根系活力测定
实验四 根系活力的测定
实验四根系活力的测定一、意义根系是植物对水分和矿质营养的主要吸收器官，同时又是植物体中重要物质如氨基酸、激素等物质合成、同化、转化的器官，因此根的生长情况和活动能力直接影响植物个体的生长情况、营养水平和产量水平等具有重要的实际意义。
在科学研究中常把根系的呼吸强度、阳离子代还量（CEC）、对有色物质的吸附量和ATP酶的活性等作为作物根系活力的指标。
二、测定原理TTC（2，3，5－氯化三苯基四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯基甲月朁（TTF）。
具有活力的组织和细胞在呼吸作用中，脱氢酶催化底物氧化脱氢产生NADH、NADPH 等还原性物质，当TTC渗入组织或细胞时呼吸过程产生的还原物质可将其还原成TTF（红色），组织或细胞被染成红色。
死细胞无呼吸，不发生这样的氧化还原反应。
应用这一原理，可根据组织或细胞染色情况来检测种子、花粉、根系等的活力。
植物根引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到加强；而被丙二酸、碘乙酸所严重抑制。
还原强度（即根系活力强弱）可用TTF的生成量来表示。
TTF在485 nm 处有吸收峰，用乙酸乙酯提取后测定OD485，通过标准曲线计算TTF的生成量，用单位时间内单位根重产生的TTF表示根系的活力。
三、仪器设备1.分光光度计；2.分析天平（感量0.1mg）；3.托盘天平（感量0.1 g）；4.温箱；5.研钵：1套；6．4 cm漏斗：2 个；7.量筒10 mL：1 个；8.刻度移液管：0.5 mL、2 mL、5 mL；9．10 mL容量瓶（或10 mL具塞刻度试管）：8个；10．试管架：1 个；11.石英砂适量；12.高型称量瓶（30×60 mm）：2 个。
四、试剂1.乙酸乙酯（分析纯）；2.连二亚硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末；3．1 %TTC溶液：准确称取TTC 1.0000 g，溶于少量水中，定容到100 mL，用时稀释至需要浓度；4．0.1 mol ·L -1 pH 7.5磷酸缓冲液；5．1 mol ·L -1 硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55 mL，边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000 mL；6．0.4 mol ·L -1琥珀酸：称取琥珀酸4.72 g，溶于水中，定容至100 mL。
测定植物根系活力的方法
测定植物根系活力的方法植物根系活力是指植物根系吸收、传导和利用水分、营养物质以及对土壤环境进行适应的能力。
根系活力的测定可以帮助我们了解植物生长发育和适应能力的情况，同时指导我们合理地进行植被管理和栽培。
以下是测定植物根系活力的几种方法：1. 简易Auslander土柱法。
如其名，Auslander土柱法是一种方法简单、不需高级设备的测定植物根系活力的方法。
该方法主要是通过植物根系对土壤环境的响应，来判断根系活力的强弱。
具体操作方法为：将要测定的植株的根系在浇透水的土壤内生长2-4天，之后将其整株拔起，然后根据根系的发育程度、数量、长度等来评估根系活力的强弱。
该方法简单易行，操作简便，但其缺点在可能存在误判的可能性。
2.根系形态分析法。
根系形态分析法是通过对植物根系形态结构的观察，来判断其根系活力的强弱。
该方法适合于观测植物在不同环境下的根系结构变化，比如不同土壤类型、水分营养等而导致的根系形态上的适应性变化。
具体测定内容为：利用根系分叉角度、根毛数量、根长、分散程度等指标来评估根系活力的强弱。
该方法操作简便，可以直观地观察植物根系的形态变化。
3. 马琦森氏（Markson）芽生长理论测定法。
马琦森氏芽生长理论测定法是一种直接测定植物根系活力的方法，与前面两种方法略有不同。
该方法的基本理论是当植物叶和根的生长速度趋于相等时，表明根系的活力非常强。
为测量生长速度，该方法首先需要在芽顶茎部投射一个小光斑，之后再测量芽生长长度的变化。
与前面两种方法相比，马琦森氏芽生长理论测定法操作难度较大，但它可以直接反映出植物根系的生长速度。
4.直接收获法。
直接收获法可以理解为野外调查法。
