 固定 液平齐 的 ７ ℃ 热 水 （ 面 每 次 都要 与小 玻 璃 ５ 下
技术 进行 了初步研 究 ， 到 比较 完整 的 玉米 组织 解 得
பைடு நூலகம்
剖 结构 ； 国 内 ， 在 魏欣 悦等 以采 用 水稻 （ ｒ ａｓ一 Ｏｙ 口 ｚ
玉 米 （ ｅ ａ ） Ｚ ａ ｍ ｙ 的花 和 叶 为试 材 对 微 波石 蜡 制 片
面保 留其表 皮 。一部 分 按 传 统 石蜡 法 制 作 一
组商 陆 叶片 、 和茎 的解 剖结构 ， 为对 照 ； 根 作 另一部 分 片段放 人 小 玻 璃 瓶 中 ， 人 大 于 体 积 片 段 体 积 加 ２ Ｏ倍 以上 的 Ｆ Ａ固定 液 （ Ａ 甲醛 ： 乙 酸 ：０ 乙醇 冰 ７％
石蜡切片实验设计
“优一”花芽解剖实验设计背景资料：核果类花芽生理分化的时间：5月下旬或6月上旬至7月初或7月中旬，在长梢生长量达全生长量的60%-95%时为盛期。
7月中旬至8月中旬开始进入形态分化期，部分品种6月中旬就开始进入形态分化，7月中旬至8月中旬是分化高峰时期，8月下旬至10月初为性器官分化阶段。
由于今年气温高整个物候期提前，所以计划于5月10号开始观察。
一、实验目的此次杏的花芽解剖实验从花芽生理分化开始，对杏的各个时期的花芽进行观察，力求找出雌蕊败育的时期和原因。
二、实验时间试验于2014年5 月10 日始至2015 年3月（开花前）三、实验材料选取原阳基地9年生以上的优一品种，在同一棵树上选取树冠外围南部中、短果枝上的中、下部芽为主。
四、实验方法先对优一挂牌采样，每隔10 d 取样1 次，每次取50个芽，每次从短枝取芽后用F A A 固定液(70％乙醇90mL ：福尔马林5mL ：冰醋酸5mL)保存。
将花芽材料需在固定液中固定24h以上。
五、实验方法与步骤采用石蜡切片法制片方案一：采用常规石蜡切片法制片1、染色将固定液中的芽取出，放人盛有50%乙醇的培养皿中，用镊子与解剖针小心剥去鳞片之后，移入装有蒸馏水的小瓶中，再用注射器吸干水，然后加入2～3 滴爱氏苏木精，封盖静置10～1 5 d。
2、材料冲洗用注射器将小瓶内的染色剂吸出，回收，然后将小瓶用纱布蒙口，倒置入水槽，后用自来水冲洗12～24 h 。
3、脱水材料取出后依次放入70% 乙醇、83％乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100％乙醇、100%乙醇的脱水剂中脱水，每级脱水剂中处理50分钟(100 %乙醇中为30分钟／次)。
4、透明脱水后迅速将材料放人100％乙醇与一二甲苯的混合物中，混合物按2 ：1、1 ：1、1 ：2 的比例混合，再将混合物各放置20分钟，接着各放入两组纯一二甲苯15 分钟。
5、浸蜡将试验材料与二甲苯一并倒入玻璃杯中，放置在37℃恒温处12～24 h，后移人56～60℃的恒温箱中3 d ，期间更换恒温箱中纯蜡3～4次。
石蜡制片法实验课件111
试剂的配制
(一)70％、80％、90％乙醇 )70％、80％、90％乙醇 95％以下的各级浓度乙醇是用95％乙醇加蒸馏水稀 95％以下的各级浓度乙醇是用95％乙醇加蒸馏水稀 释而成。简单的稀释方法是：所需稀释的浓度是多少， 释而成。简单的稀释方法是：所需稀释的浓度是多少， 就量取多少毫升95 ％ 的乙醇 ， 再加蒸馏水至 95 ml即 就量取多少毫升 95％ 的乙醇， 再加蒸馏水至95 ml 即 可例如，配制70％乙醇，就量取70 可例如，配制70％乙醇，就量取70 m1 95％的乙醇，然 95％的乙醇， 后加入蒸馏水至95 ml即成。 后加入蒸馏水至95 ml即成。 (二)固定剂 常用的固定剂有4％甲醛溶液、Bouin液和Zenker液 常用的固定剂有4％甲醛溶液、Bouin液和Zenker液 等。Bouin液在组织学制片技术中应用甚广，其配方如 等。Bouin液在组织学制片技术中应用甚广，其配方如 下： 苦味酸饱和水溶液 75 ml 4％甲醛溶液 25 ml 冰醋酸 5 ml
切片
（九）粘片
切下来的切片经过镜检，将符合要求的切片粘在洁 净的载玻片上。粘片时先在载玻片涂薄层粘片剂（蛋白 甘油），将其放在烤片盒中置于50℃左右恒温箱内烤 甘油），将其放在烤片盒中置于50℃左右恒温箱内烤 干 。
蜡带
粘片
（十）脱蜡、染色、脱水透明和封片
粘片后要经过脱蜡、染色、再次脱水透明， 粘片后要经过脱蜡、染色、再次脱水透明，然后封 片永久保存。 片永久保存 。 下面以动物学中观察组织结构最常用的 HE染色法说明脱蜡、染色、脱水透明和封片的过程。 HE染色法说明脱蜡、染色、脱水透明和封片的过程。
染色
封片
实践： 学生每3 学生每3人一组，以大鼠肝脏为材料，熟 悉石蜡切片步骤。
石蜡制片实验报告
一、实验目的1. 学习石蜡制片的基本原理和操作步骤。
2. 掌握石蜡制片过程中常用的试剂和设备。
3. 了解石蜡制片在组织学、病理学等领域的应用。
二、实验原理石蜡制片是一种将组织固定、脱水、透明、包埋、切片和染色等一系列操作过程结合在一起的实验技术。
通过石蜡制片，可以使组织在显微镜下观察到其形态结构。
石蜡制片的基本原理是利用石蜡的物理和化学性质，将组织固定、脱水、透明、包埋，并使其具有适宜的硬度和透明度，以便于切片和染色。
