糖化酶和葡萄糖氧化酶

生物化学下册葡萄糖氧化酶

生物化学下册葡萄糖氧化酶一、概述葡萄糖氧化酶是一种重要的酶类蛋白，参与了糖代谢途径中葡萄糖的氧化过程。

它在细胞内起着至关重要的作用，对维持细胞内的能量平衡和新陈代谢有着举足轻重的影响。

本文将围绕着葡萄糖氧化酶的结构、功能、代谢途径以及临床应用等方面展开介绍。

二、葡萄糖氧化酶的结构葡萄糖氧化酶是一种单亚基蛋白酶，其分子量约为約170kD，由四个相同的亚基组成。

每个亚基中含有一个腺苷酸结合位点和一个金属结合位点。

腺苷酸结合位点与葡萄糖结合位点相互作用，金属结合位点则与辅因子结合，起到催化反应的作用。

三、葡萄糖氧化酶的功能1. 氧化葡萄糖葡萄糖氧化酶可催化葡萄糖的氧化过程，将葡萄糖分解为丙酮酸、乳酸或乙醛等产物，释放能量，供细胞进行生命活动。

2. 调节新陈代谢葡萄糖氧化酶参与了糖代谢途径中的糖酵解和糖异生过程，调节了糖类物质的代谢平衡，对维持细胞内的能量供给和代谢平衡起着重要的作用。

四、葡萄糖氧化酶在代谢途径中的作用葡萄糖氧化酶主要参与了糖代谢途径中的糖酵解和糖异生过程。

在糖酵解过程中，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖分解为丙酮酸和乳酸，产生ATP，为细胞提供能量。

而在糖异生过程中，葡萄糖氧化酶则参与了葡萄糖的合成，调节了葡萄糖的合成与分解平衡。

五、葡萄糖氧化酶的临床应用1. 临床诊断葡萄糖氧化酶的活性可以反映出病人的代谢情况，因此可以作为临床诊断的一个重要指标，对于糖尿病、肝病和其他一些代谢性疾病的诊断有一定的参考价值。

2. 药物研发葡萄糖氧化酶作为糖代谢途径中的关键酶类蛋白，在药物研发领域中具有重要的应用前景。

通过调节葡萄糖氧化酶的活性，可以有效地治疗一些糖代谢异常相关的疾病。

六、结论葡萄糖氧化酶作为糖代谢途径中的关键酶类蛋白，在细胞代谢和能量供给中起着不可替代的作用。

其结构与功能的研究对于深入了解细胞的代谢机制，促进新药研发以及疾病的诊断与治疗具有重要的理论和实践意义。

希望未来能有更多的研究在葡萄糖氧化酶领域取得突破，为人类健康做出更大的贡献。

两种曲霉糖化性质的比较

两种曲酶糖化性质的比较研究在国内传统的制酒行业中，由于黑曲霉含有丰富的酶系如液化酶、糖化酶、纤维素酶和蛋白酶等，自70年代大多都由米曲霉改为黑曲霉作糖化用菌种。

但在日本迄今仍在采用米曲霉做糖化菌，说明其中必有原因。

鉴于此，本实验以黑曲霉和米曲霉为研究对象，研究比较它们的液化酶和糖化酶（葡萄糖淀粉酶）生产性质。

黑曲霉是一种常见的真菌, 属于半知菌类曲霉属。

黑曲霉对营养要求较低, 只要培养基中含有碳源、氮源及磷、钾、镁、硫等元素即能生长良好。

黑曲霉可以产生许多种酶, 现已成为工业应用常见的菌种之一。

根据bigelis1989年的统计, 25种主要商品酶制剂中就有15种来源于黑曲霉仁, 。

它们分别是α-淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶、葡萄糖酶、糖化酶、葡萄糖氧化酶、半纤维素酶、橙皮昔酶、脂肪酶、果胶酶、蛋白酶、单宁酶。

