免疫细胞的分离与检测解析
免疫学实验方法
免疫学实验方法免疫学实验方法是免疫学研究的重要部分,它通过一系列的技术手段来识别、分析免疫系统中的各种生物分子、细胞和组织,以及它们之间的相互作用。
这些方法在免疫学领域广泛应用于疾病诊断、药物研发、疫苗研究等方面,对促进免疫学的发展和应用发挥了重要作用。
下面将介绍一些常用的免疫学实验方法。
一、ELISA法ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种用于检测抗体或抗原的免疫学实验方法。
该方法通过将待测抗体或抗原与固相物质结合,再加入酶标记的二抗来进行标记,最后通过酶底物的底物变色反应或荧光底物的发光反应来检测待测抗体或抗原的存在量。
二、流式细胞仪流式细胞仪是一种用于分析和计数悬浮细胞的仪器,它利用激光照射细胞,通过细胞膜上的特异性抗体标记来检测细胞的表面标记物和内部细胞器的性质和分布,对免疫细胞的表型和功能进行高效的分析。
三、免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的免疫学实验方法,通过电泳将待测蛋白分离,再将其转移到膜上,最后使用特异性抗体和标记的二抗来检测待测蛋白的存在量和大小。
四、免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织中特定蛋白的免疫学实验方法,通过将组织切片后进行脱水、脱脂和脱水处理,再使用特异性的抗体来标记待测蛋白,并观察标记物的颜色变化或发光情况来确定蛋白的位置和表达量。
五、免疫沉淀法免疫沉淀法是一种用于检测蛋白相互作用的免疫学实验方法,通过将待测抗体与蛋白结合,再使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠等材料将蛋白抗原免疫沉淀下来,最后使用核酸酶或质谱技术来分析蛋白的互作关系。
以上介绍的是一些常用的免疫学实验方法,它们在免疫学研究中起着举足轻重的作用,不仅在科研领域有重要应用,同时在临床诊断和治疗中也有着广泛的运用。
希望以上内容能够对您有所帮助。
分离cd8t细胞基本流程
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免疫学实验
免疫学实验免疫学实验是一项非常重要的研究领域,它涉及到研究人体免疫系统的机制和功能,并通过实验手段来深入了解和探索免疫系统对疾病的防御和治疗作用。
在本文中,我们将介绍免疫学实验的一些基本概念和常见的实验方法,以及它们在研究和治疗免疫相关疾病中的应用。
首先,我们来了解一下免疫学实验中常用的一些基本概念。
免疫学实验主要涉及到免疫细胞、抗体和抗原的相互作用。
免疫细胞是人体免疫系统的重要组成部分,包括巨噬细胞、淋巴细胞等。
抗体是由免疫细胞产生的一种特殊蛋白质,它可以识别和结合到体内外入侵的病原体,激活免疫系统进行防御。
而抗原则是一种能够引起免疫系统反应的物质,可以是细菌、病毒、真菌等。
在免疫学实验中,常见的实验方法包括免疫组化、流式细胞术、ELISA等。
免疫组化是一种用于检测组织或细胞中某一种特定蛋白质的方法,它可以通过使用特异性抗体来标记和检测目标蛋白质的位置和表达水平。
流式细胞术则是一种通过流式细胞仪进行细胞表面标记和分析的方法,它可以对不同类型的免疫细胞进行鉴定和分类。
ELISA是一种用于检测和分析抗体和抗原相互作用的方法,它基于酶标记免疫吸附技术,可以测定目标物质的浓度和活性水平。
除了这些基本方法,免疫学实验还可以进一步应用于研究和治疗免疫相关疾病。
免疫学实验可以帮助我们深入了解免疫系统在疾病中的作用机制,例如自身免疫疾病、感染性疾病等。