三、实验器材与试剂1. 器材：石蜡切片机、切片刀、切片刀架、切片夹、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子、剪刀、酒精灯、火柴、显微镜、烤箱、离心机、移液器、微量滴管、染色缸、染色瓶、试剂瓶、试管、试管架等。
2. 试剂：4%多聚甲醛固定液、70%酒精、80%酒精、95%酒精、无水乙醇、醇苯、二甲苯、石蜡、石蜡熔融剂、中性树胶、苏木精、伊红、盐酸酒精、磷酸盐缓冲液等。
四、实验步骤1. 组织固定：取新鲜组织，用4%多聚甲醛固定液固定24小时以上。
2. 组织脱水：将固定好的组织放入70%酒精中浸泡2小时，然后依次放入80%酒精、95%酒精、无水乙醇、醇苯中浸泡各2小时。
3. 组织透明：将脱水的组织放入二甲苯中浸泡2小时，使组织透明。
4. 组织包埋：将透明的组织放入石蜡中，加热熔融，使组织浸入石蜡中。
待石蜡凝固后，将组织从石蜡中取出，放入包埋框中，贴上标签。
5. 组织切片：将包埋好的组织块放入石蜡切片机中，调整切片厚度（一般为4μm），进行切片。
6. 组织展平：将切片从石蜡切片机上取下，放入水中展平。
7. 组织染色：将展平的切片放入苏木精染液中染色5分钟，然后用盐酸酒精分化，最后放入伊红染液中复染。
8. 组织封片：将染色的切片放入中性树胶中封片，待树胶凝固后，用盖玻片封片。
9. 显微镜观察：将封片后的切片放入显微镜中观察，记录观察结果。
五、实验结果与分析1. 组织切片：经过石蜡制片，组织切片呈现出良好的透明度和硬度，便于观察。
石蜡切片的具体步骤与做法
石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。
制片时间太长。
石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。
AFA固定液则不需要水洗。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
石蜡切片及染色实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握石蜡切片的基本操作步骤。
2. 了解石蜡切片的染色原理和方法。
3. 观察细胞组织的结构特征。
二、实验器材与试剂1. 器材：- 石蜡切片机- 石蜡包埋机- 恒温箱- 显微镜- 载玻片- 盖玻片- 毛笔- 镊子- 刀片- 染色缸- 烤片机- 试剂瓶2. 试剂：- 4%多聚甲醛固定液- 无水乙醇- 二甲苯- 苏木素染液- 伊红染液- 1%盐酸酒精溶液- 1%氨水溶液- 甘油蛋白粘片剂- 中性树胶三、实验步骤1. 取材与固定：取新鲜组织，用4%多聚甲醛固定24小时以上。
2. 脱水：将固定好的组织放入脱水盒，依次用75%、85%、90%、95%、无水乙醇进行脱水，每级酒精处理1小时。
3. 浸蜡：将脱水后的组织放入二甲苯中浸泡，每缸浸泡1小时。
4. 包埋：将浸好蜡的组织块放入包埋机中，加入融化的石蜡，待石蜡凝固后取出，修整蜡块。
5. 切片：将修整好的蜡块固定在切片机上，切成4微米厚的切片。
6. 水化：将切片放入水中，用毛笔轻轻搅动，使切片展平。
7. 脱蜡：将水化的切片放入二甲苯中，依次浸泡30分钟，然后放入无水乙醇中，浸泡10分钟。
8. 苏木素染色：将脱蜡后的切片放入苏木素染液中，染色0.5-1分钟。
9. 自来水漂洗：将染色后的切片放入自来水中漂洗。
10. 盐酸酒精分化：将漂洗后的切片放入1%盐酸酒精溶液中分化数秒。
11. 自来水漂洗：将分化后的切片放入自来水中漂洗。
12. 氨水返蓝：将漂洗后的切片放入1%氨水溶液中返蓝1分钟。
13. 自来水漂洗：将返蓝后的切片放入自来水中漂洗。
14. 伊红染色：将漂洗后的切片放入伊红染液中染色1分钟。
15. 自来水漂洗：将染色后的切片放入自来水中漂洗。
16. 梯度酒精脱水：将漂洗后的切片依次放入70%、80%、90%、95%、无水乙醇中，每级酒精处理5分钟。
17. 透明：将脱水后的切片放入二甲苯中，依次浸泡5分钟，然后放入无水乙醇中，浸泡5分钟。
实验九 石蜡切片制作
组织固定后的处理
①冲洗或漂洗：组织固定后应充分水洗，除去留在组 织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染 色效果。
②材料经过固定后，需要保存下来以备利用，通常使 用的保存剂是70%的酒精溶液，可以使一般的材料 保存较长的时间而不至于变坏。
③通常在冰箱中4℃存放。
3. 脱水
• 水和透明剂不能互溶，只有脱去水分后，才能让透 明剂进入。
蒸馏水 100毫升 甘油 15毫升 苯酚 2克 乙液：甲醛 4毫升 蒸馏水 100毫升
8. 脱蜡及复水
干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染 液中进行染色。 用二甲苯脱蜡，再逐级经梯度酒精复水。
• 脱蜡（溶蜡）：将切片上的石蜡溶去。一般都用二 甲苯溶脱蜡。如果脱蜡不彻底，材料的染色就困难。
• 复水：脱蜡后的材料从高浓度的酒精溶液（100%） 开始，逐级进入低浓度的酒精溶液，最后一级通常 是30%酒精或水，使材料中的水分逐渐增加。如果 不经过复水，材料脱蜡后直接进入染色剂中，材料 将会严重变形，甚至难以染色。
5.浸蜡与包埋
• 用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。 • 通常先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等