该方法不针对单一植物进行定量测定，而是利用长期收获和观察的数据分析出根系生长的数量、长度和生长速度。
根第一原则：土壤性质的差异和分布引起根的差异在根领域尤为明显。
如草地表土CO_2分压的变化，山间度坡对气温、风速、光照和土壤水分的影响均可引起根的各种变化。
根系活力的测定（–萘胺氧化法）target=_blank
根系活力的测定（–萘胺氧化法）target=_blank根系活力的测定(α-萘胺氧化法) 与过氧化物酶活性的测定09050321 孙蕾蕾 09050322 余浣莎一、实验目的1、掌握α-萘胺法测定根系的活力2、观察重金属胁迫对根系活力的影响3、掌握比色法测定过氧化物酶活性的原理和步骤二、实验原理1、植物根系能氧化α-萘胺,可通过测定溶液中未被氧化的α-萘胺的量,定量测定根系活力。
2、在有过氧化氢情况下过氧化物酶能使愈创木酚氧化生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最大吸收，可用分光光度计测OD470的变化来测定活力。
三、实验步骤1、取50ug/mL的α-萘胺和磷酸缓冲液各25mL,于三角瓶中混匀,须根系洗净吸干,取0.5g浸入三角瓶,同法处理无根系对照组,5min后从两瓶中各取2mL,按步骤3做第一次测定。
2、将两三角瓶置于25度恒温瓶避光保存60min后,各取2mL,按3做第二次测定。
3、取2mL培养液加10mL水混匀,再依次加入1mL对氨基磺酸与1mL亚硝酸钠,混匀,观察溶液颜色变化,再定容至25mL。
室温25min 后,于510nm处测定吸光度(OD)值。
4、标准曲线的制备：以50ug/mL的α-萘胺溶液为母液，配制40、30、10、5、0ug/mL的溶液各10mL。
各取2mL，按照步骤3分别反应，并测定OD值。
以OD值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制α-萘胺溶液的标准曲线，或者根据浓度与OD值关系直接计算回归方程。
5、分别查对标准曲线，或利用回归方程直接计算出实验组与对照组溶液实验前后对应的α-萘胺溶液浓度。
6、提取野菱叶片（去主脉）的酶液。
7、现配反应混合物，即50m LpH6.0磷酸液+28ul愈创木酚+19ul H2O2(30％)8、取两只比色杯，1只加3mL反应液+0.2mL磷酸缓冲液，调零。
另一只加3mL反应液，加0.2mL酶液，立即开始计时，每隔10s读数1次。
直至OD470≥1.00。
根系活力的测定
实验十二氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定植物根系活力一、实验目的掌握TTC 法测定植物根系活力的原理和方法。
植物根系与植株整个生命活动紧密相关，其作用主要有：对地上部的支持和固定；物质的贮藏；对水分和盐类的吸收；合成氨基酸、激素等物质。
因此根系的活力是植物生长的重要生理指标之一，它直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。
二、实验原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙（TTCH或TTF），比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC 被广泛地用作酶促反应实验的氢受体。
根系中脱氢酶的活性强弱与根的活力成正相关。
所以TTC 还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
三、设备与试剂分光光度计，电子天平，温箱，研钵，漏斗，试管架，药勺，石英砂，50 mL三角瓶，100 mL 量筒，10 mL移液管，10 mL 刻度试管，10 mL容量瓶，10 mL、1 000 mL 烧杯。
①乙酸乙酯（分析纯）或丙酮，保险粉（连二亚硫酸钠，Na2S2O4）。
②1％TTC 溶液：准确称取TTC 1.0 g，溶于少量水中，定容到100 mL。
用时稀释至需要的浓度。
