石蜡切片详细步骤

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石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程以石蜡切片制作流程为标题，写一篇文章。

石蜡切片制作是一项常见的实验技术，在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。

石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析，能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。

下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。

1. 组织固定：首先，需要从感兴趣的样本中取得组织样本，并将其进行固定。

固定是为了保持组织的形态结构和化学成分，常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。

固定过程中，需要确保样本完全浸泡在固定液中，通常需要数小时至数天的时间，以确保组织被充分固定。

2. 脱水：固定后的组织样本需要进行脱水处理，以去除其中的水分。

脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂，常用的有乙醇、丙酮等。

通常采用递增浓度的有机溶剂，从低浓度逐渐提高到高浓度。

每个浓度的脱水液中，样本需要浸泡一定的时间，以确保脱水彻底。

3. 渗透：脱水后的组织样本需要进行渗透处理，以使其与石蜡更好地结合。

渗透剂通常为石蜡溶液，可以将样本浸泡在石蜡溶液中，以使其逐渐渗透进入组织内部。

渗透过程中，需要注意控制温度和时间，以确保渗透均匀。

4. 包埋：渗透后的组织样本需要进行包埋处理，即将其嵌入到石蜡中。

首先，将组织样本放置在石蜡模具中，并加入适量的石蜡。

然后，将模具放入石蜡包埋机中，利用加热和真空等处理，使石蜡与组织样本充分结合。

包埋过程中需要严格控制温度和时间，以确保石蜡固化完全。

5. 切片：包埋后的组织样本需要进行切片处理，以获取薄片供观察。

首先，使用切片机将石蜡块切割成薄片。

然后，将薄片置于载玻片上，并加热使其与载玻片结合。

最后，使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。

6. 然后，对切片进行染色处理，以增强对组织结构的观察。

常用的染色方法有血液学染色、免疫组化染色等。

染色后，可以使用显微镜观察和分析切片中的细胞和组织结构。

总结起来，石蜡切片制作流程包括组织固定、脱水、渗透、包埋、切片和染色等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和时间，以确保制作出高质量的石蜡切片。

石蜡切片的主要步骤

石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。

本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。

1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。

固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。

处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。

2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。

首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。

然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。

在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。

3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。

首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。

然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。

接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。

在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。

4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。

首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。

然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。

在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。

5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。

首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。

然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。

在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。

6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。

首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。

然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。

接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。

7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。

石蜡切片的详细制作过程

石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要包括：取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。

1．取材材料的好坏直接影响到切片的质量，无论取哪一种动植物材料，以下几点是必须注意的。

（1）植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分；动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织。

（2）取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要，应该尽可能割取生活着的组织块，并随即投入固定液。

（3）切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。

（4）切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。

一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。

2．固定组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。

为了使标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。

这种处理就是固定。

除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某些部分易于染色。

固定剂的作用对象主要是蛋白质，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作时不加考虑，如要观察这些物质，可用特殊的方法将其固定下来。

固定剂的作用表现在对材料体积的改变、硬化的程度、穿透的速度以及对染色的影响等方面。

这些作用的好坏、大小，都依所固定的材料性质而定，同样一种固定液对某一材料来说是良好的，但对另外一些组织可能就不很适用。

良好的固定剂必须具备的特征是：穿透组织的速度快。

，能将细胞中的内含物凝固成不溶解物质，不使组织膨胀或收缩以保持原形，硬化组织的程度适中，增加细胞内含物的折光度，增加媒染和染色能力，具有保存剂作用。

固定剂有简单固定剂和混合固定剂的划分。

简单固定剂即单一的固定剂，常用的有乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞、苦味酸、铬酸、重铬酸钾和锇酸。

