土壤脱氢酶活性的测定
实验一活性污泥和土壤脱氢酶活性的测定
环境生物技术实验一 活性污泥和土壤脱氢酶活性的测定一、实验目的了解活性污泥脱氢酶活性的测定原理及方法二、实验原理活性污泥和土壤中的微生物对于有机物的降解，实质上是微生物经过一系列的酶的催化作用下的生物氧化还原反应。
参加生物氧化的重要酶为氧化酶和脱氢酶二大类，参加生物氧化的重要酶为氧化酶和脱氢酶二大类，其中脱氢酶类尤为重要。
其中脱氢酶类尤为重要。
其中脱氢酶类尤为重要。
其中脱氢其中脱氢酶能使氧化有机物的氢原子活化并传递给特定的受氢体实现有机物的氧化和转化。
如果脱氢酶活化的氢原子被人为受氢体接受，就可以通过直接测定人为受氢体浓度的变化间接测定脱氢酶的活性，就可以通过直接测定人为受氢体浓度的变化间接测定脱氢酶的活性，表征生物表征生物降解过程中微生物的活性。
因此，脱氢酶的活性可以反映处理体系内活性微生物量以及其对有机物的降解活性，以评价降解性能。
解活性，以评价降解性能。
脱氢酶活性测定方法有MB.2H 定性分析法和TTC 比色法，目前用得较多的为氯化三苯基四氮唑（TTC ）比色法。
利用TTC 作为人为受氢体，其还原反应方程式如下：作为人为受氢体，其还原反应方程式如下：无色的TTC 受氢后变成红色的TF （三苯基甲月替），根据红色的深浅，测出相应的光密度（OD 值），从而计算TF 的生成量，求出脱氢酶的活性。
的生成量，求出脱氢酶的活性。
三、实验设备及药品1．紫外-可见光分光光度计、分析天平、50mL 离心管、50mL 具塞三角瓶、50mL 比色管、甲醛、丙酮、4mg/mL 的TTC 溶液（2，3，5-氯化三苯基四氮唑，分析纯）、10 %硫化钠（Na 2S 分析纯）、无氧水（0.36% 亚硫酸钠，分析纯）、连二亚硫酸钠( Na 2S 2O 4 ，分析纯)、Tris （三羟甲基氨基甲烷，分析纯） 2．活性污泥悬浮液或土壤悬浮液。
．活性污泥悬浮液或土壤悬浮液。
要点：(1) 所有操作应当尽量在避光条件下进行。
脱氢酶最适反应条件, 温度温度 30～37℃ , pH 值7.4～8.5。
土壤脱氢酶活性测定
土壤脱氢酶活性测定
测定步骤
1 称取4克鲜土于50ml三角瓶中，加入4ml（0.5%TTC+0.5%葡萄糖）-Tris缓冲溶液（pH7.6）,(2ml 1%TTC-Tris缓冲溶液，2ml 1%葡萄糖)，置37℃暗室培养24hr。
2 取出后用少量甲醇提取后过滤，再用50ml容量瓶或比色管定容。
3 滤液马上用485nm波长下分光光度计测定。
pH7.6 Tris缓冲液的配制：
A：0.2M三-（羟甲基）-氨基甲烷溶液（1000 ml含24.23克）
B：0.2M HCl
100 ml A+76.8ml B,加水稀释至400 ml，准确调节pH为7.6。
TBF标准曲线的制备：准确称取10mg TPF溶于250 ml甲醇中，得到40 mg/L 的母液。
从中吸取0，1，2，3，4，5 ml于50ml容量瓶中，用甲醇定容，得到0，40，80，120，160，200ug TPF的标准曲线。
参考文献
Casida LC Jr, Klein DA, Santoro T(1964) Soil dehydrogenase activity. Soil Science 98, 371-376.
H.Y.Chu, J.G.Zhu, Z.B.Xie, H.Y.Zhang, Z.H.Cao and Z.G.Li(2003) Effects of lanthanum on dehydrogenase activity and carbon dioxide evolution in a Haplic Acrisol. Australian Journal of Soil Research 41, 731-739.