量混合液浸渍1～2小时或者过夜，再先后移入熔化 的石蜡液中浸渍几天。 • 浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以 利石蜡浸入组织内。
• 石蜡熔点： 45-50℃ 软蜡 55-60℃ 硬蜡
实验九 石蜡切片制作
一、实验目的与要求： 掌握石蜡切片制作的基本过程及其注意事项。
二、实验材料和仪器： 实验材料: 向日葵幼茎、石蜡、酒精、二甲苯、番红/固
绿染色液等；实验仪器和器皿：石蜡切片机、展片机、染色 缸、载玻片、盖玻片等。 三、实验内容与方法：
实验三石蜡切片法
30min-1h 1-2h
1-2h
? 包埋：将浸蜡后的组织块包在石蜡之中，并使组织块 与石蜡一起凝固成均匀一致的蜡块的过程叫包埋。
? 方法：将纸盒盛满已融化的石蜡，随即将第三杯中已 浸蜡的材料放入其中，并排出里面的气泡待石蜡表面 凝结后，将纸盒进入水中冷却石蜡全部凝结后，拆去 纸盒即成蜡块。动物致死方法：常用方法有麻醉法、空气栓塞法、断头 法、击头法、股动脉放血法等；无尾两栖类常用探针破 坏脑和脊髓的方法处死，鼠类可用两手（戴手套）用力 拉，使颅骨和颈椎分离而导致延髓损伤致死。
? 动物保护 组织材料新鲜
动作迅速
取材注意事项：
① 要熟悉取材部位； ② 所取材料尽可能新鲜； ③ 组织块力求小而薄：厚度一般不超过5mm为宜，较理想的
? 组织块修整：经过固定后的组织有一定的硬度，此时就可以 做一些修整，但改变不要太大，只要将组织材料切取平整， 修掉一些不规则的部位；过大、过厚的组织改小、改薄。
4.洗涤
? 洗涤：将残余在组织内的固定液清洗干净，以免影响对组织 内部结构的观察、分析、研究。
? 常用的洗涤方法 水洗法（含有铬、锇的固定液固定的组织块） 酒精洗涤法（含有苦味酸、酒精固定液固定的组织块）
厚度为2mm左右； ④ 勿使组织块受挤压，以免破坏组织； ⑤ 保持材料清洁，以免影响观察。
2.固定
? 固定：固定是指处死的动物体或新取的组织块投入固定 液使其结构得以凝固为不溶性物质的过程。其目的在于 保持组织内细胞的形态、结构及其组成，防止细胞组织 死后的自溶和腐败，使之尽量保持生前的状态和结构。
3)切片：在旋转式切片机上将蜡块切成 5-10um厚的薄片。 切下的薄片会连成蜡带。用毛笔轻托轻取蜡带，放在蜡带盒 内备用。
修块
石蜡切片的实验报告
一、实验目的1. 掌握石蜡切片的制作过程，包括组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤。
2. 了解石蜡切片技术在生物学研究中的应用。
3. 学会使用显微镜观察石蜡切片，识别不同组织结构。
二、实验原理石蜡切片技术是一种重要的生物学制片方法，用于观察组织、细胞等微观结构。
其基本原理是将组织固定后，通过一系列的脱水、透明、浸蜡等步骤，使组织在石蜡中充分浸渍，然后用切片机切成薄片，最后进行染色和观察。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 组织：肝脏、肾脏、心肌、骨骼肌等3. 试剂：卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液、1%伊红酒精溶液、1%盐酸酒精溶液、甘油蛋白粘片剂、郝普特氏粘片剂、中性树胶、1%番红、1%固绿、1%过碘酸、Schiff 试剂、0.5%偏重亚硫酸钠溶液、醋酸酐-吡啶混合液、0.5%~1%淀粉糖化酶溶液等4. 器材：切片刀、切片机、恒温箱、温台、熔蜡炉、蜡杯、酒精灯、蜡铲、展片台、解剖刀、解剖针、解剖剪、解剖盘、培养皿、吸管、镊子、单面刀片、台木、毛笔、洒精灯、包埋纸盒、染色缸、盖玻片、载玻片、玻片盘、树胶、树胶瓶、显微镜、温度计、脸盆、水浴锅等四、实验步骤1. 取材：取新鲜组织，固定于4%多聚甲醛24小时以上。
2. 脱水：将固定后的组织依次放入75%、85%、90%、95%酒精中浸泡1小时，然后放入无水乙醇I、无水乙醇II中浸泡30分钟，最后放入醇苯中浸泡5-10分钟。
3. 透明：将组织放入二甲苯I、二甲苯II中浸泡5-10分钟。
4. 浸蜡：将组织放入熔化的石蜡中浸泡1小时。
5. 包埋：将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋，待石蜡凝固后取出并修整蜡块。
6. 切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚约4微米。
7. 展片：将切片漂浮于摊片机40℃温水上，将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。
8. 染色：将烤干的切片进行染色，如苏木精-伊红染色。
石蜡的切片实验报告
一、实验目的1. 熟悉石蜡切片的制作过程。
2. 掌握石蜡切片的染色技术。
3. 了解石蜡切片在组织学研究和病理诊断中的应用。
二、实验原理石蜡切片技术是一种常用的组织学制片方法，其原理是将组织标本进行脱水、浸渍、浸蜡等处理，使其在石蜡中充分浸渍，然后用微型切片机将其切成薄片，最终制成组织学切片。