③0.1mol/L，pH7 磷酸缓冲液贮备液A：0.2mol/L NaH2PO4溶液（27.8g NaH2PO4·H2O或31.21gNaH2PO4·2H2O 配成1000ml）；贮备液B：0.2 mol/L Na2HPO4溶液（53.65g Na2HPO4·7H2O或71.64gNa2HPO4·12H2O 配成1000ml）；取A液39ml+B液61ml，用水稀释至200ml）④1 mol·L－1硫酸：用量筒取比重1.84 的浓硫酸55 mL，边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1 000 mL。
实验二根系活力的测定a萘胺氧化法
3. 3. 简述分光光度计使用过程及注意事项。
4、在使用分光光度计时，为何每变化一次波 长，就需要重新调零和调透光率100%？
5、为何在测定时需要洗净比色皿？洗净旳比 色皿在倒入提取液时为何还要用提取液洗 2-3遍？
（二）仪器与用具 分光光度计、天平、恒温培养箱、三角烧瓶、量筒、移液 管、剪刀、玻棒。
（三）试剂 α-萘胺溶液：先用少许旳95%酒精溶解，然后加水定容成。 配制50 μg/mL、50 μg/mL溶液。
• 0.1 mol/L磷酸缓冲液，pH 7.0。 • 1%对氨基苯磺酸溶液：溶解于30%旳醋酸溶液中。 • 0.01%亚硝酸钠溶液。
注意：
• OD510越大→α-萘胺剩余越多→根系活力越弱
• 反应液旳酸度大则增长重氮化作用旳速度，但降 低偶联作用旳速度，颜色比较稳定。增长温度能 够增长反应速度，但降低重氮盐旳稳定度，所以 反应需要在相同条件下进行。
三、试验材料与仪器设备
（一）试验材料 水稻(Oryza sativa L.)等水生植物旳须根系。
• 各取2 mL，按照环节4分别反应，并测定 OD值。以OD值为纵坐标，浓度为横坐标， 绘制α-萘胺溶液旳原则曲线。或者根据浓 度与OD值关系直接计算回归方程。
6．换算浓度
• 分别核对原则曲线，或利用回归方程直接 计算出试验组与对照组溶液试验前后相应 旳α-萘胺浓度（ C、C’与 C0、C’0 ）。
定性观察
• 根系表面红色越深，阐明根系活力越强。
定量测定
• 剩余旳α-萘胺在酸性环境中可与对氨基苯 磺酸（sulfanil-amide）和亚硝酸盐作用生 成稳定旳红色偶氮染料。
定量测定
对-苯磺酸-偶氮-α-萘胺
《植物生理学实验》实验05 根系活力的测定
实验步骤
定性测定 定量测定
定性测定
• 配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1︰5︰4比 例混合。
• 把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液， 以浸没根为度，置37℃左右暗处放1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以 及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
• 生成的红色TTF越多，说明酶活性越强， 也表示根系活力越强
• TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强， 而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标
实验用品
材料：植物根系 仪器：分光光度计、恒温箱、容量瓶、烧杯、石英砂、研钵、
定量测定
•TTC标准曲线的制作
试管编号
1 2 34 5 6
空白 样品
取1mg/mL (即1%)的TTC 2mL于 100mL容量瓶中，加入2gNa2S2O4 摇匀，加入乙酸乙酯40mL左右剧烈
TTF溶液浓度 （ug/mL）
溶液中的TTC还原量 （ug）
0 2 4 6 8 10 0 20 40 60 80 100
2019-2020学年春季学期
植物生理学实验
红河学院 生命科学与技术学院 陶宏征
实验五 根系活力的测定
实验目的
掌握TTC法测定根系活力的原理和方法
实验原理
根系活力 TTC法测定根系活力的原理
根系活力
• 根系活力泛指跟的吸收与合成的能力，是衡 量根系活动能力强弱的重要指标，可以衡量 根系吸收水分或矿质元素的能力大小，甚至 可以反映地上部分的营养状况以及产量水平。
• 测定根系活力，可为植物营养研究提供依据。 • 在幼根中，脱氢酶活性的强弱与根系活力成
实验五 根系活力的测定
