植物根系活力的测定方法 ( TTC 法)
实验3 根系活力的测定(TTC法)
实验3 根系活力的测定（TTC法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、实验目的熟悉测定根系活力的方法和原理二、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
三、材料、设备仪器及试剂1、材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
2、仪器设备：分光光度计；分析天平（感量0.1mg）；电子顶载天平（感量0.1g）；温箱；研钵；三角瓶50ml；. 漏斗；. 量筒100ml；吸量管10ml；. 刻度试管10ml；. 试管架；容量瓶10ml；. 药勺；. 石英砂适量；. 烧杯10ml、1000ml。
3、试剂：乙酸乙酯（分析纯）。
次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
.1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
.0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
四、实验步骤1、TTC标准曲线的制作取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。
再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。
然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml 置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根系活力的测定
实验十二氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定植物根系活力一、实验目的掌握TTC 法测定植物根系活力的原理和方法。
植物根系与植株整个生命活动紧密相关，其作用主要有：对地上部的支持和固定；物质的贮藏；对水分和盐类的吸收；合成氨基酸、激素等物质。
因此根系的活力是植物生长的重要生理指标之一，它直接影响地上部的生长和营养状况及产量水平。
二、实验原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲腙（TTCH或TTF），比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC 被广泛地用作酶促反应实验的氢受体。
根系中脱氢酶的活性强弱与根的活力成正相关。
所以TTC 还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
三、设备与试剂分光光度计，电子天平，温箱，研钵，漏斗，试管架，药勺，石英砂，50 mL三角瓶，100 mL 量筒，10 mL移液管，10 mL 刻度试管，10 mL容量瓶，10 mL、1 000 mL 烧杯。
①乙酸乙酯（分析纯）或丙酮，保险粉（连二亚硫酸钠，Na2S2O4）。
②1％TTC 溶液：准确称取TTC 1.0 g，溶于少量水中，定容到100 mL。
用时稀释至需要的浓度。
③0.1mol/L，pH7 磷酸缓冲液贮备液A：0.2mol/L NaH2PO4溶液（27.8g NaH2PO4·H2O或31.21gNaH2PO4·2H2O 配成1000ml）；贮备液B：0.2 mol/L Na2HPO4溶液（53.65g Na2HPO4·7H2O或71.64gNa2HPO4·12H2O 配成1000ml）；取A液39ml+B液61ml，用水稀释至200ml）④1 mol·L－1硫酸：用量筒取比重1.84 的浓硫酸55 mL，边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1 000 mL。
ttc法根系活力标准曲线
ttc法根系活力标准曲线
ttc法（氯化三苯基四氮唑法）是一种测定植物根系活力的方法。
标准曲线是实验中用于计算根系活力的基础，它通过测定不同浓度的ttc 溶液与植物根系的还原反应，得出一个标准曲线，从而推算出植物根系的活力。
以下是ttc法根系活力标准曲线的一个示例：
1. 配制不同浓度的ttc溶液，如0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%等。
2. 取植物根系样品，分别放入不同浓度的TTC溶液中，保持在适当的温度和光照条件下。
3. 经过一定时间后（如1小时），取出根系样品，用滤纸吸干表面水分。
4. 测定根系样品在485nm波长下的吸光度，记录下各浓度点的吸光度值。
5. 将吸光度值与ttc浓度绘制在坐标轴上，得到标准曲线。
总结，通过绘制标准曲线，可以找出植物根系活力与ttc浓度之间的关系，从而更准确地计算植物根系的活力。
在实际操作中，可以根据实验需要适当调整ttc溶液的浓度范围和实验时间。
TTC测根系活力的方法
氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力原理：TTC+2H=TTF+HCLTTC无色,TTF红色且比较稳定,不会被空气中的氧气自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.试剂:95%乙醇Na2S(还原剂)0.4%TTC溶液:准确称取TTC 0.4g,溶于少量蒸馏水中,定容至 100 ;0.2M PH8.4 Tris-HCL 缓冲液:母液 A:0.2mol/l三羟甲基甲烷(Tris：分子量121g/mol)(24.2g溶至1000ml) B:0.2mol/l HCL A:5OmL+B:16.5 mL,稀释至200ml.1mol/l硫酸:用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml,边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释定容至1000ml定量测定:(1)TTC标准曲线的制作吸取0.25ml0.4%TTC溶液放入10ml容量瓶中,加少许Na2S晶体（药匙后端一点即可）,摇匀后立即产生红色的TTF.再用95%乙醇定容至刻度,摇匀.然后分别取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、2.00ml、4ml置10ml容量瓶中,用95%的乙醇定容至刻度,即得到含TTF25μg、50μg 、100μg、200 μg、400 μg的标准比色系列,以空白做参比,在485nm波长下测定光密度,绘制标准曲线.(2)称取样品0.5g,放入25ml的小烧杯中(空白实验先加硫酸再加根样品,其他操作相同),加入0.4%TTC溶液和PH8.4 Tris-HCL 缓冲液的等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液中,37℃下暗处保温6h,此后加入1mol/l硫酸2ml(除对照外),以停止反应.(3)把根取出,用吸水纸把材料表面的水吸干,转移到原来的小烧杯中,先加6ml95%的乙醇,浸提15-20min或者封口后放置过夜,直至红色物质完全提出。