石蜡切片具有切片厚薄均匀、染色效果好、保存时间长等优点，是组织学研究和病理诊断的重要工具。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠2. 实验器材：石蜡切片机、显微镜、载玻片、盖玻片、染色缸、酒精灯、剪刀、镊子等3. 实验试剂：卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、埃利希苏木精染液、1%伊红酒精溶液、1%盐酸酒精溶液等四、实验步骤1. 取材：取小白鼠肝脏组织，用剪刀剪成小块。
2. 固定：将剪好的组织块放入卡诺氏固定液中固定24小时。
3. 脱水：将固定好的组织块依次放入70%、80%、90%、95%、100%酒精溶液中，每级酒精溶液浸泡1小时，使组织逐渐脱水。
4. 透明：将脱水的组织块依次放入三个二甲苯溶液中，每缸浸泡1小时，使组织逐渐透明。
5. 浸蜡：将透明的组织块依次放入三个石蜡溶液中，每缸浸泡1小时，使组织完全浸渍在石蜡中。
6. 包埋：将浸好蜡的组织块放入熔蜡中，待石蜡凝固后取出，用剪刀修整蜡块。
7. 切片：将修整好的蜡块固定在石蜡切片机上，调整切片厚度为4微米，制成石蜡切片。
8. 展片：将切好的石蜡切片展平在载玻片上。
9. 脱蜡：将展平的石蜡切片依次放入二甲苯、无水乙醇中，使切片脱蜡。
10. 染色：将脱蜡后的切片放入苏木精染液中染色5-10分钟，然后放入1%盐酸酒精溶液中分化，最后放入伊红染液中复染30秒。
11. 封片：将染好的切片放入封片液中封片。
五、实验结果制作完成的石蜡切片在显微镜下观察，可见到肝脏组织的细胞结构，如细胞核、细胞质、血管等。
六、实验讨论1. 石蜡切片技术是组织学研究和病理诊断的重要工具，具有切片厚薄均匀、染色效果好、保存时间长等优点。
石蜡切片的步骤实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉石蜡切片的制作流程。
2. 掌握石蜡切片的基本操作步骤。
3. 了解石蜡切片在组织学、病理学等领域的应用。
二、实验器材与试剂1. 实验器材：- 组织切片机- 石蜡切片机- 脱水机- 摊片机- 载玻片- 烤片机- 石蜡- 二甲苯- 无水乙醇- 4%多聚甲醛- 70%、85%、95%、100%乙醇- 75%、85%、90%、95%酒精- 0.1mol/L盐酸- 苏木精- 伊红- 柠檬酸缓冲液- HE染色试剂三、实验步骤1. 取材与固定- 将新鲜组织固定于4%多聚甲醛24小时以上。
- 将组织从固定液中取出，在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
- 将修切好的组织和对应的标签放入脱水盒内。
2. 脱水- 将脱水盒放入吊篮里，于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。
- 脱水过程：75%酒精1小时，85%酒精1小时，90%酒精1小时，95%酒精1小时，无水乙醇I 30分钟，无水乙醇II 30分钟，醇苯5-10分钟，二甲苯I 5-10分钟，二甲苯II 5-10分钟，蜡I 1小时，蜡II 1小时，蜡III 1小时。
3. 包埋- 将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋。
- 先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出，按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。
- 于-20℃冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4. 切片- 将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4微米。
- 切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。
- 待水烤干蜡烤化后取出，常温保存备用。
5. 脱蜡至水- 依次将切片放入二甲苯30分钟，二甲苯30分钟，无水乙醇10分钟，无水乙醇10分钟，95%酒精5分钟，90%酒精5分钟，80%酒精5分钟。
- 苏木精染色：将切片放入苏木精染液中染色5-10分钟。
- 水洗：将切片放入清水中清洗。
- 伊红染色：将切片放入伊红染液中染色1-2分钟。
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作的实验指导石蜡制片法是将材料经过固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法，是永久制片法。
是光学显微镜的制片技术中最常用的一种方法。
（一）材料的采集与分割•采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。
为使固定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。
分割时动作要迅速，以防材料萎蔫。
分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1cm3，分割后立即杀死固定。