通过实验手段,我们可以研究免疫细胞的活性和功能,并探索潜在的治疗策略。
例如,在免疫细胞治疗中,我们可以通过实验手段提取、修饰和培养免疫细胞,并将其用于治疗癌症、自身免疫疾病等疾病。
此外,免疫学实验还有助于研发和评估新型的免疫药物和疫苗。
通过实验方法,我们可以研究药物在免疫系统中的作用机制和疗效,并评估其用于治疗疾病的潜力。
免疫学实验在疫苗研发中也发挥着重要的作用,通过评估免疫细胞对疫苗的反应和效果,我们可以确定疫苗的安全性和有效性。
总结起来,免疫学实验是一项非常重要且广泛应用的研究领域。
单细胞测序技术流程及其应用
单细胞测序技术流程及其应用随着生物学的快速发展,越来越多的生物问题需要从单个细胞的角度进行研究。
与传统的群体测序技术不同,单细胞测序技术可以单独测序某个特定细胞类型或特定状态的单个细胞,从而获取单个细胞的基因组学、转录组学和表观组学信息。
因此,单细胞测序技术在生物学研究,尤其是癌症、免疫、神经生物学等领域,具有广阔的应用前景。
1.单细胞分离单细胞测序技术首要的步骤是将单个细胞从样品中分离出来,以确保测序结果的准确性。
目前单细胞分离主要有三种方式:流式细胞术、显微取样和微流体技术。
2. lysis单细胞完整细胞膜和核壳的破裂是一个至关重要的步骤。
这个步骤不仅需要高效的细胞裂解剂和可靠的组织破碎器,还需要低浓度的尿素和二硫化物来溶解蛋白质。
3. cDNA合成和放大RNA在细胞裂解后被逆转录成cDNA。
核酸的放大可以用以下两种方法中的一种:扩增polymerase链反应(PCR)或通过非对称PCR。
4. cDNA质量检测cDNA质量检测包括定量和质量的评估。
目前采用的定量方法有比色法、荧光法和电泳法。
cDNA的质量可以通过DNA片段大小、比率,RNA质量和完整性及最终的放大情况来评估。
cDNA的测序可以有两种方法:成对的末端测序和单端测序。
常用的末端测序包括Illumina Hiseq平台和Ion Torrent Platforms的单细胞测序。
6. 数据分析数据分析包括以下四种类型:拆除在每个序列文件中,需要通过限制ATCG序列中的最小数字来删除悬空线。
这可以被认为是序列的重复或者测序错误或低质量读取。
定量上游分析可以将独一无二的序列与参考基因组或转录组序列进行比对。
拆除了低质量的序列后,可以将读取与参考序列比对来量化基因的表达。
簇合这是将单个读取组合在一起以检测不同且相似的基因表达。
聚类算法生成i个簇(每个簇代表一个单独的细胞)和每个簇的成员。
测序量化通过选择一个点和一个所有可能点的距离范围,测序量化是比较不同细胞之间的相似性。
pdc细胞流式指标 -回复
pdc细胞流式指标-回复PDC细胞(Plasmacytoid Dendritic Cells)是一种特殊的免疫细胞,分布在人体多个组织和器官中,主要负责抗病毒免疫应答。
在流式细胞术中,我们可以利用一系列指标来鉴定和分析PDC细胞,从而深入了解其功能和参与免疫调控的机制。
本文将一步一步解析PDC细胞流式指标,帮助读者了解这一重要免疫细胞群体。
首先,我们需要分离单个细胞,使其在流式细胞仪中能够被准确检测。
我们可以采取组织切片或体液,如血液或骨髓的方法来获得细胞样本。
在血液样本中,PDC细胞的典型标记物是CD123,该标记物在流式细胞仪中被使用。
接下来,我们需要对细胞样本进行预处理以获得单个细胞。
一种常用的方法是使用红细胞溶解缓冲液将红细胞溶解掉,使得其他受到红细胞污染的细胞得以被检测。
然后,我们需要对细胞进行表面标记,以帮助鉴定和分析PDC细胞。
PDC细胞的典型表面标记物包括CD123、CD303和CD304。