美国准许使用的食品工业用酶生产菌种只有黑曲霉、酵母、枯草杆菌等约20种, 其中以黑曲霉所产酶类最多。

我国酶制剂工业生产用菌种中, 黑曲霉占了17种中3种, 即黑曲霉变异株和,它们分别用于糖化酶、果胶酶和酸性蛋白酶的生产[1]。

黑曲霉酶类在工业上具有重要的作用, 例如, 柠檬酸等有机酸的发酵生产、食品及饮料加工以及用于轻化工业、纺织工业、饲料加工和废物的处理等等。

总之, 黑曲霉生产的酶制剂具有用量大、应用范围广、安全性好的特点, 已愈来愈受到人们的重视。

米曲霉的菌丝由多细胞组成，是一类产复合酶的菌株，除产蛋白酶外，还可产淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等。

在淀粉酶的作用下，将原料中的直链、支链淀粉降解为糊精及各种低分子糖类，如麦芽糖、葡萄糖等；在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸，而且可以使辅料中粗纤维、植酸等难吸收的物质降解，提高营养价值、保健功效和消化率，广泛应用于食品、饲料、生产曲酸、酿酒等发酵工业。

1 材料与方法1．1材料菌种：黑曲霉UV-48；米曲霉-41．2培养基种子培养基（土豆汁培养基；察式培养基）；发酵培养基（麸皮培养基；液体深层发酵液）1．3试剂1．33%可溶性淀粉；碘液；0.01MNacl-HAC缓冲液；6NHCL；DNS试剂；葡萄糖标准溶液1．4实验仪器电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司，DK-8D）；721型分光光度计（上海欣茂仪器有限公司，2C409035）；立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂，LDZX-75KB)；恒温培养箱(上海实验仪器厂有限公司，DHP060)；气浴恒温摇床（太仓市实验设备厂，TCYQ）。

糖化酶

我国糖化酶的研究概况糖化酶是世界上生产量最大应用范围最广的酶类，介绍了糖化酶的结构组成、特性、生产、提取、活力检测以及提高酶活力的研究。

主要的内容包括：一、糖化酶的简介糖化酶是应用历史悠久的酶类，1 500年前，我国已用糖化曲酿酒。

本世纪2O年代，法国人卡尔美脱才在越南研究我国小曲，并用于酒精生产。

50年代投入工业化生产后，到现在除酒精行业，糖化酶已广泛应用于酿酒、葡萄糖、果葡糖浆、抗菌素、乳酸、有机酸、味精、棉纺厂等各方面，是世界上生产量最大应用范围最广的酶类。

糖化酶是葡萄糖淀粉酶的简称(缩写GA或G)。

它是由一系列微生物分泌的，具有外切酶活性的胞外酶。

其主要作用是从淀粉、糊精、糖原等碳链上的非还原性末端依次水解a一1，4糖苷键，切下一个个葡萄糖单元，并像B一淀粉酶一样，使水解下来的葡萄糖发生构型变化，形成B—D一葡萄糖。

对于支链淀粉，当遇到分支点时，它也可以水解a一1，6糖苷键，由此将支链淀粉全部水解成葡萄糖。

糖化酶也能微弱水解a一1，3连接的碳链，但水解a一1．4糖苷键的速度最快，它一般都能将淀粉百分之百地水解生成葡萄糖。

二、糖化酶的结构组成及分类糖化酶在微生物中的分布很广，在工业中应用的糖化酶主要是从黑曲霉、米曲霉、根霉等丝状真菌和酵母中获得，从细菌中也分离到热稳定的糖化酶，人的唾液、动物的胰腺中也含有糖化酶。

不同来源的淀粉糖化酶其结构和功能有一定的差异，对生淀粉的水解作用的活力也不同，真菌产生的葡萄糖淀粉酶对生淀粉具有较好的分解作用。

糖化酶是一种含有甘露糖、葡萄糖、半乳糖和糖醛酸的糖蛋白，分子量在60 000 到1 000 000间，通常碳水化合物占4％ 18％。

但糖化酵母产生的糖化酶碳水化合物高达80％，这些碳水化合物主要是半乳糖、葡萄糖、葡萄糖胺和甘露糖。

三、糖化酶的特性1、糖化酶的热稳定性在糖化酶的热稳定性机理及筛选热稳定性糖化酶菌株上。

工业上应用的糖化酶都是利用它的热稳定性。

一般真菌产生的糖化酶热稳定性比酵母高，细菌产生的糖化酶耐高温性能优于真菌。

葡萄糖氧化酶的功效

葡萄糖氧化酶的功效
葡萄糖氧化酶（glucose oxidase）是一种酶类，通常源自黄曲霉菌（Aspergillus niger）。

其主要功效如下：
1. 葡萄糖监测与诊断：葡萄糖氧化酶可以将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并同时生成过氧化氢。

