各种感受态细胞的特征和用途
JM109,DH5a,BL21等这些感受态有何区别
JM109,DH5a,BL21这些感受态有何区别1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)3:BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F- ,mcr AΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU ,galK ,rps,(Strr) endA1,nupG6:HB101菌株该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GA TC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
常见大肠杆菌感受态的特点和用途
1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)3:BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompThsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS,Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F- ,m crAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU,galK,rps,(Strr) endA1,nupG6:HB101菌株该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-17:M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
trans5a感受态细胞说明书
trans5a感受态细胞说明书摘要:I.简介- 介绍trans5a感受态细胞II.trans5a感受态细胞的特点- 描述trans5a感受态细胞的特性III.trans5a感受态细胞的用途- 介绍trans5a感受态细胞的主要应用领域IV.trans5a感受态细胞的操作方法- 说明trans5a感受态细胞的操作步骤V.trans5a感受态细胞的保存和质量控制- 介绍trans5a感受态细胞的保存方法和质量控制措施VI.结论- 总结trans5a感受态细胞的优势和应用前景正文:I.简介trans5a感受态细胞是一种广泛应用于基因工程和生物制品生产领域的细胞类型。
它具有良好的生长特性,易于培养和转染,因此在实验室和工业生产中备受欢迎。
II.trans5a感受态细胞的特点trans5a感受态细胞具有以下特点:1.遗传稳定性:trans5a感受态细胞具有较高的遗传稳定性,可以长期保存和传代。
2.表达能力强:trans5a感受态细胞表达外源基因的能力较强,可以高效地合成目标蛋白质。
3.适应性广:trans5a感受态细胞对环境条件具有较强的适应性,可在不同的培养基和生长条件下生长。
III.trans5a感受态细胞的用途trans5a感受态细胞的主要应用领域包括:1.基因工程:trans5a感受态细胞常用于基因克隆、表达和突变研究。
2.蛋白质生产:trans5a感受态细胞可用于大规模生产重组蛋白质,包括药用蛋白、酶和工业酶等。
3.疫苗研究:trans5a感受态细胞可用于病毒载体疫苗的研究和生产。
IV.trans5a感受态细胞的操作方法trans5a感受态细胞的操作步骤如下:1.细胞的复苏和培养:从冰箱中取出细胞,放入含有适当营养物质的培养基中,在37℃、5% CO2的条件下培养。
2.转染:将外源基因载体与细胞混合,通过电穿孔或脂质体介导的方法将基因载体转染入细胞。
3.培养:将转染后的细胞继续培养在含有适当营养物质的培养基中,促进目标基因的表达。
感受态细胞制备及各种感受态的特点
感受态细胞制备制备感受态常用得方法就是电击法与CaCl2制备法,以下介绍CaCl2制备法:1、可以从-80℃冰柜中,取出一支冻存菌株,于事先照过紫外得超净台中,用无菌得接种环轻轻蘸取菌种后,在无抗平板(由于Rocetta含有氯霉素抗性,需要涂布在氯霉素抗性得平板,后面得都就是如此)上划线,并将菌种迅速放回-80℃保存,在划线板上做好相应标记,于37℃培养过夜。
2、从37℃培养过夜得新鲜平板上挑取一个单克隆,接种于2mlEP管中,37℃,220rpm震荡培养约6个小时至对数生长中后期;将该菌悬液以1:100得比例接种于50ml LB液体培养基(2瓶)中,37℃振荡培养2、5小时至OD600=0。
5。
注意:接种比例不得大于1:10。
3、在无菌条件下将细菌转移到一个无菌、预冷得离心管(50ml)中,在冰上放置5~10min; 注意:划板、接种为了防止意外发生最好多划一块平板与多接一根试管,划板、接种、转接均要严格按照无菌操作。
4、4℃5000g离心5分钟。
用预冷得去离子水洗涤沉淀,4℃ 5000g离心5分钟;Note:此步主要就是为了洗去培养基中得盐等5、沉淀加入2ml预冷得0、05mol/L CaCl2—15%甘油混合溶液,轻吹散,冰浴5分钟,4℃5000g离心5分钟;6、沉淀加入2ml预冷得0.05mol/L CaCl2—15%甘油混合溶液,轻吹散,即成为感受态细胞悬液。
分装成50~100μl得小份,贮存于-70℃可保存半年。
含15%甘油得0.05mol/L CaCl2制备方法:称取0。
28g CaCl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,加入15ml甘油,定容至100ml,高压灭菌。
感受态细胞得特征感受态:通过特殊处理使细胞处于能够吸收外源DNA得状态。
感受态细胞得特征:(1)细胞表面暴露出一些可接受外来DNA得位点(以溶菌酶处理,可促使受体细胞得接受位点充分暴露)。
(2)细胞膜通透性增加(用钙离子处理,可使膜通透性增加,使DNA直接穿过质膜进入细胞)。
感受态细胞制备及各种感受态的特点
感受态细胞制备制备感受态常用的方法是电击法和CaCl2制备法,以下介绍CaCl2制备法:1、可以从-80℃冰柜中,取出一支冻存菌株,于事先照过紫外的超净台中,用无菌的接种环轻轻蘸取菌种后,在无抗平板(由于Rocetta含有氯霉素抗性,需要涂布在氯霉素抗性的平板,后面的都是如此)上划线,并将菌种迅速放回-80℃保存,在划线板上做好相应标记,于37℃培养过夜。
2、从37℃培养过夜的新鲜平板上挑取一个单克隆,接种于2mlEP管中,37℃,220rpm震荡培养约6个小时至对数生长中后期;将该菌悬液以1:100的比例接种于50ml LB液体培养基(2瓶)中,37℃振荡培养2.5小时至OD600=0.5。
注意:接种比例不得大于1:10。