H.Y.Chu,。
土壤酶指标测定
土壤酶指标测定土壤生物化学指标测定一、土壤脱氢酶(dehydrogenase)活性测定（比色法）（一）分析意义脱氢酶能酶促发展过氧化氢充分反映，它起至着氢的中间传达题的促进作用。
在土壤中，碳水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃，他们可以作为氢的工体。
脱氢酶能自基质中析出氢而进行氧化作用。
（二）方法挑选与原理lenhard(1956)最先明确提出用ttc做为氢的受体分解成红色的tf，入行闭塞测定，以溶液的光密度值表示酶活性。
后来对上述的方法搞了相同的改良和健全。
用土壤有机质做为氢的供体或用葡萄糖搞氢的供体，用分解成的tf数量或折算成氢的体积去则表示脱氢酶的活性。
（三）试剂配制1、0.5%ttc溶液2、甲苯3、tris-hcl缓冲液ph7.6：0.1m三羟甲基氨基甲烷（12.114g/l）50ml与0.1mhcl38.5ml混合后，用水稀释至100ml。
4、硫化钠5、0.1mol/l葡萄糖溶液。
（四）实验步骤1、标准曲线的绘制：称取相当于50mg纯品量的已烘干的ttc于50ml比色管中，定容，制成1mg/l的母液。
分别向6支50ml比色管中依次注入1、2、3、4、5、6mlmg/ml标准ttc溶液，用蒸馏水定容，是为工作液：取7只带塞比色管（50ml）依次加入2mltris-hcl演算缓冲液，1ml不同浓度的ttc工作液，1ml10%硫化钠新配溶液，摇匀，放置20分钟；反应完全后，准确加入10ml甲苯，振摇。
完全提取tf，稳定数分钟，取上层有机溶液在紫外分光光度计492nm处闭塞（在比色皿中也需稳定2分钟）绘制标准曲线。
2、操作过程：取0.5g新鲜土壤，置于50ml比色管中，依次加入2mltris-hcl盐酸缓冲液、1ml0.1mol/l葡萄糖溶液、1ml0.5%ttc溶液,震荡均匀，离心（4000转/分）5分钟后，将甲苯提取液在分光光度计492nm处闭塞测定。
同时设无土壤和无ttc的对照（以蒸馏水替代）。
脱氢酶活性检测在环境监测中的应用
脱氢酶活性检测在环境监测中的应用脱氢酶活性检测方法是一种常用于环境监测的生物学方法，其通过测量脱氢酶对底物的催化能力，来间接反映环境中某些特定污染物的浓度和毒性程度。
该方法具有高灵敏度、高选择性、快速、经济和可重复等优点，因此在环境监测中得到广泛应用。
第一，脱氢酶活性检测可用于监测水体中的污染物浓度。
水体中的有机物污染物，如苯、甲苯、二甲苯等可通过脱氢酶催化反应被氧化，从而反映水体中有机物污染物的存在及浓度。
环境中孕育潜在有毒性的有机物污染物，通过脱氢酶活性检测可以实时监测其浓度，从而及时采取措施，避免对水体生态及人类健康产生潜在危害。
第二，脱氢酶活性检测可用于监测土壤中的有毒物质浓度。
某些化学物质经分解产生的有毒物质，如重金属离子，可引起土壤中微生物群落的损伤，从而影响土壤肥力和生态系统的稳定性。
脱氢酶活性检测可通过测量土壤中微生物的脱氢酶活性，来评估土壤中有毒物质的毒性程度。
据此结果，可以采取相应的措施，如修复污染土地，保护生态环境。
脱氢酶活性检测可用于监测空气中的有机污染物浓度。
空气中存在大量的VOCs（挥发性有机化合物），例如苯类、醛类等，这些物质对人体和环境都有潜在危害。
脱氢酶活性检测可检测大气中VOCs的浓度，比传统的气相色谱-质谱联用（GC/MS）方法更快速、灵敏和经济。
脱氢酶活性检测在空气质量监测、工业废气排放等方面具有广阔的应用前景。
脱氢酶活性检测是一种可靠、灵敏的环境监测方法，具有广泛的应用前景。
在水体、土壤和空气等环境中，脱氢酶活性检测能够准确及时地反映污染物的浓度和毒性程度，为环境保护和生态修复提供重要参考依据。
这种方法的广泛应用将有助于建立更加全面和有效的环境监测体系，以保护环境质量和人类健康。
土壤活性测定实验报告
一、实验目的1. 了解土壤活性的基本概念和测定方法。
2. 掌握土壤酶活性的测定原理和操作步骤。
3. 通过实验，了解土壤酶活性与土壤肥力的关系。
二、实验原理土壤活性是指土壤中微生物、植物、动物等生物体及其代谢产物的综合活性。
土壤酶活性是土壤活性的重要指标，可以反映土壤中生物体的代谢能力和土壤肥力状况。
本实验通过测定土壤酶活性，了解土壤活性水平。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、过氧化氢酶、磷酸酶、脲酶、蛋白酶、转化酶、脱氢酶等试剂。
2. 实验仪器：恒温水浴锅、pH计、分光光度计、滴定管、移液管、烧杯、试管等。
四、实验方法1. 土壤样品的采集与处理采集不同类型土壤样品，过筛后，置于4℃冰箱中保存。
2. 土壤酶活性的测定（1）过氧化氢酶活性测定原理：过氧化氢酶催化过氧化氢分解，产生水和氧气。
通过测定氧气的产生量来计算过氧化氢酶活性。
操作步骤：①配制过氧化氢酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的过氧化氢酶反应液，加入一定量的过氧化氢，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算过氧化氢酶活性。
（2）磷酸酶活性测定原理：磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，产生酚和磷酸。
通过测定酚的产生量来计算磷酸酶活性。