石蜡切片的步骤2021.7.21

石蜡切片的步骤2021.7.21(1)取材：选取生长良好、有代表性的目标材料，洗净。

用锋利的双面刀片截取材料，动作要迅速。

材料的大小不超过0.5~lcm。

(2)固定：将选取的材料放人固定液中，固定液的体积大约是材料的20倍。

固定剂有faa固定液。

faa既是良好的固定剂，也是保存剂，材料可以在其中长久保存。

而卡诺固定液和纳瓦兴固定液则不能长久保留材料，固定后，使用70%的乙醇尽快清洗2~3次，转人70%乙醇中保存。

若材料含有空气，固定时需要抽气。

(3)水解：紧固不好的材料经各级乙醇水解至氢铵乙醇。

各级乙醇的浓度为：30%、50%、70%、85%、95%和l0o%、l0o%，每次水解40min，材料可以煮沸二甲苯留存在4℃冰箱(4)透明化：。

由于石蜡溶二甲苯而不溶乙醇，因此透明化的促进作用除了并使材料显得透明化外，另一方面就是将材料中的乙醇除去。

使用3/4乙醇+1/4二甲苯,2/4乙醇+2/4二甲苯,1/4乙醇+3/4二甲苯,氢铵二甲苯两次，每次透明化时间为40min，透明化顺利完成后材料可以煮沸氢铵乙醇留存在4℃冰箱。

(5)浸蜡：使石蜡慢慢溶于透明剂中，然后完全取代透明剂进人植物组织中。

一般将透明好的材料换入新的二甲苯中，然后加入等体积的碎蜡，置于65℃左右的温箱中。

随着碎蜡的溶解，不断加入碎蜡使石蜡饱和为止，时间大约l~2天。

(6)上皮组织：泡蜡后，在60℃的温箱中泡蜡后，在60℃的温箱中，换两次已熔化的纯蜡，每次约2h，崭新石蜡然后将材料和石蜡一起倒应先融一次减少密度，凝结后再聚润就可以采用，大纸盒中，用冷却的镊子快速把材料按须要的螺旋和一定的间隔排序整齐，再将大纸盒折叠于冷水中，并使其很快凝结。

(7)修块：将包埋好的材料切割成小块，每个小块包含一个材料。

然后按需要的切面将蜡块切成梯形，切面在梯形的上部，注意上部矩形的对边平行。

梯形的底部用烧热的蜡铲将其固定在木块上。

(8)切片：用手摇切片机将蜡块切开已连续的蜡带。

石蜡切片制备基本步骤(附HE染色步骤)

石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制：成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸（ml）1000 200 100重铬酸钾（mg）63 120 100蒸馏水（ml）200 200 1000重铬酸钾1200g蒸馏水2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2. 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3. 95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）2．枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）（二）固定剂：1．甲醛：10%甲醛福尔马林100ml蒸馏水900ml注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2．10％中性福尔马林钙固定液甲醛液10ml蒸馏水90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。

3．4%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水100ml加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。

滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。

石蜡切片的主要制备程序

石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：
1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。

首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。

调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。

需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

石蜡切片流程范文

石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术，用于制备生物组织薄片，使其可以在显微镜下观察和分析。

下面是石蜡切片制备的详细流程。

1.组织固定：首先，需要选择适当的方法将生物组织进行固定，以保持其形状和结构。

最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。

将组织样品置于福尔马林溶液中，通常需要固定24至48小时。

2.去水：固定完毕后，需要将组织中的水分除去，以便进行后续的处理。

通过逐渐提高样品中酒精浓度（例如70％、80％、95％和100％构成的酒精梯度）来逐步去除水分，通常每次浸泡20至30分钟。

3.清洁：去水后，通常需要对样品进行清洁，以去除可能存在的污物和其他杂质。

可以用清洁的醇溶液（例如100％酒精）浸泡样品数分钟，然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。

4.浸渍：在石蜡切片制备过程中，需要将组织样品浸泡在石蜡中，以使其渗透并得到支撑。

选择适当的石蜡类型和温度很重要。

通常使用低熔点石蜡（例如58℃石蜡），在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。

5.渗透：将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中，通常需要经历多个步骤的渗透过程。

首先将样品浸泡在75％酒精中，然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中（例如85％、95％和100％）和石蜡中，每次浸泡时间约为1小时。

