ACL7000全自动凝血分析仪SOP

ACL7000全自动凝血分析仪 标 准 操 作 程 序 部分凝血活酶时间（APTT）测定（散射比浊法）
1.原理及检验目的
原理：将试剂加入抗凝血浆中，试剂中的微粒硅胶是血小板因子3的表面活性剂，与牛脑磷脂一同作用于内源凝血系统，当加入CaCl
2后，开始凝集，产生纤维蛋白血凝块，通过660nm光照射血浆，测定其凝固过程中90o散射光变化，确定血液凝固时间，来测定APTT。

目的：由于凝血机制障碍、肝脏疾病、Vit K缺乏或某些药物所致凝血因子II,V,VIII,IX,XI,XII缺乏和肝素抗凝治疗时，可用APTT 检测。

2.标本要求
2.1使用血浆，9份静脉血加1份
3.8g/dL(129mmol/L)枸掾酸钠抗凝。

2.2全血贮存在4~10o C不超过2小时，最好在1小时内分离血浆，采用2000~2500rmp，离心30min分离，以去除全血中的血小板第三因子（PF3）, 血小板第三因子（PF4）等。

此血浆在室温22~24o C下可存放2小时，在2~4o C可存放4小时，在-20o C可存放2周，在-70o C 可存放6个月。

冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37o C水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗。

冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。

2.3根据NCCLS规定，溶血标本易激活凝血因子，所以不应该测定。

3.试剂
3.1每个试剂均购自美国贝克曼库尔特公司。

1）APTT测定试剂盒（代号P/N:如8468710，参见实际选用的APTT 试剂盒）
冻干脑磷脂 5瓶
CaCl
5瓶(25mmol/L)
2
2）定标血浆 Calibration Plasma（代号P/N:8467300）
3）正常质控血浆 Normal control plasma（代号P/N:8467011） 4）低水平质控血浆 Abnormal control plasma level I/Low（代号P/N:8467500）
5）高水平质控血浆 Abnormal control plasma level II/High （代号P/N:8467700）
6）因子稀释液（代号P/N:9757600）
3.2试剂准备
用9mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干脑磷脂，盖
上盖子，轻摇至完全溶解，置15-25o C30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

3.3试剂保存
未开封的试剂可保存在2-8 o C至试剂盒上标明的有效期。

脑磷脂：试剂溶解后，于原瓶中2-8 o C，7天内有效；在ACL7000上（15o C），8小时有效。

CaCl
：于原瓶中2-8 o C，30天内有效。

2
建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2-8 o C，不要将试剂冷冻。

4.仪器和校准
4.1使用美国贝克曼库尔特公司的ACL7000全自动血凝仪
4.2操作步骤
第１步．在主菜单下选择Analysis (分析)
第２步．选择Single test session (实验模式)
选择APTT实验
第３步．选择Ｅnter/Edit Sample ID 键（编辑样本号）位置 １ 编辑 样本号 按对钩保存
第４步．选择Store Loadlist 键 (保存目录) 出现对话框在框内填写 第几批量 按对钩保存
第５步．检查R2放APTT试剂R8放CACL
第６步．按Start键开始分析
关于比率计算方式，更多的细节请参阅ACL7000操作手册第四章（比率调节）。

如果样本凝集少于空白时间，或FIB值低于60mg/dl，则显示“COAG ERROR”（凝集错误），不显示结果。

如果样本在限定的最长时间内没有凝集，则显示“NOT COAG”（没凝集），不显示结果。

（见ACL7000操作手册第四章SPECIAL PROGRAMS-ACQUISITION TIME，特殊程序中的数据收集时间）。

如果分析盘上带的定标血浆（N.P.）的值在规定的范围内，则病人结果以秒数和比率表示。

如果分析盘上带的定标血浆（N.P.）的值超过参比血浆的值的±15%
（秒数），则N.P.的值显示并以背光显示，病人样本的APTT值仅以秒数表示。

屏幕上“RESULT”后出现“？”。

如果分析盘上未放N.P.，则结果只出现秒数。

操作 按“←”，回主菜单
在“结果”画面上，按“STOP”键，在5秒之内按ENTER，仪器就不会把N.P.值存入S.P.（即使N.P.值在规定的范围内）。

如果N.P.值超限，则以背光显示
5.质量控制
完整的质量控制，应用正常、高值、低值3个水平的质控物进行质量控制，每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。