3、在无菌条件下将细菌转移到一个无菌、预冷的离心管(50ml)中,在冰上放置5~10min;注意:划板、接种为了防止意外发生最好多划一块平板和多接一根试管,划板、接种、转接均要严格按照无菌操作。
4、4℃ 5000g离心5分钟。
用预冷的去离子水洗涤沉淀,4℃ 5000g离心5分钟;Note:此步主要是为了洗去培养基中的盐等5、沉淀加入2ml预冷的0.05mol/L CaCl2-15%甘油混合溶液,轻吹散,冰浴5分钟,4℃5000g 离心5分钟;6、沉淀加入2ml预冷的0.05mol/L CaCl2-15%甘油混合溶液,轻吹散,即成为感受态细胞悬液。
分装成50~100μl的小份,贮存于-70℃可保存半年。
含15%甘油的0.05mol/L CaCl2制备方法:称取0.28g CaCl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,加入15ml甘油,定容至100ml,高压灭菌。
感受态细胞的特征感受态:通过特殊处理使细胞处于能够吸收外源DNA的状态。
感受态细胞的特征:(1)细胞表面暴露出一些可接受外来DNA的位点(以溶菌酶处理,可促使受体细胞的接受位点充分暴露)。
(2)细胞膜通透性增加(用钙离子处理,可使膜通透性增加,使DNA直接穿过质膜进入细胞)。
常见大肠杆菌感受态的特点和用途
1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)3:BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU ,galK ,rps,(Strr) endA1,nupG6:HB101菌株该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-17:M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
各种感受态细胞的区别、用途和特征
各种感受态细胞的区别、用途和特征Xl1-Blue菌株基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。
特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。
用途:分子克隆和质粒提取。
BL21(DE3)菌株基因型:F–ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。
特点:该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。
T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合于非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达。
[生物秀-专心做生物BL21(DE3)ply菌株基因型:F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。
特点:该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。
此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。
适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达Competent E. coliFull Product Description BL21 Star™ E. coli strains are high-performance BL21 hosts designed for improving protein yield in a T7 promoter-based expression system. Because T7 RNA polymerase synthesizes mRNA more rapidly thanE. coli RNA polymerases, transcription from the T7 promoter is uncoupled to translation in E. coli. This results in mRNA transcripts unprotected by ribosomes, which are then subject to enzymatic degradationby endogenous RNases (1). The reduced level of transcripts in the cell often leads to greatly reduced levels of protein yield (Figure1). The BL21 Star™ strains contain a mutation in the gene encodingRNaseE (rne131), which is one of the major sources of this mR NA degradation (2). BL21 Star™ cells significantly improve the stability of mRNA transcripts and increase protein expression yield from T7 promoter-based vectors (3) (Figure 2).BL21 Star™(DE3) is ideal for expressing proteins that are non-toxic to E. coli.BL21 Star™(DE3)pLysS offers lower basal-level expression of heterologous genes than BL21 Star™(DE3). It is designed for expressing proteins that are slightly growth inhibitive to E. coli.1DH5α菌株基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ–特点:一种常用于质粒克隆的菌株。
十八种实验室常用的克隆感受态细胞
DH5α:DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。
缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA 的稳定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。