这个反应通过葡萄糖检测仪器可以测量过氧化氢的产生量，从而间接检测出葡萄糖浓度。

这种反应常用于血糖检测仪器，适用于糖尿病患者的血糖监测。

2. 食品防腐：葡萄糖氧化酶可以将食物中的葡萄糖转化为葡萄糖酸，并生成过氧化氢。

过氧化氢具有一定的抑制微生物生长的能力，因此葡萄糖氧化酶可以被用作食品防腐剂，在某些食品中可以延长其保质期。

3. 面包蛋糕发酵：葡萄糖氧化酶被广泛应用于面包和蛋糕等糕点制作过程中。

它能够将面团中的葡萄糖氧化成葡萄糖酸并生成过氧化氢，通过产生的气泡使面团膨胀发酵，增加面包的松软度和口感。

总的来说，葡萄糖氧化酶在生物学、医药、食品加工等领域具有广泛的应用前景。

十种常见的酶制剂

十种常见的酶制剂（1）纤维素酶纤维素酶，是由多种水解酶组成的一个复杂酶系，自然界中很多真菌都能分泌纤维素酶。

习惯上，将纤维素酶分成三类：C1酶、Cx酶和β葡糖苷酶。

C1酶是对纤维素最初起作用的酶，破坏纤维素链的结晶结构。

Cx酶是作用于经C1酶活化的纤维素、分解β-1，4-糖苷键的纤维素酶。

β葡糖苷酶可以将纤维二糖、纤维三糖及其他低分子纤维糊精分解为葡萄糖。

自1906年Seilliere在蜗牛的消化液中发现纤维素酶至今已有一百余年了,随着在工业上的广泛应用,特别是在纺织工业、能源工业上的应用,纤维素酶已成为最近十几年酶工程研究的一个焦点。

近年来有关纤维素酶的基础研究,包括酶的氨基酸序列、基因的克隆与表达、酶蛋白的空间结构与功能,以及酶蛋白的基因调控等诸多方面都取得显著进展。

到目前为止,登记在Swiss2Protein数据库的纤维素酶的氨基酸序列有649条,基因序列有433条。

我国对纤维素酶的研究始于上世纪50年代,迄今已有50多年的历史。

在纤维素酶的菌种开发、发酵培养、基因的克隆与表达,以及纤维素酶在纺织、能源等方面的应用都取得较大进展. 进入21世纪,利用纤维素酶转化纤维素物质产生葡萄糖进而发酵获得生物乙醇,可以避免对粮食作物的大量损耗,引起了各国政府和研究机构的重视,这其中的关键是纤维素酶的成本问题。

由于纤维素酶发酵活力较低,因此其应用成本也较高。

同时纤维素酶相比其他糖苷水解酶类,比活力至少要低1～2个数量级,如滤纸酶的比活力为1IU/mg左右,CMC的比活力约为10IU/mg[7],从而造成酶的作用效率较低。

这是两个限制纤维素酶应用的瓶颈问题,也是纤维素酶研究的热点与难点。

目前通过传统的菌种诱变和基因工程技术可以较大幅度地提高目的蛋白的表达量,从而提高酶的发酵水平.还可以通过改善发酵条件和工艺,如采用固体发酵来大幅度降低发酵成本。

但是提高酶降解天然纤维素的效率则需要,深入研究纤维素酶的结构与功能以及作用方式,进而对其进行有效改造;或者通过筛选新的产酶菌种,发现具有开发潜力的新酶源.（2）脂肪酶脂肪酶即三酰基甘油酰基水解酶，它催化天然底物油脂水解，生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯。

