鉴定试剂
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挥发油鉴定试剂
1、茴香醛-硫酸试剂
硫酸1m1加至50ml冰醋酸中,冷却后加入茴香醛0.5ml(必须临用时配制)。喷洒后,105℃加热,挥发油中各成分显不同颜色。
2、碘化钾-冰醋酸-淀粉试剂
检查过氧化物。
溶液I:4%碘化钾溶液10ml与冰醋酸40ml混和,再加锌粉一小勺过滤。溶液Ⅱ:新制的1%淀粉溶液。先喷溶液I,5min后大量喷溶液Ⅱ,直至薄层透明为止。显蓝色斑点为过氧化物。
3、2,4-二硝基苯肼试剂
lg 2,4-二硝基苯肼、36%盐酸l0ml溶于1000ml乙醇中。喷洒后,显黄红色斑点为阳性反应。
4、硝酸铈试剂
检查醇类化合物。
硝酸铈6g溶于2.5%100 ml硝酸溶液中,喷洒后,黄色背景上显棕色斑点为阳性反应。
5、钒酸铵(钠)-8-羟基喹啉试剂
检查醇类化合物
1%钒酸铵(钠)溶液1ml和8-羟基喹啉的6%乙醇溶液1ml混和,用30ml苯萃取,分取灰蓝色的苯溶液为试剂。
喷洒后,微加热,灰蓝色背景上显淡红色斑点为阳性反应。挥发油组成复杂,需依据结构特征如醇、醛、酮、酚、醚、酯、内酯等选择鉴定试剂。
四、生物碱鉴定试剂
1、改良碘化铋钾试剂
为生物碱通用显色剂。
溶液I:0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸,加水40ml。溶液Ⅱ:8g碘化钾溶于20ml水中。溶液I和溶液Ⅱ等量混和,于棕色瓶中可以保存较长时间。目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配置:7.3g碘化铋钾、10ml冰醋酸加水60ml。取lml样品的稀酸溶液,加1滴~2滴试剂,产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。作为薄层色谱显色剂,取混和液1ml、醋酸2ml、水10ml混和即得。喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应。
2、碘化汞钾
为生物碱通用沉淀试剂。
1.36g氯化汞和5g碘化钾各溶于20 ml水中,将氯化汞溶液慢慢加入碘化钾溶液,混合后,加水至100ml。取lml样品的稀酸溶液,加1~2滴试剂,产生类白色沉淀为阳性反应。
3、硅钨酸试剂
为生物碱通用沉淀试剂。
1g硅钨酸溶于20 ml水中,加10%盐酸使成pH2左右。取
1 ml样品的稀酸溶液,加入1~2滴试剂,产生白色至褐色沉淀为阳性反应。
4、碘化铂钾(碘铂酸)试剂
为生物碱通用沉淀试剂。
10%六氯铂酸3ml和97ml水混合,加6%碘化钾溶液100ml,混合均匀(临用前配制)。取1 ml样品稀酸溶液,加l~2滴试剂,不同生物碱显不同颜色沉淀。
5、碘—碘化钾试剂
为生物碱沉淀剂。
1g碘及10g碘化钾溶于50ml水中,加2ml醋酸,再用水稀释至100ml。取1 ml样品稀酸溶液,加入试剂1~2滴,产生棕色或褐色沉淀为正反应。
6、苦味酸试剂
为生物碱通用沉淀试剂。
苦味酸1g溶于100ml水中。取1 ml样品中性溶液,加入试剂1~2滴,产生黄色晶形沉淀。
7、鞣酸试剂
为生物碱通用沉淀试剂。
鞣酸1g用1ml乙醇溶解后,加水至10 ml 。取lml样品稀酸溶液,加入试剂1~2滴产生白色至棕黄色沉淀。
8、硫酸铈—硫酸试剂
检查生物碱及含碘化合物。
0.1g硫酸铈悬浮于4ml水中,加三氯醋酸1g,加热至沸,放冷,逐滴加入硫酸直到浑浊消失为止。喷洒试剂后,110℃加热数分钟,呈色(不同生物碱显不同的颜色)。
9、钒酸钠—硫酸试剂
检查生物碱。
1g钒酸钠溶于100ml硫酸中。喷洒试剂后,不同生物碱产生不同颜色,如莨菪碱显红色,马钱子碱显血红色,士的宁显蓝紫色,奎宁显淡橙色,吗啡显棕色等。
10、雷氏铵盐试剂
检查水溶性生物碱。
2%硫氰化铬铵溶液(临用时配制)。取1ml样品的弱酸性水溶液(pH5~6),加入1~2滴试剂,产生暗红色沉淀为阳性反应。
11、Ehrlich试剂
检查吡咯、吲哚类生物碱。
1g对二甲氨基苯甲醛溶于25ml 36%盐酸和75ml甲醇混合溶液中。取1ml样品的稀酸溶液,加人数滴试剂,加热,显紫红或青紫色为阳性反应。
五、鞣质类鉴定试剂
1、氯化钠—明胶试剂
检查鞣质。
1g明胶溶于50ml水中(60℃水浴中加热),加入10g氯化
钠,使完全溶解后,用水稀释到100ml。取1m1样品的60℃水浸液,加入1~2滴试剂,产生白色浑浊或沉淀
2、对甲苯磺酸试剂。
检查鞣质、甾体、黄酮类。
20%对甲苯磺酸氯仿溶液。薄层色谱上喷洒试剂后,100℃加热5min显出不同颜色的斑点。
3、新鲜石灰水试剂
检查鞣质。
取1ml样品的热水提取溶液,加新鲜石灰水上清溶液数滴,产生青灰色沉淀为可水解鞣质,产生棕或棕红色沉淀为缩合鞣质。
六、氨基酸、多肽、蛋白质鉴定试剂
1、茚三酮试剂
检查2-氨基酸及含有2-氨基酸的肽类、氨基糖和蛋白质。
0.2g茚三酮溶于l00ml正丁醇中,加冰醋酸3ml。或者,0.2g 茚三酮溶于l00ml乙醇或丙酮中。取1ml样品的冷水浸液,加入2~3滴试剂,沸水浴上加热5min放冷,显蓝色或蓝紫色。
2、吲哚醌试剂
检查氨基酸、多肽。
吲哚醌1g溶于100ml丙酮中,加入10ml醋酸。作薄层色谱显色剂,喷洒试剂后,100~110℃加热l0min,显蓝、红、
桃红或棕色斑点。
3、1,2-萘醌-4-磺酸钠试剂
检查氨基酸。
0.02g l,2-萘醌-4-磺酸钠溶于l00ml5%碳酸钠溶液中,新鲜配制。喷洒试剂后,室温晾干,不同氨基酸出现不同的颜色。
4、双缩脲试剂
检查多肽、蛋白质。
七、有机酸鉴定试剂
1、溴酚蓝试剂
检查有机酸。
0.1%溴酚蓝的乙醇溶液。作薄层色谱显色剂,喷洒后,蓝色背景上呈黄色斑点。如不明显,可再喷氨水,然后暴露在盐酸气体中,则为黄色背景上呈蓝色斑点。
2、芳香胺—还原糖试剂
检查有机酸。
5g苯胺和5g木糖溶于100ml 50%乙醇中。作薄层色谱显色剂,喷洒试剂后,
125~130℃加热至出现棕色斑点。
3、吖啶试剂
检查有机酸。
0.005%的吖啶乙醇溶液。喷洒试剂后,于紫外光灯下观察,