热休克蛋白70减轻帕金森病细胞模型中α 突触核蛋白毒性的作用
热休克蛋白70减轻帕金森病细胞模型中α突触核蛋白毒性的作用
热休克蛋白70减轻帕金森病细胞模型中α-突触核蛋白毒性的作用【摘要】目的探讨HSP70在因α-突触核蛋白过表达或突变所致的帕金森病(PD)细胞模型中的作用及其机制。
方法构建过表达野生型和PD相关突变型(A53T)α-突触核蛋白质粒，转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞后得PD细胞模型;然后在细胞模型中转染表达HSP70的质粒。
采用免疫印迹检测转染HSP70细胞模型中α-突触核蛋白表达量的改变;采用MTT法检测转染HSP70后细胞模型活力的变化。
结果转染HSP70后，细胞模型α-突触核蛋白表达减少，细胞活性增加。
结论HSP70通过降低α-突触核蛋白表达水平对PD细胞模型发挥保护作用。
【关键词】α-突触核蛋白;热休克蛋白70;过表达α-突触核蛋白是一种在中枢神经系统突触前表达的可溶性蛋白,具有调节膜稳定性和神经可塑性等生理功能。
近年研究发现，α-突触核蛋白基因过表达或突变可引起α-突触核蛋白的错误折叠、有毒蛋白寡聚体和多聚体的形成，使其结构和功能障碍，从而启动一系列级联反应致多巴胺能系统损伤，最终导致帕金森病(PD)。
研究认为神经保护剂可能是治疗PD的一个新的有效途径，而热休克蛋白70(HSP70)就是其中之一。
HSP70是分子伴侣家族中的一员,作为一种重要的应激蛋白,能与错误折叠的蛋白相互作用，阻止聚集物的形成;除此之外，HSP70还有助于错误折叠蛋白的降解〔1，2〕。
在果蝇及酵母的PD模型中发现，HSP70能减轻α-突触核蛋白的毒性及其引起的神经细胞凋亡〔3，4〕,而HSP70抑制α-突触核蛋白毒性可能与其能够与α-突触核蛋白相互作用，阻止α-突触核蛋白纤维样聚集，降低α-突触核蛋白表达量有关〔5，6〕。
为进一步证实HSP70在α-突触核蛋白所致PD 的作用，本实验首次在神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)PD模型中检测了HSP70的作用及机制，发现HSP70可以通过降低α-突触核蛋白水平发挥对PD细胞模型的保护作用。
帕金森病相关基因异常诱导自噬障碍
帕金森病相关基因异常诱导自噬障碍李佳昱;于兰;陈敏【摘要】帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种常见的多因素和基因异质性神经退行性疾病.自噬是进化上高度保守的细胞代谢途径,具有细胞保护作用.最近的研究表明自噬与PD密切相关,α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)、PINK1和Parkin 等PD相关基因编码的蛋白都可以参与自噬的调控,被认为与PD的发病机制相关.本文阐述了几种重要PD相关基因在自噬途径中的作用,为PD发生发展并最终靶向PD治疗的研究提供新线索.【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2019(040)010【总页数】5页(P1351-1355)【关键词】帕金森病;自噬;α-突触核蛋白;PINK1;Parkin【作者】李佳昱;于兰;陈敏【作者单位】桂林医学院基础医学院广西桂林541001;桂林医学院人体解剖学教研室广西桂林541001;桂林医学院附属医院科研科广西桂林541001【正文语种】中文【中图分类】R742.5;Q753帕金森病(Parkinson′s disease，PD)是一种年龄相关的慢性神经退行性疾病[1]，具有以动作迟缓、静止性震颤等运动症状为主的临床表现。
过去PD被认为是一种完全特发性疾病，但近20年的研究表明遗传学对该疾病也有重大贡献，所有PD病例中估计有15%是家族性的[2]。
尽管PD的发病机制复杂，但目前公认的氧化还原失衡、线粒体功能损伤、受损蛋白质稳态异常，甚至是家族性PD的相关致病基因突变，都被证实涉及自噬相关途径障碍[3-4]。
类似地，越来越多的证据表明，自噬对神经元存活至关重要，其失调导致神经变性[5]。
1 自噬途径与PD1.1 自噬溶酶体途径(autophagy-lysosome pathway，ALP)的分子机制泛素蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system，UPS)和ALP是机体正常生理状况下修复或消除异常蛋白质的两种最主要的途径[6]。
α-突触核蛋白在帕金森病中的作用
α-突触核蛋白在帕金森病中的作用翟骁;段国礼;沈下贤;陈晓【摘要】帕金森病(PD)患者的路易小体中存在大量α-突触核蛋白寡聚体.目前认为,寡聚体的形成和增多与氧化应激损伤及氧化修饰息息相关.氧化修饰包括硝化修饰和多巴胺氧化加合.α-突触核蛋白作为分子标志物,可能成为临床治疗帕金森病的新途径.%Alpha-synuclein oligomers are the main composition of the Lewy body in patients with Parkinson's disease , they may be associated with oxidative stress damage and oxidative modification. The oxidative modifications include nitrative modification and dopamine oxidative adduction. Serving as a biomarker, a-synuclein may become a new target for clinical treatment.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2012(032)012【总页数】3页(P1481-1483)【关键词】α-突触核蛋白;氧化应激;氧化修饰;帕金森病【作者】翟骁;段国礼;沈下贤;陈晓【作者单位】第二军医大学研究生管理大队,上海200433;第二军医大学研究生管理大队,上海200433;第二军医大学研究生管理大队,上海200433;第二军医大学研究生管理大队,上海200433【正文语种】中文【中图分类】R742.5Abstract:Alpha-synuclein oligomers are the main composition of the Lewy body in patients with Parkinson's disease，they may be associated with oxidative stress damage and oxidative modification．The oxidative modifications include nitrative modification and dopamine oxidative adduction．Serving as a biomarker，α-synuclein may become a new target for clinical treatment．Key words:α-synuclein;oxidative stress;oxidative modification;Parkinson's disease帕金森病(Parkinson's disease，PD)是常见神经退行性疾病。
热休克蛋白70与临床相关性疾病的研究进展