DH5α感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。
TOP10:TOP10菌株来源于MC1061菌株,是目前实验室最常用的感受态细胞之一,基因型与DH10B高度类似(DH10B为gal E15型,而TOP10为gal U型)。
TOP10生长速度快(比DH5α快,但比Mach1-T1生长速度慢),10小时可见克隆,rec A1和end A1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
可用于构建克隆,蓝白斑筛选等实验。
TOP10感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108cfu/μg DNA。
JM109:JM109菌株来源于E.coli K strain,是提取高质量DNA的理想菌株,rec A1和end A1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
携带hsd R17基因型背景,使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。
laqI q ZΔM15的存在使JM109可用于构建克隆,蓝白斑筛选实验;JM109感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达109cfu/μg DNA。
Mach1-T1:Mach1-T1菌株由野生型non-K-12 E. Coli W菌株改造而来,是目前生长速度较快的感受态细胞之一,在平板上8h可见克隆,缺失核酸内切酶(end A),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(rec A1398)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性;lacZΔM15的存在使Mach1-T1可用于蓝、白斑筛选;tonA突变赋予Mach1-T1菌株对噬菌体T1和T5的抗性。
感受态细胞的选择与使用
【专题】分子克隆实验专题--(五)感受态细胞的选择与使用作者: 空谷幽风(站内联系TA)发布: 2011-04-16分子克隆实验专题--(五)感受态细胞的选择与使用常用感受态细胞的特性:TOP10,DH5α:蓝白斑筛选,高效克隆,质粒抽提JM110:甲基化酶缺陷型SURE:克隆不稳定插入片段,降低同源重组DH10B:文库构建,长片段质粒的克隆(150kp质粒转化)Stbl2:克隆不稳定插入片段,正向重复,逆转录病毒序列,克隆甲基化基因组序列。
Stbl3:克隆慢病毒表达载体中的正向重复序列,降低逆转录病毒载体中长末端重复序列的非目标同源重组。
ν选择适宜的感受态细胞序列的结构,长度,载体种类以及特殊要求等。
ν选择适宜的转化方式热激转化:常规克隆,片段较短(<10kb)电转化: 建库,基因敲除,长片段(>10kb)感受态细胞使用的注意事项ν连接产物或质粒的量效价:1μg标准质粒转化感受态细胞产生的单克隆的数目,单位为cfu。
化学感受态细胞:106,107,108,109cfu电转感受态细胞:108,109,1010cfu常规的克隆根据连接产物和质粒的量选择适当效价的感受态细胞,特殊转化(如建库)则选择最高效价的感受态细胞,一般选用电转。
ν感受态细胞效价测定标准质粒:pUC18, pUC19,pBR322超螺旋,超纯质粒使用量:<5μl, <1ng设立阴性对照,多涂几板(3块以上)取平均值。
ν化学感受态细胞的使用质粒PCR扩环的产物以及进行体内重组的线性片段不宜选用DH5α高效感受态细胞进行转化。
可能原因:DH5α本身不适合这种操作;高效感受态制备的试剂对于这种转化有抑制作用。
可选用TOP10感受态细胞。
ν电转感受态细胞的使用尽量降低转化产物的离子浓度,防止细胞被击穿。
大量的连接产物提纯后进行转化,或者进行透析后再转化,有些进行体内重组的酶切产物进行提纯后进行转化。
ν氨苄平板的卫星菌落氨苄平板涂板后如果时间太长,就会产生卫星菌落,在单克隆周围生成小的克隆。
几种感受态细胞的用途、基因型和特点
几种感受态细胞的用途、基因型和特点1、DH5菌株用途:克隆菌,用于分子克隆、质粒提取。
基因型:supE44△lacU169(80lacZ△M15)hsdR17recAl endAl gyrA19thi-1relAl特点:一种用于铺制与培养质粒平板和粘性平板的抑制型菌株.其80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。
recAl和endAl的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒的提取。
2、TOP10菌株用途:克隆菌,用于分子克隆,质粒提取。
基因型:F_mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)φ80lacZΔM15△lacⅩ74 recA1deoR araD139Δ(ara-leu)7697galU galK rpsL(StrR)endA1 nupG特点:一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。
其中φ80lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补,可用于蓝白斑筛选。
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
3、JM109菌株用途:克隆菌,用于分子克隆。
基因型:recAl supE44endAl hsdR17Gyr A96relAl thiΔ(lac-proAB)F’[traD36proAB+lacZ△M15]特点:一种支持带有琥珀突变的载体生长的重组缺陷的抑制型菌株,对转染的DNA有修饰作用而无限制作用。
4、BL21(DE3)菌株用途:表达菌,可用于表达非毒性蛋白基因型:hsdSgal(c I TS857indl Sam7nin5lacUV5-T7)特点:该菌株用于高效表达克隆于含有T7噬菌体启动子的表达载体的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于噬菌体DE3区,该区整合于BL21染色体上5、BL21(DE3)pLysS菌株用途:表达菌,可表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
常用几种感受态区别
