生长激素知识

韩婷
生长激素的生理作用
一、促进组织生长
骨骼生长：GH及其介导IGF-1促进软骨细胞增殖和代谢， 促进线性增长。骨骺闭合后GH对维持骨矿物质及骨密 度仍然有重要作用 细胞生长：如骨骼肌细胞数量及其体积的增加，增加红 细胞数量 器官增长：增加内脏器官的体积和功能
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生长激素的生理作用
二、GH促进蛋白质的合成
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思真
【药代动力学和药效学】
大鼠药代动力学实验表明：思真和垂体hGH间没有显著差异
思真
肌肉注射：半衰期—— 皮下注射：半衰期—— 3.2h 5.1h
vs
垂体hGH
2.4h 4.7h
二种方式同样有效，皮下注射需要相对长时间达到血清峰浓度， 但更持久和均匀
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USFDA已批准的生长迟缓相关rhGH适应征
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C. 重组技术的产物后加工
真核细胞产生的hGH是具有完美结构和活性的分子，无需 任何后加工 原核细胞产生的是hGH肽链，无生物活性，必须人工复性。
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hGH的人工复性
方法：交替使用一定量的氧化剂和还原剂，在两个半 胱氨酸残基 (Cys) 间氧化形成二硫键。
人工加载2个 二硫键
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人工复性存在的问题
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思真
【性状】
无菌、无热原的白色冻干粉
【包装】
4IU(1.33mg): 1支冻干粉 ＋1支生理盐水 10IU(3.33mg):1支冻干粉＋1支溶解剂（含苯甲醇）
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思真
【化学结构】
191个氨基酸残基的合成多肽。 一条氨基酸序列，2对内二硫键— —与人体垂体生长激素的主要结构 一致。
【制备】
哺乳动物（鼠）肿瘤细胞系制备
生长激素的电子镜像
原核细胞源性
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思真
产品特点
全球唯一哺乳动物细胞源性人生长激素。 天然纯净，纯度达99.99％，极低的抗体产生率。
默克雪兰诺公司是目前世界上唯一获准以哺乳动物细 胞为宿主，生产人类蛋白激素的生产商。
韩婷
生长激素简介
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真核生物（哺乳动物）细胞
细胞膜
细胞核
细胞质
粗面内质网
核糖体
高尔基体
完整的细胞核；分工细致的细胞器；细胞膜为内外边界
思真®——唯一真核细胞源性重组生长激素
韩婷
原核生物（大肠杆菌）细胞
核区， 无细胞核
核糖体
无细胞器
无细胞核；无细胞器；细胞壁隔绝细胞内外大分子物质交换
其它生长激素都是以原核细胞大肠杆菌为宿主生产
【有效期】 2年
韩婷
贮藏 （禁忌冷冻）
产品
思真8 mg （24IU） clickeasy
描述
1支click.easy预混器 抑菌溶解剂＋1支24 IU冻干粉
溶解前 贮存条件
室温
溶解后 贮存条件
2–8 C
o
溶解后 贮存时间
28 天
Hale Waihona Puke Baidu
思真3.33 mg (10IU)
1支 10 IU冻干粉＋ 5ml 抑菌溶解剂
2–8 C
o
2–8 C
o
14 天
思真1.33 mg (4 IU)
1支4 IU 冻干粉＋1 ml 安培生理盐水 (不含抑菌剂)
2–8 C
o
2–8 C
o
24 小时
韩婷
思真及主要竞争品牌信息－－中国大陆
公司
法玛西亚 诺和诺德 礼来 辉瑞 LG 默克雪兰诺 上海联合赛尔 深圳科兴 产品名 Genotropin（健豪宁） Norditropin（诺泽） Humatrope（优猛茁） 健高宁 －－－－－－－ Saizen (思真） 珍怡 赛高路
真核细胞能直接生产具有活性的hGH分子
机制： ◦ 粗面内质网为蛋白质加载正确的二硫键：
◦ 粗面内质网特点：
◦ 适宜的氧化环境 ◦ 二硫键异构酶确保正确加载
产物具有天然活性，正确、稳定
韩婷
原核细胞的蛋白质表达
细胞结构简单，无细胞器协助，无法给肽链加载二硫键。 原核细胞生产的hGH是无空间构象的肽链，不具有生物活 性！ 所有原核细胞大肠杆菌技术，都必须在产物提取后，进行 蛋白质的人工复性
韩婷
【用药注意事项】
糖尿病为相对禁忌症 不得用于有任何进展迹象的潜在性脑肿瘤患者
思真
不宜于孕妇及哺乳期妇女
与糖皮质激素为相对配伍禁忌（可能抑制生长激素促生长作用）
韩婷
【配液注射注意事项】
每天更换部位注射，避免注射部位的营养不良 溶解时不得振摇，应慢慢转动药瓶直至内容物完全溶解
思真
3岁以下儿童禁用含苯甲醇的溶解剂，应用无菌生理盐水
韩婷
原核细胞“分泌型”技术