操作步骤：①配制磷酸酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的磷酸酶反应液，加入一定量的磷酸苯二钠，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算磷酸酶活性。
（3）脲酶活性测定原理：脲酶催化尿素水解，产生氨和二氧化碳。
通过测定氨的产生量来计算脲酶活性。
操作步骤：①配制脲酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的脲酶反应液，加入一定量的尿素，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用滴定法测定氨的产生量，根据标准曲线计算脲酶活性。
土壤脱氢酶活性的测定
土壤脱氢酶活性的测定一、实验原理脱氢酶的正式命名是AH：B氧化还原酶，广泛存在于动植物组织和微生物细胞内，它能酶促一定的基质中脱出氢而进行氧化作用。
脱氢酶的种类因电子供给体和接受体的特异性而有不同。
单位时间内脱氢酶活化氢的能力表现为它的酶活性。
通过测定土壤中微生物的脱氢酶活性，可以了解微生物对土壤中有机物的氧化分解能力，即土壤酶的活性。
已知受氢体可接受脱氢酶脱出的氢原子，根据接收氢原子的量可以判断脱氢酶的活性。
如无色的氯化三苯基四氮唑（TTC，俗称红四唑）接受氢后变成红色的三苯基甲瓒（TF），根据产生红色的色度进行比色定量分析，就可以判断脱氢酶的活性。
通常，吸光度越大（红色越深），脱氢酶活性越大。
二、实验材料、试剂和仪器1．材料：过0.9mm孔径筛的土壤样品，8g2．试剂：0.36%Na2SO3溶液，15mlTris-HCl缓冲液（PH=7.6），45ml0.4%TTC,7.6mlNa2S2O4，十几粒甲醛，10ml丙酮，20ml3．仪器：50ml具塞比色管，6只比色管架，1只1~5ml移液枪，1只（枪头3个）100~1000ul移液枪1只（枪头1个）药匙1个水浴锅1个分光光度计1台分析天平1台离心管4只培养箱1台离心机1台三、实验步骤1．标准曲线的绘制（1）按下表配制系列浓度的TTC标准溶液。
（2）显色。
用药匙向每只比色管中各加入少许连二亚硫酸钠（Na2S2O4），混匀，使TTC 全部还原为红色的TF。
用1~5ml移液枪向各管滴加1ml甲醛终止反应，摇匀后再加入2ml丙酮震荡摇匀，37℃水浴10min。
（3）测定吸光度，绘制标准曲线。
在485nm波长下测定各管溶液的吸光度A，并以A为纵坐标，TTC浓度为横坐标，绘制出TTC标准曲线。
2．土壤脱氢酶活性的测定（1）培养并显色（此步骤由助教预先完成）。
首先，按下表向四只离心管中分别加入以下物质然后，将以上四只离心管避光，37℃保温培养12~24h。
脱氢酶活性测定实验报告
脱氢酶活性测定实验报告TTC标准曲线的绘制：TTC浓度(ug/mL) 8 16 24 32 40 吸光值A 0.041 0.186 0.298 0.312 0.456土壤脱氢酶的吸光值记录：编号 1 2 3 平均吸光值A 0.145 0.167 0.186 0.166由标准曲线可得相应TTC浓度为：2.0314 ug/mL则土壤脱氢酶活性= ABC= 2.0314*18*1= 36.5652式中：A为查出的TTC浓度(ug/mL)；B为培养时间校正值(18h);C为比色时稀释倍数(1)。
思考题：1.影响脱氢酶活性的因素有哪些？答：pH：每种酶都有最适pH，在此pH下，酶活性最大；温度：酶活性随着温度的升高而增加，在最适温度时达到最高值，然后开始下降；激活剂：可以促进酶活性；抑制剂：会使酶活性降低；还有内因如底物浓度和酶浓度。
2.已知乳酸脱氢酶（LDH）在NAD+的递氢作用下，使乳酸脱氢生成丙酮酸。
丙酮酸在碱性溶液中与2,4-二硝基苯肼生成2,4-二硝基苯腙使溶液呈蓝色。
颜色的深浅与丙酮酸浓度成正比。
请设计一个测定动物肝脏乳酸脱氢酶活性的实验。
答：1，校正曲线的制作：（1）按下表操作：加入物(ml) B 1 2 3 4 5丙酮酸标准液0 0.025 0.05 0.1 0.15 0.2底物缓冲液0.5 0.475 0.45 0.4 0.35 0.3去离子水0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11二硝基苯肼0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0相当于金氏单位0 125 250 500 750 1000（2）37度水浴15分钟，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用B管调零，读取各管吸光度。
以吸光度值为纵坐标，相应的酶活性单位为横坐标绘制校正曲线。
2，酶活性的测定：（1）加入物(ml) 测定管对照管血清0.01 0.01NAD＋底物缓冲液0.5 0.5（37度水浴5min）NAD＋溶液0.1 －（37度水浴15min）2,4二硝基苯肼0.5 0.5NAD＋溶液－0.1（37度水浴15分钟）0.4mol/L溶液 5.0 5.0（2）混匀，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用蒸馏水调零，读取各管吸光度。
脱氢酶活性检测方法及其在环境监测中的应用
内容介绍
基本原理
基本原理
TTC脱氢酶测定方法的基本原理是利用TTC盐（如TTC-CoA）作为底物，在脱 氢酶的作用下，将TTC盐还原成TTF，并通过比色法测定TTF的生成量。脱氢酶的 活性越高，底物的还原速度越快，生成的TTF也就越多。通过测量特定时间内TTF 的生成量，可以计算出脱氢酶的活性。