至少每8小时做一次质控分析。

用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。

请参考ACL7000全自动血凝仪操作手册。

6.计算
系统自动计算结果。

7.参考值
APTT 秒：25~37
R值：0.8~1.2
建议每个实验室应根据NCCLS(C
28
-A)推荐的方法（均值±2SD）建立自己的参考值范围。

8.实验性能
8.1精密度（批内）
Normal Abn
low/levI Abn
high/levII
Mean 32.7 55.9 78.5
CV% 0.89 0.78 1.20
8.2相关性
斜率 截距 r 参考方法
APTT 0.902 6.386 0.946 Sllica based APTT
on ACL
8.3影响因素
8.4.1多种药物可影响APTT结果，如出现异常结果，需做进一步实
验以确定导致异常的原因。

8.4.2血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。

游离血红蛋白 胆红素 甘油三脂
APTT 100mg/dl 15mg/dl 700mg/dl
8.4.3溶血标本不能测定。

9.参考文献
ACL7000 Operation Manual, Application Manual &Reagent Kit insert sheet of Becman Coulter Inc.
抗凝血酶（AT）测定（发色底物法）
1.原理与检测目的
原理：在待测血浆中加入过量的凝血酶，凝血酶与血浆中的AT形成1:1的复合物，剩余的凝血酶作用于显色肽S2765，裂解出显色基团对硝基苯胺(pNA)，用405nm测吸光度，显色程度与剩余凝血酶的量成正相关，而与血浆AT的量呈负相关。

检测目的：可用于排除或诊断有血栓形成倾向的患者是否患有AT遗传性缺乏、术前筛查、口服避孕药下医嘱之前的筛查、DIC、肾病综合症、肝脏疾病、和用肝素或抗凝血酶浓缩液治疗的监测。

2.标本要求
2.1使用血浆，9份静脉血加1份
3.8g/dL(129mmol/L)枸掾酸钠抗凝。

2.2全血贮存在4~10o C不超过2小时，最好在1小时内分离血浆，采用2000~2500rmp，离心30min分离，以去除全血中的血小板第三因
子（PF3）, 血小板第三因子（PF4）等。

此血浆在室温22~24o C下可存放2小时，在2~4o C可存放4小时，在-20o C可存放2周，在-70o C 可存放6个月。

冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37o C水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗。

冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。

3.试剂
3.1每个试剂均购自美国贝克曼库尔特公司。

1）AT测定试剂盒（代号P/N:20008900）
冻干发色底物S2765 2瓶（6mg/瓶）
冻干活化X因子试剂（包括牛活化X因子、肝素、缓冲液、牛血
清白蛋白）2瓶
2）定标血浆 Calibration Plasma（代号P/N:8467300）
3）正常质控血浆 Normal control plasma（代号P/N:8467011） 4）异常水平发色底物法质控血浆 Abnormal chromogenic control plasma level I/II（代号P/N:8467600）
5）Cleaning agent（代号P/N:9832700）
6）Cleaning solution（代号P/N:9831700）
3.2试剂准备
发色底物：用2mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干发色底物，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15-25o C30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

活化X因子试剂：用2.5mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干活化X因子试剂，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15-25o C30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

3.3试剂保存
未开封的试剂可保存在2-8 o C至试剂盒上标明的有效期。

试剂溶解后，于原瓶中15 o C ，7天内有效；2-8 o C，3月内有效；-20 o C，6月内有效。

建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2-8 o C，不要将试剂冷冻。

4.仪器和校准
4.1使用美国贝克曼库尔特公司的ACL7000全自动血凝仪
4.2操作步骤
从主屏幕上可以选择TESTS试验（单个试验的批量测试）或PROFILE组合试验。

然后可以根据屏幕提示进行操作，也可以根据这里的操作步骤说明进行实验。

注：这里只介绍选择TESTS试验的操作步骤，如要通过PROFILE组合试验进行测试，请参见ACL7000操作手册。

操作 按“↑、↓、←、→”键移动光标APTT，然后按“ENTER”键“Check”画面出现
状态 提示放置可使用的比色盘
操作 检查是否放置了可使用的比色盘
状态 提示检查脑磷脂试剂水平
操作 标有APTT的大试剂杯，将脑磷脂试剂倒入放入2号位置
状态 提示检查CaCL2水平
操作 标有CaCL2的大试剂杯，将CaCL2试剂倒入放入3号位置
状态 提示检查参比液水平
操作 确保有足够的参比液，否则更换新瓶。