•操作：取来桐花叶子数片，用刀片将其切割成小于1cm3大小的小块取材原则：•植物材料的取材（注意季节；横切面，纵切面）•动物组织的取材（各器脏的全部组织结构或重要结构，如消化管包括粘膜、粘膜下层、肌肉和外膜四层结构；切割方向，取材大小）注意事项：•遵循准确、典型、完整、适时原则•固定剂的选择•刀须锐利•详细记录时期、采集地点、标本名称、年龄、性别、取材部位、断面和所用固定剂等（二）杀死与固定•利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。
•将F.A.A固定液放在具塞小瓶中，投入材料，盖好瓶盖，时间为24小时。
说明：F.A.A固定液既是良好的固定剂，也是保存剂，因此材料可长期保存在固定液中备用。
卡诺固定液穿透力强，固定较小材料一般1~6小时即可，最多不超过24小时。
因卡诺固定液不能做保存剂，所以固定后要用95%、85%酒精浸洗，每级约20min.，然后保存在70%的酒精中备用。
（乙醇+醋酸：F.A.A，也称卡诺氏固定液）固定和固定剂•固定的概念和目的••将所要观察的新鲜组织割取后立即投入某种固定剂中，通过化学药品的作用保存组织、细胞的形态结构，不使其改变形态和变质的一种措施•固定的作用和目的••防止组织自溶和腐败，保存细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等成分••使细胞成分沉淀和凝固，因而产生不同折射率，造成光学上的差异，使某些看不清的结构变得清晰，而且有些固定剂可使细胞各部分容易染色••固定剂兼有硬化作用，使组织硬化不易变形，利于后续操作••固定的主要目的是保持材料生活时的状态。
石蜡制片实验报告
篇一：石蜡切片技术实验报告题目：石蜡切片技术实验报告学院：农学院，专业：植物学，姓名：张永丰，学号：2011202010目的掌握石蜡切片技术，为以后的科研中切出合格的实验装片做准备。
并观察植物叶的横切面内部结构。
材料：已经固定好的女贞叶方法与操作步骤一、脱水：依次使用下列浓度的乙醇脱水50%乙醇—70%乙醇—85%乙醇—95%乙醇—100%乙醇—100%乙醇每步两个小时。
二、透明：依次通过下列试剂进行透明1、1/2无水乙醇1/2二甲苯（加少许番红粉末，对材料进行附染）两个小时2、二甲苯两个小时3、二甲苯一个小时三、浸蜡：浸蜡步骤如下1、将材料瓶中的二甲苯取出1/2，加入剩余二甲苯的体积3/2倍的石蜡液于36℃温箱中处理35小时2、换用纯石蜡液于60℃温箱中处理2小时，再换一次纯石蜡液处理2小时四、包埋与切片1、在提前准备好的纸盒中放入少量蜡液。
2、片刻后放入材料，避免形成断层还要注意材料摆放的位置和方向。
3、及时将蜡块冷却，防治形成结晶。
4、修块与粘连：将多余的石蜡切除，使蜡块成为梯形；将蜡块一正确的方向粘连在枕木上。
5、切片：利用切片机将蜡块切成薄片。
切片厚度为8～10μm，以每分钟40～50转为宜。
6、粘片与展片：在载玻片上滴一滴黏贴剂和一滴蒸馏水用牙签涂匀，将蜡带光面朝下固定于载玻片上，放到展片台上经加温使其充分展开。
7、干燥：将展好的片放于36℃温箱中干燥16小时五、脱蜡：切片分别经过下列步骤进行脱蜡二甲苯1/2二甲苯1/2无水乙醇乙醇85%乙醇70%乙醇 5min六、染色：染色分为番红染色和固绿染色两步1、番红染色：将载玻片放入盛有番红染液（1%番红，70%乙醇）的染缸中染色22小时2、固绿复染：载玻片依次经过一下处理固绿染液（0.1%固绿，95%乙醇）20秒3、脱水：95% 1min 100% 1min 100%1min4、透明：1/2二甲苯1/2无水乙醇 1min 二甲苯 1min 二甲苯七、封片中性树胶封片，干燥八、镜检将封好的装片在显微镜下观察，并挑选清晰的具有叶横切面典型结构特征的部位拍照。
石蜡制片方法
▪包埋中出现旳问题及其处理方法 ➢问题 包埋后旳石蜡块应为均匀旳半透明状态， 但有时出现白色混浊旳结晶部分，这么在切片时 就有阻碍。 ➢原因 1.脱水不洁净。2.组织内部或石蜡中混 有透明剂。3.石蜡本身品质不良。4.纸盒中周围 旳石蜡先成凝固状态，中部旳石蜡凝固较晚。5. 石蜡冷凝得太慢。 ➢处理方法
1.摺包埋用旳纸盒并写好标签。 2.检验恒温箱中所熔旳新鲜石蜡是否够 用。
➢纸合旳折叠措施
3.在脸盆内放入冷水备用。 4.点燃酒精灯，准备好1把镊子，1支拨针。
➢包埋旳操作过程 1、右手持镊子，左手从恒温箱中取出盛满熔
化石蜡旳小瓶，并随手将恒温箱旳门关闭，立即 将小瓶中旳石蜡和材料一起倒入包埋用旳纸盒中， 假如纸盒中蜡旳量少，可再加入适量旳蜡。
15％，35％，50％，70％，85％，95％，100 ％。
2.一般经水洗旳材料，脱水可自35％开始， 柔弱旳材料自15％开始，若用酒精洗涤，则可直 接移入50％或70％酒精中继续脱水。
3.在每级中停留旳时间，依材料旳大小、性 质以及留在固定液中旳时间长短和固定液旳溶解 性而定。一股旳原则是：
(1)如洋葱、蚕豆等根尖和小片叶子一样大 小旳材料，每级停留约30分钟到1小时。
（3）福尔马林——醋酸——酒精混合液(FAA)
合用范围：合用于植物各器官解剖构造旳观察，
但不适于染色体观察研究。
配方： 50％或70％酒精
90毫升
冰醋酸
5毫升
福尔马林 5毫升
处理：1、一般柔软材料，可用50％酒精。
2、固定时间最短需18小时，也可无限期延长。
3、冲洗时材料可直接换入50％或70％酒精中洗一、
➢常用固定液旳配方
（1）福尔马林[Formalin，37—40％旳甲醛
石蜡制片程序-修改后
第一天：脱水：材料（已在70%酒精中）→85%酒精1小时→95%酒精1小时→100%酒精1 小时→100%酒精1小时→1/2二甲苯+1/2纯酒精（加几粒泛红颗粒）（过夜）。