应用案例
应用案例
在医学领域，TTC脱氢酶测定方法可用于研究疾病的发病机制和药物治疗效果。 例如，通过对患者脱氢酶活性的检测，可以了解其体内代谢状态和生理功能，有 助于对疾病的诊断和治疗提供依据（具体案例略）。
应用案例
在农业领域，TTC脱氢酶测定方法可用于研究作物的生理特性和产量之间的关 系。通过测定不同品种作物脱氢酶的活性，了解其代谢状态和生理功能，为作物 品种的选育和栽培管理提供指导（具体案例略）。
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脱氢酶活性检测方法及其在环 境监测中的应用
01 引言
目录
02 脱氢酶活性检测方法
03 环境监测中的应用
04 案例分析
05 结论
06 参考内容
引言
引言
脱氢酶是生物体内一类重要的酶类，它们参与许多生物过程，如能量代谢、 物质转化等。脱氢酶活性的检测方法在环境监测中具有重要意义，可用于评估环 境污染对生物体影响、污染物代谢过程及生态系统健康状况的影响。本次演示将 详细介绍脱氢酶活性检测方法及其在环境监测中的应用。
3、设定对照组：不添加脱氢酶的样品为对照组。
6、比色：将反应液与显色剂混合，观察颜色变化，并进行比色测定。
注意事项
注意事项
1、实验过程中要严格控制温度和pH值等实验条件，以确保实验结果的准确性。 2、实验操作完成后，要及时记录实验数据，并对实验结果进行分析和处理。
土壤脱氢酶测定方法
土壤脱氢酶测定方法土壤脱氢酶可是个很有趣的研究对象呢。
那怎么测定它呢？一种常见的方法是采用三苯基四氮唑氯化物（TTC）法。
这就像是一场土壤里的小魔术。
我们先把含有脱氢酶的土壤样品取出来，然后加入TTC溶液。
脱氢酶在土壤里就像一个个小工匠，它会把TTC变成一种红色的东西，叫三苯基甲臜（TF）。
这个过程就像是小工匠把普通的材料加工成了漂亮的工艺品。
接下来呀，就要把这个反应后的土壤溶液进行处理啦。
我们得想办法把TF从土壤里提取出来呢。
这时候就需要用到有机溶剂，比如说丙酮之类的。
把丙酮加进去，像给土壤洗个特别的澡，让TF乖乖地跑到丙酮里。
然后呢，我们就可以用分光光度计这个神奇的小仪器来测量啦。
把含有TF的丙酮溶液放到分光光度计里，它就能告诉我们TF的含量。
因为TF的含量和土壤脱氢酶的活性是有关系的，就像小工匠的作品数量能反映出小工匠的工作能力一样。
还有一种方法是碘硝基四氮唑蓝（INT）法。
这个方法也很有意思哦。
同样先把土壤样品准备好，再加入INT溶液。
土壤里的脱氢酶就会对INT动手脚啦，把它变成一种有色的产物。
然后也是通过提取这个有色产物，再用分光光度计去测量。
不过在做这些测定的时候，要特别小心呢。
土壤样品的采集就很有讲究，要确保采集的样品能代表要研究的那片土壤。
就像挑苹果，要挑到能代表一整筐苹果好坏的那个。
而且在整个测定过程中，温度、pH值这些条件都要控制好。
如果温度不合适，就像小工匠在寒冷或者炎热的环境里工作，会影响他们的工作效率，也就是脱氢酶的活性测定结果啦。
pH值也是一样的道理，太酸或者太碱，小工匠们也会不开心，测定结果就不准啦。
土壤脱氢酶的测定方法虽然有点小复杂，但就像探索一个神秘的小世界，充满了乐趣呢。
脱氢酶
脱氢酶活性测定（一）基本原理利用2，3，5-三苯基四氮唑氯化物（TTC）为基质（氢受体），由于土壤中脱氢酶的作用使之形成红色的TPF，两者在一定范围内呈线性关系，因此，用比色法测定其形成量作为土壤脱氢酶的活性指标。
（二）实验试剂1、酶促反应试剂（1）0.5mol/L三（羟甲基）氨基甲烷-盐酸缓冲液，pH7.6：2mol/L三（羟甲基）氨基甲烷溶液50mL与1mol/L盐酸溶液75mL混合，加蒸馏水定容到200mL。
（2）0.5%TTC溶液：TTC0.5g溶于0.5mol/L三（羟甲基）氨基甲烷-盐酸缓冲液中，定容到100mL。
2、测定试剂（1）甲醇（2）TPF标准溶液：称取TPF30mg,置于100mL容量瓶中，用甲醇定容到100mL，此溶液浓度即为1μg/Ml.再用甲醇稀释该溶液，配制成25、50、75、100、150ng/mL的标准溶液。
（三）操作步骤1）称取通过2mm筛的土样5g于带塞试管（0.7*15.0cm）中，加入TTC溶液5mL，充分混合。
2）同时设置对照，即在试管内加入三（羟甲基）氨基甲烷-盐酸缓冲液5mL 以替代土壤与TTC。
3）将以上试管置暗处30℃保温培养12h后，分次少量地加入甲醇100mL，移入带塞三角瓶中，用振荡机震荡1h，过滤。
4）取滤液用分光光度计（波长485nm）测定其光密度。
以甲醇作为空白。
5）用上述同样方法测定不同浓度TPF标准溶液光密度，在半对数纸上绘制标准曲线。
6）根据减去空白的光密度查标准曲线，即可求出产生的TPF的量，该量（μg/g 干土）即表示脱氢酶活性。
脱氢酶的活性可按下式计算：土壤脱氢酶活性（μg TPF/g干土）=C×V/dwtC：滤液中TPF的量（μg/mL）（由标准曲线查知）；V：滤液的体积（mL）；dwt:烘干土壤重量（g）。
土壤生态修复相关酶指标测定
土壤生物化学指标测定土壤脱氢酶(dehydrogenase)活性测定（比色法）（一）分析意义脱氢酶能酶促脱氢反应，它起着氢的中间传递体的作用。
在土壤中，碳水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃，他们可以作为氢的工体。
脱氢酶能自基质中析出氢而进行氧化作用。