虫国塞旦医型；Q!!生!旦筮!!鲞箍j塑堡塾i望笪!』!旦塑型照!望!垡!!!丛!堂堕些丛翌：!Q!!：y!!：!!：堕!：i热休克蛋白70与临床相关性疾病的研究进展陶伍元张文武热休克蛋白是1962年发现的一种机体在各种应激因素刺激下产生的一种特殊蛋白，保护细胞免受有害刺激造成的损伤，具有多种生物学功能，在热休克蛋白家族中研究较多的是热休克蛋白70(H eat s hock pr ot e i nTO，H S P70)。
近年来研究发现H SP70与呼吸、血液、神经、自身免疫系统等疾病密切相关，具有重要的基础研究和临床应用前景。
结合相关文献对H SP70与临床相关性疾病的研究进展做如下综述。
1热休克蛋白(H SP)概述自1962年H SP被首次发现以来，目前不同类型的H SP已被证实。
H SP是一组分子量为8～110K D a的蛋白家族，按其分子量大小可分为H SP27、H SP32、H SP47、H SP60、H SP70、H S P90、H SP110。
H SP70是细胞含量最丰富的一类H SP家族，它分为组成性(cons t i t uen t)的热休克蛋白70(H SC73)和诱导性(i nduced)热休克蛋白70(H SP72)。
H SP是生物体在各种应激因素，如炎症、创伤、手术、休克、缺血再灌注等的作用下产生的一组特殊蛋白质，它能保护细胞免受各种有害刺激所造成的损伤，促进受损细胞的自身修复，且具有多种生物学功能，帮助蛋白质折叠、装配、跨膜转运、稳定和再折叠细胞受损蛋白，具有抗炎症、抗氧化及抗凋亡作用…。
2热休克蛋白70与临床相关性疾病2．1呼吸系统疾病：急性肺损伤(acut e l un g i nj ur y，A LI)是机体在感染、创伤、休克、缺血～再灌注等致病因素刺激下激活机体单核巨噬细胞系统，导致炎症介质：核因子一kB(nucl ear fa c—t or—K B，N F—K B)、肿瘤坏死因子(t um or necr os i s f act o r—al pha，TN F一0【)、白细胞介素一6(i nt er l euki n一6，I L一6)、细胞问粘附分子(i nt er ce l l ul ar ad hes i o n m ol ecul e，I C A M)等的释放，在炎症细胞的共同参与下，呈级联放大的瀑布样炎性反应，造成肺血管内皮细胞、肺上皮细胞受损及肺泡毛细血管膜通透性增加，引起肺间质和肺泡水肿，最终可导致通气／血流比例严重失调引起低氧血症，严重者可导致急性呼吸窘迫综合征和多器官功能衰竭。
α-突触核蛋白与帕金森病
α－突触核蛋白与帕金森病<a rel='nofollow' onclick="doyoo.util.openChat();return false;"href="#">【摘要】α-突触核蛋白是一种中枢神经系统突触前表达的可溶性蛋白，与帕金森病的发病有密切的关系。
α-突触核蛋白在各种生理，环境因素的影响下异常表达和聚集，通过一系列的氧化应激等生化反应，产生了对神经元的毒性作用，从而参与了帕金森病的发生。
对α-突触核蛋白的化学性质，聚集的机制及其影响因素的了解与研究，将会十分有利于帕金森病的预防和治疗。
【关键词】α-突触核蛋白；帕金森病；路易小体Alpha - synapse nucleoalbumin and Parkinson sicknessZHANGYanchaoZHANGNanDIAO Jianping【Abstract】Alpha - the synapse nucleoalbumin is thesoluble protein which one kind of central nervous system synapse, expresses, gets sick the morbidity with Parkinson to have the close relationship. Alpha - the synapse nucleoalbumin in each physiology, under environmental factor's influence exceptionally expresses and gathers, through biochemistry and so on a series of oxidized stress responded, has produced to neuron's toxic effect, thus participated in the occurrence which Parkinson gets sick. To Alpha - the synapse nucleoalbumin's chemical property, the accumulation mechanism and influencing factor's understanding and the research, will be very advantageous the prevention which and the treatment will get sick in Parkinson.【Key words】Alpha - synapse nucleoalbumin; Parkinson sickness; Louis minute帕金森病是一种中老年人常见的运动障碍疾病，以黑质多巴胺能神经元变性缺失和路易小体形成为病理特征，临床上表现为静止性震颤，运动迟缓，肌强直和姿势步态异常等。
癫痫患儿血清α-突触核蛋白和热休克蛋白70的表达及临床意义
组,而癫痫1组、癫痫2组的 C-WISC 评分低于癫痫3组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson线 性 相 关 分
析显示,血清α-Syn、HSP70水平与 C-WISC 评分呈 负 相 关,而 与 P300 潜 伏 期 及 血 清IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α
水平呈正相关(P<0.05)。结论 与健康儿童相比,癫痫患儿血清α-Syn、HSP70水平明显增高,二者水平变化
摘 要:目的 探讨癫痫患儿血清α-突触核蛋白(α-Syn)、热休克蛋白70(HSP70)的变化,分析二者与认知
功能、事件相关电位、血清炎症细胞因子的关系。方法 选取该院 2016 年 8 月至 2019 年 8 月收治的癫痫患儿
105例作为癫痫组,根据癫痫类型进一步分为癫痫1组(癫痫频发)、癫 痫 2 组(癫 痫 持 续 状 态)、癫 痫 3 组(非 频
热休克蛋白70对细胞凋亡调控的研究进展分析
热休克蛋白70对细胞凋亡调控的研究进展分析马广鹏【摘要】细胞凋亡是与机体组织自我稳定机制有关的主动的程序性死亡,是细胞在一定生理和病理条件下遵循自身程序的生理性死亡.热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)是广泛存在于原核和真核细胞中的一组结构上高度保守的多肽,HSP 70家族因具有分子伴侣、细胞保护、抗细胞凋亡、抗氧化以及参与免疫应答等多种重要生理功能而成为研究热点.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2011(033)010【总页数】4页(P827-830)【作者】马广鹏【作者单位】科技部中国农村技术开发中心,北京100045【正文语种】中文【中图分类】S852.61细胞凋亡是与机体组织自我稳定机制有关的主动的程序性死亡，是细胞在一定生理和病理条件下遵循自身程序的生理性死亡。