第二天：透明：纯二甲苯2小时→二甲苯+1/3碎蜡（45度温箱2小时）→二甲苯+1/3碎蜡（45度温箱2小时）→二甲苯+1/3碎蜡（45度温箱过夜）第三天：透蜡：混合物（60度温箱2小时）【可以将瓷碗放到包埋机里，设成60度。
之后的60度温箱都这样处理。
提前将包埋机打开，待蜡熔化后再将材料从45度温箱移过来。
】→纯蜡1（60度温箱2小时）→纯蜡2（60度温箱2小时）。
包埋：包埋要整齐，将材料摆好，勿触及到柱头。
第四天：切块：将包埋好的蜡块切成单个材料的小块。
粘块：粘好后，放入小袋子里密封，放于-20度冰箱过夜第五天：修块：块要好好修理，整齐，有利于后续的切片，材料不要暴露出来，留一部分蜡在表面。
切片：厚度8微米。
连续切片切好后用毛笔转移到A4大小的滤纸上，用解剖刀分割成与盖片同样长度的片段【要比盖片稍小些，还有展片的过程，要预留出空间。
】。
【切片前用毛笔将切片机上的刀片内外两侧都清扫干净。
可以提前用抽屉中现有的别的材料的蜡块用6微米切切，看看效果，如果可以就用6微米切。
切片越薄着色和观察的效果越好。
但是如果切的蜡带很碎，或者很难成带，就还用8微米的。
】粘片：载玻片上涂薄薄一层粘贴剂，涂匀后再在上面滴2、3滴蒸馏水，涂抹均匀，把切片用解剖刀转移到载玻片上，靠载玻片右侧粘材料，左侧留出空白写材料信息。
尽量多贴切片，没有柱头的部分不要。
展片：43度温台上放置15秒至切片展开。
烘片：从温台上取下载片，放入载片盒中，45度温箱干燥2天。
第七天：脱蜡：二甲苯1→二甲苯2→二甲苯3→1/2二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→100% 酒精→95%酒精→85%酒精→70%酒精（以上每级10分钟）→50%酒精（加上1%番红）（4天过染）。
第九天：染色：蒸馏水过一下→50%酒精（加入半滴1当量盐酸）（1分半钟）→70%酒精→85% 酒精→95%酒精（这三级每级过一下，用滤纸吸干）→固绿（0.5%，95%酒精）（约5-30秒）→95%酒精→100%酒精→100%酒精（这三级每级过一下）→1/2二甲苯+1/2纯酒精（2分钟）→二甲苯1（5分钟）→二甲苯2（10分钟）→加拿大树胶封片。
第三章 石蜡制片实例
三、叶横切片制片法
用于一般根、茎、叶、花药、子房等切片 目的：观察双子叶植物叶的结构。 材料：棉花叶片（南瓜茎、菊芋茎也可以用此方法。 染色方法：苯胺番红、苯胺固绿双重染色。
制片效果：厚壁组织、导管、细胞核红色，其余部分为绿色。
制片步骤
1.取样：取完全成熟棉叶，用单面刀片沿主脉两侧各5〜6 mm处切开，将中央有叶脉的部分再横切成5 mm的小段。 2.固定：FAA液中固定24 h，并保存于固定液中。 3.脱水：70%/85%乙醇(各3~4h)，含0.5%〜1%伊红的95%乙醇 3〜4 h (可过夜），无水乙醇2次（各1〜2 h）。 4.透明、加蜡：5级氯仿透明(每级3〜4 h)，纯氯仿2次(每次2 h)，加碎蜡，置36 ℃温箱1〜2 d。 5.透蜡、包埋：50%蜡、75%蜡各3 h，纯蜡A、B、C三杯，每杯lh， 包埋时将叶片直立。 6.修块、切片：修蜡块时使叶片直立于台木上，并用单面刀片切除先端石蜡， 浸水软化后放在切片机上作叶的横 切面，切片厚度12 μm。 7.展片、粘片、烘干：切片先镜检，每张载玻片放2个蜡片，展片后平放在摊片盘上，36 ℃温箱中烘干。 8.脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。 9.染色（番红一固绿双重染色）：在已脱蜡的材料上滴注无水乙醇、95%乙醇、 85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、 30%乙醇、蒸馏水各约4〜5 s，苯胺番红染色5〜10 min，用蒸馏水洗去浮色。 10.脱水、透明：各级乙醇脱水（30%、50%、70%、85%、95%乙醇），苯胺固绿复染30〜40 s，再经95%乙醇， 无水乙醇、1/2无水乙醇+1/2 二甲苯、二甲苯（2次）各约4〜5s，最后置二甲苯缸中。 11.封片、烘片：加拿大树胶封片。封片后将材料平放在摊片盘上，36 ℃温箱内烤数天（或自然干燥）。 12.镜检。
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南瓜茎导管、筛管纵切
南瓜茎导管、筛管横切 南瓜茎导管、筛管横切局部放大
制片效果：厚壁组织、导管、细胞核红色，其余部分绿色。
制片步骤
1.取样：锋利刀片将南瓜茎切成小段，横切:0.8cm，纵切:lcm，选髓腔较小样品，便于切片。 2.固定：FAA固定24 h，抽气，并保存于固定液中。 3.软化：经70%乙醇、50%乙醇2〜4 h降至蒸馏水，15%氢氟酸中软化10〜15 d。 4.水洗：自来水流水冲洗24 h，蒸馏水浸洗6 h。 5.整染：苯胺番红中染色48 h。 6.脱水：经30%-50%-70%-85%-95%乙醇，每级3〜4 h， 无水乙醇2次，每次1.5〜3 h。 7.透明、加蜡：5级氯仿透明(每级3〜4h)，纯氯仿2次(每次2h)，加碎蜡2次，置36℃温箱2〜4 d。 8.透蜡、包埋：50%/75%蜡各3 h，纯蜡A/B/C(每杯lh)。包埋时:横切样品竖放，纵切样品卧放。 9.修蜡块、切片：横切片厚度15 μm，纵切片厚度20μm，切前浸水软化。 10.展片、粘片、烘干：每张载玻片粘1个蜡片，展片后将材料平放在摊片盘，36℃温箱中烘干。 11.脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。 12.复染、脱水及透明：滴注无水乙醇、95%乙醇各4〜5 s，苯胺固绿约0.5〜1 min,再经95%乙 醇、1/2无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯（2次）各约4〜5s，最后置于二甲苯缸中。 13.封片、烘片：加拿大树胶封片后平放在摊片盘上，36℃温箱烤数天（自然干燥）。 14.镜检。