（二）方法选择与原理Lenhard(1956)最先提出用TTC作为氢的受体生成红色的TF，进行闭塞测定，以溶液的光密度值表示酶活性。
后来对上述的方法做了不同的改进和完善。
用土壤有机质作为氢的供体或用葡萄糖做氢的供体，用生成的TF数量或换算成氢的体积来表示脱氢酶的活性。
（三）试剂配制1、0.5%TTC溶液2、甲苯3、Tris-HCl缓冲液Ph7.6：0.1M三羟甲基氨基甲烷（12.114g/L）50ml 与0.1MHCl38.5ml混合后，用水稀释至100ml。
4、硫化钠5、0.1mol/L葡萄糖溶液。
（四）实验步骤1、标准曲线的绘制：称取相当于50mg纯品量的已烘干的TTC于50 ml比色管中，定容，制成1 mg/L的母液。
分别向6支50ml比色管中依次注入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL mg/ml标准TTC溶液，用蒸馏水定容至5mL。
在试管中依次加入2 mL Tris-HCl缓冲液，2mL蒸馏水，2mL TTC系列溶液，对照组不加TTC，再各加入1 g低亚硫酸钠，摇匀，待溶液充分显色后，各管准确加入5ml甲苯，振荡萃取2min，取上层有机溶液在紫外分光光度计492nm处闭塞绘制标准曲线。
2、操作过程：取1g新鲜土壤，置于50ml 比色管中，依次加入4mlTris-HCl盐酸缓冲液、2ml 0.1mol/L葡萄糖溶液、1ml 0.5% TTC溶液,震荡均匀，离心（4000转/分）5分钟后，将甲苯提取液在分光光度计492 nm处闭塞测定。
同时设无土壤和无TTC的对照（以蒸馏水替代）。
3、结果计算：脱氢酶活性=TF含量/0.5g —土壤含水量脱氢酶活性，以24h后1g干土中TF的生成量表示。
几种常用的土壤酶活性意义及测定
几种常用的土壤酶活性意义及测定土壤酶是土壤中的重要组成部分，它们参与了土壤的有机质分解、养分转化等重要生态过程。
土壤酶活性的意义在于指示土壤的生物活性和健康状况，能够反映土壤的肥力和生态功能。
因此，研究土壤酶活性对于评价土壤质量和改善土壤生态环境具有重要意义。
本文将介绍几种常用的土壤酶活性意义及测定方法。
一、脲酶活性脲酶是一种氧化酶，广泛存在于土壤中。
它能催化脲类化合物的分解，参与土壤氮的生物循环过程。
脲酶活性可以反映土壤中的氮转化能力和有机质的分解速率。
脲酶活性的测定常用碘酸钠法和银盐法，可以通过测定脲酶催化反应产生的碘或银色沉淀的数量来评估脲酶的活性水平。
二、过氧化氢酶活性过氧化氢酶存在于土壤中的微生物和植物中，它是一种氧化还原酶，能够催化过氧化氢的分解。
过氧化氢是土壤中常见的活性氧化物，它对土壤微生物和植物的生长发育具有毒害作用。
过氧化氢酶活性的测定可以用过氧化氢法和双酚A法，其原理是利用过氧化氢催化反应的颜色变化或双酚A氧化反应的速率来评估过氧化氢酶的活性。
三、脱氢酶活性脱氢酶包括脱氢酶、脱氢酶、过氧化酶等，广泛存在于土壤中的微生物中。
它们能够催化有机物的氧化还原反应，参与土壤中有机质的降解分解过程。
脱氢酶活性的测定可以用间苯二酚法、尼羧酸法和氨基酸反应法等方法，通过测定产生的颜色变化、吸光度变化或氨基酸含量的变化来评估脱氢酶的活性水平。
四、葡萄糖酶活性葡萄糖酶是一种分解葡萄糖的酶，广泛存在于土壤中的微生物和植物中。
它能够催化葡萄糖的氧化反应，参与土壤中有机质的分解和碳的循环过程。
葡萄糖酶活性的测定可以用邻苯二酚法、硫酸酚法和氨基酸反应法等方法，通过测定产生的颜色变化、吸光度变化或氨基酸含量的变化来评估葡萄糖酶的活性水平。
土壤酶活性的测定方法多种多样，选择适合的方法要考虑到土壤样品的特性、目标酶的特性和测定的灵敏度。
通过研究土壤酶活性，可以了解土壤中的生物活性和功能，为土壤质量评价、生态环境保护和土壤养分管理提供科学依据。
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法土壤中的微生物是维持土壤生态系统健康的重要组成部分，土壤酶活性则可以作为评价土壤肥力和生物活性的重要指标。
因此，在土壤微生物量和土壤酶活性测定方面的研究非常重要。
本文将介绍几种常用的土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法。
一、土壤微生物量测定方法1.铺平法：将土壤样品铺平在玻璃板上，使用显微镜对土壤中的微生物进行直接观察和计数。
这种方法的优点是简单易行，但需要大量的时间和人力。
2.累积碳法：通过测定土壤中的有机碳含量来间接估算土壤微生物量。
有机碳水平与微生物量密切相关，所以可以通过测定土壤中的有机碳来推测微生物的数量和活性。
3.培养法：将土壤样品接种到适当的培养基上进行培养，然后通过菌落计数或直接计数来估算微生物的数量。
这种方法适用于数量较多的微生物，如细菌和真菌。
4.傅里叶变换红外光谱法（FTIR）：通过测量土壤样品的傅里叶变换红外光谱，分析土壤中的微生物量。
该方法具有快速、准确、非破坏性等优点。
1.浊液法：通过观察测定液中的混浊度来测定土壤中的脲酶、过氧化氢酶等氧化酶的活性。
这种方法简单易行，但对于不同种类的土壤酶效果不一样。
2.比色法：采用酶底物与酶催化产物之间的化学反应，通过测定反应产物的颜色来估算土壤酶活性。
比色法可以用于测定脱氢酶、脱氢酶、脱氧核苷酸酶等酶的活性。
3.荧光法：将有机物和荧光试剂一起加入土壤样品中，经过反应后，在荧光分析仪中测定产生的荧光强度来测定土壤酶的活性。
荧光法适用于测定蔗糖酶、酚氧化酶和脱氢酶等酶的活性。
4.比浊法：通过加入酶底物后，观察土壤样品的混浊度来测定土壤中酶的活性。
