高效液相色谱仪验证方案

目录

2．围

3．责任

4．验证

4．1．公用系统检查

4．2运行确认

4．2．1目的

4．2．2式

4．2．3容

4．2．3．1设备使用原理

4．2．3．2确认标准操作规程的可行性4．2．3．3确认设备正常运行的项目

4．3性能确认

4．3．1输液系统

4．3．1．1泵流量设定值误差与流量稳定性误差4．3．1．2定性、定量测量重复性误差4．3．1．3系统适用性试验

4．3．2紫外检测器性能

4．3．2．1基线漂移与基线噪声

5．拟订验证期

6．验证结果评价与结论

1 目的：

为确认Alliance2695型高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证案，对高效液相色谱仪进行验证。验证过程应格按照本案规定的容进行，若因特殊原因确需变更

时，应填写验证案变更申请及批准书，报验证委员会批准。

2 围：

适用于美国Waters 公司Alliance2695型高效液相色谱仪系统的再验证。

3 责任：

3．1验证委员会

3．1．1负责验证案的批准。

3．1．2负责验证的协调工作，以保证本验证案规定项目的顺利实施。

3．1．3负责验证数据及结果的审核。

3．1．4负责验证报告的审批。

3．1．5负责发放验证证书。

3．1．6负责验证期的确认。

3．2设备部。

3．2．1负责建立设备档案。

3．2．2负责仪器、仪表的校正。

3．3质量保证部

3．3．1负责制定验证案。

3．3．2负责验证的实施。

3．3．3负责拟定验证期。

3．3．4负责收集各项验证、试验记录，起草验证报告，报验证委员会。

4 验证：

4．1 公用系统检查

复核人：日期：

4．2运行确认

4．2．1目的

试验并证明设备的各部分及整体，能在预期的及设计围准确的运行，并能完全达到规定的技术指标和使用要求。

4．2．2式

通过对输液系统、紫外检测器性能的检测，确认本机器运行正常。

4．2．3容

4．2．3．1设备概述

4．2．3．1．1本仪器为Waters公司Alliance2695型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，2996检测器和自动进样器、Millennium32色谱管理工作站及打印机组成。

4．2．3．1．2高压液相色谱法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入分析色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果,然后分别进行收集。

4．2．3．2确认高效液相色谱系统标准操作规程的可行性测试过程:

A．前提：安装确认结果使得设备安装稳固，电源连接完好，仪器自检完毕。

B．仪器操作运行：仪器运行，整个操作过程完全按《10-G-08002 Alliance2695型高效液相色谱仪标准操作规程》进行。

C．在整个系统运转的同时，运行确认以下项目，以证明设备符合要求。

4．2．3．3高效液相色谱仪运行确认

4．3 性能确认 4．3．1输液系统

4．3．1．1泵流量设定值误差与流量稳定性误差

4．3．1．1．1要求：泵流量设定值误差S S ＜±2%；流量稳定性误差S R ＜±2%。 4．3．1．1．2检定法：将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机，以甲醇为流动相，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗干燥称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10～25分钟，称重，按下式计算S S 和S R 。

S S ＝

%100⨯-s

s

m F F F S R ＝

%100min

max ⨯-F

F F 式中：S S 为流量设定值误差（%）； F m ＝

t

t W W ⨯-ρ1

2为流量实测值（ml/min ）； W 2为容量瓶＋流动相的重量（g ）； W 1为容量瓶的重量（g ）； F S 为流量设定值（ml/min ）；

Ρt为实验温度下流动相的密度（g/cm3）；

t为收集流动相的时间（min）

S R为流量稳定性误差（%）

Fmax为同一组测量中流量最大值（ml/min）；

Fmin为同一组测量中流量最小值（ml/min）

F为同一组测量值的算术平均值（ml/min）

表1 S S、S R的检定

4．3．1．2定性、定量测量重复性误差

4．3．1．2．1检定法：将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机，使之处于正常工作状态，注入注射用胸腺五肽样品溶液20μl，记录保留时间和峰面积，连续测量5次，计算相对标准偏差RSD。

4．3．1．2．2可接受标准：RSD≤1.5%。

按下式计算相对标准偏差RSD。

RSD＝

()

%

100

1

1

1

1

2

⨯

⨯

-

-

∑

=

X

n

X

Xi

i

式中：RSD为定性、定量测量重复性的相对标准偏差

Xi为第i次测得的保留时间或峰面积

X为n次测量结果的算术平均值

i为测量序号

n为测量次数

4．3．1．3系统适用性试验

选定注射用胸腺五肽含量测定的色谱条件作为系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）-甲醇（90：10）为流动相；检测波长为275nm。精密量取20μl，注入液相色谱仪，连续测定3次，依据图谱，记录理论板数。

4．3．1．3．1可接受标准：记录色谱图理论板数按胸腺五肽峰计算应不低于2000。

4．3．2紫外检测器性能

4．3．2．1基线漂移与基线噪声

4．3．2．1．1要求：基线漂移≤5×10-3（AU/h）；基线噪声≤5×10-4（AU）。

4．3．1．1．2检定法：将仪器各部分联接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min,吸收度围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线20-30分钟，计算基线漂移和噪声。

5．拟订再验证期

设备验证期拟订为：一年一次。

6．验证结果评价与结论

由设备动力部负责收集各项验证试验结果记录，根据验证试验结果起草验证报告，报验