常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21的区别1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3)3:BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697, galU ,galK ,rps, (Strr) endA1, nupG6:HB101菌株该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-17:M110或 SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。
感受态细胞分类
感受态细胞分类以感受态细胞分类为标题,写一篇文章。
感受态细胞是人体中一类非常重要的细胞,它们负责传递感觉信息给大脑,让我们能够感受到外界的刺激和环境的变化。
根据不同的感受能力和传递方式,感受态细胞可以分为视觉感受态细胞、听觉感受态细胞、触觉感受态细胞、嗅觉感受态细胞和味觉感受态细胞等。
视觉感受态细胞是我们感知世界的主要方式之一。
它们分布在我们的眼睛中,能够感受到光的强度、颜色和运动等信息。
当光线进入眼睛后,视觉感受态细胞中的感受器会受到刺激,产生电信号,然后通过视神经传递给大脑。
大脑会根据这些信号分析和处理,最终让我们看到世界的各种景象。
听觉感受态细胞则分布在我们的耳朵中,负责感受声音的振动。
当声音传入耳朵时,听觉感受态细胞中的感受器会受到声波的刺激,产生电信号,然后通过听神经传递给大脑。
大脑会根据这些信号的频率、强度和时长等信息,解析出声音的来源和含义,让我们能够听到各种声音,包括语言、音乐和自然界的声音等。
触觉感受态细胞广泛分布在我们的皮肤中,能够感受到物体的接触、压力和温度等刺激。
当我们触摸到物体时,触觉感受态细胞中的感受器会受到刺激,产生电信号,然后通过触觉神经传递给大脑。
大脑会根据这些信号的特点,判断物体的硬度、温度和纹理等信息,让我们能够感受到物体的质地和温度等变化。
嗅觉感受态细胞分布在我们的鼻腔中,负责感受气味的分子。
当我们闻到气味时,嗅觉感受态细胞中的感受器会受到气味分子的刺激,产生电信号,然后通过嗅觉神经传递给大脑。
大脑会根据这些信号的种类和浓度等信息,识别出气味的来源和特征,让我们能够分辨出各种不同的气味。
味觉感受态细胞则分布在我们的舌头上,能够感受食物的味道。
当食物进入口腔时,味觉感受态细胞中的感受器会受到食物化学物质的刺激,产生电信号,然后通过味觉神经传递给大脑。
大脑会根据这些信号的种类和浓度等信息,识别出食物的味道,包括酸、苦、甜、咸和鲜等。
这些味觉信息会影响我们对食物的喜好和选择。
TOP10感受态细胞说明书
TOP10 感受态细胞说明书1.感受态细胞必须用干冰运输,融化后的感受态细胞不能再冻结储存。
如果用户收到感受态细胞后发现泡沫箱中的干冰已经挥发殆尽,应予以拒收。
2.收到感受态细胞后应立即储存在-70℃以下的冰箱中,在6个月内使用不影响转化效率;感受态细胞不可反复冻融,不要与限制性内切酶等经常使用的分子生物学试剂放在一起,避免因温度的波动而影响的效率。
技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部:E-mail:technical@,电话:400-0099-857。
产品介绍本公司生产的TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用DNA的化学转化。
经pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/μg。
每支感受态可以酌情分装使用,降低了实验的成本。
质量稳定,使用方便,质优价廉。
TOP10菌株介绍基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1,ara Δ139Δ(ara-leu)7697,galU/galK ,rps,(Str R) endA1,nupG。
特点:本菌株是一种常用于质粒克隆的菌株。
适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
其φ80、lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。
质量标准1. 使用1 ng pUC19 Plasmid质粒DNA转化100 µl Competent Cells DH5α测试,产生的菌落数>1×108 transformants/1µg pUC19 Plasmid 。
2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认:对E.coli Competent Cells TOP10使用pUC19 DNA进行转化后,在含有100 µg/ml的Ampicillin、40µg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上,产生蓝色菌落。
常见大肠杆菌感受态的特点和用途解析教学内容
常见大肠杆菌感受态的特点和用途解析1:DH5a 菌株DH5a 是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用 pUC 系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-, φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argFU169, deoR , recA1, endA1,hsdR17(rk-, mk+, phoA , supE44, λ-, thi-1, gyrA96, relA12:BL21(DE3 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7启动子的表达载体(如 pET 系列的基因。
T7噬菌体 RNA 聚合酶位于λ 噬菌体 DE3区,该区整合于 BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-, ompT , hsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE33:BL21(DE3 pLysS菌株该菌株含有质粒 pLysS ,因此具有氯霉素抗性。
PLysS 含有表达 T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-, ompThsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE3, pLysS , Camr4:JM109菌株该菌株在使用 pUC 系列质粒载体进行 DNA 转化或用 M13 phage载体进行转染时,由于载体 DNA 产生的 LacZa 多肽和 JM09编码的LacZΔM15进行α-互补 ,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型 :recA1, endA1, gyrA96, thi -1, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac -proAB/F’[traD36, proAB+, lacIq , lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增 ,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