提取液转入到10ml的离心管中,用乙醇反复洗涤2-3次,皆转入离心管中,最后加95%的乙醇定容至刻度,4000转速下离心10min,冷却,用分光光度计在485nm下比色,以空白作参比读出光密度,查标准曲线,求出四氮唑还原量.(4)计算将所得数据带入下式,求出四氮唑还原强度四氮唑还原强度=四氮唑还原量(μg)/根重(g)/时间(h)注意事项:1、把根从TTC和Tris-HCL等量混合液中取出时可以不过滤，而直接把根和溶液倾倒在一层纱窗上，在其上面再盖一层纱窗，在纱窗的上面用吸水纸把根上的水分吸干2、37℃保温一定在暗处.3.根切成1cm左右的小段。
植物根系活力的测定
植物根系活力的测定实验5植物根系活力的测定（TTC法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（TTF），如下式：生成的三苯甲（TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）试剂1.乙酸乙酯（分析纯）。
2.次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。
3.1％TTC溶液：准确称取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100mL用时稀释至需要的浓度。
4.磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH7.0）。
5.1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55mL，边搅拌边加入盛有500mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000mL6.0.4mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100mL即成。
（三）仪器设备小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5mL1支、10mL1支、5mL3支，刻度试管6支，分光光度计，分析天平（感量0.1mg），电子顶载天平（感量0.1g），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
三、实验步骤1.定性测定（1）配制反应液把1％TTC溶液、0.4mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。
（2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。
将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
根系活力测定方法
根系活力测定方法根系活力的测定[TTC法]植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
二、材料、设备仪器及试剂（一）材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 分析天平（感量0.1mg）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。
（三）试剂：1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
3.1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
5. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
6. 0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
植物根系活力定性检测液(TTC法)
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编号 DC0032 DF0135 NR0001 PS0013 TC1167
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北京雷根生物技术有限公司
植物根系活力定性检测液(TTC 法)
简介：
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影 响植物地上部的生长和营养状况以及最终产量，是植物生长的重要生理指标之一。TTC(2， 3，5-氯化三苯基四氮唑)是一种氧化还原物质，是标准氧化电位为 80mV 的氧化还原色素， 溶解于水为无色，可以检测根系活力。
3、 观察着色情况，新根尖几毫米以及细侧根都有较为明显的变成红色，表明该处有脱氢酶 存在。
注意事项：
1、 配制好的 TTC Assay buffer 工作液应避光保存，如果见光会变红，影响实验结果。
北京雷根生物技术有限公司
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制 TTC Assay buffer 工作液：取 TTC，按 TTC：TTC Assay buffer：琥珀酸缓冲液 一定的比例混合，即为 TTC Assay buffer 工作液。即配即用，避光保存 3 天有效。
2、 准备样品：取植物须根系洗净，浸没于 TTC Assay buffer 工作液(以完全浸没为准)， 避光孵育。
组成：
编号 TP1025
名称
2×100ml
试剂(A): TTC
2×0.1g
试剂(B): TTC Assay buffer
实验3 根系活力的测定(TTC法)
实验3 根系活力的测定（TTC法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、实验目的熟悉测定根系活力的方法和原理二、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC 被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
三、材料、设备仪器及试剂1、材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
2、仪器设备：分光光度计；分析天平（感量0.1mg）；电子顶载天平（感量0.1g）；温箱；研钵；三角瓶50ml；. 漏斗；. 量筒100ml；吸量管10ml；. 刻度试管10ml；. 试管架；容量瓶10ml；. 药勺；. 石英砂适量；. 烧杯10ml、1000ml。