（每1.5-2cm高度参比液可做1到2个比色盘,包括死体积）
放上样本架, N.P.放在“POOL”的位置上，可放18个样本，然后按“↓”开始分析
取样
取样臂吸取N.P.和脑磷脂放入比色盘。

然后活化最后加CaCL2孵育，比色（收集数据）
状态 收集数据结束后，“results”（结果）画面出现
APTT结果以秒数和比率表示（如果样本架上放置了N.P.而且N.P.值没有背光显示）
关于比率计算方式，更多的细节请参阅ACL7000操作手册第四章（比率调节）。

如果样本凝集少于空白时间，或FIB值低于60mg/dl，则显示“COAG ERROR”（凝集错误），不显示结果。

如果样本在限定的最长时间内没有凝集，则显示“NOT COAG”（没凝集），不显示结果。

（见ACL7000操作手册第四章SPECIAL PROGRAMS-ACQUISITION TIME，特殊程序中的数据收集时间）。

如果分析盘上带的定标血浆（N.P.）的值在规定的范围内，则病人结果以秒数和比率表示。

如果分析盘上带的定标血浆（N.P.）的值超过参比血浆的值的±15%（秒数），则N.P.的值显示并以背光显示，病人样本的APTT值仅以秒数表示。

屏幕上“RESULT”后出现“？”。

如果分析盘上未放N.P.，则结果只出现秒数。

操作 按“←”，回主菜单
在“结果”画面上，按“STOP”键，在5秒之内按ENTER，仪器就不会把N.P.值存入S.P.（即使N.P.值在规定的范围内）。

如果N.P.值超限，则以背光显示
5.质量控制
完整的质量控制，应用正常、高值、低值3个水平的质控物进行质量控制，每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。

至少每8小时做一次质控分析。

用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。

请参考ACL7000全自动血凝仪操作手册。

6.计算
系统自动计算结果。

7.参考值
75-122%
建议每个实验室应根据NCCLS(C
-A)推荐的方法（均值±2SD）建立自
28
己的参考值范围。

8.实验性能
8.1精密度（批内）
Mean 49.2 103.7
CV% 3.6 1.6
8.2相关性
斜率 截距 r 参考方法
ACL7000 0.96 -1.20 0.992 COAMATIC® Antithrombin,
Chromogenix AB
8.3影响因素
血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。

肝素（UF/LMW） α1抗胰岛素 α2巨球蛋白 肝素辅因子II
2U/mL 2mg/mL 7mg/mL 3IU/mL
血红蛋白 胆红素 甘油三脂
200mg/dl 20mg/dl 1000mg/dl
9.参考文献
ACL7000 Operation Manual, Application Manual &Reagent Kit insert sheet of Becman Coulter Inc.
D-二聚体测定（免疫比浊法）
1.原理及检验目的
血浆中的D-二聚体与包被在乳胶颗粒上的D-二聚体的单克隆抗体作用，乳胶颗粒开始凝集，凝集程度直接反映了血浆中的D-二聚体浓度，由405nm光源检测由于凝集造成的透射光变化（免疫比浊法）。

D-二聚体是由纤维蛋白的纤溶产物进一步形成的交联纤维蛋白降解产物。

D-二聚体的特异性抗原，在纤维蛋白原及其降解产物，以及可溶的纤维蛋白中都不存在，所以D-二聚体为纤维蛋白的特异性降解产物，并反映了纤溶进行的程度。

D-二聚体广泛应用于血栓疾病的诊断和溶栓治疗的监测。

其水平升高多见于深静脉血栓（DVT）、肺栓塞（PE）、弥散性血管内凝血（DIC），另外，妊娠时D-二聚体也有升高，但很高的D-二聚体水平则预示办由并发症，如先兆子痫。

2.标本要求
2.1使用血浆，9份静脉血加1份
3.8g/dL(129mmol/L)枸掾酸钠抗凝。

2.2全血贮存在4~10o C不超过2小时，最好在1小时内分离血浆，采用2000~2500rmp，离心30min分离，以去除全血中的血小板第三因子（PF3）, 血小板第三因子（PF4）等。