给合成的hGH肽链多加了一段 信号肽序列
hGH分子合成
“分泌”指，借助信号肽将hGH 分子牵引到细胞周质内（细胞 壁与膜的间隙）。注意：并非 细胞外。
！必需人工打破细胞壁，才能提取hGH
韩婷
分泌型原核技术的产物提取
需打破细壁，影响因素多
可能产生的杂质包括：细胞壁碎片、游离的信号肽片段、被机械和化学 操作破坏的hGH肽链
成熟的hGH分子直接分泌到培养基内，只需提取培养基即可
思真®经培养基提纯后，纯度已经达到90％，经过纯化车间 后，能被提纯到99.99%。
操作干预少、杂质少、产品纯净、 安全
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原核细胞技术的蛋白质提取
原核细胞无细胞器，同时肽聚糖构成的细胞壁阻隔了大分子物质的内 外交换。原核细胞不能直接分泌hGH产物，必须人工提取，可分为两类：
韩婷
B. 重组产物(hGH)的提取
真核细胞—通过细胞器配合下的外排作用，将hGH直接分泌到 细胞外
机制：——与人类细胞天然过程一致
◦ 高尔基体接受来自粗面内质网的活性hGH分子，以分泌小泡的形式，将hGH直 接分泌到细胞外培养基内。 ◦ 无细胞壁，便于物质的运输
高 尔 基 体
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真核细胞技术的蛋白质提取
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思真®的制取过程
——重组DNA技术的一般操作
构建hGH基因序列 基因导入载体 载体转染宿主细胞 细胞培养 (hGH表达) hGH产物提取 产物纯化
成品配置
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宿主细胞和hGH蛋白质表达
思真®宿主细胞——中国仓鼠乳腺 细胞C127
C127与人类细胞一样，为真核生物 哺乳动物细胞
可直接克隆产生有活性的hGH分 子
【治疗目标】
促进生长 纠正代谢失衡 改善生活质量
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【推荐用法用量】

思真
GHD : 0.6IU/kg/周 ;分6～7次单剂量晚上皮下注射 Turner : 0.9IU/kg/周; 分7次单剂量晚上皮下注射
【不良反应】

儿童长期使用注意甲状腺功能减低的发生 血糖升高 严重不良反应很罕见；偶见颅内高压和股骨头骨骺滑 脱
韩婷
生长激素的生理作用
四、减少对葡萄糖的利用
GH可减少外周组织对葡萄糖利用，亦可降低细胞
对胰岛素的敏感性，可致血糖上升。 使能量来源由糖代谢向脂肪代谢转移，有利于机体 生长与修复过程。
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生长激素的生理作用
五、促进水、矿物质代谢
GH促进生长及合成代谢，使体内钠、钾、磷酸盐正平衡。
GH参与对体液的调节，尤其对细胞外液，可促进肾小管
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主要在夜间分泌
2am
8am 2pm 8am
8pm
韩婷
生长激素简介
思真®产品知识简介
生长激素的临床使用
思真在®非适应症市场活动
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思真
【药品名称】 通用名：注射用重组人生长激素 商品名：思真（英文商品名:Saizen） 英文名：Recombinant Human Somatropin for Injection 赋形剂：甘露醇、磷酸钠、氯化钠等
GH促进蛋白质合成，这体现在：细胞对氨基酸的摄取 以及氮潴留的增加。
是体内促进蛋白质合成的重要激素。
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生长激素的生理作用
三、GH促进脂肪燃烧
GH对脂肪细胞溶脂速率有重要调节作用；
体外研究表明，GH可提高脂解速率，抑制游离 脂肪酸重新酯化。临床上GH缺乏病人皮下脂肪
增多，尤其在腹部。而GH治疗后腹脂明显减少。
真核细胞重组技术
宿主细胞进化高级 产物自然分泌 空间构象自然形成 无需人工复性， 步骤少，影响环节少
原核细胞重组技术
宿主细胞进化低级 产物人工提取 空间构象无法自然形成 需人工复性 步骤多，影响因素多
产物杂质少 活性损失小、效价高 稳定性好、批间差异无
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产物杂质多 活性损失大、效价低 稳定性差、批间差别大
规格 4IU/10IU/24IU 4.5IU/10IU 4IU 4IU/2IU 4IU/6IU
价格 399元/4IU 198元/4.5IU 170元/4IU 148元/4IU 168元/4IU
生产厂家 默克雪兰诺 长春金赛 上海联合赛尔 安徽安科 深圳科兴
注射用重组人生长 激素
注射用重组人生长 激素 注射用重组人生长 激素 注射用重组人生长 激素
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A. 重组产物（hGH）的表达
——蛋白质的活性
