自身抗体的检测及应用 ppt课件
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ANA阳性
可见于多种临床情况，出了风湿病外，也可见于正常人或非风湿病。 (1)健康人:年龄越大,阳性率越高(>60岁的阳性率为20%-25%),但为低滴
度。 (2)有SLE家族史的一级亲属,有近50%为阳性 (3)肺疾病、肝病、血液病、慢性感染等。 注意：正常人中一般ANA滴度较低。
21
ANA阳性
15
16
欧蒙印迹法试剂盒用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP、Sm、 SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、Jo-1、CENP B、 dsDNA、核小体、组蛋白和核糖体P蛋白等14种不同抗原lgG类抗体。
17
自身抗体检测结果正确解读
检测方法局限性：假阳性，假阴性 临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期
7
自身抗体检测常用方法学
间接免疫荧光法：解决有与无的问题 免疫印迹法：解决有什么的问题 酶联免疫吸附试验：解决有多少的问题
8
2020/11/25
9
抗核抗体（ANA）
【定义】 ANA是抗核酸和核蛋白抗体的总称，泛指抗各种细胞核成分的 抗体。
【分类】 (1)抗核蛋白抗体 (2)抗DNA抗体(包括抗dsDNA和抗ssDNA) (3)抗可提取性核抗原(ENA)抗体
22
ANA阴性
(1)正常人或非结缔组织病患者，其体内应该不存在ANA。 (2)疾病初期，ANA含量不足以被检测出;临床治疗有效，病情缓解，
ANA确实转阴。 (3) 实验室误差，特别是试剂，不同厂家的试剂检测结果会有差异。
23
24
SLE、药物性狼疮
核膜型 与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
12
抗核抗体（ANA）
核点型 与抗ENA有关，应进一
步查特异性抗体
核仁型 多见于系统性硬皮病
13
特异性抗体检测
检测除ANA以外其他项目。 其中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)和抗双链DNA抗体(抗dsDNA)是用
间接免疫荧光法。 而其他特异性抗体(包括抗Sm抗体，抗着丝点抗体，抗SSA抗体等)均采
自身抗体的检测及应用
1
自身抗体
【概念】 由各种原因造成的机体B细胞产生针 对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。 自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每
种自身免疫性疾病都伴来自百度文库特征性的自身抗体谱。
2
自身抗体的意义
自身免疫性疾病的诊断； 疾病活动性的判断； 疗效的观察及预后； 指导临床用药等； 进行不同疾病的鉴别诊断。
用免疫印迹法。
14
抗ENA抗体谱
是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体 的总称，它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗 SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体、抗核 小体抗体、抗核糖体P-蛋白抗体、抗着丝点抗体, 抗dsDNA。
不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗 ENA抗体，ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊 断和鉴别具有重要意义。
ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析,阳性并不能确定某种临床诊 断,反之,ANA阴性也不能排除自身免疫性疾病。
但是临床上如果ANA滴度≥1:1000肯定可以考虑为结缔组织病或自身 免疫性疾病，具体是哪一种疾病，要结合其他临床病史、症状体征 和实验室结果综合考虑下结论。
一般ANA滴度为1:100时，临床意义不大。
临床表现阳性，实验室检查阴性 实验室检查阳性，临床表现阴性
18
“自相矛盾”的结果
ANA (间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性 ANA (间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性 （膜条法），占10%，为客观存在 ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）
19
指 标 阴 性 是 否 意 味 着 疾 病 的 排 除 ？ 指标阳性意味着什么？
3
自身抗体的检测方法
4
(1) 间接免疫荧光法(IFT): 检测ANA的金标 准，具有很高的敏感性 和特异性。 将稀释的血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温 育，如果样本是阳性的，特异性IgG、IgA和 IgM抗体与相应的核抗 原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基 质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。
5
（2）免疫印记法：将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置，每一种抗原 只对应一条条带，不会产生非特异性反应条带，结果灵敏度高、特异好， 判断实验结果简单，每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确，阴性 与阳性的结果明显，容易判断，条带显色与抗体滴度相关 。
6
（3）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：该法检测自身抗体快速、敏感及特异 性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原 只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在 临床免疫实验室的应用受到一定限制 。
10
抗核抗体（ANA）
检测方法：间接免疫荧光法（检测总抗） 根据荧光显微镜下细胞的形态确定核型(颗粒型，均质型等)，用荧光
强度判定抗体滴度(1:100，1:320，1:1000，1:3200等) 优点：敏感性高 缺点：操作复杂，对人员要求高，各实验室标准有差异
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抗核抗体（ANA）
均质型
与AHA（抗组蛋白抗体）、抗 DNA有关，引起LE形成主要见于
ANA阳性
可见于多种临床情况，出了风湿病外，也可见于正常人或非风湿病。 (1)健康人:年龄越大,阳性率越高(>60岁的阳性率为20%-25%),但为低滴
度。 (2)有SLE家族史的一级亲属,有近50%为阳性 (3)肺疾病、肝病、血液病、慢性感染等。 注意：正常人中一般ANA滴度较低。
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ANA阳性
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欧蒙印迹法试剂盒用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP、Sm、 SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、Jo-1、CENP B、 dsDNA、核小体、组蛋白和核糖体P蛋白等14种不同抗原lgG类抗体。
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自身抗体检测结果正确解读