实验五根系活力的测定一、实验目的• 1、理解植物根系活力的内涵• 2、熟悉测定根系活力的方法及测定原理:•二、实验原理TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC 还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
在幼根中，脱氢酶活性的强弱与根系活力成正比。
所以，通过测定脱氢酶的活性，可由脱氢酶活性代表根系活力。
氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中为无色溶液，还原后生成稳定、红色、不溶于水的三苯基甲腙（TTF）。
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化溶于乙酸乙酯，485nm有最高吸收峰三、实验材料及用品实验材料：水培1天葱的根系实验器皿：分光光度计、水浴锅、研钵、漏斗、移液管、比色皿、容量瓶、烧杯、滤纸实验溶液：乙酸乙酯、石英砂、硫代硫酸钠（Na2S2O4）、TTC、磷酸缓冲液、硫酸四、实验步骤1.制作TTC标准曲线将配制好的浓度为0,0.01%，0.02%，0.03%，0.04%的TCC溶液，各取5ml放入比色管中，在哥使馆中加入乙酸乙酯5ml和Na2S2O2粉末少量，摇匀→溶液分层，甲腙位于乙酸乙酯层→取上层乙酸乙酯→485nm比色→标准曲线→记录数据。
2.测定根系活力将根系洗净，搽干表面水分，取0.5g根尖样品（第1份加1mol/L硫酸2ml ）→0.5％TTC溶液5ml→磷酸缓冲液5ml→37℃下保温1h→第2份试管加入1mol/L硫酸2ml，以杀死根系作为空白对照→取出根，洗净，吸干水分→与4 ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎→红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml→空白试验作参比测485nm下吸光度→根据标准曲线，求四氮唑还原量。
五、实验现象和结果a、制作标准曲线（显示计算公式及R^2值）01234浓度（mg/ml）OD值00.1570.4180.820 1.187表一 各浓度吸光度值记录表图一 各浓度TTC溶液在485nm下的吸光度曲线图如图一所示,回归方程为y=303.7x – 0.0910, R^2=0.9735把样品吸光度0.021nm代入方程可得x=3.688x10^-4b、计算TTC还原强度和还原量四氮唑还原量（ug）=TTC浓度×提取液总体积（×稀释倍数）=3.688 x 10^-4 x 25=9.22x 10^-3 ug四氮唑还原量（ug）四氮唑还原强度（ug/g(根鲜重)/h）= ———————————[根重（g）×时间(h)]= 9.22x10^3/(0.5x1)=1.844x10^-2六、分析和讨论1.在实验中，进行标准曲线制作步骤时，加入Na S O粉末摇匀后为出现红色，可能是由于溶液本身浓度有偏差和操作时加入的溶液有偏差。
实验五+根系活力的测定
实验五根系活力的测定一、实验目的• 1、理解植物根系活力的内涵• 2、熟悉测定根系活力的方法及测定原理:•二、实验原理TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
在幼根中，脱氢酶活性的强弱与根系活力成正比。
所以，通过测定脱氢酶的活性，可由脱氢酶活性代表根系活力。
氯化三苯基四氮唑(TTC)溶于水中为无色溶液，还原后生成稳定、红色、不溶于水的三苯基甲腙 (TTF)。
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化溶于乙酸乙酯，485nm有最高吸收峰三、实验材料及用品实验材料:水培1天葱的根系实验器皿:分光光度计、水浴锅、研钵、漏斗、移液管、比色皿、容量瓶、烧杯、滤纸实验溶液:乙酸乙酯、石英砂、硫代硫酸钠(Na2S2O4)、TTC、磷酸缓冲液、硫酸四、实验步骤1.制作TTC标准曲线将配制好的浓度为0,0.01%，0.02%，0.03%，0.04%的TCC溶液，各取5ml放入比色管中，在哥使馆中加入乙酸乙酯5ml和Na2S2O2粉末少量，摇匀?溶液分层，甲腙位于乙酸乙酯层?取上层乙酸乙酯?485nm比色?标准曲线?记录数据。