面粉中常用的酶制剂的作用机理及应用方法

（2）在面包中添加真菌α-淀粉酶使面包变得柔软，增强伸展性和保持气体的能力，容积增大，出炉后制成触感良好面包。
（3）真菌α-淀粉酶作用淀粉产生的糊精，又对改良面包外皮色泽已有良好的效果。
3、细菌α-淀粉酶
细菌α-淀粉酶一般是耐热的枯草杆菌α-淀粉酶在作用机理上与真菌α-淀粉酶有一定的差别。同样以可溶性淀粉作底物时，真菌α-淀粉酶的水解终产物主要是麦芽糖和麦芽三糖；而细菌α-淀粉酶的终产物主要是短链糊精。两者的性质差异也很大。其最适pH值为5.0最适温度为80℃～90℃。
因此，优良的面包制造，必须添加适量的α-淀粉酶。
在面包生产中添加α-淀粉酶，使面包变得柔软，增强伸展性和保持气体的能力，容积增大，出炉后制成触感较好的面包，此外，由于α-淀粉酶作用淀粉所生成的糊精，对改良面包外皮色泽已有较好的效果。
2、真菌α-淀粉酶
真菌α-淀粉酶简称FAA,来源于米曲霉，作为传统酶制造，是第一个应用于面包制作的微生物酶，它取代了麦芽是由于麦芽中的淀粉酶含量不稳定，而且含有蛋白水解酶，真菌α-淀粉酶具有更稳定的活性而不含蛋白质酶活性，所以此酶应用十分广泛。
由于其较高的耐热性，在烘培是仍有酶活性，从而产生过多的可溶性糊精，结果使得最终制品发粘而不是和在面包中大量使用。但与真菌α-淀粉酶相比，它能产生很好的抗老化效果。而对面包的弹性和口感都优于真菌α-淀粉酶，因而小规模的使用及如何解决其耐高温而造成最终产品发粘的问题是十分重要的。
α-淀粉酶具有仿腐抗老的能力，其机理是此酶将淀粉分解生成地分子量糊精火地分子量的分支淀粉，能干涉支链淀粉的重结晶。产生的糊精会干涉面包中膨胀淀粉粒与蛋白质网络结构的相互作用，而且支链淀粉和支链淀粉中裂开的键有助于支链淀粉-脂肪复合物的形成。
面筋蛋白由麦谷蛋白和麦醇蛋白组成，面筋蛋白中的半胱氨酸是面筋的空间结构和面团形成的关键。蛋白质分子间的作用取决于二硫键－S－S－的数目和大小。二硫键可在分子内形成（麦醇蛋白），也可以在分子间形成（麦谷蛋白）

测定糖化酶活性的方法

对照组
I2 NaIO
完全歧化反应，无葡萄糖
NaIO3 I2
实验组
I2
NaIO
NaIO另一部分歧化反应生成NaIO3
NaIO一部分与葡萄糖反应
I2
试剂与器材
1.糖化酶试剂；
2.微量滴定管、滴定台、试剂瓶、试管、三角瓶、 pH计、电子天平；
3.试剂
2%可溶性淀粉溶液；pH4.6、0.1mol/L的醋酸缓冲液； 0.1mol/L碘液；0.1mol/L氢氧化钠溶液； 2mol/L硫酸溶液； 0.1N硫代硫酸钠溶液；0.5%淀粉指示剂。
式中:
B——空白滴定消耗的硫代硫酸钠毫升（ml）数；
A——酶液滴定消耗的硫代硫酸钠毫升（ml）数（取3次滴定的平均值）；
N——硫代硫酸钠的当量浓度。
180.1——葡萄糖的摩尔质量。
8/5——表示从8ml酶反应体系取出5ml反应液。
2——所加酶液为0.5ml，按定义为1ml。
60/10——表示酶反应时间为10min，按定义为1h。
（2）在上述条件下， 1ml酶液每分钟催化2% 淀粉溶液水解生成1μmol葡萄糖的酶量定义为1个酶活力单位（U）：
酶活力单位（U/ml）=（B－A）×10-3 ×（N/2）× （8/5）×106×2 ×（1/10）
式中符号与前式相同，
其中：
10-3—— ml换算成L。
106—— μmol换算成mol。
4.以0.5%可溶性淀粉为指示剂（4-5滴即可），用0.1N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失为终点。记录0.1N硫代硫酸钠消耗的毫升数：酶液样品（A）、空白对照（B）；
计算
(1)在上述条件下，1ml酶液每小时催化2%淀粉溶液生成1mg葡萄糖的酶量定义为1个酶活力单位：