实验日程表(固定-包埋)
日期（日/月）
时间
步骤
第一天 / 上午8:00-11:30
50%乙醇 爱氏苏木精稀释液（原液1份加50%乙醇及乙酸等量混合液1份）
第四天 / 上午8:00 下午2:00
蒸馏水浸洗，勤换水，至水中无浮色，镜检。 如需分色则以45%乙酸分色至适度，自来水浸洗，换水数次至根尖变蓝。
上午8:00-11:30 下午2:00-4:30 第二十天 /
步骤 样品取材、固定，转至蒸馏水，入15%氢氟酸软化
10-15 d
流水冲洗除酸液
蒸馏水换数次（0.5h）、苯胺番红整染
30%乙醇 50%乙醇(2.5h)-70%乙醇(2.5h)-85%乙醇(2.5h)-95%
乙醇 无水乙醇(1.5h)-无水乙醇(1.5h)-1/5氯仿,2/5氯仿 ,3/5氯仿(每次吸出一格溶液，加人一格纯氯仿，间
实验日程表(固定-包埋)
日期（日/月 ）
第一天 /
时间
上午任何时间 下午2:00-5:00
步骤 70%乙醇(4h)-85%乙醇(3h)-95%伊红乙醇（含伊红1%)(过夜)
第二天 / 上午8:00-11:30 无水乙醇(1.5h)-无水乙醇(2.5h)-1/5氯仿,12/5氯仿,3/5氯仿,每次吸出
一、根尖纵切片制片法
目的：观察根尖分区细胞的特征及细胞有丝分裂过程。 材料：洋葱根尖。 染色方法：爱氏苏木精整染。
制片效果：核仁与染色质为深蓝色，其余浅蓝色。
制片步骤
1.取样：9〜10月中旬培养/取样，将洋葱鱗茎搁置盛满自来水的玻璃瓶口上，基部接触水面，室温24 h即可生根， 根长至1. 5〜2 cm时切取根尖约0. 8cm固定。每天取根后换水，直至洋葱鳞茎不再发新根。 2.固定：铬酸乙酸液固定24 h。 3.保存：经固定的根尖换入蒸馏水浸洗约24 h，勤换水，以去尽酸液。后经15%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70% 乙醇脱水，每级2〜4 h，并保存于70%乙醇中备用。 4. 整染：50%乙醇2〜4 h，入爱氏苏木精稀释液（原液1份+50%乙醇与乙酸等量混合液1份）整染2〜3 d。 5. 水洗、返蓝：蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色，再换入自来水1〜2 次，至根尖由紫色变为深蓝色，约24 h。 6.镜检及分色：取一根尖置载玻片上用刀片切碎后，加1滴水，覆以盖玻片，进行镜检，要求染色体、核仁清晰。 如果发现染色过度，如细胞核为一团深蓝色，则需以 1%盐酸或45%乙酸分色至适度，再用水洗净。 7.脱水：经15%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇，每级2〜4 h。 8.透明、加碎蜡：5级氯仿透明，每级l h，最后纯氯仿2次，每次30 min。加碎蜡，所加石蜡量约占透明剂的一半， 然后放入36 ℃温箱中1 d。 9.透蜡、包埋：经50%蜡、75%蜡各30 min，纯蜡A、B、C三杯，每杯30 min，包埋。 10.修蜡块、切片：根尖纵切，切片厚度为8 μm。 11.展片、粘片、烘干：经镜检后选取根尖中轴部位、生长点及根冠分界清晰的蜡片，如果目的是观察有丝分裂 过程，则需注意所切蜡带有无分裂相，每张载玻片上放2 个蜡片，展片后平放摊片盘上，36 ℃温箱中烘干。 12.脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各一次。 13.封片、烘片：加拿大树胶封片。封片后平放摊片盘上，36 ℃温箱内烤数天（或自然干燥）。 14.镜检。
第三章 石蜡切片实例
常规石蜡切片步骤
•取材（新鲜、特定时期） •固定（FAA、卡诺固定，70%酒精长期保存） •脱水（不同梯度酒精） •透明（二甲苯、氯仿） •浸蜡（石蜡熔点不同，温箱浸蜡温度不同，二甲苯过渡） •包埋（包埋盒（快、准、一次到位）） •切片（修块、切片、捞片、展片、贴片，42~50℃水浴，37℃过夜） •脱蜡（脱蜡彻底，时间宁长勿短） •染色（每种2min, 大约15-20min）（60℃烤箱15min，脱色效果较好） •脱水（伊红染液，二甲苯等每种3-5min，） •透明 （二甲苯） •封片（加拿大树胶、中性树胶，胶量适宜） •显微观察
五、子房纵切片制片法
目的：观察子房和胚珠的结构、大孢子发生、雌配子体发育、受 精过程、胚和胚乳发育。
材料：蚕豆子房（油菜子房、拟南芥子房也可以用此方法制片）。 染色方法：铁矶苏木精切片染色，1%伊红乙醇复染。
丝兰子房横切，
局部放大，示1个心皮中的2个胚珠；
丝兰胚珠的结构（摄影：冯燕妮）