此血浆在室温22~24o C下可存放2小时，在2~4o C可存放4小时，在-20o C可存放2周，在-70o C可存放6个月。

冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37o C水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗。

冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。

2.3溶血标本不应该测定
3.试剂
3.1每个试剂均购自美国贝克曼库尔特公司。

1）D-二聚体测定试剂盒（代号P/N:20008500）
Latex reagent: 包裹有D-二聚体 单克隆抗体的冻干乳胶颗粒 3mL X4瓶
D-Dimer buffer:缓冲液（含牛血清蛋白和稳定剂）
9mL X3瓶
D-Dimer calibration plasma:冻干D-二聚体校准品
1mL X2瓶
2）D-二聚体质控（代号P/N:20008600）
3）因子稀释液（代号P/N:09757600）
3.2试剂准备
Latex reagent：用3mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶试剂，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15-25o C30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

D-Dimer buffer：用前颠倒混匀。

D-Dimer calibration plasma：用1mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶试剂，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15-25o C30分钟，用前摇匀，勿用力振摇，以避免形成泡沫。

3.3试剂保存
未开封的试剂可保存在2-8 o C至试剂盒上标明的有效期。

Latex reagent：试剂溶解后，于原瓶中2-8 o C，1个月有效；在ACL7000上（15o C），1天有效；勿冷冻。

D-Dimer buffer：于原瓶中2-8 o C，1个月有效；在ACL7000上（15o C），1天有效。

D-Dimer calibration plasma：试剂溶解后，15-25o C，1个月有效；于原瓶中，
-20o C，2个月有效。

冷冻的试剂化冻时需放在37o C，用前轻轻摇匀，忌反复冻融。

4.仪器和操作
4.1使用美国贝克曼库尔特公司的ACL7000全自动血凝仪
4.2操作和校准（定标）
4.2.1校准（定标）步骤
从主屏幕上，按“↑、↓、←、→”键移动光标，选择“ABS. TESTS”，在选择“D-Dimer”，按“ENTER”键
出现“check”画面
状态 提示放入可使用的比色盘
操作 检查是否放入了可使用的比色盘
状态 检查1号试剂位Latex reagent水平
操作 将Latex reagent倒入试剂杯，放入1号位置
状态 提示检查参比液的水平
操作 检查是否有足够的参比液，否则请更换新瓶。

（每1.5~2cm高度参比液可做到1到2个比色盘,包括死体积）
按“↑”，启动定标
状态 显示D-Dimer定标状况，如试剂批号
操作 可输入新的值，按“ENTER”键
状态 “PLACE”画面出现
操作 在这个画面操作者需要输入D-Dimer calibration plasma的值，ng/ml。

光标显示在这个值上（默认值：1000）。

按“ENTER”键
注：
这个值应该在950~1050 ng/ml 之间，否则输入的值不会被仪器接受，光标仍停留在这个值上。

根据操作者输入的这个值，仪器作出定标曲线和相关稀释度。

操作 按如下在样品盘上放置试剂和样品杯：
-将D-Dimer calibration plasma 放“POOL”位置；
-放空杯在17和18号位；
-放D-Dimer buffer在“DIL”位（用4mL杯）；
-放因子稀释液在16号位；
按“↓”开始定标分析
状态 数据收集结束后，屏幕显示定标曲线的三个点（1000-500-250，每个点重复4次），以ng/ml、光密度表示，并显示每个点的CV%，以及标准曲线的相关参数m, q, r2。

如CV%超出预设的以下范围，该值将以背光显示：
NP (100%) CV%=4
NP (50%) CV%=6
NP (25%) CV%=10
状态 如果不只一个点或第1点的数据超限，不出现“结果”画面，屏幕显示如下：
—“NOT CALBRATED： NO 1ST POINT”（未定标，无第一点） —“NOT CALBRATED： INSUFFICIENT DATA”（未定标，缺数据） —“NOT CALBRATED： SLOPE OUT OF RANGE”（未定标，斜率超限）
操作 按“PRT”键，可以打印定标数据
按“↑”，显示定标曲线
操作 按“PRT”打印定标曲线
按“←”接受或拒绝定标结果
按“ENTER”键，接受并储存。