2.测定根系活力将根系洗净，搽干表面水分，取0.5g根尖样品(第1份加1mol/L硫酸2ml )?0.5,TTC溶液5ml?磷酸缓冲液5ml?37?下保温1h?第2份试管加入1mol/L硫酸2ml，以杀死根系作为空白对照?取出根，洗净，吸干水分?与4 ml乙酸乙酯和少量石英砂在研钵内磨碎 ?红色提取液移入试管且用乙酸乙酯定容到10ml?空白试验作参比测485nm下吸光度?根据标准曲线，求四氮唑还原量。
五、实验现象和结果a、制作标准曲线(显示计算公式及R^2值)浓度(mg/ml) 0 1 2 3 4 OD值 0 0.157 0.418 0.820 1.187表一各浓度吸光度值记录表图一各浓度TTC溶液在485nm下的吸光度曲线图如图一所示,回归方程为y=303.7x – 0.0910, R^2=0.9735把样品吸光度0.021nm代入方程可得x=3.688x10^-4b、计算TTC还原强度和还原量=TTC浓度×提取液总体积(×稀释倍数) 四氮唑还原量(ug)=3.688 x 10^-4 x 25=9.22x 10^-3 ug四氮唑还原量(ug)四氮唑还原强度(ug/g(根鲜重)/h)= ———————————[根重(g)×时间(h)]= 9.22x10^3/(0.5x1)=1.844x10^-2六、分析和讨论1.在实验中，进行标准曲线制作步骤时，加入Na S O粉末摇匀后为出现红色，可能是由于溶液本身浓度有偏差和操作时加入的溶液有偏差。
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实验14 植物根系活力的测定
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。
本实验学习测定根系吸收面积和活力的方法。
一、根系总吸收面积和活跃吸收面积的测定
【原理】
根据植物矿质吸收的理论，植物对溶质的最初吸收具有吸附的特性，并假定这时在根系表面均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层，因此可以根据根系对某种物质的吸附量来测定根的吸收面积。
常用甲烯蓝作为被吸附物质，它的被吸附量可以根据供试液浓度的变化用比色法准确地测出。
已知1mg甲烯蓝成单分子层时所占面积为1.1m2，据此即可求出根系的总吸收面积。
当根系在甲烯蓝溶液中已达到吸附饱和而仍留在溶液中时，根系的活跃部分能把原来吸附的物质吸收到细胞中去，因而继续吸附甲烯蓝。
从后一吸附量求出活跃吸收面积，可作为根系活力指标。
【仪器与用具】
分光光度计1台；100ml烧杯3只；50或100ml量筒1个（依根系大小而定）；吸量管1ml 1支，10ml 1支；试管（15×150mm）10支；容量瓶1000ml 1个，100ml 1个；吸水纸适量；试管架1个。
【试剂】
0.0002mol/L甲烯蓝溶液：精确称取74.8mg甲烯蓝（C16H18N3SCl·3H2O），加水溶解，定容至1000ml。
此溶液每ml含甲烯蓝0.0748mg。
0.010mg/ml的甲烯蓝溶液：用刻度吸管吸取0.0002mol/L甲烯蓝13.37ml定容至100ml，摇匀即成。
【方法】
1．植物材料的准备本实验最好采用水培或砂培植物，以获得完整而无损伤的根系。
玉米根系发达，是较好的材料。
如无水培、砂培试材，也可用盆栽植物，用水将盆土仔细冲净后使用。
田间栽培的材料因不可能无损地挖出全部根系，最好避免在正式试验中使用。
2．甲烯蓝溶液标准曲线的制作取试管7支编号，按表14-1次序加入各溶液，即成甲烯蓝系列标准液。
表14-1 各试剂加入顺序
试管号 1 2 3 4 5 6 7
0.01mg/ml甲烯蓝溶液(ml)
蒸馏水(ml)
甲烯蓝浓度mg/ml 0
10
1
9
0.001
2
8
0.002
4
6
0.004
6
4
0.006
8
2
0.008
10
0.01
以第1管（水）为参比在分光光度计下比色，取波长660nm，读出光密度，以甲烯蓝浓度为横坐标，光密度为纵坐标绘成标准曲线。
3．取待测植物根系用滤纸将水吸干再用排水法在量杯或量筒中测定其根系体积。
把
0.0002mol/L 甲烯蓝溶液分别倒在三个编号的小烧杯里，每杯中溶液量约10倍于根的体积，准确记下每杯的溶液用量。
4．取根系，用吸水纸小心吸干数次，慎勿伤根，然后顺次浸入盛有甲烯蓝溶液的烧杯中，每杯中浸1.5min 。
注意每次取出时都要使甲烯蓝溶液能从根上流回到原烧杯中。
表14-2 测定根系吸收面积记载表 日期：