检测方法局限性：假阳性，假阴性 临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期
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自身抗体检测常用方法学
间接免疫荧光法：解决有与无的问题 免疫印迹法：解决有什么的问题 酶联免疫吸附试验：解决有多少的问题
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2020/11/25
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抗核抗体（ANA）
【定义】 ANA是抗核酸和核蛋白抗体的总称，泛指抗各种细胞核成分的 抗体。
【分类】 (1)抗核蛋白抗体 (2)抗DNA抗体(包括抗dsDNA和抗ssDNA) (3)抗可提取性核抗原(ENA)抗体
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ANA阴性
(1)正常人或非结缔组织病患者，其体内应该不存在ANA。 (2)疾病初期，ANA含量不足以被检测出;临床治疗有效，病情缓解，
ANA确实转阴。 (3) 实验室误差，特别是试剂，不同厂家的试剂检测结果会有差异。
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SLE、药物性狼疮
核膜型 与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
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抗核抗体（ANA）
核点型 与抗ENA有关，应进一
步查特异性抗体
核仁型 多见于系统性硬皮病
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特异性抗体检测
检测除ANA以外其他项目。 其中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)和抗双链DNA抗体(抗dsDNA)是用
间接免疫荧光法。 而其他特异性抗体(包括抗Sm抗体，抗着丝点抗体，抗SSA抗体等)均采
自身抗体的检测及应用
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自身抗体
【概念】 由各种原因造成的机体B细胞产生针 对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。 自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每
种自身免疫性疾病都伴来自百度文库特征性的自身抗体谱。
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自身抗体的意义
自身免疫性疾病的诊断； 疾病活动性的判断； 疗效的观察及预后； 指导临床用药等； 进行不同疾病的鉴别诊断。
用免疫印迹法。
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抗ENA抗体谱
是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体 的总称，它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗 SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体、抗核 小体抗体、抗核糖体P-蛋白抗体、抗着丝点抗体, 抗dsDNA。
不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗 ENA抗体，ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊 断和鉴别具有重要意义。
ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析,阳性并不能确定某种临床诊 断,反之,ANA阴性也不能排除自身免疫性疾病。
但是临床上如果ANA滴度≥1:1000肯定可以考虑为结缔组织病或自身 免疫性疾病，具体是哪一种疾病，要结合其他临床病史、症状体征 和实验室结果综合考虑下结论。
一般ANA滴度为1:100时，临床意义不大。
临床表现阳性，实验室检查阴性 实验室检查阳性，临床表现阴性
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“自相矛盾”的结果
ANA (间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性 ANA (间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性 （膜条法），占10%，为客观存在 ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）
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指 标 阴 性 是 否 意 味 着 疾 病 的 排 除 ？ 指标阳性意味着什么？
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自身抗体的检测方法
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(1) 间接免疫荧光法(IFT): 检测ANA的金标 准，具有很高的敏感性 和特异性。 将稀释的血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温 育，如果样本是阳性的，特异性IgG、IgA和 IgM抗体与相应的核抗 原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基 质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。
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（2）免疫印记法：将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置，每一种抗原 只对应一条条带，不会产生非特异性反应条带，结果灵敏度高、特异好， 判断实验结果简单，每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确，阴性 与阳性的结果明显，容易判断，条带显色与抗体滴度相关 。
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（3）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：该法检测自身抗体快速、敏感及特异 性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原 只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在 临床免疫实验室的应用受到一定限制 。
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抗核抗体（ANA）
检测方法：间接免疫荧光法（检测总抗） 根据荧光显微镜下细胞的形态确定核型(颗粒型，均质型等)，用荧光
强度判定抗体滴度(1:100，1:320，1:1000，1:3200等) 优点：敏感性高 缺点：操作复杂，对人员要求高，各实验室标准有差异
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抗核抗体（ANA）
均质型
与AHA（抗组蛋白抗体）、抗 DNA有关，引起LE形成主要见于