酶制剂作为面粉改良剂的作用及发展趋势

酶制剂作为面粉改良剂的作用及发展趋势
摘要：本文综述了当前用于面粉品质改良剂中多种酶制剂的作用机理、应用效果和应用优势,并讨论了应用于面粉改良中酶制剂的最新研究进展,展望了在面粉工业中酶制剂的应用前景和发展趋势。
关键词：酶制剂;面粉;应用;作用机理
酶制剂，（Zymin）是指从生物中提取的具有酶特性的一类物质，主要作用是催化食品加工过程中各种化学反应，改进食品加工方法。在我国传统饮食中，面粉是一日三餐中最大量的主食之一，同时也是现代食品工业中最主要的原辅料之一。随着人们生活水平的日益提高和食品工业的不断发展，人们对面粉及面制食品的品质也提出了更高的要求，因此不得不通过添加国际上通常使用的面粉改良剂来改善面粉的品质，生产出相应的专用粉。1995年第44届JECFA确认溴酸钾有致癌性和遗传毒性，不宜用作食品添加剂，许多国家都相继禁止使用。因此各国的科技工作者都在寻找、研制溴酸钾的替代品。食品行业和大众消费者迫切需要健康、天然、无公害的面粉改良剂，酶制剂则正好符合这一要求，酶制剂来自生物（动物、植物、微生物），是一类蛋白质，而且许多酶制剂是用现代生物技术制作，是一种纯天然的生物制品、绿色食品添加剂。在谷物加工和其它食品加工中被广泛应用，在面粉工业中的应用早已引起人们的重视，在各种专用粉的生产和改良中发挥着不可忽视的作用[2-6]。我国卫生部决定自2005年7月1日起，取消溴酸钾作为面粉处理剂在小麦粉中使用。因此采用新型酶制剂和其它安全、天然的成分，开发出以酶制剂为主体的新型高效的能替代溴酸钾的面粉品质改良剂成为我们面粉改良工作的重点方向之一。本文就常用于面粉品质改良的酶制剂分别作以论述，并对酶制剂在面粉品质改良中的应用发展趋势作以展望。
1.4脂肪酶[4, 7, 15, 22]
脂肪酶又叫脂酶、甘油酯水解酶,系统名为EC3.1.1.3,在烘焙工业中的应用也是最近几年才开始。脂肪酶作用于脂肪中的酯键,它能催化甘油三酯水解生成甘油二酯或甘油一酯或甘油。生产脂肪酶的微生物主要是有假丝酵母、黑曲霉、根霉、假单孢菌、葡萄球菌等。其最适pH6.0~9.0,温度30~40℃,能被钙离子和低浓度胆碱盐激活。其中应用于面粉工业的脂肪酶来源于微生物。脂肪酶可以添加于面包、馒头及面条的专用粉中。在面包专用粉中加入脂肪酶可以得到更好的面团调理功能,使面团发酵的稳定性增加,面包的体积增大,内部结构均匀,质地柔软,包心的颜色更白,且能提高面包的保鲜能力;而脂肪酶水解脂肪形成的单酰甘油能与淀粉结合形成复合物,从而延缓淀粉的老化,提高面包的保鲜能力,在面条专用粉中加入脂肪酶,可减少面团上出现斑点,提高咬劲,使面条在水煮中不粘连、不易断,表面光亮。在面粉中适量添加脂肪酶可明显增加面粉的抗拉伸阻力,延伸性增加,可以解决加入强筋剂后面粉的延伸度变得过小的不足。