按“↑”，不接受
4.2.2样品操作步骤
从主屏幕上，按“↑、↓、←、→”键移动光标，选择“ABS. TESTS”，在选择“D-Dimer”，按“ENTER”键
出现“check”画面
状态 提示放入可使用的比色盘
操作 检查是否放入了可使用的比色盘
状态 检查1号试剂位Latex reagent水平
操作 将Latex reagent倒入试剂杯，放入1号位置
状态 提示检查参比液的水平
操作 检查是否有足够的参比液，否则请更换新瓶。

（每1.5~2cm高度参比液可做到1到2个比色盘,包括死体积）
操作 放D-Dimer buffer在“DIL”位；
样品从样品盘1号位开始放置。

在check画面，按“↓”开始分析。

接下来，开始加样、孵育、收集数据，之后出现结果画面。

操作 按“PRT”打印结果
按“<=”回ABS、菜单
样品结果超出1050ng/ml，可以1：5稀释样品后（50ul血浆+200ul 因子稀释液）再测。

5.质量控制
应用高值、低值2个水平的质控物进行质量控制，每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。

请参考ACL7000全自动血凝仪操作手册。

6.计算
系统自动计算结果。

7.参考值
测定240例健康献血者的正常上限值为255ng/ml。

建议每个实验室建立自己的参考值。

8.实验性能
8.1线性范围 200-1050ng/ml，超出1050ng/ml，可以1：5稀释样品，<20000ng/ml无前带现象。

8.2精密度
批内
平均值（ng/ml） 310 732 1055
CV% 6.01 2.42 1.31
8.3相关性
斜率 截距 r 参考方法
ACL7000 1.26 240.4 0.998 D-Dimertest EIA(酶免法) 8.4影响因素
8.4.1血浆中下列物质低于指定浓度时对D-二聚体结果无影响。

血红蛋白 胆红素 甘油三脂 FDP 风湿因子
50mg/dl 5mg/dl 1000mg/dl 20ug/ml 60IU/ml
8.4.2溶血标本不能测定。

9.参考文献
ACL7000 Operation Manual, Application Manual &Reagent Kit insert sheet of Becman Coulter Inc.
纤维蛋白原-Clauss（FIB-C）测定（散射比浊法）
1.原理及检验目的
原理：将试剂加入稀释的抗凝血浆中，试剂中过量的牛凝血酶可直接作用血浆中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，此反应过程的速率即反映了纤维蛋白原的浓度和功能。

通过660nm光照射血浆，测定其凝固反应的散射浊度变化。

目的：在血液凝固过程中，几种先天性的纤维蛋白原异常可影响纤维蛋白原转化为纤维蛋白。

纤维蛋白原是评价诸如弥散性血管内凝血（DIC）、肝脏疾病、炎症及肿瘤的有效指标，纤维蛋白原水平升高反
映病人患心血管疾病的风险增加，还可见于妊娠及口服避孕药等。

而纤栓治疗时纤维蛋白原水平会降低。

2.标本要求
2.1使用血浆，9份静脉血加1份
3.8g/dL(129mmol/L)枸掾酸钠抗凝。

2.2全血贮存在4~10o C不超过2小时，最好在1小时内分离血浆，采用2000~2500rmp，离心30min分离，以去除全血中的血小板第三因子（PF3）, 血小板第三因子（PF4）等。

此血浆在室温22~24o C下可存放2小时，在2~4o C可存放4小时，在-20o C可存放2周，在-70o C可存放6个月。

冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37o C水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗。

冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。

2.3根据NCCLS规定，溶血标本易激活凝血因子，所以不应该测定。

3.试剂
3.1每个试剂均购自美国贝克曼库尔特公司。

1）FIB-C测定试剂盒（代号P/N:8469110）
冻干牛凝血酶（>35uNIH/ml） 8瓶
异常质控血浆2瓶
2）定标血浆 Calibration Plasma（代号P/N:8467300）
3）正常质控血浆 Normal control plasma（代号P/N:8467011） 4）低纤维蛋白原质控血浆 Low fibrinogen control（代号P/N:20004200）
5）因子稀释液（代号P/N:9757600）
6）清洗液A Cleaning solution（代号P/N:9831700）
7）清洗液B Cleaning agent（代号P/N:9832700）
3.2试剂准备
牛凝血酶：用2mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶牛凝血酶，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15-25o C 30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