热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)是广泛存在于原核和真核细胞中的一组结构上高度保守的多肽，HSP 70家族因具有分子伴侣、细胞保护、抗细胞凋亡、抗氧化以及参与免疫应答等多种重要生理功能而成为研究热点。
HSP是一组在结构上高度保守的多肽，广泛存在于自然界原核、真核细胞中。
根据HSP的相对分子质量，主要的HSP被分成6个家族：大分子量HSP家族、HSP90家族、HSP70家族、HSP60家族、小分子量HSP家族和泛素[1]。
其中HSP70家族是最保守、最重要的一族，在大多数生物中含量最多，由于在应激反应中的敏感性，以及在临床实践中的各种作用而成为研究的热点[2]。
HSP70家族成员众多，它们在进化上高度保守，种属间同源性高，并且在正常细胞内和应激状态下均有表达。
当进入应激状态时，机体通过对HSP70 mRNA的优先翻译和增强其稳定性等调控机制来以适应变化的需要。
HSP70家族具有多种重要的功能，业已证明其在充当分子伴侣、细胞保护、抗细胞凋亡、抗氧化以及在免疫应答中都发挥着重要作用[3-7]。
帕金森病或因免疫系统“犯糊涂”
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帕金森病或因免疫系统“犯糊涂”
作者：
来源：《恋爱婚姻家庭·养生版》2017年第09期
帕金森病患者脑部一种名为α-突触核蛋白的蛋白质会异常积聚，导致附近分泌多巴胺的神经元死亡。
医学界曾认为，α-突触核蛋白会“毒死”神经元，破坏神经系统的信号传导，导致帕金森病。
但事实上，这种蛋白质也许并不直接杀死神经元，而是诱导患者自身的免疫系统把神经元当成异物去攻击。
美国哥伦比亚大学等机构的研究人员分别提取帕金森病患者和健康人的血样，与神经元分泌的一些蛋白质碎片混合，然后对比两者的免疫反应。
结果发现，健康人的血液对这些蛋白质碎片反应很小，而帕金森病患者血液里的T细胞则对α-突触核蛋白的碎片產生了强烈的免疫
反应。
这表明，患者的免疫系统对α-突触核蛋白有“记忆”，也就是说曾经接触并攻击过这种蛋白质及其附近的神经元。
研究人员计划在接下来的实验中阻断上述免疫反应，观察这一做法能否遏制病情发展。
热休克蛋白70抗肿瘤免疫的研究
热休克蛋白70抗肿瘤免疫的研究王顺利;杨耀琴【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2006(027)0z1【摘要】热休克蛋白（heat shock proteins，Hsps）也称为应激蛋白（stress proteions）是一类高度保守的广泛存在于原核和真核生物中的蛋白质，它参与多种胞内蛋白的折叠、装配及转运。
近年研究发现，Hsps在诱导抗肿瘤免疫中发挥着独特的作用。
从肿瘤组织中获得的Hsps事实上以非共价键方式与不同的肿瘤抗原肽（肿瘤排斥抗原）结合，形成多种Hsps一多肽复合物，具有肿瘤特异的免疫原性，Hsps中以Hsp70，gp96作用最强。
Hsps携带的抗原肽指令庞大，可以结合所有肿瘤抗原成分，活化多个CTL克隆，无需免疫佐剂即可激发有效、持续的抗肿瘤免疫效应，这对克服肿瘤的异质性、对抗肿瘤逃逸和治疗转移癌有明显帮助，也为肿瘤免疫治疗开辟了一条新途径。
Hsp70是肿瘤免疫治疗研究中研究得最广泛的热休克蛋白之一。
本文就这方面的研究进展作一综述。
【总页数】4页(P18-21)【作者】王顺利;杨耀琴【作者单位】同济大学医学院肿瘤细胞研究室,上海,200092;同济大学医学院肿瘤细胞研究室,上海,200092【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.肺癌热休克蛋白70-多肽复合物的抗肿瘤免疫效应研究及其与热证的相关性 [J], 王洪琦;胡晨霞;胡玲;申维玺;赵健;祁岩超;韩霞;李建国;张正2.热休克蛋白70的抗肿瘤免疫效应研究 [J], 孟凡东;傅庆国;郭克建;郭仁宣3.热休克蛋白在肝细胞癌形成、增殖、复发、转移及抗肿瘤免疫中的作用研究 [J], 吴嘉仪;李高鹏;罗葆明4.热休克蛋白70抗肿瘤免疫的研究进展 [J], 黄丽5.热休克蛋白gp96抗肿瘤免疫的研究进展 [J], 岳培彬;杨树德;黄常志因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
帕金森病患者血浆增强α-突触核蛋白细胞毒性及其机制研究
帕金森病患者血浆增强α-突触核蛋白细胞毒性及其机制研究李杰;谢秀娟;宋炜;潘维花;杨巍巍;于顺【摘要】目的研究帕金森病(Parkinson's disease,PD)患者血浆对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)细胞毒性的影响及其机制.方法将重组人α-Syn加入PD和对照血浆中,采用免疫印迹法及酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法鉴定α-Syn寡聚体和磷酸化形成情况.在原代神经培养基中加入终浓度为5μmol/L的α-Syn单体及寡聚体,同时添加30％(体积分数)PD血浆、正常人血浆和胎牛血浆,孵育14 d后,MTT及流式细胞技术观察细胞死亡情况.酶活力试剂盒检测各组原代神经元中蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)酶活力.结果 PD患者血浆较正常受试者(normal subject,NS)血浆可促使更多的α-Syn 磷酸化和寡聚化.与NS血浆相比,添加到原代神经元培养物中的PD血浆导致更多细胞在细胞外α-Syn存在下死亡,同时伴有PP2A活力降低.结论 PD患者血浆中可能通过降低PP2A酶活力使α-Syn发生磷酸化,导致其聚集并进一步使得原代培养神经元死亡.【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2019(040)002【总页数】7页(P244-250)【关键词】α-突触核蛋白;血浆;帕金森病;原代神经元;磷酸化【作者】李杰;谢秀娟;宋炜;潘维花;杨巍巍;于顺【作者单位】北京市大兴区中西医结合医院神经内科,北京100076;北京市大兴区中西医结合医院神经内科,北京100076;北京市大兴区中西医结合医院神经内科,北京100076;北京市大兴区中西医结合医院神经内科,北京100076;首都医科大学宣武医院神经生物学研究室,北京100053;首都医科大学宣武医院神经生物学研究室,北京100053【正文语种】中文【中图分类】R742帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是继阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)之后的第二大神经系统常见退行性疾病。
α—突触核蛋白与帕金森病相互关系研究进展
α—突触核蛋白与帕金森病相互关系研究进展α-突触核蛋白是一种可溶性小分子蛋白主要在中枢神经系统的突出前末梢表达。
近年来关于α-突触核蛋白和帕金森病等神经退行性病的密切关系被广泛报道越来越多。
在本综述中，详细介绍了α突触核蛋白的构成、生理功能和作用、病理生理、聚合机制等方面的研究进展，从α-突触核蛋白的角度理解帕金森病的发生机制。
标签：α-突触核蛋白；中枢神经系统帕金森病（Parkinson’s Disease，PD）发病率在65岁以上人群中高达1%，神经系统退行性疾病中排在第二位，尤其男性罹患为多[1]。