葡萄糖氧化酶

发现与历史
发现
葡萄糖氧化酶最早是在1933年由德国科学家在面包酵母中发现的。
历史
自发现以来，葡萄糖氧化酶在多个领域得到了广泛的应用和研究，特别是在食品工业和生物传感器领域。
结构与功能
结构
葡萄糖氧化酶是由两个相同的亚基组成的二聚体，每个亚基包含一个铜离子和一个蛋白质分子。
功能
该酶的主要功能是催化葡萄糖与氧气的反应，生成葡萄糖酸和过氧化氢。此外，葡萄糖氧化酶还具有一些其他的功能，如抑制肿瘤细胞生长和调节免疫反应等。
葡萄糖氧化酶还可用于生物传感器制造，通过检测葡萄糖含量变化来监测环境中的污染物或有毒物质。
葡萄糖氧化酶在环境保护领域还有潜在的应用价值，如用于土壤修复和生态恢复等。
04
葡萄糖氧化酶的提取与纯化
提取方法
01
02
03
04
酸提取法
利用酸性条件溶解细胞，释放出葡萄糖氧化酶，再经过离心
分离得到粗酶液。
葡萄糖氧化酶还可用于药物研发，作为药物筛选的工具酶，帮助筛选具有药理活性的小分子化合物。
葡萄糖氧化酶在医疗领域还有潜在的应用价值，如用于治疗糖尿病等代谢性疾病，以及用于肿瘤免疫治疗等。
在环境保护领域的应用
葡萄糖氧化酶可用于废水处理，通过催化葡萄糖氧化反应产生过氧化氢，利用过氧化氢的强氧化性降解废水中合成也有影响，过高或过低的温度和pH值可能会抑制酶的合成。
3
基因表达调控
基因表达的调控也会影响葡萄糖氧化酶的合成，如转录因子、miRNA等对基因表达的调控。
03
葡萄糖氧化酶的应用
在食品工业中的应用
葡萄糖氧化酶可用于食品加工过程中，如面包、糕点、饮料等，作为防腐剂和抗氧化剂，延长食品的保质期。

酶活力测定的原理和方法

• 3、甲醛滴定法：用蛋白酶水解蛋白质生成氨基酸。再用甲醛固定氨基酸的氨基，用0.1N NaOH滴定生成的氨基酸的量，从而测定酶活力。
• 4、DHT—酪蛋白法：用5-氨基四唑重氮盐将酪蛋白中部分组氨酸和酷氨酸重氮化，得到黄色的重氮5-氨基四唑酪蛋白（DHT-酪蛋白）。以 DHT-酪蛋白为底物，在蛋白酶作用下，水解生成DHT-肽。二价镍离子可与DHT-蛋白及DHT-肽形成稳定的可溶性红色螯合物，而锌离子可迅速沉淀DHT-酪蛋白，但不沉淀DHT-肽。选用合适浓度的锌离子和镍离子作为沉淀剂和显色剂，利用比色法可测定蛋白酶活力。
2、偶联的连续法
• 偶联的连续法就是将指示酶直接加到待测酶反应系统中，将其产物直接或间接转变成一个可用光谱吸收仪检测的化合物。连续的偶联反应必须在酶反应相同条件（ pH ，温度等）下进行，且加入的指示酶，以及其他各种物质不能干扰原来的酶活力。
四、酶分析的自动化
• 所谓酶分析的自动化是指从加样，启动反应，检测、数据记录及结果处理等整个过程都由仪器自动操作。自动分析技
十、胰蛋白酶的活力测定
• 测定时，取底物溶液3.0mL，加盐酸（0.001mol/L）0.2mL混匀，作为空白。取供试品溶液0.2mL与底物溶液（预热至25±0.5℃） 3.0mL，立即计时并摇匀，使比色池内的温度保持在25±0.5℃，在253nm波长处，每隔30s 读吸收度，共5min。以吸收度为纵坐标，时间为横坐标作图，取在3min内成直线部分的吸收度计算分析。
• 1、福林—酚法：蛋白酶催化蛋白质水解生成氨基酸。其中含酚基的氨基酸(酪氨酸、色氨酸等)与福林—酚试剂反应，生
成蓝色复合物。蓝色深浅与含酚氨基酸
的量成正比，从而测定其活力。

糖化酶执行标准

糖化酶执行标准本标准规定了糖化酶的酶活力定义和测定方法、酶活力单位定义、糖化酶的活性范围、糖化酶的底物特异性、糖化酶的活性稳定性、糖化酶的存储条件及保质期、糖化酶的外观及物理性质、糖化酶的使用方法及注意事项。