6.包埋：当样品完成渗透后，需要进行包埋，即将渗透后的组织样品放置在切片模型中，并用石蜡封住。

将切片模型倒置，将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。

然后将切片模型固定在冷却装置中，等待石蜡冷却和固化。

7.切片：当石蜡块完全固化后，可以将其切割成所需的薄片。

通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。

将切片机的刀片调整到所需厚度（通常为3至5微米），将石蜡块放置在切片机上，并逐渐将刀片与石蜡块接触，以制备薄片。

8.制片：将切好的石蜡薄片静置在温水中，让其自然展开，并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。

轻轻将玻片压在石蜡薄片上，以确保两者之间有良好的接触。

然后将载片放置在恒温台上，以便胶水干燥。

石蜡切片步骤

⽯蜡切⽚步骤⽯蜡切⽚基本步骤（⼀）取材和固定根据实验⽬的选择材料。

将整个⾍体或⾍体的内部器官（如肠道、马⽒管、唾液腺等）取出后，⽴即投⼊固定液。

取材⼤⼩：0.5cm×0.5 cm×0.2或者1.0 cm×1.0 cm×0.2，厚度不宜超过3mm。

固定液：2.5%的戊⼆醛固定液，Bouin⽒液，10%甲醛等。

固定时间：4oC固定24⼩时。

注意事项：取材：1．勿使组织块受挤压切取组织块所⽤⼑、剪要锋利，切割时不可来回切割。

夹取组织时，镊⼦要轻，切勿挤压，以免损伤组织。

取材时，组织块可稍⼤⼀点，以便在固定后，将组织块的不平整部分修去。

2.选好组织块的切⾯应熟悉器官组织的组成，并根据观察⽬的来确定纵切或横切。

3．保持材料的清洁组织块上如有⾎液、污物、粘液、⾷物等，先⽤⽣理盐⽔冲洗⼲净，再⼊固定液。

4．切除（清除）不需要的部分特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，以免影响以后的程序和观察。

固定：1．材料新鲜取出组织后须⽴即固定。

否则时间相隔过久，体积就要收缩变形或发⽣⾃溶现象。

2．抽⽓⽣物组织常有⽓体的存在，使材料不能沉⼊固定液中，抽⽓使得固定液有效渗⼊。

真空泵抽⽓或者⽤空针管抽⽓。

昆⾍整体固定，固定前⽤解剖针刺数个⼩孔，以利⽤固定液渗透。

3．固定剂⽤量⼀般为组织体积的10~20倍。

勿使组织贴于瓶底或瓶壁，以免影响固定剂的渗⼊。

4．避免阳光尽可能避免接触阳光以免失去固定作⽤。

5．加速固定轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗⼊，对长期固定的标本可经常更换固定液。

（⼆）洗涤2.5%戊⼆醛固定液固定的组织：0.2M, pH7.2磷酸缓冲液漂洗三次，每次10minBouin⽒固定液固定的组织：直接⼊70%酒精更换数次即可脱⽔，注意苦味酸。