PD的临床特点集中在严重的运动性症状，包括静止性震颤、肌强直、姿势反射异常以及运动减少[2-3]。
这些症状障碍可以与自主神经功能障碍、抑郁障碍、痴呆等其他神经精神功能障碍伴发[4]。
病理学上PD特点为黑质致密部多巴胺神经元显著的退行性变，导致纹状体投射区或脑干多巴胺神经元投射的减少以及一系列运动皮质系统有关的运动功能障碍。
这一神经退行性变伴随着存活多巴胺神经元和受累神经细胞胞浆和突触中路易小体的表现，但具体机制目前尚不清楚[5]。
尽管许多研究者试图阐明选择性多巴胺神经退化的机制，但PD仍是一种病理研究不明的散发性神经退行性疾病。
基因和环境危险因素目前收到广泛的关注，但神经退行过程的始动因素目前仍不清楚[6]。
基于目前研究，迟发型原发性PD是由于复杂的多重易感基因和环境因素引起的。
此外，若干PD单基因家族类型以發病早和显性或隐性以遗传染色体病为特征。
在众多与PD可能的基因中，四种PD有关的突变包括α-synuclein[7]、parkin[8]、泛素羧基末端水解酶（ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L-1）[9]和DJ-1[10]。
尽管伴有特殊基因缺陷的家族性PD患者只占所有发病人群的一小部分，但对这些病例的研究可以有助于我们发现造成多因素散发性PD的核心蛋白通路。
病理性A-突触核蛋白与帕金森病的相关性进展
病理性 A-突触核蛋白与帕金森病的相关性进展作者简介：华蔚（1994-）女（汉族），硕士研究生在读，神经病学专业，主要研究帕金森病及脑血管认知功能障碍。
【摘要】自从发现帕金森病(PD)患者大脑中的路易体和路易体神经突中存在a-突触核蛋白(alpha-Syn，a-syn)以来，神经科学家们就已经对病理性A-突触核蛋白在帕金森病的发病机理中起到的作用进行了深入的研究和探索，a-突触核蛋白是中枢神经系统突触前可溶性蛋白，具有3个特征性的结构区域。
在生理条件下，α-突触核蛋白具有修复DNA双链的功能。
病理条件下，α-突触核蛋白被转换成有毒的纤维低聚物。
病理性的a-突触核蛋白可通过激活腺苷二磷酸核糖聚合酶1、胶质细胞促炎症反应、与分子伴侣蛋白、胃肠迷走神经相互作用与帕金森病产生关联，本文就近些年来国内外对有关病理性A-突触核蛋白引起帕金森病神经元变性的研究进行深入了解并展开，可为临床治疗帕金森病提供新的线索。
【关键词】a-突触核蛋白、帕金森病、神经元变性机制Mechanism of pathological A-synuclein in the degeneration ofneurons in Parkinson's diseaseHUA Wei1(1. Guangxi Medical University, Nanning 530000;)abstract: Since the discovery of alpha-synuclein (a-syn) in Lewy bodies and Lewy body neurites in the brains of patients with Parkinson's disease (PD), neuroscientists have intensively studied and explored the role of pathological A-synuclein in the pathogenesis of Parkinson's disease, which is a presynaptic soluble protein in thecentral nervous system with three characteristic structural regions. Under physiological conditions, a-synuclein has the function ofrepairing DNA duplexes. Under pathological conditions, a-synuclein is converted into toxic fiber oligomers. Pathological a-synuclein can be associated with Parkinson's disease by activating adenosinediphosphate-ribose polymerase 1, glial proinflammatory response, interaction with molecular chaperones and gastrointestinal vagus nerve. In this paper, the research on neuronal degeneration of Parkinson's disease caused by pathological A-synuclein at home and abroad inrecent years is deeply understood and carried out, providing a new direction for the clinical treatment of Parkinson's disease.Keywords：a-synuclein, Parkinson's disease, neuronal degeneration mechanism帕金森病(PD)是神经系统中发病率排名第二、与年龄相关的退行性疾病[1-2]。
热休克蛋白70在帕金森症患者外周血单核细胞中的表达及意义
热休克蛋白70在帕金森症患者外周血单核细胞中的表达及意义陈丽成【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2014(024)022【摘要】目的探讨PD患者外周血细胞中监测CMA活性的生物标志物.方法 53例散发性PD患者和53名正常人纳入该次研究.检测PD患者和正常人外周血单核细胞中HSC70,lamp2A和MEF2D表达情况.蛋白和基因表达水平分别由Western blot和real-time PCR检测.结果在基础状态下或血清剥脱引起的自噬状态下,PD患者外周血单核细胞HSC70表达显著下降.lamp2A和MEF2D在PD 患者和健康人群中表达无差异.HSC70,lamp2A和MEF2D表达对PD患者临床特征无影响.结论 HSC70在PD患者外周血单核细胞中表达显著下降.【总页数】5页(P38-42)【作者】陈丽成【作者单位】山东临沂市人民医院神经内科,山东临沂276000【正文语种】中文【中图分类】R742.5【相关文献】1.肺结核患者血浆中热休克蛋白70的表达及意义 [J], 李佺;张炎林;张和武2.热休克蛋白70在合并C型人格特征抑郁的乙肝相关性肝癌患者中的表达及临床意义 [J], 向骁;李秋琴;谢蓉蔚;赵凌云;游雪梅;黎乐群;王言焱;齐鲁楠;覃宏贵;赵新华;唐娟;钟鉴宏;向邦德;吴飞翔3.血清热休克蛋白70在突发性聋患者血清中的表达及意义 [J], 马丽华;刘萱;卢满存;刘雅静4.热休克蛋白70和热休克蛋白90α 在甲状腺乳头状癌中的表达及其意义 [J], 孙春婷;杨俊芬;余勤;张会娟5.热休克蛋白70和热休克蛋白27在宫颈鳞癌中的表达及其意义 [J], 郭云鸿;田晓予;米建强;熊丽丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
热休克蛋白70在阿尔茨海默病模型中的研究进展