本标准适用于糖化酶的生产、检验和使用。

1.酶活力定义和测定方法糖化酶的酶活力定义为：在规定的反应条件下，每分钟催化底物生成1μmol葡萄糖所需的酶量。

糖化酶活力的测定方法为：将一定量的糖化酶加入底物溶液中，在规定的温度和时间下反应，用葡萄糖氧化酶-DNS法测定反应生成的葡萄糖含量，计算出酶的活力。

2.酶活力单位定义糖化酶的酶活力单位（U）定义为：在规定的反应条件下，每分钟催化底物生成1μmol葡萄糖所需的酶量。

3.糖化酶的活性范围糖化酶的活性范围为：适宜温度范围为40℃-85℃，适宜pH范围为4.0-6.5。

4.糖化酶的底物特异性糖化酶的底物特异性为：能水解淀粉的α-1,4-葡萄糖苷键，生成葡萄糖，但不能水解纤维素和其他多糖。

5.糖化酶的活性稳定性糖化酶的活性稳定性为：在规定的储存条件下，糖化酶的活力保持稳定，有效期不低于2年。

6.糖化酶的存储条件及保质期糖化酶的存储条件为：密封、干燥、阴凉、避光。

糖化酶的保质期为：在上述存储条件下，有效期不低于2年。

7.糖化酶的外观及物理性质糖化酶应为无色至淡黄色的固体或液体，无异味。

其物理性质包括：相对分子质量低于100kDa，溶解性良好，不溶于有机溶剂和水。

8.糖化酶的使用方法及注意事项使用方法：将所需用量的糖化酶加入底物溶液中，搅拌均匀，按照规定的温度和时间进行反应。

反应结束后，用葡萄糖氧化酶-DNS法测定生成的葡萄糖含量。

根据测定结果计算出糖化酶的实际用量。

使用时应遵守使用说明和安全规定。

注意事项：操作时应避免直接接触皮肤和眼睛，若不慎接触，应立即用清水冲洗。

储存和使用时应避免污染和交叉污染。

食品保质保鲜剂——葡萄糖“氧化酶”

食品保质保鲜剂——葡萄糖“氧化酶”一、葡萄糖氧化酶的性质葡萄糖氧化酶是用黑曲霉等经过发酵后制得的高纯度酶制剂。

现在生物领域最主要的工具酶在食品工业中应用非常广泛。

高纯度葡萄糖氧化酶为淡黄色粉末，易溶于水，完全不溶于乙醚、氯仿、丁醇、吡啶、甘油、乙二醇等有机溶剂，50％丙酮、66％的甲醇能使其沉淀。

其分子量为15万左右。

其固体酶制剂在0℃下保存可稳定2年以上，在－15℃保存可稳定8年，稳定的pH在3～4，最适作用温度30℃～60℃，化学物质EDTA、KCN、NaF不影响其酶活性，但酶活性受HgCL（氯化汞）、AgCL（氯化银）、苯肼、对氯汞苯甲酸等影响而使酶活性降低。

葡萄糖氧化酶的最大特点是能消耗氧气催化葡萄糖氧化；每克分子葡萄糖氧化酶在有过氧化氢酶存在下消耗1克原子氧；在没有过氧化氢酶存在下消耗1克分子氧，在有乙醇和过氧化氢酶存在下，也消耗1克分子氧。

二、葡萄糖氧化酶在食品工业中的应用1．在酿酒类生产中的应用葡萄糖氧化酶能抗啤酒氧化，保持啤酒风味，延长保存期。

啤酒混浊是由多酚或多肽、二价金属等物质由低分子向高分子缩聚，并以多酚聚合为主，氧是啤酒混浊母体形成与结合的促成因素。

啤酒中双乙酰含量对啤酒口味影响较大，啤酒在保存期中双乙酰含量增加是由瓶颈空气引起。

在啤酒生产中，多酚氧化生成挥发性羧基化合物也使啤酒乙酰化，氧化作用可加深啤酒色泽使之变暗红色。

即啤酒中含氧高引发啤酒氧化变味变色。

在啤酒中加入葡萄糖氧化酶，可除去啤酒中溶解氧与瓶颈氧，阻止啤酒的氧化变质过程，可使氧与啤酒中的葡萄糖生成葡萄糖酸内酯而消耗氧。

由于该酶具有专一性，不会对啤酒中其他物质产生作用。

葡萄糖氧化酶在防止啤酒老化，保持啤酒原有风味，延长保存期有显著效果。

白葡萄酒生产中，氧的存在使白葡萄酒发生褐变，在白葡萄酒生产中添加0．5ppm～1．0ppm的葡萄糖氧化酶可有效减轻氧造成的褐变危害。

2．在面粉中及制品的应用葡萄糖氧化酶是面粉改良剂与面包品质改良剂。

酶在谷物食品加工中应用

酶在食品加工中应用——谷物食品08生工2班王文辉0820020051摘要：该文综述谷物食品加工中广泛使用淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、木聚糖酶、葡萄糖氧化酶、转谷氨酰胺酶特性及其应用进展，并展望其发展前景。