植物名称
杯中甲烯蓝溶液量(ml) 开始时甲烯蓝浓度(mg/ml)
浸根后 溶液浓度 (mg/ml) 烧杯1 烧杯2 烧杯3 被吸收的 甲烯蓝量 (mg)
烧杯1 烧杯2 烧杯1＋2 烧杯3
根体积(ml)
根吸收 面积m 2
总的
活跃的 活跃/总的(%)
比表面
总的 活跃的
5．从三个烧杯中各取1ml 溶液加入试管，均稀释10倍，测得其光密度，查标准曲线，求出每杯浸入根系后溶液中剩下的甲烯蓝毫克数。
6．把结果记入表14-2，并以下式求出根的吸收面积： 总吸收面积（m 2）= [(C 1－C 1ˊ)×V 1] ＋ [(C 2－C 2ˊ)×V 2]×1.1 活跃吸收面积（m 2）= [(C 3－C 3ˊ)×V 3]×1.1 活跃吸收面积（%）=活跃吸收面积/总吸收面积×100 比表面＝根的总吸收面积/根的体积 式中 C —溶液原来的浓度mg/ml ； C ˊ—浸提后的浓度mg/ml ； 1,2,3—烧杯编号。
二、氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力
【原理】
氯化三苯基四氮唑（TTC ）是标准氧化还原电位为80mV 的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲 （TTF ），如下式：
(TTC)
(TTF)
+
Cl
+C
N N N
N +2H
C
N N N
N
H
HCl
生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
【仪器与用具】
分光光度计；分析天平（感量0.1mg）；恒温箱1台；研钵1套；100ml三角瓶；漏斗；移液管10ml 1支、2ml 1支、0.5ml 1支；20ml刻度试管；10ml容量瓶；小培养皿；试管架，药匙；石英砂适量。
【试剂】
乙酸乙酯；
连二亚硫酸钠（Na2S2O4，为强还原剂，俗称保险粉）；
1%TTC溶液：准确称取TTC 1.0g，溶于少量蒸馏水中，定容至100ml；
0.4%TTC溶液：准确称取TTC 0.4g，溶于少量蒸馏水中，定容至100ml；
磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH7.0）；
1mol/L硫酸：用量筒量取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml；
0.4mol/L琥珀酸钠：称取琥珀酸钠（含6个结晶水）10.81g，溶于蒸馏水中，定容至100ml。
【方法】
1．定性测定
（1）配置反应液把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。
（2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
2．定量测定
（1）TTC标准曲线的制作吸取0.25ml 0.4%TTC溶液放入10ml容量瓶，加少许Na2S2O4粉末，摇匀后立即产生红色的TTF。
再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。
然后分别取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定光密度，绘制标准曲线。
（2）称取根样品0.5g，放入小培养皿（空白试验先加硫酸再加入根样品，其他操作相同），加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗处保温1h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反应。
（3）把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。
把红色提出液移入试管，用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在485nm下比色，以空白作参比读出光密度，查标准曲线，求出四氮唑还原量。
（4）计算将所得数据带入下式，求出四氮唑还强度。
四氮唑还原强度=)h ()g ()
g (时间根重四氮唑还原量⨯μ
【思考题】
不同类型（如草本和木本）植物中，根的表面积和地上部表面积的比例有何不同？。