·综述与讲座·热休克蛋白７０在阿尔茨海默病模型中的研究进展谢启杨（扬州大学医学院，江苏扬州２２５０００）摘要：阿尔茨海默病（ＡＤ）是一种神经退行性疾病，以认知功能缺陷为特征，尚无根治手段，给公众健康造成严重的威胁。
ＡＤ是由错误折叠的蛋白质在大脑中聚集引起，导致神经元损伤，从而引起一系列神经系统的障碍，故又称为“蛋白质错误折叠疾病”。
热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）是一种分子伴侣，可以修正错误折叠蛋白并抑制其聚集，促进其清除。
此外ＨＳＰ７０还有抗细胞凋亡，抗氧化应激，减轻神经炎症等特性，在治疗ＡＤ中有较好的前景。
大量体内外实验表明过表达ＨＳＰ７０可以缓解ＡＤ的进展，在预防和治疗“蛋白质错误折叠病”发挥着重要作用。
以ＨＳＰ７０为靶向治疗ＡＥ已受到许多学者关注，本文主要综述了ＨＳＰ７０在ＡＤ中的研究进展。
关键词：阿尔茨海默病；热休克蛋白７０；β淀粉样蛋白；ｔａｕ蛋白；神经炎症；蛋白质构象中图分类号：Ｒ９６５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６ ３７６５（２０２０） ０７ ０００１ ０４作者简介：谢启杨，男（１９９９－）。
毕业于扬州大学医学院。
从事专业：临床医学。
ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｆＨｅａｔＳｈｏｃｋＰｒｏｔｅｉｎ７０ｉｎｔｈｅＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＡｌｚｈｅｉ ｍｅｒ′ｓＤｉｓｅａｓｅＸＩＥＱｉ ｙａｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ２５５０００，Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓｄｉｓｅａｓｅ（ＡＤ）ｉｓａｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅｔｈａｔｃａｎｎｏｔｂｅｃｕｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｐｒｏｇｒｅｓｓａｎｄｉｓａｃｏｍｍｏｎｃａｕｓｅｏｆｈｕｍａｎｄｅａｔｈ ＡＤｉｓａｌｓｏｃａｌｌｅｄ“ｐｒｏｔｅｉｎｍｉｓｆｏｌｄｉｎｇｄｉｓｅａｓｅ”ｂｅｃａｕｓｅｍｉｓｆｏｌｄｅｄｐｒｏ ｔｅｉｎｓｇａｔｈｅｒｉｎｇｉｎｔｈｅｂｒａｉｎ，ｃａｕｓｉｎｇｎｅｕｒｏｎａｌｅａｍａｇｅａｎｄａｓｅｒｉｅｓｏｆｍｅｍｏｒｙａｎｄｃｏｇｎｉｔｉｏｎｄｅｆｅｃｔｓ Ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏ ｔｅｉｎ７０（ＨＳＰ７０）ｉｓａｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｐｅｒｏｎｅ，ｗｈｉｃｈｈａｓａｔｔｒａｃｔｅｄｅｘｔｅｎｓｉｖｅａｔｔｅｎｔｉｏｎｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ Ｉｔｈａｓｔｈｅｃｈａｒａｃ ｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｃｏｒｒｅｃｔｉｎｇｍｉｓｆｏｌｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｉｔｓａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ，ｐｒｏｍｏｔｉｎｇｉｔｓｃｌｅａｒａｎｃｅ，ｒｅｓｉｓｔｉｎｇｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ｒｅｄｕｃｉｎｇｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｅｔｃ ＩｔｈａｓａｇｏｏｄｐｒｏｓｐｅｃｔｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＡＤ ＡｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｉｎｖｉｖｏａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＳＰ７０ｃａｎａｌｌｅｖｉａｔｅｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆＡＤａｎｄｐｌａｙｓａｎｉｒｒｅ ｐｌａｃｅａｂｌｅｒｏｌｅｉｎｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇａｎｄｔｒｅａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｍｉｓｆｏｌｄｉｎｇ Ｍａｎｙｓｃｈｏｌａｒｓｈａｖｅｐａｉｄａｔｔｅｎｔｉｏｎｔｏｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｔａｒｇｅ ｔｉｎｇＨＳＰ７０ ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｍａｉｎｌｙｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆＨＳＰ７０ｉｎＡＤ ＫＥＹＷＯＲＤＳ：ＡｌｚｈｅｉｍｅｒＤｉｓｅａｓｅ；ＨＳＰ７０Ｈｅａｔ ＳｈｏｃｋＰｒｏｔｅｉｎｓ；Ａｍｙｌｏｉｄｂｅｔａ ｐｒｏｔｅｉｎ；ＴａｕＰｒｏｔｅｉｎｓ；ＮｅｕｒｏｇｅｎｉｃＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ；ＰｒｏｔｅｉｎＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ 全球老龄化趋势导致阿尔茨海默病的发病率逐年上升，这将会给家庭和社会带来了巨大的压力〔１〕。
热休克蛋白在抗突变和打击中的作用研究
热休克蛋白在抗突变和打击中的作用研究生命体在面对环境变化和压力时，通常会通过一定的适应机制来保持稳定状态，其中热休克蛋白(HSPs)作为一种重要的分子担负着调节细胞稳定性的重要任务。
热休克蛋白是最早发现的适应性保护蛋白，是一类可以在高温、缺氧、低营养等环境压力下表达的蛋白质家族。
本文将围绕热休克蛋白在抗突变和打击中的作用展开论述。
1. 热休克蛋白的特点和分类热休克蛋白属于分子重量为10-150 kDa蛋白家族。
根据其分子重量和功能特点可分为HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40等多个子类。
这些蛋白在细胞内有着不同的分布和功能，在抵御不同的压力和环境中具有不同的调节作用。
2. 热休克蛋白的表达调节机制热休克蛋白的表达受到多种因素的调控，其中热休克因子1(HSF1)是最为重要的调节因子。
HSF1的激活主要受到细胞内蛋白质异常积累或严重DNA损伤等压力的刺激。
HSF1的激活可以促进HSP家族蛋白的表达，并提高细胞对压力的抵御能力。
3. 热休克蛋白在抗癌中的作用研究表明，热休克蛋白在抗癌中发挥着重要的作用。
现阶段最常用的肿瘤治疗手段之一就是放疗和化疗。
但是这两种治疗方案都会带来一定程度上的细胞损伤。
热休克蛋白在这种情况下可以协同作用并发挥细胞保护的作用。