异常质控血浆：用1mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶血浆，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15-25o C 30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

3.3试剂保存
未开封的试剂可保存在2-8 o C至试剂盒上标明的有效期。

试剂溶解后，
凝血酶：于原瓶中2-8o C，3天内有效；于原瓶中-20o C，1个月有效；ACL（15o C），3小时有效。

异常质控血浆：于原瓶中，15-25o C，4小时有效；-20o C，7天有效。

建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2-8 o C。

4.仪器和校准
4.1使用美国贝克曼库尔特公司的ACL7000全自动血凝仪
4.2操作步骤
可以根据屏幕提示进行操作，也可以根据这里的操作步骤说明进行实验。

4.2.1校准（定标）步骤
选择Ｃalibration程序
选择Calibrate菜单弹出Ｃalibration
选择右侧TEST FIB-C定标
A1放NP A2放因子稀释液
按START键分析
状态 数据收集结束后，屏幕显示定标曲线的三个点，以mg/dL（或g/L）和秒数表示，平均值+CV+曲线系数，例：
如果输入的N.P.值是300mg/dl，则定标曲线的值如下：
—450mg/dl（150% N.P.）
—300mg/dl（100% N.P.）
—150mg/dl（50% N.P.）
操作 按“↑”显示定标数据，按“←”接受或拒绝定标结果
状态 如果超过一个点的数据超限，不出现“结果”画面，屏幕显示如下：
—“NOT CALBRATED： NO 1ST POINT”（未定标，无第一点） —“NOT CALBRATED： INSUFFICIENT DATA”（未定标，缺数据） —“NOT CALBRATED： SLOPE OUT OF RANGE”（未定标，斜率超限）
操作 按“PRT”键，可以打印定标数据
按“↑”，显示定标曲线
操作 按“PRT”打印定标曲线
按“←”接受或拒绝定标结果
按“ENTER”键，接受考验并储存。

按“↑”，不接受
4.2.2样品操作步骤
第１步．在主菜单下选择Analysis (分析)
第２步．选择Single test session (实验模式)
选择FIB-C实验
第３步．选择Ｅnter/Edit Sample ID 键（编辑样本号）位置 １ 编辑 样本号 按对钩保存
第４步．选择Store Loadlist 键 (保存目录) 出现对话框在框内填写 第几批量 按对钩保存
第５步．检查R3放FIB-C试剂
第６步．按Start键开始分析前，必须执行清洗程序。

附加清洗程序主要是为了洗掉取样针上附着的凝血酶，避免遗留到下一次分析中。

5.质量控制
完整的质量控制，应用正常及异常质控物进行质量控制，每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。

至少每8小时做一次质控分析。

用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。

请参考ACL7000全自动血凝仪操作手册。

6.计算
系统自动计算结果。

7.参考值
230-500mg/dL
建议每个实验室应根据NCCLS(C
-A)推荐的方法（均值±2SD）建立自
28
己的参考值范围。

8.实验性能
8.1精密度（批内）
Mean(mg/dl) 102 303 441
CV% 2.2 2.2 1.8
8.2相关性
斜率 截距 r 参考方法
0.94 -9.73 0.978 FIB Clauss
8.3线性
70-750mg/dl
8.4影响因素
8.4.1血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。

游离血红蛋白 胆红素 甘油三脂 肝素
150mg/dl 20mg/dl 1022mg/dl 1U/ml
FDP（纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物），对FIB-C有影响。

8.4.2溶血标本不能测定。

9.参考文献
ACL7000 Operation Manual, Application Manual &Reagent Kit insert sheet of Becman Coulter Inc.
凝血酶原时间-纤维蛋白原（PT-FIB）测定（散射比浊法）
1.原理及检验目的
本实验可同时测定凝血酶原时间（PT）和纤维蛋白原（FIB）浓度。

原理：将组织凝血活酶、钙离子加入抗凝血浆中，激活外源凝血途径，产生纤维蛋白血凝块，通过660nm光照射血浆，测定其凝固过程中90o散射光变化，确定血液凝固时间，来测定PT。

在检测PT的同时，血浆浊度的变化与血浆中FIB的含量成正相关，通过测定凝固终点和起始点光散射强度的差值，再根据试验前已经做出的由不同已知FIB浓度与相应的光散射差值关系的标准曲线即可推测出FIB的浓度。