甲醛固定的组织：直接投⼊50%或70%酒精脱⽔，不经⽔洗。

但如果在甲醛中时间过长，则仍应当⽤流⽔冲洗。

陈旧性标本和混合性固定液应及时洗涤，有利于脱⽔、切⽚和染⾊。

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程一、取材选取目的组织块，修剪到合适的大小；二、固定将组织块放入福尔马林固定液（10%甲醛溶液），固定时间由组织块大小而定，一般不少于24h；体积1cm3的组织块，一般为3-7天；三、冲水自来水洗几下，泡1小时；四、系列酒精脱水50%酒精，1h；70%酒精，1h；80%酒精，1h；90%酒精，1h；100%酒精（I），1h；100%酒精（II），1h；五、透明酒精：二甲苯=1：1溶液，过夜；二甲苯，1h；六、包埋二甲苯：石蜡=1：1，65-70 ℃，2h；新鲜石蜡（I），65-70 ℃，1h；新鲜石蜡（II），65-70 ℃，4h；新鲜石蜡包埋；七、切片切片厚度为5-7um；八、展片温水（40-42 ℃）展片；九、捞片将展好的片子贴于载玻片上；十、烘片42 ℃将片子上的水烘干；十一、烤片60 ℃烤片12-24h；十二、脱腊二甲苯（I）：2min；酒精：二甲苯=1：1溶液：2min；十三、水化100%酒精（I）：1min；100%酒精（II）：1min；95%酒精：1.5min；80%酒精：1.5min；70%酒精：1.5min；50%酒精：1.5min；自来水洗：2min十四、H&E染色Hematoxylin染色3-5min(2.5min时取出观察染色效果)，自来水洗3次，盐酸分化（2/3杯玻璃缸+3滴1N盐酸），10s；自来水洗蓝化，镜下观察染色效果；（伊红）Eosin染色30-50s，直接脱水（90%酒精-----100%酒精I，100%酒精II各1分------酒精：二甲苯=1：1溶液：1-1.5min）；十五、脱水90%酒精-100%酒精-100%酒精，各1min；十六、透明二甲苯：酒精：1-1.5min；二甲苯：2min；十七、封片中性树胶封片；十八、镜下观察并拍照。

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程石蜡切片是一种常用的组织学技术，用于制备组织切片，以便进行显微镜观察和研究。

以下是石蜡切片的基本操作流程：1. 组织固定：首先，将待切片的组织标本进行固定，以保持组织结构的完整性和稳定性。

常用的固定剂包括福尔马林、酒精和乙醛等。

固定时间的长短取决于组织的大小和类型，一般为数小时至数天。

2. 组织去水化：固定后的组织需要去除固定剂并脱水，以防止切片过程中的破损和变形。

通常采用逐渐增加乙醇浓度的脱水步骤，常见的乙醇浓度为70%、80%、90%和100%。

3. 组织浸渍：脱水后，组织需要进一步浸渍到石蜡中，以增加组织的硬度和支持性。

首先将组织放入浸渍剂中，如甲醛或乙醇中的苯麻油，然后逐渐增加石蜡浓度，常见的石蜡浓度为50%、70%和100%。

4. 组织包埋：在组织浸渍后，将组织放入包埋模具中，然后倒入熔化的石蜡，使其完全包裹住组织。

包埋完成后，将模具放入冷却台或冷冻器中，使石蜡迅速固化。

5. 石蜡切片：将冷却固化的石蜡块从模具中取出，使用切片机将其切割成薄片。

切片机通常配有刀片、切片夹和切片盒等工具，切片时需要注意切片的方向和角度，以获取最佳的切片效果。

6. 切片染色：切片完成后，可以对切片进行染色，以便更好地观察和分析组织结构和细胞形态。

常用的染色方法包括血液染色、组织染色和免疫组化染色等。

7. 切片封片：染色后，将切片放置在载玻片上，并使用透明的封片剂将其覆盖。

封片剂可以保护切片，防止切片脱落和变形，并提高显微镜观察的清晰度。

8. 切片观察：最后，将封片的切片放置在显微镜下进行观察和分析。

可以使用不同的显微镜镜头和放大倍数来观察组织细节和细胞结构，同时可以使用图像分析软件对切片图像进行处理和测量。

总体而言，石蜡切片的基本操作流程包括组织固定、去水化、浸渍、包埋、切片、染色、封片和观察等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和操作技巧，以确保获得高质量的组织切片用于研究和诊断。

石蜡切片制作流程

石蜡切片制作流程石蜡切片制作流程表一. 取材1，样品要求：长，宽各1cm左右，厚不超过5mm2，固定液：10%福尔马林固定液或4%多聚甲醛：组织块=20:1为宜3，固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如24h或更长，应密封瓶口，封前换液4, 修块二.脱水1，水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下水洗，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2，脱水1）75%酒精1h2) 80%酒精1h3）95%酒精Ⅰ1h4) 95%酒精Ⅱ1h5) 100%酒精Ⅰ1h6) 100%酒精Ⅱ1h组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其在95%酒精（Ⅱ）中进入100%酒精（Ⅰ）中，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分进入。

