实验六 植物根系活力的测定
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• •一、实验目的 • • 了解测定根系活力的方法及原理，掌握 TTC法测定根系活力的方法 •二、实验原理 • •氯化三苯基四氮唑（TTC）是一种氧化还 原色素，水溶液无色，可被根系细胞中的 琥珀酸脱氢酶还原，生成红色不溶于水的 三苯基甲臜（TTF）。
• 三、实验器材与试剂 • 1、实验仪器 烧杯，分光光度计，容量瓶，恒温箱， 石英砂，研钵，量筒，三角烧瓶，刻度试管 • 2、实验试剂 乙酸乙脂，连二亚硫酸钠，1％TTC （准确称取TTC1.00 g，溶于少量水中，定容至100 ml）,1 mol/L硫酸（用量筒取98％浓硫酸55 ml，边 搅拌边加入到盛有500 ml蒸馏水的烧杯中，冷却后 稀释至1000 mL）,0.4 mol/L琥珀酸（称取琥珀酸 4.72g，溶于水中，定容至100ml），66 mmol/L磷酸 缓冲液（pH7.0。A液：称取Na2HPO4﹒2H2O 11.876g 溶于蒸馏水中，定容至1000 mL；B液：称取KH2PO4 9.078g溶于蒸馏水中，定容至1000 mL。用时取A液 60mL,B液40mL混合即可） • 3、实验材料： 植物根系
• （3）标准曲线的制作：配制浓度0、0.04％、 0.03％、0.02％、0.01％、0.005％的TTC溶液， 各取5mL放入刻度试管中，各取5 mL乙酸乙酯 和少量Na2S2O4（约2 mg，各管中量要一致）， 充分振荡后产生红色的甲臜，转移到乙酸乙酯 层，待忧色液层分离后，补充5 mL乙酸乙酯， 振荡后静置分层，取上层乙酸乙酯液，以空白 作为参比，在分光光度计上于485 nm处测定各 溶液的OD，然后以TTC浓度作为横坐标，OD作 为纵坐标绘制标准曲线。 • 注意事项 根系应 注意事项： 吸干水分但不能用力挤压伤及细胞，才能测定 准确。
• 四、实验步骤 • •1、定性观察 • （1）反应液的配制：将1％TTC溶液、0.4 mol/L琥珀酸和66 mmol/L磷酸缓冲液（pH7.0）按1：5：4混合。 • （2）将待测根系仔细洗净后小心洗干，浸入盛有翻译液的 三角烧瓶中，置于37℃暗处2-3h，观察着色情况，根尖端 几毫米及细侧根都明显变红。 • •2、定量测定 • （1）TTC还原量的测定：称取根样品1－2g，浸没于盛有 0.4％TTc和66 mmol/L磷酸缓冲液（pH7.0）的等两混合液10 mL的烧杯中，于37℃保温3 h，然后加入1mol/L硫酸2 mL终 止反应。取出根，小心擦干水分后于3-5mL乙酸乙酯和少量 石英砂仪器在研钵中充分研磨，以提取出甲臜，过滤后将 红色的提取液移入容量瓶中，最后补充乙酸乙酯至刻度， 用分光光度计于485 nm处比色，以空白试验（先加硫酸， 再加根样品）作为参比读出OD，查标准曲线，即求出TTC 的还原量。 • （2）计算：TTC还原强度＝TTC还原量（g）/各民族金瓶梅 嘎（g）×时间（h）。
• 五、作业 • • 比较不同生境条件下的植物根系活力。
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• 三、实验器材与试剂 • 1、实验仪器 烧杯，分光光度计，容量瓶，恒温箱， 石英砂，研钵，量筒，三角烧瓶，刻度试管 • 2、实验试剂 乙酸乙脂，连二亚硫酸钠，1％TTC （准确称取TTC1.00 g，溶于少量水中，定容至100 ml）,1 mol/L硫酸（用量筒取98％浓硫酸55 ml，边 搅拌边加入到盛有500 ml蒸馏水的烧杯中，冷却后 稀释至1000 mL）,0.4 mol/L琥珀酸（称取琥珀酸 4.72g，溶于水中，定容至100ml），66 mmol/L磷酸 缓冲液（pH7.0。A液：称取Na2HPO4﹒2H2O 11.876g 溶于蒸馏水中，定容至1000 mL；B液：称取KH2PO4 9.078g溶于蒸馏水中，定容至1000 mL。用时取A液 60mL,B液40mL混合即可） • 3、实验材料： 植物根系
• （3）标准曲线的制作：配制浓度0、0.04％、 0.03％、0.02％、0.01％、0.005％的TTC溶液， 各取5mL放入刻度试管中，各取5 mL乙酸乙酯 和少量Na2S2O4（约2 mg，各管中量要一致）， 充分振荡后产生红色的甲臜，转移到乙酸乙酯 层，待忧色液层分离后，补充5 mL乙酸乙酯， 振荡后静置分层，取上层乙酸乙酯液，以空白 作为参比，在分光光度计上于485 nm处测定各 溶液的OD，然后以TTC浓度作为横坐标，OD作 为纵坐标绘制标准曲线。 • 注意事项 根系应 注意事项： 吸干水分但不能用力挤压伤及细胞，才能测定 准确。
• 四、实验步骤 • •1、定性观察 • （1）反应液的配制：将1％TTC溶液、0.4 mol/L琥珀酸和66 mmol/L磷酸缓冲液（pH7.0）按1：5：4混合。 • （2）将待测根系仔细洗净后小心洗干，浸入盛有翻译液的 三角烧瓶中，置于37℃暗处2-3h，观察着色情况，根尖端 几毫米及细侧根都明显变红。 • •2、定量测定 • （1）TTC还原量的测定：称取根样品1－2g，浸没于盛有 0.4％TTc和66 mmol/L磷酸缓冲液（pH7.0）的等两混合液10 mL的烧杯中，于37℃保温3 h，然后加入1mol/L硫酸2 mL终 止反应。取出根，小心擦干水分后于3-5mL乙酸乙酯和少量 石英砂仪器在研钵中充分研磨，以提取出甲臜，过滤后将 红色的提取液移入容量瓶中，最后补充乙酸乙酯至刻度， 用分光光度计于485 nm处比色，以空白试验（先加硫酸， 再加根样品）作为参比读出OD，查标准曲线，即求出TTC 的还原量。 • （2）计算：TTC还原强度＝TTC还原量（g）/各民族金瓶梅 嘎（g）×时间（h）。
• 五、作业 • • 比较不同生境条件下的植物根系活力。
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