TOP10 感受态细胞说明书
TOP10感受态细胞说明书货号:C1200规格:10×100ul/20×100ul保存:-70℃保存,运输为干冰包装。
自收货之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6个月。
产品简介:TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。
使用pUC19质粒检测,转化效率可达108,-70℃保存六个月转化效率不发生改变。
基因型:F_mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)φ80lacZΔM15△lacⅩ74recA1deoR araD139Δ(ara-leu)7697galU galK rpsL(StrR)endA1nupG特点:一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。
其中φ80lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补,可用于蓝白斑筛选。
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
操作方法:(以下各步骤均为无菌操作)1、将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以100ul感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA,注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒,然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟,注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基,37℃180rpm振荡培养1小时。
目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培养12-16小时。
涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的DNA总量较多,可取100ul左右的转化产物涂板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300ul的转化产物涂板。
过多菌液可以抑制细菌生长。
如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
各种感受态细胞的特征和用途
1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)3:BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU ,galK ,rps,(Strr) endA1,nupG6:HB101菌株该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1JM110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
感受态细胞概念
感受态细胞概念
感受态细胞是一个神经科学中的概念,指的是特定类型的神经细胞或神经元,其主要功能是接收和传递感觉信息。
感受态细胞存在于人体的感觉系统中,包括触觉、视觉、听觉、味觉和嗅觉等。
不同类型的感受态细胞对于特定的感觉刺激具有选择性和特异性。
例如,视觉感受态细胞能够接收和处理光线的信息,听觉感受态细胞能够接收和解析声音的波动,而触觉感受态细胞能够感知物体的接触、压力和温度等刺激。
感受态细胞在感觉信息的传递过程中起着关键的作用。
它们通过接收外界刺激,并将其转化为神经电信号,然后传递给大脑的感觉中枢进行进一步的处理和解读。
这样,我们才能感知和体验到周围环境的各种感觉,包括触摸、视觉、听觉、嗅觉和味觉等。
感受态细胞的研究对于理解感觉系统的功能和机制,以及相关的疾病和神经系统紊乱具有重要意义。
科学家们在这个领域进行了广泛的研究,以揭示感觉信息是如何在神经细胞之间传递和处理的,进而为相关的医学和临床应用提供理论基础。
trans5a感受态细胞说明书
trans5a感受态细胞说明书感受态细胞是一种新型细胞解剖学结构,它具有广泛的功能和应用。
在这篇文章中,我们将讨论关于感受态细胞的特点、应用领域和对人类生活的影响。
首先,感受态细胞具有高度的特异性。
它们能够感知和识别各种外界刺激,包括声音、光线、温度和压力等。
这种特异性使得感受态细胞在人类感官系统中起着重要的作用。
例如,听觉细胞能够感知声音的频率和强度,帮助我们听到和区分各种声音。
视觉细胞则能够感知不同的光线波长和强度,使我们能够看到和识别不同的物体和颜色。
感受态细胞的高度特异性使得我们能够通过感官系统获取丰富的信息。
其次,感受态细胞具有快速反应的能力。
一旦感受态细胞感知到刺激,它们能够迅速转化为相应的电化学信号,通过神经系统传递到大脑中进行处理和分析。
这种快速反应的能力使得我们能够在短时间内做出适应性反应。
例如,当我们听到危险的声音时,感受态细胞能够将这个信息快速传递给大脑,引发我们的注意和应激反应。
感受态细胞的快速反应能力有助于我们及时掌握和应对周围环境的变化。
此外,感受态细胞具有较好的适应性。
它们能够通过长期的刺激训练来提高对特定刺激的感知和识别能力。
这种适应性让我们的感官系统能够不断适应外界环境的变化。
例如,长时间暴露在光线强烈的环境中,我们的视觉细胞会逐渐适应这种强烈的刺激,减少对于光线强度的敏感度,从而使我们能够适应明亮的环境。
感受态细胞的适应性有助于我们在不同环境中更好地运用感官系统。
感受态细胞的应用领域十分广泛。
在医学领域,感受态细胞的研究可以帮助我们更好地理解感官系统的工作原理,进而研究和治疗感官系统相关的疾病和障碍。
在工业领域,感受态细胞的研究有助于开发更智能化的传感器和仪器,用于自动化控制和监测系统。
在生活中,感受态细胞的应用可以改善我们的感官体验,比如开发更先进的听力辅助设备和视觉增强技术等。