三．透明1)酒精（100%）：二甲苯=1：1 10min2)二甲苯Ⅰ透明10min3二甲苯Ⅱ10min四．浸蜡1）二甲苯：石蜡=1：1 30min 温箱56—58℃2）石蜡Ⅰ1h 温箱56—58℃3) 石蜡Ⅱ1h 温箱56—58℃4) 石蜡Ⅲ1h 温箱56—58℃温度保持在56—58℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。

五．包埋首先在金属框架上涂抹凡士林，以保证石蜡到入后不会外溢。

将包埋用石蜡及浸蜡组织块放在有石棉网的电炉上保温。

在框架中先倒入少许包埋用石蜡，再用镊子将组织块迅速移入框架，再倒入石蜡，待完全凝固后取出待用。

六．切片和烘片（烘片温度38℃）七．附贴（45℃）；烤片（一）附贴（45℃）附贴液的配制：新鲜蛋白20ml,麝香草酚少许，用玻璃棒混匀，再加入甘油20ml,继续混匀。

若有多聚懒氨酸处理的切片则直接用之。

（二）烤片：温箱内的温度应保持在40-45℃之间，烤片时间至少1小时。

八．H．E染色（一）脱蜡1 二甲苯Ⅰ（脱蜡） 10min2 二甲苯Ⅱ（脱蜡） 10min3 100%酒精Ⅰ（脱二甲苯） 10min4 100%酒精Ⅱ（脱二甲苯） 10min5 95%酒精Ⅰ（脱二甲苯） 5 min6 95%酒精Ⅱ（脱二甲苯） 5 min7 80%酒精（脱二甲苯） 5 min8 自来水或蒸馏水洗（去酒精）5 min （二）染色1 苏木素染液 6 min2 冲洗清水（兰化）15 min3 酸水分化视情况而定 10-20S4 冲洗淡蓝色即可 20 min5 伊红染液视情况而定6 min （三）脱水，透明13 80%酒精颜色淡化14 95%酒精Ⅰ 5min15 95%酒精Ⅱ 5 min16 100%酒精Ⅰ 5min17 100%酒精Ⅱ 10min18 二甲苯Ⅰ（透明） 5min19 二甲苯Ⅱ（透明） 10 min 九．封片：用中性树胶将切片标本封固。

石蜡切片操作步骤

操作步骤（本次实验要求，做到包埋）1、取材2、固定3、脱水：30%--50%---70%（每步60分钟）---85%---95%--100%--- 100%（每步30分钟）。

4、透明：转入1/2二甲苯＋1/2无水酒精混合液20ml透明1h，纯二甲苯20 ml透明1h，再用纯二甲苯20ml透明40min，并回收各液。

5、浸蜡：（1）将材料分别放入25%、50%、75%的石蜡-二甲苯溶液中，每级30分钟。

该过程在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行；（2）将材料放入溶解的纯蜡中，时间为30分钟，该过程再重复两次。

在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行。

6、包埋（1）将溶解好的石蜡在加入预先折好的纸船中，石蜡溶解后应过滤后使用，以免含杂质影响切片；（2）材料放入纸船，并摆好在蜡中的位置，如果包埋的组织块较多，应进行编号；（3）将纸船放置在冷水上加速冷却过程。

7、切片（1）修整：用刀片修成方形或长方形蜡块；（2）以少许热蜡液，将蜡块底部粘附于小木块上，以少许石蜡融化在蜡块边缘，加强粘附的强度；（3）木块粘附于切片机上，调整切片机，使蜡块切面与切片刀刃平行；（4）切成连续的蜡带，切片刀的锐利度、蜡块的硬度都会影响切片质量，可用热水或冷水适当改变石蜡的硬度，也可在冰箱中放置一段时间；（5）分割蜡带，分开的蜡片放在45℃温水上，使蜡片展开。