制片效果：核紫红色，其余浅红色。
制片步骤
1.取样：12月至翌春2月采油菜苗剥除叶片，只留下极小的茎端，切取茎端约0.5〜0.6 cm长的部位，即 为被小的幼叶所包裹的花芽。 2.固定：FAA液中固定24 h，可保存其中备用。 3.整染：经70%、50%乙醇各2〜4 h，转入爱氏苏木精稀释液（爱氏苏木精原液1份+50%乙醇及乙酸各 半的混合液1份）中整染2〜3 d。 4.水洗、返蓝：蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色，再转入自来水，换1〜2次水，至样品由紫色变为深蓝 色为止，共需时约1 d。 5.脱水及复染：经30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇，每级3〜4 h。含0.5%〜%伊红的95%乙 醇中4〜6 h (可过夜），无水乙醇2次，每次2 h。 6.透明、加蜡：5级氯仿透明，每级2〜4 h，纯氯仿2次，每次2 h，加碎蜡，然后置36℃温箱中1 d。 7.透蜡、包埋：经50%蜡、75%蜡各3 h，再经纯蜡A、B、C三杯各 1 h，包埋。 8.修蜡块、切片：纵切花芽，切片厚度8 μm。 9.展片、粘片、烘干：镜检选取花芽中轴的蜡片进行粘片，每张载玻片上粘1〜2 个蜡片。展片后将材 料平放在摊片盘上，放置36 ℃温箱中烘干。 10.脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各一次。 11.封片、烘片：加拿大树胶封片。封片后将材料平放在摊片盘上，36℃温箱内烤数天（或自然干燥）。
下午2:00-5:00
一格溶液，加入一格纯氯仿，间隔3h,3/5氯仿过夜
第三天
/
上午8:00-11:30 4/5氯仿,吸出一格，加入一格纯氯仿(2h)-纯氯仿,吸出瓶内全部氯仿，再 下午2:00-30 4:30 加入新氯仿(重复，间隔2h)-加碎蜡（间隔1h)于新氯仿பைடு நூலகம்置36℃温箱中
第五天 /
上午8:30-11:30 下午2:00-4:30
制片效果：细胞核紫蓝色，其余部分淡红色。
小麦子房纵切面 A.示孢原细胞； B.大孢子母细胞时期； C.大孢子四分体时期； D.四分体的3个大孢子退化,1 个继续发育 ；E.单核胚囊（大孢子）； F.二核胚囊； G.四核胚囊； H.示2个助细胞； I.示3个反足细胞； J.示 2个极核 ； K.成熟胚囊示1个卵细胞； L.成熟胚囊示反足细胞群（摄影：冯燕妮）
实验日程表(固定-包埋)
日期（日/月） 第一天 /
时间
第十一天 / 第十二天 / 第十五天 /
下午2:00-5:00 下午5:00
第十六天 / 第十七天 /
上午8:00-11:30 下午2:00-5:00 上午8:00-11:30 下午2:00-5:00
第十八天 / 上午8:00-11:30 下午2:00-4:30
第五天 / 第六天 /
上午8:00-11:30 下午2:00-5:00
蒸馏水过一遍，15%乙醇(3h)-30%乙醇(2h)-50%乙醇(2h)-70%乙醇(过夜)
上午8:00-11:30 下午12:30-4:00
85%乙醇(1h)-95%乙醇(1h)-无水乙醇(1h)-无水乙醇(1h)-1/5氯仿，2/5氛仿，3/5氯仿， 4/5氯仿，每次吸出一格溶液，加人一格纯氯仿(间隔0.5h)-吸出瓶内全部氯仿，加入新氯
三、叶横切片制片法
用于一般根、茎、叶、花药、子房等切片 目的：观察双子叶植物叶的结构。 材料：棉花叶片（南瓜茎、菊芋茎也可以用此方法。 染色方法：苯胺番红、苯胺固绿双重染色。
制片效果：厚壁组织、导管、细胞核红色，其余部分为绿色。
制片步骤
1.取样：取完全成熟棉叶，用单面刀片沿主脉两侧各5〜6 mm处切开，将中央有叶脉的部分再横切成5 mm的小段。 2.固定：FAA液中固定24 h，并保存于固定液中。 3.脱水：70%/85%乙醇(各3~4h)，含0.5%〜1%伊红的95%乙醇 3〜4 h (可过夜），无水乙醇2次（各1〜2 h）。 4.透明、加蜡：5级氯仿透明(每级3〜4 h)，纯氯仿2次(每次2 h)，加碎蜡，置36 ℃温箱1〜2 d。 5.透蜡、包埋：50%蜡、75%蜡各3 h，纯蜡A、B、C三杯，每杯lh， 包埋时将叶片直立。 6.修块、切片：修蜡块时使叶片直立于台木上，并用单面刀片切除先端石蜡， 浸水软化后放在切片机上作叶的横 切面，切片厚度12 μm。 7.展片、粘片、烘干：切片先镜检，每张载玻片放2个蜡片，展片后平放在摊片盘上，36 ℃温箱中烘干。 8.脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。 9.染色（番红一固绿双重染色）：在已脱蜡的材料上滴注无水乙醇、95%乙醇、 85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、 30%乙醇、蒸馏水各约4〜5 s，苯胺番红染色5〜10 min，用蒸馏水洗去浮色。 10.脱水、透明：各级乙醇脱水（30%、50%、70%、85%、95%乙醇），苯胺固绿复染30〜40 s，再经95%乙醇， 无水乙醇、1/2无水乙醇+1/2 二甲苯、二甲苯（2次）各约4〜5s，最后置二甲苯缸中。 11.封片、烘片：加拿大树胶封片。封片后将材料平放在摊片盘上，36 ℃温箱内烤数天（或自然干燥）。 12.镜检。