此外，由于热休克蛋白家族在肿瘤中表达量往往较高，因此一些研究人员提出利用热休克蛋白的表达特点，把其当作肿瘤靶向治疗的物质对象。
4. 热休克蛋白在大气污染中的作用大气污染是目前全球环境污染的主要问题。
研究表明，热休克蛋白在大气污染中也发挥着重要作用。
实验表明，空气中多种气体和颗粒物质都会直接或间接地影响热休克蛋白的表达和调节，从而加剧细胞受到污染物与抗氧化的挑战。
因此，研究热休克蛋白在大气污染中的作用不仅可以为预防治疗某些疾病提供新的途径，也可以为环境改善提供新的思路。
5. 热休克蛋白在场地污染中的作用场地污染也是一个被高度关注的问题。
帕金森病前驱期α-突触核蛋白生物标志物的研究进展
帕金森病前驱期α-突触核蛋白生物标志物的研究进展
张亚珂;王顺;王玉琳;白妍
【期刊名称】《中国实用神经疾病杂志》
【年(卷),期】2024(27)4
【摘要】帕金森病(PD)是最常见的神经退行性疾病之一,临床诊断的PD患者已出
现实质性、不可逆的神经退行性病变,临床上通过多巴胺能药物对症治疗并不能阻
止疾病进展和降低致残率。
近年来,帕金森病研究关口前移,众多研究在其前驱期探
索神经保护疗法,以期延缓与阻止疾病进展。
在此类型研究中,如何大范围准确筛选、检测、识别PD前驱期患者是目前所面临的难题。
α-突触核蛋白是PD的标志性蛋白,本文以α-突触核蛋白为切入点,阐述其在PD发病过程中的重要理论地位,整合近年来已报道的PD前驱期患者脑脊液、组织、粪便中α-突触核蛋白的检测特异性,
整理各研究所采用的检测方法及其优缺点,为临床进一步探索该标志物提供参考。
【总页数】4页(P519-522)
【作者】张亚珂;王顺;王玉琳;白妍
【作者单位】黑龙江中医药大学;黑龙江中医药大学附属第二医院;黑龙江省中医药
科学院
【正文语种】中文
【中图分类】R742.5
【相关文献】
1.红细胞α-突触核蛋白寡聚体作为帕金森病生物学标记物研究
2.α-突触核蛋白聚集作为帕金森病生物学标记物的研究进展
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4.揭示α-突触核蛋白与帕金森病的关系:α-突触核蛋白单克隆抗体的研究
5.红细胞来源α-突触核蛋白作为早发型帕金森病生物标记物的研究
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α-突触核蛋白转运与帕金森病关系的研究进展
α-突触核蛋白转运与帕金森病关系的研究进展庄镇裕;叶梓良;林楚曼;谢惠芳【摘要】帕金森病是一种常见缓慢进行性发展的神经系统变性疾病,最终导致患者出现多方面运动功能障碍,严重影响患者自理能力与生活质量.目前研究表明,神经细胞路易小体和神经突触内聚合的α-突触核蛋白(α-Syn)是帕金森病中大脑病变的标志,且已发现路易小体病变同时存在于帕金森病的外周神经系统.干扰路易小体形成已经成为帕金森病治疗的新热点.因路易小体的形成与α-Syn在脑细胞和血脑屏障中的转运有着重要联系,本文就α-Syn在脑细胞和血脑屏障的转运机制与α-Syn寡聚体形成及帕金森病发展的相关关系做一综述.【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2018(034)023【总页数】3页(P4008-4010)【关键词】α-突触核蛋白;帕金森病;路易小体;蛋白转运【作者】庄镇裕;叶梓良;林楚曼;谢惠芳【作者单位】南方医科大学珠江医院广州510282;南方医科大学珠江医院广州510282;南方医科大学珠江医院广州510282;南方医科大学珠江医院广州510282【正文语种】中文帕金森病是一种常见的神经退行性疾病，具有缓慢进行性发展的特点，其发病率仅次于阿尔茨海默病，临床上表现为行动迟缓、静止性麻痹、肌强直和姿势步态异常等运动障碍。
不同患者疾病进展速度不同，早期患者通过药物治疗多可控制症状，疾病晚期患者对药物反应差，不能有效控制疾病进展，出现肌强直等运动功能障碍，生活自理受到限制，长期卧床，最终死于肺炎、延髓麻痹、脑血管疾病等。
对于帕金森病病因的探究，目前认为是由于中脑黑质多巴胺能神经元缺失及出现路易小体所导致，其中α-突触核蛋白（α-synclein，α-Syn）异常聚集与路易小体及帕金森病的发生发展密切相关，对于α-Syn在脑组织中的平衡调节转运机制及导致异常聚集的机制尚未清楚，本文就α-Syn在脑组织中的转运与α-Syn寡聚体形成在帕金森病发展中所起的作用做一综述。
α-突触核蛋白与帕金森病
患者确诊为急性 淋巴细胞 性 Ｌ ２型 白血病 后 ， 患者无法接受 ， 不吃、 不喝 、 不说话 ， 目光呆滞 。我 们在做护理 时总是面带 微 笑 ， 常细心的帮助整理 床被 及凌 乱 的书籍 ， 她感 兴趣 的 非 找 话题 与她交谈 ， 并把她转 到 家化病 房 ， 里有 客厅 、 病房 、 那 有 有 电视又与普通病人相对 隔离 。便 于护理 临终病人 ， 也便 于 家 属的探视 。我 们针 对病人 的 心理状 态 ， 自己的言 语 、 用 表 情 、 为去 影响 或改 变病 人 的感 受 和认 识 ， 轻 她 的痛 苦 。 行 减 帮 助其建立最佳 的心理状 态 以利于 治疗 的顺 利进 行。护 理 人员 要真正理解 临终病人 的心理 ， 以真挚 、 慈爱 、 亲切的态度 和语 言对待之 。要宽 容大度 ， 足她 合理 的要 求 ， 始 终 满 使她 得到精 神上 的安抚 。我们把 患者转到家化病 房 ， 是让 她不觉 得生 活角色 的改 变 心理 上感 到像 是 在 家一 样 的温 暖 与 和 谐， 因为病人 神志清楚 ， 以护 理人员应格 外注意尊重 她” 。 所 』 ２ ２ 中期 的身心护理 ： ． 掌握患 者心理发展 的规律 ， 针对性 有 地实 施心理护理 。病情 确诊后 ， 化疗 药物 的应 用 ， 使患 者产 生严重 的不适感 ， 出现恶 心 ， 繁地 呕 吐现 象 。此 时我 们及 频 时调 整化疗 的滴速及 间隔 时间 ， 提前 应用 保护 胃黏膜 、 解痉 止吐药 。及时清理污染 的被 服 ， 协助病 人漱 口、 清洗 面部 ， 保 持洁净 、 干燥 、 整齐。随着 化疗 药物 的应 用 ， 者头 发脱 落 ， 患 我们及时 给患者清理掉 下来 的长发 ， 上 漂亮 的帽 子 ， 加 戴 增 病人 的舒适感 。手拉手 的跟她 交谈 ， 她 的学生 ， 她 的孩 谈 谈 子 ， 她所 有值得 自豪 的感兴趣 的事 。观察 掌握患者疼 痛 的 谈 规律 ， 按时 应用强效止痛药 ， 尽量减轻患 者的痛苦 ， 增强 她活 下去 的勇气 ， 打断 因痛 苦不堪 而轻 身 的念 头 ， 高患 者 的生 提 存 质量 ， 少不 良刺激 。我们 的一切 操作 力 求轻 柔 ， 减 态度 和 谐 ， 言温柔 ， 室随时保 持空气 清新 。化 疗后 因粒 细胞 缺 语 病 乏要 做好保护性 隔离 ， 防止外源性感 染 ， 以 ， 日按时做 好 所 每 病室 内空 气消毒 ， 出人员要穿 隔离 服 ， 进 不把 病菌带入 病房 。 患者 深深地关心着 亲人 的利益 ， 时 ， 人 家属 的言 行直 接 此 病 影 响到临终病 人是否愿意治疗 ， 是否还 有活下去 的勇气 。因 此， 我们及时做好 家属的思 想工 作 ， 帮助 家属尽 快度 过 悲伤 期， 振作 起来配合 医护人员 护理 好患 者 ， 导 家属 与病 人沟 指 通 ， 除病人的思想顾虑 Ｊ 解 。 ２ ３ 晚期 的身心护理 ： ． 在患 者生命 的晚期 ， 我们 做到细 心观 察病人 的心理变化 ， 帮助病人安然度过 死亡期 。病情进一 步