背景知识： 活性：蛋白质分子必须具备准确的空间构象才能成为 活性分子，与受体结合。三级结构 hGH的空间构象由两对二硫键来实现，位于182和 189 、53和165位点。
二硫键是通过氧化方法加载在两个半胱氨酸（还原性 基团）上的
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真核细胞的蛋白质表达
钠回吸收，激活肾上腺素、血管紧张素、醛固酮系统，引 起水、钠滞留增加。
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生长激素的生理作用
六、其它：还有抗衰老、促进脑功能、增强心肌 功能、提高免疫功能等作用
韩婷
生长激素何时分泌？
生长激素呈脉冲式分泌 大部分生长激素在夜间分泌 分泌高峰发生在深睡眠后1小时 在日间和夜间，尤其是在餐前，可以观察到生长激素较小 的分泌峰
1985 生长激素缺乏症
1993
1996 2001 2002 2003
慢性肾功能不全作肾移植前
Turner综合征 宫内生长迟缓 Prader-willin综合征 特发性矮身材
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思真
【适应症】
内源性生长激素分泌不足所致的生长障碍（GHD） 性腺发育不全所致的生长障碍（特纳综合症，Turner’s syndrome）
诺泽
健高宁
诺和诺德
12IU 1600元/12IU 辉瑞
*LG公司及益普生公司计划在中国上市生长激素
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◦ 思真®是全球唯一的哺乳动物源性重组人生长激素。 ◦ 配有专属的思真注射器 ◦ 已在全球90多个国家销售；超过16万人受益。
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® 思真
重组DNA技术
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基因重组人生长激素对生长迟缓的治疗
人生长激素发展史
传统型方法—合成的hGH肽链位于细胞包涵体颗粒内
*包涵体：大肠杆菌内不溶性的物质基团，成分以蛋白质、脂类等为主
分泌型方法—合成的hGH肽链位于细胞周质内
*细胞周质：指细胞壁与细胞膜间的间隙
人工提取带来大量的杂质，影响产物纯度和稳定性。
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传统原核技术的产物提取
步骤繁多，影响因素多
可能产生的杂质：细胞碎片、包涵体内的其它物质、被机械和化学操作 破坏的hGH肽链。
• •
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150例/3000例
真核及原核细胞源性重组DNA技术
重组DNA技术根据宿主细胞的不同可以分为两类：
◦ 真核细胞源性重组DNA技术（eg. 思真）
◦ 技术难度高；宿主细胞成本较高难培养；产品质量优异、稳定性好
◦ 原核细胞源性重组DNA技术（eg. 大肠杆菌产品）
◦ 技术难度低；宿主细胞廉价易培养；产品质量较差、不稳定
— 1953年从人尸体垂体轴提取的生长激素（Pit-hGH）用于
治疗首例17岁GHD男孩 — 40年间 creuzfeldt-Jakob综合征 — 1985年USFDA禁用Pit-hGH — 同年rhGH批准用于临床
1985年用大肠杆菌基因重组技术合成的GH上市。 1989年第一个用哺乳动物细胞基因重组技术合成的GH（Saizen）正 式上市。
内部培训资料
思真
®
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生长激素简介
思真®产品知识简介
生长激素的临床使用
思真在®非适应症市场活动
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什么是生长激素？
人生长激素（rGH）：
脑垂体前叶分泌的一种肽类激素，是人类出生后 促生长的最主要激素，有种属特异性。
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• 由191个氨基酸组成,含2对二硫键， 22 kd的单个多肽链
生长激素在血循环中与一种蛋白结合， 这种蛋白被称为生长激素结合蛋白GHBP3 生长激素结合蛋白起贮存池的作用, 能减慢生长激素从血中清除的速度
复性过程很难被人工控制，可能出现：
1.hGH肽链中存在多个半胱氨酸残基，以及其它还原性基团（如 蛋氨酸），容易发生错配 2.二硫键将两个hGH分子上的半胱氨酸连接起来形成hGH二聚体； 3.将半胱氨酸直接错误氧化成其它基团，如基丙氨酸和半胱氨酸 亚砜。
人工复性错误率高，无法控制，产物质量不稳定
韩婷
两种生长激素的区别
描述
1.3mg • 5mg 注射液 •1.3mg •12IU •4IU •4IU,10IU,24IU •4IU 4IU/6IU
安徽安科
长春金赛
安苏萌
赛增
韩婷
•4IU，2IU
•2IU,4IU,4.5IU,10IU, 15IU，30IU……
思真竞争产品
产品 思真 金磊赛增 珍怡 安苏萌 赛高路 成份
注射用重组人生长 激素 注射用重组人生长 激素 注射用重组人生长 激素