3、试剂：乙酸乙酯（分析纯）。
次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
.1％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
. 1mol/L硫酸用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
.0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
四、实验步骤1、TTC标准曲线的制作取0.4％TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。
再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。
然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml 置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
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实验 5 植物根系活力的测定（ TTC 法）
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（ TTC ）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（ TTF ），
生成的三苯甲（ TTF ）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以 TTC 还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）试剂
1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（ Na 2 S 2 O 4 ，分析纯），粉末。
3. 1 ％ TTC 溶液：准确称取 TTC 1.0 g ，溶于少量水中，定容到 100 mL 。
用时稀释至需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（ 1/15 mol/L ， pH7.0 ）。
5. 1 mol/L 硫酸：用量筒取比重 1.84 的浓硫酸 55 mL ，边搅拌边加入盛有 500 mL 蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000 mL 。
6. 0.4 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 4.72 g ，溶于水中，定容至 100 mL 即成。
（三）仪器设备
小烧杯 3 个，研钵 1 个，移液管： 0.5 mL 1 支、 10 mL 1 支、 5 mL 3 支，刻度试管 6 支，分光光度计，分析天平（感量 0.1 mg ），电子顶载天平（感量 0.1 g ），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
三、实验步骤
1. 定性测定
（ 1 ）配制反应液把 1 ％ TTC 溶液、 0.4 mol ／ L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按 1:5:4 比例混合。
（ 2 ）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。
将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置 37 ℃左右暗处放 1 ～ 3 h ，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
2. 定量测定
（ 1 ） TTC 标准曲线的制作取 0.4 ％ TTC 溶液 0.2 mL 放入大试管中，加9.8 mL 乙酸乙酯，再加少许 Na 2 S 2 O 4 粉末摇匀，则立即产生红色的 TTF 。
此溶液浓度为每毫升含有 TTF 80 μg 。
分别取此溶液 0.25 mL 、 0.50 mL 、1.00 mL 、 1.50 mL 、 2.00 mL 置 10 mL 刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含 TTF 20 μg 、 40 μg 、 80 μg 、 120 μg 、 160 μg 的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在 485 nm 波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
（ 2 ）称取根尖样品 0.5 g ，放入小烧杯中，加入 0.4 ％ TTC 溶液和磷酸缓冲液（ pH7.0 ）各 5 mL ，使根充分浸没在溶液内，在 37 ℃下暗保温 1 ～
2 h ，此后立即加入 1 mol/L 硫酸 2 mL ，以停止反应。
（与此同时做一空白
实验，先加硫酸，再加根样品， 37 ℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操
作步骤同上）。
（ 3 ）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯 3 ～ 4 mL ，
充分研磨，以提出 TTF 。
把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残
渣洗涤 2 ～ 3 次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为 10 mL ，用分
光光度计在波长 485 nm 下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，
即可求出 TTC 还原量。
四、结果计算
根系活力 = [mg TTF/ （ g · h ） ]
式中： C ——四氮唑还原量，μg 。
W ——根重， g 。
h ——时间， h 。
[ 思考题 ]
为什么要测定根系活力 ? 植物的根与地上部分有何关系 ?
因为根的生长情况和活力水平直接影响植物个体的生长情况，营养状况和产量水平，所以要测定根系活力。
植物的根与地上部的生长具有相关性，一方面二者相互依赖，即根负责从土壤中吸收水分，矿物质，有机质以及合成少量的有机物，细胞分裂素等供地上部所用，而地上部则供给根生长所必需的糖类，维生素等。
一般而言，根系发达，地上部分生长良好。
另一方面二者相互制约，主要表现在对水分，营养等的争夺上，并从根冠比的变化上反映出来。