关键词：酶；谷物食品；食品加工Abstract：This article introduced properties and application of the amylase，protease，lipase，xylanase，glucose oxidase，transglutaminase used widely in cereal food processing an d promised its future．Key Words：enzyme；cereal food；food processing联合国粮食及农业组织提出粮食概念是指谷物(Cerea1)，包括小麦、粗粮和稻谷三大类，其中，粗粮主要包括玉米、大麦、高梁、燕麦、荞麦及其它杂粮；谷物所含营养物质主要是淀粉，其次是蛋白质。

随着人们生活水平不断提高，对谷物食品品质提出更高要求；而生物工程技术发展，尤其是酶工程技术发展为谷物食品加工和品质改良提供有利工具。

品加工中所用酶的特性及其应用。

一、谷物食品加工中所用酶及其特性由于谷物含有丰富淀粉、蛋白质，所以在谷物食品加工中主要使用的酶为淀粉酶和蛋白酶；同时赋予谷物食品特殊风味和良好品质的酶有脂肪酶、木聚糖酶、葡萄糖氧化酶、转谷氨酰胺酶等等。

1．1淀粉酶淀粉酶是谷物食品加工中使用最广泛一类酶，主要有 a一淀粉酶、B一淀粉酶、糖化酶、葡萄糖异构酶、环状糊精葡萄糖基转移酶。

a一淀粉酶是内切水解酶，水解中间部位a-1，4糖苷键，把庞大淀粉分子迅速断裂成小分子糊精。

淀粉酶一般在 pH5．5～8时稳定，pH 4以下容易失活，酶最适 pH值为 5～6，不同来源一淀粉酶其性质有很大差别。

一淀粉酶主要来源于真菌、细菌及霉菌。

食品酶学-葡萄糖氧化酶

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三、葡萄糖氧化酶在食品加工中的应用
葡萄糖氧化酶在食品加工中的应用是多种多样的，根据其作用有四个方面
①形成过氧化氢
②形成葡萄糖酸
③除去葡萄糖
④除去氧
葡萄糖氧化酶是经微生物发酵和最先进的提纯技术纯化而得到的绿色生物食品保鲜剂，无毒无副作用。能够除去食品中溶解氧，起到保鲜、护色、防褐变、保护维生素C、延长食品保质期的作用。
有一段平坦部分，而在两侧都急剧地下降。曲线在高pH一侧下降是由于酶的不稳定性；在低pH一侧下降是由于pH对酶的反应速度的真实
影响
底物起稳定酶活性作用
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3.温度对酶活力的影响
葡萄糖氧化酶反应体系含有气体反应物氧，因此，反应温度的改变意味着氧在反应体系中浓度的改变。
当温度升高时，反应体系氧的溶解度下降，这就抵消了温度升高对酶反应速度的影响。
（氧化态）
图中 G：β-D-葡萄糖， L：δ-D-葡萄糖酸内酯
O2 （非酶水解） H2O
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二、葡萄糖氧化酶活力测定
测定葡萄糖氧化酶催化的反应中氧消耗量量压法外氧电极法
根据反应中葡萄糖消耗的速度葡萄糖酸和H2O2生成速度
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偶联酶法
葡萄糖氧化酶的活力测定——偶联酶法
（1）原理：在有氧存在的情况下，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖的氧化反应生成葡萄糖酸和过氧化氢，酶而活加测过定氧原化理物：酶后分解过氧化氢，分解出的氧又将邻-联二茴香胺氧化变成棕色物质，这一反应使溶液吸光度增大（436nm），与葡萄糖氧化酶活性成线性关系:
（302℃酶）条活定件力义下定：每义1m：个in在葡催25萄化℃糖氧，氧化PH化17.μ0酶的g单分条位子件“的下，U葡”每萄相分糖当钟或于葡萄糖氧化酸1的毫酶摩定尔葡义萄为糖1个所葡需的萄酶糖量酶为的一活个力活单力位单位。