8、粘片与烤片（1）可用粘片剂防止蜡片滑脱，但粘附剂通常容易被染色而使切片背景有颜色，影响观察，实验表明，载玻片洗的足够干净，一般不会滑片；（2）用载玻片捞取展开后的蜡片，调整蜡片的位置使位于载玻片中央，自然干燥。

9、脱蜡与醇化（1）将切片放入纯二甲苯溶液中10分钟，使石蜡完全溶解，共2次；（2）溶去石蜡的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中，每级10分钟；（3）再将切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中进行醇化，每级10分钟。

10、染色（1）将切片放入番红染液中30分钟，番红染色后，将切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；（2）洗脱后的切片放入固绿染液中染色1分钟；11、脱水、透明与封片（1）染色后的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；（2）洗脱后的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明，每级10分钟，出现浑浊表示脱水不彻底，需重来；（3）滴1-2滴中性树胶，将洁净的盖玻片倾斜放下，封片，镜检，选择好的贴上标签，永久性切片制作完成。

石蜡切片流程

石蜡切片流程一、引言石蜡切片是生物学、医学和材料科学等领域中常用的一种实验技术，用于制备样品的薄片，以便进行显微观察和分析。

本文将介绍石蜡切片的流程及其关键步骤。

二、材料准备1. 石蜡：选择适合的石蜡材料，常见的有硬质石蜡和软质石蜡。

2. 样品：根据需要选择合适的样品，可以是生物组织、细胞、材料等。

3. 切片刀：选择切割尖锐且锋利的切片刀，常见的有玻璃刀片和钢刀片。

4. 切片机：使用专业的切片机设备，保证切片的精准度。

三、石蜡切片流程1. 固定样品：将样品进行固定处理，常用的方法有福尔马林固定、乙醛固定、冷冻固定等。

固定的目的是保持样品的形态结构和生物活性。

2. 除去水分：将固定后的样品通过醇溶液逐渐去除水分，一般采用浓度逐渐降低的醇溶液，如75%乙醇、50%乙醇、30%乙醇等。

3. 渗透石蜡：将去水后的样品用石蜡进行渗透处理。

首先将样品置于较低融点的石蜡中，然后逐渐转移到较高融点的石蜡中，这样可以保证样品逐渐与石蜡融合。

4. 包埋：将渗透后的样品放入石蜡模具中，待石蜡凝固后，取出石蜡块。

5. 切片：使用切片机将石蜡块切割成薄片，切片的厚度根据需要进行调整，一般为4-10微米。

6. 切片处理：将切好的薄片浸泡在温水中，使其展平，并将薄片转移到载玻片上。

7. 固定薄片：将载玻片放入烘箱中，以适当的温度和时间使薄片与载玻片充分固定。

四、注意事项1. 操作环境：保持实验室的清洁和安静，避免灰尘和噪音对实验结果的影响。

2. 刀片处理：在使用切片刀前，先将其清洗干净并消毒，以防止样品污染。

3. 温度控制：石蜡切片的各个步骤中，温度的控制非常重要，可以根据不同的样品选择适当的温度。

4. 切片厚度：不同的样品需要不同的切片厚度，要根据实验需要进行调整。

5. 质量控制：在每个步骤结束后，要对样品的质量进行严格检查，确保切片的质量。

6. 保存条件：切好的石蜡切片应妥善保存，防止受潮或受到外界环境的污染。

五、总结石蜡切片是一种常用的实验技术，通过固定、去水、渗透石蜡、切片等步骤，可以制备出精细的样品薄片，用于显微观察和分析。

石蜡切片具体过程及操作步骤精心整理

石蜡切片具体过程及操作步骤固定：组织块大小：1.5×1.5×0.2 CM固定液>4倍组织体积福尔马林固定市售为40%甲醛水溶液，应放入小量碳酸钠放置一段时间福尔马林固定液：40%甲醛溶液1份，水9份固定数小时后用水洗24小时优点：克服了乙醇固定的缺点脱水（组织块）70%乙醇片刻80%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时95%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时100%乙醇2-4小时注：为保证100%乙醇无水，可在容器中放入无水硫酸铜吸收水分，变蓝后更换。