感受态细胞对人类生活的影响是巨大的。
它们使我们能够感知和理解世界,从而更好地适应和应对环境的变化。
trans t1感受态细胞说明书
trans t1感受态细胞说明书感受态细胞是一种经过特殊处理,能够吸收外源DNA的细胞状态。
TransT1感受态细胞是TransGen公司出品的一种感受态细胞,被广泛用于基因克隆和转化。
以下是Trans T1感受态细胞的说明书:1. 简介:Trans T1感受态细胞是一种用于高效克隆和转化DNA的宿主菌。
它具有高转化效率和良好的克隆性能,适用于各种类型的DNA克隆和转化。
2. 成分:Trans T1感受态细胞含有经过特殊处理的E. coli DH5α菌株,使其具有吸收外源DNA的能力。
此外,还含有必要的培养基和添加剂,以确保细胞的最佳生长和DNA转化。
3. 用途:Trans T1感受态细胞适用于各种基因克隆和转化实验,如PCR产物克隆、质粒构建、基因敲除等。
它也适用于将外源DNA导入原核细胞中,进行基因表达和蛋白质生产。
4. 操作步骤:(1)准备所需试剂和DNA片段;(2)按照产品说明书的比例将感受态细胞与DNA混合;(3)将混合物在冰上放置30分钟;(4)将混合物热击(42℃)并维持一定时间;(5)将热击后的混合物加入培养基中;(6)在37℃下培养1-2小时;(7)挑选阳性克隆并进行进一步分析。
5. 注意事项:(1)使用感受态细胞时应遵循无菌操作原则;(2)感受态细胞应在-80℃下保存,以保持其活性;(3)避免反复冻融,以免影响细胞的活性;(4)感受态细胞仅用于研究用途。
以上是Trans T1感受态细胞的说明书,仅供参考,具体操作请根据实际情况进行调整。
如有任何疑问或需要技术支持,请联系TransGen公司或相关专家。
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1:DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1
2:BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)
3:BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr
4:JM109菌株
该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]
5:TOP10菌株
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU ,galK ,rps,(Strr) endA1,nupG
6:HB101菌株
该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验
基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1
JM110或SCS110
大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.
部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。
大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI, BclI等。
而且甲基化只发生在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化。
而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:
(1)选用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影响;
(2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coli JM110和链霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。
E.coli JM110
要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110
如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化.
各种感受态细胞的区别用途特征
Xl1-Blue菌株
基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。
特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。
用途:分子克隆和质粒提取。
BL21(DE3)菌株
基因型:F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。
特点:该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。
T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合于非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达。
BL21(DE3)ply菌株
基因型:F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。
特点:该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。
此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基
因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。
适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达
DH5α菌株
基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ–
特点:一种常用于质粒克隆的菌株。
其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。
recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
JM109菌株
基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F‘ traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。
特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。