比浊法适用于黄酶、脱氢酶等酶的活性测定。
5.电导法：通过测定土壤样品溶液中的电导率变化来估算土壤中酶的活性。
电导法适用于磷酸酶和脱氢酶等酶的活性测定。
总结起来，土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法多种多样，选择合适的方法需要考虑样品特性和实验条件等因素。
每种方法都有其优点和局限性，研究者应根据需要选取合适的方法进行测定。
土壤脱氢酶测定-TTC还原法
土壤脱氢酶测定-TTC还原法仪器：试管、定量滤纸、三角瓶、分光光度计、摇床、Ph计试剂：TTC（氯化三苯基四氮唑）、浓HCl、Tris（三强甲基氨基甲烷）、甲醇、TPF（三苯基甲臜za）配制：1.Ph 7.6 、0.5mol/L Tris 缓冲溶液：60.57g Tris溶于水，用1mol/LHCl（按浓盐酸：水=1：1比例配制）准确调pH至7.6，定容至1000ml；2.1% TTC溶液：1g TTC溶于上述缓冲液，定容至100ml；3.1%葡萄糖溶液：1g葡萄糖溶于水，定容至100ml；测定步骤：1.4g过2mm（10目）筛新鲜土样于试管（25ml），加1%TTC溶液2ml，1%葡萄糖溶液2ml，摇匀；同时每个处理设置用Tris缓冲液2ml 代替TTC对照；2.试管于恒温箱（烘箱）暗室37℃培养24h，加甲醇20ml（少量多次），移入50ml三角瓶，摇床（180-220r/min）振荡1h，过滤；3.先用量筒测量滤液体积，然后将滤液于分光光度计485nm处测定吸光度值，用水和待测液润洗，直接测量下一个样品。
4.整个实验设置无土壤对照（加TTC溶液和葡萄糖溶液各2ml）。
标准曲线制备：1.准确称取TPF 50mg于250ml 甲醇中，母液浓度为200mg/L。
2.吸取0，0.25，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml母液于25ml容量瓶，用甲醇定容，TPF浓度分别为0，2，4，8，12，16，20mg/L。
脱氢酶活性计算：脱氢酶活性（mgTPF/g干土/h）=（c*v）/（干土质量*24）c：滤液中TPF的浓度（标准曲线查）；v：滤液的体积；干土质量：2g鲜土烘干后的质量；24：暗室培养的时间。
脱氢酶活性检测在环境监测中的应用
脱氢酶活性检测在环境监测中的应用【摘要】脱氢酶活性检测在环境监测中扮演着重要角色。
本文首先介绍了脱氢酶活性检测技术原理，然后探讨了其在土壤、水体、大气和生物膜环境监测中的应用。
脱氢酶活性检测的优势在于高灵敏度和快速结果，但也存在局限性，如受环境条件影响。
未来，该技术有望在环境监测领域得到更广泛应用，尤其是在研究环境影响和生态系统健康方面。
通过不断完善技术、提高检测精度和扩大应用范围，脱氢酶活性检测将成为环境监测的重要手段，为保护环境和人类健康发挥重要作用。
【关键词】关键词：脱氢酶活性检测、环境监测、技术原理、土壤、水体、大气、生物膜、优势、局限性、发展方向1. 引言1.1 脱氢酶活性检测在环境监测中的应用脱氢酶是一类广泛存在于细菌、真菌、植物等生物体中的酶，其在环境监测中扮演着重要的角色。
脱氢酶活性检测技术是利用脱氢酶催化底物氧化还原反应的原理，通过检测底物的氧化还原状态来评估生物体内脱氢酶的活性水平，从而反映生物体对环境中有害物质的代谢能力和污染程度。
在土壤环境监测中，脱氢酶活性检测可用于评估土壤微生物活性和土壤健康状况，对土壤污染物的降解速率和土壤肥力的状况进行监测和评估。
在水体环境监测中，脱氢酶活性检测可用于评估水体中微生物的代谢活力和水质状况，对水体中的有机物和重金属污染进行监测和评估。
在大气环境监测中，脱氢酶活性检测可用于评估大气中微生物的活性水平和大气污染物的代谢能力，对大气污染物的来源和分布进行监测和评估。
在生物膜环境监测中，脱氢酶活性检测可用于评估生物膜中微生物的代谢活力和生物膜的污染状况，对生物膜的形成和结构进行监测和评估。
脱氢酶活性检测在环境监测中具有重要的应用价值，可以为环境监测提供更为细致和准确的数据支持，有助于及时发现环境污染问题并采取相应的控制和治理措施，保障环境质量和人类健康安全。
2. 正文2.1 脱氢酶活性检测技术原理脱氢酶是一类广泛存在于生物体内的酶，其在环境监测中的应用越来越受到重视。
土壤脱氢酶(S-DHA)活性检测试剂盒说明书 微量法
土壤脱氢酶（S-DHA）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0395规格：100T/48S产品内容：试剂一：粉剂×1瓶，使用前加5mL水溶解，4℃避光保存（尽量现配现用）。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：丙酮，自备。
产品说明：土壤脱氢酶(Soil dehydrogenase,sDHA)的活性可以反映土壤体系内活性微生物量以及其对有机物的降解活性，可以作为土壤微生物的降解性能指标。
氢受体2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,TTC）在细胞呼吸过程中接受氢以后，被还原为三苯基甲臜（Triphenyl Formazone,TF），TF呈现红色，在波长485nm处有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm测定其吸光值，即得土壤脱氢酶活性。