帕金森病患者血浆和红细胞α-突触核蛋白寡聚体水平及临床意义
帕金森病患者血浆和红细胞α-突触核蛋白寡聚体水平及临床意义梁杨;顾英;李晓红【摘要】目的探讨帕金森病患者外周血浆及红细胞中α-突触核蛋白(α-syn)寡聚体含量对帕金森病诊断以及与病程、疾病严重程度的相关性.方法 2013年3月至2014年12月,采集30例帕金森病患者(患者组)及30例健康体检者(对照组)血液,采用酶联免疫吸附测定法检测血浆及红细胞中α-syn寡聚体含量.结果对照组血浆及红细胞中α-syn寡聚体含量低于患者组(t>2.346,P<0.05);两组红细胞中α-syn 寡聚体含量高于血浆中含量(t>2.242,P<0.05);患者组血浆及红细胞中α-syn寡聚体含量与病程、Hoehn-Yahr分期、帕金森病综合评分量表第3部分评分、帕金森病非运动症状问卷评分、简易精神状态检查评分均无相关性(P>0.05).结论帕金森病患者外周血浆及红细胞中α-syn寡聚体含量有助于帕金森病诊断,但不具有监测疾病进展价值.%Objective To investigate the level of alpha-synuclein (α-syn) oligomers in peripheral blood plasma and red blood cells (RBC) in patients with Parkinson's disease (PD), and the value of it for diagnosis and evaluation of PD. Methods From March, 2013 to De-cember, 2014, peripheral blood samples were collected from 30 PD patients and 30 healthy coutrols, and the level ofα-syn oligomers in plas-ma and RBC was detected with enzyme linked immunosorbent assay. Results The level of α-syn oligomers was less in both plasma and RBC in the controls than in the patients (t>2.346, P<0.05), and was more in RBC than in plasma in both the controls and the patients (t>2.242, P<0.05). The level ofα-syn oligomers of patients did not correlate with their course, Hoehn-YahrStage, the scores of Unified Parkin-son Disease Rating Scale Part 3, Non-Motor Symptom Quest and Mini-Mental State Examinatlon, both in plasma and RBC (P>0.05). Con-clusion The level ofα-syn oligomers in peripheral RBC and plasma may be helpful for diagnosis of PD, but less for the evaluation of the ill-ness.【期刊名称】《中国康复理论与实践》【年(卷),期】2017(023)009【总页数】3页(P1096-1098)【关键词】帕金森病;α-突触核蛋白寡聚体;外周血;血浆;红细胞【作者】梁杨;顾英;李晓红【作者单位】大连市友谊医院,辽宁大连市116000;大连市友谊医院,辽宁大连市116000;大连市友谊医院,辽宁大连市116000【正文语种】中文【中图分类】R742.5帕金森病是中老年人常见退行性疾病之一，我国65岁以上人群总体患病率为1700/10万。
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热休克蛋白70减轻帕金森病细胞模型中a突触核蛋白毒性的作用（作者： _________ 单位：___________ 邮编：___________ ）【摘要】目的探讨HSP70在因a-突触核蛋白过表达或突变所致的帕金森病（PD）细胞模型中的作用及其机制。
方法构建过表达野生型和PD相关突变型（A53T）a-突触核蛋白质粒，转染人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）细胞后得PD细胞模型;然后在细胞模型中转染表达HSP70的质粒。
采用免疫印迹检测转染HSP70细胞模型中a- 突触核蛋白表达量的改变；采用MTT法检测转染HSP70后细胞模型活力的变化。
结果转染HSP70后，细胞模型a-突触核蛋白表达减少，细胞活性增加。
结论HSP70通过降低a-突触核蛋白表达水平对PD 细胞模型发挥保护作用。
【关键词】a-突触核蛋白；热休克蛋白70;过表达a-突触核蛋白是一种在中枢神经系统突触前表达的可溶性蛋白，具有调节膜稳定性和神经可塑性等生理功能。
近年研究发现，a -突触核蛋白基因过表达或突变可引起a -突触核蛋白的错误折叠、有毒蛋白寡聚体和多聚体的形成，使其结构和功能障碍，从而启动一系列级联反应致多巴胺能系统损伤，最终导致帕金森病(PD)。
研究认为神经保护剂可能是治疗PD的一个新的有效途径，而热休克蛋白70(HSP70) 就是其中之一。
HSP70是分子伴侣家族中的一员，作为一种重要的应激蛋白，能与错误折叠的蛋白相互作用，阻止聚集物的形成；除此之外，HSP70还有助于错误折叠蛋白的降解〔1, 2〕。
在果蝇及酵母的PD模型中发现，HSP70能减轻a-突触核蛋白的毒性及其引起的神经细胞凋亡〔3，4〕，而HSP70抑制a-突触核蛋白毒性可能与其能够与a-突触核蛋白相互作用，阻止a -突触核蛋白纤维样聚集，降低a -突触核蛋白表达量有关〔5, 6〕。
为进一步证实HSP70在a-突触核蛋白所致PD的作用，本实验首次在神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)PD模型中检测了HSP70的作用及机制，发现HSP70可以通过降低a -突触核蛋白水平发挥对PD细胞模型的保护作用。
1材料与方法1.1实验材料SH-SY5Y细胞购自ATCC公司;限制性内切酶购自Takara 公司;QIAprep TIP100 Kit 购自QIAGEN 公司;人胎脑cDNA 文库、胎牛血清(FBS)、Lipofectamine2000 购自Invitrogen 公司;蛋白酶抑制剂cocktail 购自Sigma 公司;anti- a-synuclein 204 抗体、anti-beta-actin抗体购自Santa cruz公司;聚偏二氟乙烯(PVDF)膜购自Millipore 公司。
1.2方法1.2.1质粒构建以人胎脑cDNA文库为模板，PCR获得a-突触核蛋白可编码序列(CDS序列)以Not I和Hi nd皿连接到pCDNA3.1真核表达载体中，通过overlap PCR方法，构建A53T突变体，同样以Not I禾和Hi nd皿连接到pCDNA3.1 真核表达载体中。
按照QIAprep TIP100 Kit Protocol抽取并纯化质粒，测序证实。
pCDNA3.1-HSP70 质粒由湘雅二医院肝移植中心李杰群博士惠赠。