最好能将100%乙醇中取出来的组织浸入香柏油后再经二甲苯后浸石蜡。

透明（组织块）100%乙醇：二甲苯（1：1）15分钟二甲苯15分钟二甲苯15分钟注意：时间太长变脆浸蜡（组织块）石蜡熔点52—56℃温箱：56℃二甲苯：石蜡（1：1）1-2小时石蜡1-2小时石蜡1-2小时包埋将熔化了的石蜡倾入包埋框内，随即迅速将组织块用加温了的镊子送置于框内，平置底面。

注意组织切面，放入冷水，冷固后将蜡块修齐，固定于木块上。

石蜡切片切片机：调整好。

刀：磨刀时一个方向，液体石蜡。

切下的片子，右手用弯镊子轻轻钳牢石蜡切片，左手用干燥毛笔将切片取下，放入盛温水（约30℃）的玻璃皿内，将切片摊于温水面上，光亮的切面向下，用弯镊子细心张开皱纹。

然后将水温加到40℃，使切片更平均地展开于水面上，再用弯镊子细心分开各蜡片，将涂过少许蛋白甘油的载玻片沉至切片下面，然后将切片从水面取出。

最后将切片置于56℃保温箱内烘干，需时2小时。

刀的倾角：20—30°冬天石蜡52-54℃，夏天56-58℃HE染色法石蜡切片Ⅰ二甲苯2-5分钟（冬季56℃温箱）Ⅱ二甲苯2-5分钟（冬季56℃温箱）100%乙醇1min95%乙醇1min80%乙醇1min70%乙醇1min先用自来水而后用蒸馏水洗0.5minHarris氏苏木紫液5min。

苏木紫为盐基性染料可染细胞核。

石蜡切片的制作过程

在六月期间我们学习了石蜡切片的制作，以下是制作的过程：一、切片前的准备：1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。

2、蜡块整修，将蜡块组织面的石蜡用刀修去，使组织全部暴露出切面并修平，以减少切片刀的磨损。

将组织块左右两侧的石蜡在不损伤组织及影响诊断的原则上，全部切除；否则切片容易皱褶。

组织块上下边缘的石蜡视组织情况修齐修平；石蜡不须留得过多，应尽量少留，以保持组织间距的最小限度。

这样切下的切片既呈带状，也不弯曲。

片距小，在贴片时就可相应多贴片，有利于检查诊断。

修切蜡块时只能一点一点地切掉蜡边，要是大片修切易使蜡块断裂露出组织；遇此情况应返入新蜡再次包埋。

3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象，应将载玻片浸入酸缸内12小时后流水冲洗，再烤干备用。

根据切片需要张数，每片涂上一层极薄的蛋白甘油，插于载片板（或载片架）上备用。

蛋白甘油的配制：取新鲜鸡蛋1份加甘油1份再加适量麝香草酚搅匀。

此法主要是防止脱片，实际上一张很清洁的载玻片不涂蛋白甘油也不会脱片。

4、将锋利的刀片装入切片刀夹钳内，调整角度和位置后随即紧固，检查切片刀的倾斜度是否正确，倾角过大、则切片上卷；倾角过小则切片皱起，以20°-30°为佳。

5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。

二、切片的步骤：1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。

2、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。

3、根据需要调整切片厚度。

4、摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。

5、实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。

6、切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。

三、贴片：1、将单张或数张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中，（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。

医院快速石蜡切片操作规程

快速石蜡切片操作规程
快速石蜡切片操作步骤：
1、接到标本后快速取材固定；
2、快速脱水、透明、浸蜡、包埋；
3、迅速切片、染色；
4、封片时不得有气泡，不得有树胶外溢；
5、标签必须贴于玻片左侧，编号字迹必须清楚；
6、制片后剩余组织应做常规石蜡包埋切片染色，进一步诊断。