目的：用来评估患者外源凝血途径功能，进行外源凝血因子测定，尤其适用于口服抗凝剂治疗（OAT）。

2.标本要求
2.1使用血浆，9份静脉血加1份
3.8g/dL(129mmol/L)枸掾酸钠抗凝。

2.2全血贮存在4~10o C不超过2小时，最好在1小时内分离血浆，采用2000~2500rmp，离心30min分离，以去除全血中的血小板第三因子（PF3）, 血小板第三因子（PF4）等。

此血浆在室温22~24o C下可存放2小时，在2~4o C可存放4小时，在-20o C可存放2周，在-70o C可存放6个月。

冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37o C水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗。

冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。

2.3根据NCCLS规定，溶血标本易激活凝血因子，所以不应该测定。

3.试剂
3.1每个试剂均购自美国贝克曼库尔特公司。

1）PT-FIB测定试剂盒（代号P/N:如84688210，参见实际选用的PT-FIB 试剂盒）
兔脑促凝血激酶 10mL X8瓶
2）定标血浆 Calibration Plasma（代号P/N:8467300）
3）样品稀释液（代号P/N:9756800）
4）因子稀释液（代号P/N:9757600）
5）正常质控血浆 Normal control plasma（代号P/N:8467011） 6）低水平质控血浆 Abnormal control plasma level I/Low（代号P/N:8467500）
7）高水平质控血浆 Abnormal control plasma level II/High（代号P/N:8467700）
8）低纤维蛋白原质控物 Low Fibrinogen control（代号 P/N:20004200）
注：促凝血酶原激酶
当用不同的促凝血酶原激酶，或用不同的检测方法（手工、半自动、全自动）做PT测试时，其秒数结果将会有较显著的差异。

而对于口服抗凝药的病人来说，需要一个能进行比较的PT结果。

国际血液血标准委员会（ICSH）及国际血栓与止血委员会（ICTH）建议，根据试剂的ISI值（国际敏感度指数）计算INR值（国际标准化比值），并以INR值作为PT的通用结果报告。

根据经验及文献报道，试剂的灵敏度一手测试方法及机器自动化程度的影响。

但美国贝克曼库尔特公司提供的PT-FIB试剂，每一批号都经过了严格的测试，与ICSH及ICTH的参考品有很好的相关性，其ISI值均注明在试剂盒说明书中。

在ACL7000上，当输入试剂的ISI值后，机器会自动给出INR值。

INR=(PT Ratio) ISI
3.2试剂准备
用3mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶促凝血激酶，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15-25o C30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

3.3试剂保存
未开封的试剂可保存在2-8 o C至试剂盒上标明的有效期。

试剂溶解后，于原瓶中2-8o C，3天内有效；在ACL7000上（15o C），8小时有效。

建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2-8 o C。

4.仪器和校准
4.1使用美国贝克曼库尔特公司的ACL7000全自动血凝仪
4.2操作步骤
从主屏幕上可以选择TESTS试验（单个试验的批量测试）或PROFILE组合试验。

然后可以根据屏幕提示进行操作，也可以根据这里的操作步骤说明进行实验。

注：这里只介绍选择TESTS试验的操作步骤，如要通过PROFILE组合试验进行测试，请参见ACL7000操作手册。

1）按“↑、↓、←、→”移动光标，选择PT-FIB，然后按“ENTER”键。

“Check”画面出现。

2）检查比色池内是否放置了可使用的比色盘
3） 将凝血活酶试剂（PT试剂）倒入试剂杯（大号），标好PT-FIB 放入1号位置
4）确保参比液有足够的量（1.5-2cm高度的参比液可做到1到2个比色盘,包括死体积）如果剩下的参比液不足量,请换上一瓶新的。

5） 如果仪器已定标,显示CAL DATA（see PROG）提示注意定标数据。

如果出现“NOT CALIBRATED”，表示PT—FIB没有定标。

4.2.1校准（定标）步骤
选择Ｃalibration程序
选择Calibrate菜单弹出Ｃalibration
选择Ｌiquid 按键
选择ＰＴ－ＨＳ填写ＩＳＩ值 见ＰＴ－ＨＳ说明书
选择ＮＰ 填写 ＦＩＢ值 见ＮＰ说明书（ＮＰ－定标血浆）
按对钩保存。