自备实验仪器及用品：筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、漏斗，滤纸、可见分光光度计、玻璃比色可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸馏水、丙酮（不允许快递，请用户自备）。
操作步骤：一、样品处理：1.土壤样品：准确称取过40目筛的新鲜土壤样品约0.05g（以保证TTC与土壤颗粒充分接触）。
2.污泥样品：污泥用蒸馏水洗涤，12000rpm，25℃，离心10min，弃上清，反复3-4次。
二、测定步骤和操作表：1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至485nm，对照管调零。
第1页，共2页2.操作表对照管测定管样品（g）0.050.05试剂一（mL）0.1试剂二（mL）0.20.1置于EP管中，充分混匀，37℃，暗培养12h，取出后立即冰浴5min试剂三（mL）0.10.1反复震荡数次，37℃保温10min，12000rpm，4℃，离心5min，取200μL上清，于微量石英比色皿/96孔板，酶标仪或分光光度计提前30分钟预热，蒸馏水调零，测定对照管和测定管，计算△A。
小麦根际土壤脱氢酶活性测定方法的改进
小麦根际土壤脱氢酶活性测定方法的改进戴濡伊;吴季荣;徐剑宏;俞明正;史建荣【摘要】为准确检测土壤脱氢酶活性,在传统TTC(氯化三苯基四氮唑)法基础上对萃取剂、测定波长、对照、培养时间、TTC浓度等条件进行了优化,并进行了标准曲线制作方法的创新.改进后的土壤脱氢酶活性测定方法为:用甲苯溶解TF(三苯基甲臜)制作标准曲线,以无土+无基质为试验对照,1.0％ TrC溶液为基质,土壤中加入pH为7.4的Tris-HC1缓冲液和0.1 mol/L的葡萄糖溶液,在37℃下培养24 h,以甲苯为萃取剂萃取30 min,于492 nm波长下检测吸光值.利用优化后的方法测定转基因抗旱小麦各生育期根际土壤脱氢酶活性,结果表明:转基因抗旱小麦与对照(受体小麦)根际土壤脱氢酶活性没有显著性差异,均表现为先升高后降低趋势,于返青期达到最大值.试验结果进一步证实上述方法稳定可行.【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2013(029)004【总页数】5页(P772-776)【关键词】转基因小麦;根际土壤;脱氢酶活性【作者】戴濡伊;吴季荣;徐剑宏;俞明正;史建荣【作者单位】南京农业大学植物保护学院植物病理学系,农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室,江苏南京210095;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏省转基因安全评价公共技术服务中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏省转基因安全评价公共技术服务中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏省转基因安全评价公共技术服务中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏省转基因安全评价公共技术服务中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏省转基因安全评价公共技术服务中心,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】X173脱氢酶普遍存在于活体微生物中，它催化底物去掉一个氢原子，是电子传递体系中催化有机质脱氢作用的第一酶，在有机质分解过程中具有关键作用［1］。
脱氢酶的测定
活性污泥脱氢酶活性的测定1 目的和原理有机物在生物处理构筑物中的分解，是在酶的参与下实现的，在这些酶中脱氢酶占有重要的地位，因为有机物在生物体内的氧化往往是通过脱氢来进行的。
活性污泥中脱氢酶的活性与水中营养物浓度成正比，在处理污水过程中，活性污泥脱氨酶活性的降低，直接说明了污水中可利用物质营养浓度的降低。
此外，由于酶是一类蛋白质，对毒物的作用非常敏感，当污水中有毒物存在时，会使酶失活，造成污泥活性下降。
在生产实践中，我们常常在设置对照组，消除营养物浓度变化影响因素的条件下，通过测定活性污泥在不同工业废水中脱氢酶活性的变化情况来评价工业废水成分的毒性，评价对不同工业废水的生物可降解性。
脱氢酶是一类氧化还原酶，它的作用是催化氢从被氧化的物体（基质AH）中转移到另一个物体（受氢体B）上：为了定量地测定脱氢酶的活性，常通过指示剂的还原变色速度，来确定脱氢过程的强度。
常用的指示剂有2,3,5－三苯基四氮唑氯化物（TTC）或亚甲蓝，它们在从氧化状态接受脱氢酶活化的氢而被还原时具有稳定的颜色，我们即可通过比色的方法，测量反应后颜色深度，来推测脱氢酶的活性。
例如：TTC（无色）TF（红色）2 材料与器皿（1）72型分光光度计、超级恒温器、离心机（4000转／分）、15毫升离心管、移液管、黑布罩（2）试剂：①Tris－HCl缓冲液（0.05M）：称取三羟甲基氨基甲烷6.037克，加1.0MHCl 20毫升，蒸馏水定容至1L，pH为8.4。
（备注M指mol/L）②氯化三苯基四氮唑（TTC）（0.4％）：称取0.4克TTC溶于100毫升蒸馏水中，即成0.4％的TTC溶液（每周新配）。
③亚硫酸钠（0.36％）：称0.3657克亚硫酸钠溶于100毫升蒸馏水中。