快速石蜡切片相关要求：
1、制片工作一般应在10—20分钟内完成，诊断报告应在30分钟内出具。

2、为了尽量缩短制片时间，必须预先做好有关准备工作。

3、用于组织固定、脱水、透明的试剂和浸蜡用的石蜡应及时过滤、更换。

*注：丙酮、乙醇、二甲苯等为易燃物，进行上述各项流程时，2米距离内不得存在明火；加温脱水和浸蜡过程必须应用隔水温箱，不得使用干烤箱操作。

石蜡切片和HE染色详细步骤

石蜡切片和HE染色详细步骤
一、石蜡切片制备
1、收集样品：根据样品的性质和形状，选择适当的采样工具和采样
容器，将样品采集到容品中并制冷处理，以防止样品发生腐败。

2、石蜡制备：在制作石蜡切片之前应先量出所需的石蜡，并将其放
入容器中，然后加入酒精等助剂加热溶解，当石蜡完全溶解熔融后，用桶
或温度控制的水浴加热，随着温度的升高，搅拌均匀，使石蜡液完全熔化，熔化后即可用于制作石蜡切片。

3、制备切片：将样品置于熔融石蜡中，用切片机将样品切成指定的
厚度，以便用于染色；将薄片分类清洗，用干净的棉棒涂上几滴石蜡，使
其连接牢固，然后放在凉爽的干燥地方。

二、HE染色
1、润湿：将样品片放入石蜡解决液，轻轻摩擦，使其充分润湿。

2、酒精消切：将石蜡解决液滴入被润湿的样品片，轻轻摇晃，完成
样品的酒精消切。

3、甲醛处理：将样品片放入含醛的苯乙酮溶液中，经摇晃后再放入95%乙醇中搅拌，使样品片可以完全吸收醛，促使样品受醛处理，使样品
片充分脱脂，加快染色效果和特殊部位的显示。

4、HE染色：将脱脂的样品片放入无菌玻璃容器内。

石蜡切片的操作方法

石蜡切片的操作方法石蜡切片是一种常用的组织切片制备方法，用于细胞学和组织学的研究。

下面是石蜡切片的操作方法：1. 收集样本：选择要制备切片的组织样本或细胞样本。

样本可以是动物组织、植物组织或细胞培养物。

2. 选择合适的浸渍剂：石蜡切片需要将样本浸渍在石蜡之中，以固定和保护样本。

常用的浸渍剂包括甲醇、乙醇和二甲苯。

3. 固定样本：将样本固定在固定剂（如甲醛）中，以保持其形态结构。

固定时间根据样本的类型和大小而定，一般在4C下静置数小时或过夜。

4. 脱水：在一系列浓度逐渐增加的乙醇溶液中，将固定的样本从水中脱水，使其逐渐转移到纯度较高的乙醇中。

5. 渗透：将脱水的样本浸渍在二甲苯或其他有机溶剂中，使其渗透并置换乙醇。

浸渍时间根据样本的大小和组织特性而定，一般在一到数小时之间。

6. 包埋：将渗透后的样本置于石蜡中，使其完全浸润。

石蜡块可以预先加热至液态，然后将样本放入其中，或者将样本以及适量的石蜡放入模具中，然后通过加热使其固化。

7. 切片：将制备好的石蜡块放入石蜡切片机中，使用旋转切片刀将其切成薄片。

切片厚度一般为4-10微米。

8. 取片：用切片刀或镊子将切好的石蜡切片取出，并放置在清洁的显微镜载玻片或切片架上。

9. 脱脂：将石蜡切片置于加热的二甲苯或其他脱蜡剂中，使其脱去石蜡。

10. 染色：根据需要，可对石蜡切片进行染色，例如常用的血液和组织标本染色方法如伊红染色(H&E染色)。

11. 干燥：将染色的切片在室温下晾干或在加热台上加热至干燥。

最后，将切片用显微镜载玻片覆盖，并封口保存。

以上就是石蜡切片的一般操作方法，每个实验室可能会根据具体需求进行微调。

在操作过程中要注意安全，避免接触有毒溶剂和使用锋利的刀片时的切割操作。