1.2.2细胞培养与转染SH-SY5Y细胞采用含10%FBS的高糖DMEM培养液，置于37 °C，5%CO2的培养箱培养。
转染严格按照Lipofectamine2000说明书进行。
用不含FBS的DMEM培养基洗涤细胞2次，24孔细胞培养板每孔加入含2山Lipofectamine2000及0.8⑷质粒DNA、不含FBS的DMEM培养基500 山在37 C，5%CO2的培养箱中孵育3 h，改用含10%FBS的DMEM 培养基继续孵育48 h。
1.2.3免疫荧光将稳定表达蛋白的SH-SY5Y细胞接种到有盖玻片的24孔板中，用含10% FBS的DMEM培养于37C、5% CO2 培养箱中36 h后，弃去培养基，3.7%的多聚甲醛/磷酸缓冲液(PBS) 室温下固定15 min。
PBS 洗2次，每次5 min。
0.2%的Trit on X-100/PBS 透化10 min，PBS 洗2 次，5% 牛血清白蛋白(BSA) 圭寸闭液，室温圭寸闭30 min。
加入1 400稀释的anti- a-synuclein204 一抗室温孵育60 min，PBS洗3次，每次5 min。
5%BSA封闭液，室温封闭20 min。
加入1 ：00稀释的anti-鼠lgG-Cy2二抗100 “，避光室温下孵育60 min。
1 XPBS洗3次，每次5 min。
4，6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染细胞核，室温，避光反应 2 min。
PBS洗2次, 每次5 min。
去离子水洗1次，封片，用激光共聚焦显微镜扫描和照相。
124免疫印迹取细胞，吸去培养基，加入2X十二烷基硫酸钠(SDS)sample buffer(125 mmol/L Tris HCI , 20% Glycerol , 4% SDS , 0.1% bromphenol blue, pH 6.8)加入蛋白酶抑制剂cocktail裂解细胞，超声后，使用蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。
均取20⑷总蛋白经18% SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，并电转移至PVDF膜上。
以5%脱脂奶粉封闭1 h后，加入相应一抗，4 C过夜，Tris缓冲生理盐水溶液(TBST)洗膜后，加入对应的辣根过氧化物酶标记的二抗，室温孵育60 min，TBST洗膜后，电化学发光免疫分析法(ECL)发光，曝光。
内参照为鼠抗-actin单克隆抗体。
1.2.5细胞活力测定调节SH-SY5Y细胞密度约5X104/ml，以100 "/孔接种于96孔板，24 h后分别转染pCDNA 3.1+HSP70;a-突触核蛋白野生型+ PCDNA3.1；a-突触核蛋白野生型+HSP70; a-突触核蛋白A53T+PCDNA3.1; a-突触核蛋白A53T+HSP70;每种处理设3个复孔，24 h后每孔加5mg/ml四甲基偶氮唑盐(MTT)，继续培养 4 h。
弃培养基，每孔加二甲基亚砜(DMSO)100 “振荡混匀，待颗粒溶解后置于酶标仪上，空白孔调零，以570 nm波长检测各孔吸光度值。
1.3统计学分析利用SPSS11.5软件进行统计分析，用t检验进行两组间差异比较。
2结果2.1PD细胞模型的构建a -突触核蛋白野生型和突变型A53T在转染SH-SY5Y细胞后，胞浆和胞核都有分布，以胞浆分布为主，部分细胞a-突触核蛋白呈点状分布，可能为其聚集体。
免疫印迹也显示，SH-SY5Y细胞中a-突触核蛋白野生型和突变型A53T都得到了过表达，说明PD细胞模型构建成功。
见图1A、B。
2.2HSP70对PD细胞模型中a -突触核蛋白的影响了探讨HSP70对PD细胞模型中过表达的a -突触核蛋白的作用，将HSP70 与a-突触核蛋白进行了共转染，通过免疫印迹检测HSP70对a-突触核蛋白表达的影响。
结果显示，无论是在a -突触核蛋白野生型还是突变型PD细胞模型中，HSP70均能降低a-突触核蛋白的表达。
见图2。
A:免疫荧光检测a -syunclein野生型（左图）与A53T突变体（右图）在SH-SY5Y中的表达。
一抗为anti a-syunclein 鼠单克隆抗体，二抗为cy2标记的anti mouse IgG 抗体。
蓝色为DAPI染色的细胞核。
B: western印迹检测a-syunclein在SH-SY5Y中的表达。
一抗为anti a -syunclein 鼠单克隆抗体，二抗为HRP标记的anti mouse IgG 抗体。
内参为细胞骨架蛋白beta act in。
图1 a-syu ncle in过表达PD模型的建立Western印迹检测a-syunclein与HSP70共转染后，HSP70对a-syunclein 野生型和突变性表达量的影响。
一抗为anti a-syunclein 鼠单克隆抗体，antiHSP70单克隆抗体，二抗为HRP标记的anti mouse IgG抗体。
内参为细胞骨架蛋白B -actin。
图2HSP70降低a -synuclein的表达量2.3HSP70对PD细胞模型活力的影响转染野生型和突变体a -突触核蛋白后，SH-SY5Y细胞活性明显降低，说明a -突触核蛋白对SH-SY5Y具有毒性作用，PD细胞模型建立成功。
而增加HSP70的表达后，对比a -突触核蛋白野生型(a synuclein WT)+ pCDNA3.1组和a-突触核蛋白突变型(a-synucleinA53T)+pCDNA3.1 组，表达HSP70能分别提高a-synuclein WT 和a-synuclein A53T 引起的细胞活性降低(P0.01)，见表1。
表1MTT检测HSP70对过表达a-syunclein SH-SY5Y细胞活性的影响3讨论a-突触核蛋白是一种分布于中枢神经系统突触前末梢，约15~20 kD的可溶性蛋白质。
自然状态下呈一种非折叠构象，不形成明显的三维结构，但其N末端2/3的序列可以形成一系列双极性区域，可能介导其与膜结构的结合；当高浓度或异常修饰时，构象改变形成寡聚体甚至是聚集体，具有细胞毒性〔7，8〕。
与单体不同，这类寡聚体富含8片层结构，在原子力显微镜及电镜下，可以观察到这类寡聚体形成过程中，一般先呈包含20〜30个a-突触核蛋白分子的圆状结构;随后因彼此聚合形成链状结构，最终转化为稳定的纤维状结构。
这种由单体向纤维状结构的改变，可能是a-突触核蛋白产生毒性作用的重要原因〔5，10〕。
研究进一步发现，与家族性PD有关的a-突触核蛋白A53T及A30P突变蛋白在体外均可以促进寡聚体的形成，同时，野生型a-突触核蛋白的过量表达也可以导致寡聚体的增加〔11，12〕。
当机体无法处理有毒的a -突触核蛋白中间体时，可能会导致a - 突触核蛋白形成聚集体，最终导致PD的发生〔11，13，14〕。
分子伴侣作为一类介导协助蛋白形成与维持天然构象的重要细胞因子，在a突触核蛋白蛋白结构状态转换过程中可能发挥着很重要的调控作用。
实验表明，路易小体中除a -突触核蛋白外，还含有其他蛋白质，而HSP是其中重要的蛋白之一〔15〕。
当a突触核蛋白本身结构的改变或分子伴侣、降解系统出现异常时，a -突触核蛋白的毒性作用就体现出来了。
在模型动物的研究中发现，分子伴侣(HSP70、HSP40)的表达可减轻a-突触核蛋白的细胞毒性。
譬如，在PD果蝇模型中，HSP70的表达可以减轻或阻止a -突触核蛋白引起的神经元损伤;而在酵母中HSP70水平的增加也可以有效地减缓或抑制PD的发生〔3，4〕。