④丙酮、甲醛（分析纯）。
⑤10%硫化钠：称取10克硫化钠（分析纯），定容至100mL棕色容量瓶中.⑥0.1mol／L葡葡萄糖溶液：称取1．98179葡萄糖(分析纯)溶于100mL蒸馏水。
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土壤脱氢酶活性的测定
一、实验原理
脱氢酶的正式命名是AH：B氧化还原酶，广泛存在于动植物组织和微生物细胞内，它能酶促一定的基质中脱出氢而进行氧化作用。
脱氢酶的种类因电子供给体和接受体的特异性而有不同。
单位时间内脱氢酶活化氢的能力表现为它的酶活性。
通过测定土壤中微生物的脱氢酶活性，可以了解微生物对土壤中有机物的氧化分解能力，即土壤酶的活性。
已知受氢体可接受脱氢酶脱出的氢原子，根据接收氢原子的量可以判断脱氢酶的活性。
如无色的氯化三苯基四氮唑（TTC，俗称红四唑）接受氢后变成红色的三苯基甲瓒（TF），根据产生红色的色度进行比色定量分析，就可以判断脱氢酶的活性。
通常，吸光度越大（红色越深），脱氢酶活性越大。
二、实验材料、试剂和仪器
1．材料：过0.9mm孔径筛的土壤样品，8g
2．试剂：0.36%Na2SO3溶液，15ml
Tris-HCl缓冲液（PH=7.6），45ml
0.4%TTC,7.6ml
Na2S2O4，十几粒
甲醛，10ml
丙酮，20ml
3．仪器：50ml具塞比色管，6只
比色管架，1只
1~5ml移液枪，1只（枪头3个）
100~1000ul移液枪1只（枪头1个）
药匙1个
水浴锅1个
分光光度计1台
分析天平1台
离心管4只
培养箱1台
离心机1台
三、实验步骤
1．标准曲线的绘制
（1）按下表配制系列浓度的TTC标准溶液。
（2）显色。
用药匙向每只比色管中各加入少许连二亚硫酸钠（Na2S2O4），混匀，使TTC 全部还原为红色的TF。
用1~5ml移液枪向各管滴加1ml甲醛终止反应，摇匀后再加入2ml丙酮震荡摇匀，37℃水浴10min。
（3）测定吸光度，绘制标准曲线。
在485nm波长下测定各管溶液的吸光度A，并以A为纵坐标，TTC浓度为横坐标，绘制出TTC标准曲线。
2．土壤脱氢酶活性的测定
（1）培养并显色（此步骤由助教预先完成）。
首先，按下表向四只离心管中分别加入以下物质
然后，将以上四只离心管避光，37℃保温培养12~24h。
（2）培养结束后，用1~5ml可调式移液枪向各管分别加入1ml甲醛终止反应，
再分别加入2ml丙酮震荡并于37℃下水浴保温10min。
（3）离心。
将各离心管置于离心机中，4000r/min离心5min。
（4）测吸光度。
取上清液在485nm波长下测定吸光度A，在标准曲线上查出相应的TTC浓度。
3．土壤脱氢酶活性计算。
脱氢酶活性=ABC
式中，A为由标准曲线上查出的TTC浓度（ g/ml）；B为培养时间校正值（h）;C 为比色时稀释倍数（当吸光度值大于0.8时，要适当稀释，使其在0.8以下）四、实验注意事项
1．所有操作尽量在避光条件下进行。
脱氢酶最适反应温度为30~37℃，最适pH 值为7.4~8.5，因此要控制好水浴锅的温度和缓冲液的pH。
2．取用甲醛时要小心，如若沾到皮肤上要迅速用自来水冲洗。
3．加入还原剂连二亚硫酸钠时，要保证各管加入的量几乎相同，防止因加入不同量的还原剂造成差异。
4．离心管经摇晃后会在管壁上沾有土，因此离心后取上清液测吸光度时，可用吸管吸取上清液到比色皿中，避免吸入土壤颗粒。
5．用过的比色皿如果内壁沾有颜色而难以清洗，可用硝酸浸泡。
五、思考与讨论
影响脱氢酶活性的因素有哪些？
答：1.反应终止剂的选择：本实验用甲醛作为终止剂，因其能抑制酶活性而使反应终止。
但终止剂不止甲醛一种，例如浓硫酸也可作终止剂。
但加入浓硫酸会使培养液褪色，背景值增大，且可能长时间会发生茶色反应，影响吸光度的测定。
2.萃取剂的影响：比起其它萃取剂，丙酮的萃取效果较好，吸光度大，与水互溶，不会发生液液分层现象，TF会均匀分布在水与萃取剂的混合液中。
3.TTC浓度的影响：TTC浓度影响很大，浓度上升时，TF的产量也增大。
但从已有研究来看，当TTC浓度过大时，TF产量会下降。
过高的TTC浓度不仅不会促进TTC还原反应，反而会抑制酶活性，使反应终止。
4.温度和pH的影响：反应的最适温度为30~37℃，最适pH为7.4~8.5，温度较低或较高都会使酶活性受到抑制。
5.培养时间的影响：根据酶活性的测定原则，培养时间应尽量短些，以避免因基质浓度下降、产物的形成以及酶本身的变性所带来的不良影响。
但培养时间过短会使得酶促反应可生成的被检测物质的量太少，难以定量检测，因此应选择合适的培养时间。
六、实验前准备工作
1．土样的采集和预处理
（1）本实验所用土壤采自大港。
（2）土壤采集后，通过风干、磨碎、过筛、混合、分装，制成满足分析要求的土壤样品。
2．器皿的清洗和溶液的配制（溶液的配制量要根据实验人数计算，避免不够和浪费）
（1）配制500ml pH 为7.6的0.5mol/l的Tris-HCl缓冲溶液：称取Tris（三羟甲基氨基甲烷，分子量121.4）30.285g溶于蒸馏水，加入1N的HCl 210ml，定容至500ml。
（2）配制100ml 0.4%的TTC溶液：称取0.4gTTC溶于0.5ml Tris-HCl缓冲溶液中，用蒸馏水定容至100ml。
（注：TTC即氯化三苯基四氮唑，又称红四唑）（3）配制500ml 0.36%的Na2SO3溶液：称取1.8gNa2SO3溶于蒸馏水，定容至500ml。
3.提前12~24h培养土样。
2011.12.20。