其中,CD123是最常用的PDC细胞标记物,可以帮助我们快速鉴定出PDC 细胞。
然后,我们还需要进一步进行细胞测定,以确定细胞的功能和免疫状态。
两个重要的测定是细胞活性和细胞类型鉴定。
细胞活性的测定通常使用细胞增殖标记物,如CFSE(Carboxyfluorescein diacetate succinimidylester)来测量。
细胞类型鉴定则使用针对特定细胞亚群的标记物。
在PDC 细胞中,常用于类型鉴定的标记物包括BCDA2和BDCA4。
这些鉴定方法可以帮助我们确定PDC细胞的功能和免疫特性。
最后,我们需要对得到的数据进行分析和解读。
在流式细胞仪中,我们可以通过分析细胞表面标记物的相对表达量,确定PDC细胞的比例和活性。
同时,我们还可以通过分析细胞内标记物的表达水平,了解PDC细胞的功能和免疫状态。
这些数据分析可以帮助我们深入了解PDC细胞在免疫应答中的作用和机制。
综上所述,PDC细胞是一类重要的免疫细胞,参与抗病毒免疫应答。
临床医学检验技师考试辅导临床免疫学和免疫检验 第十四章 免疫细胞的分离及其表面标志检测技术练习题
第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术一、A11、已知细胞中的黏附能力最大的为A、树突状细胞B、单核细胞C、B细胞D、T细胞E、红细胞2、免疫细胞检测技术中外周血单个核细胞指的是A、有核细胞B、淋巴细胞C、单核细胞D、淋巴细胞和单核细胞E、幼稚细胞3、下列关于T细胞亚群的分离,说法错误的是A、原理是根据相应细胞的不同标志加以选择性纯化B、凡根据细胞的表面标志进行纯化得到所需要的细胞群是阳性选择法C、选择去除不需要的细胞群,仅留下所需要的细胞为阴性选择法D、E花环沉降法是最先进的细胞分选技术E、尼龙毛柱分离法是常用的分离方法4、下列有关转化的淋巴细胞的形态描述中,错误的是A、细胞变大B、出现空泡C、核仁消失D、染色质疏松E、胞质扩大5、检测T细胞数量的试验是A、溶血空斑试验B、SmIg荧光抗体染色试验C、巨噬细胞或白细胞移动抑制试验D、E玫瑰花环试验E、计算盘直接计数6、溶血空斑形成试验中,空斑的大小表示A、抗体生成细胞的多少B、抗体生成细胞的种类C、细胞的大小D、抗体生成细胞产生抗体的多少E、吞噬细胞的活性7、做自然杀伤细胞毒试验,敏感而常用的是哪种细胞株A、小鼠T细胞肿瘤细胞株B、人肺癌细胞C、K562细胞系D、小鼠细胞毒T细胞系E、L929细胞株8、具有抗肿瘤效应的第一道防线是A、TC细胞B、中性粒细胞C、TH细胞D、B细胞E、NK细胞9、下列不属于自然杀伤(NK)细胞检测方法的是A、酶释法和放射性核素法B、酶释法和荧光分析法C、放射性核素法和荧光分析法D、放射性核素法和荧光分析法和酶释法E、反向溶血空斑实验和酶释法10、可刺激B淋巴细胞增殖转化的刺激物是A、PWMB、PHAC、ConAD、MHCE、BCG11、用于临床评价病人免疫状况的试验中,评价T细胞功能的试验是A、血清免疫球蛋白检测B、溶血空斑试验C、淋巴细胞转化试验D、膜表面Ig测定E、EA花环试验12、关于单个核细胞说法错误的是A、单个核细胞包括淋巴细胞、单核细胞B、单个核细胞的体积、形态、比重与其他细胞不同C、可利用单个核细胞的体积不同,按照密度梯度来分离D、在进行密度梯度分离时,单个核细胞比重比溶液的比重大E、多核粒细胞比重比单个核细胞比重大13、采用密度梯度分离法分离得到的细胞主要为A、单核细胞和粒细胞B、单核细胞C、淋巴细胞D、淋巴细胞和单核细胞E、淋巴细胞和粒细胞14、利用E花环沉降法可分离A、单核细胞和B细胞B、浆细胞和粒细胞C、B细胞和T细胞D、B细胞和粒细胞E、B细胞和吞噬细胞15、对分离细胞的保存说法错误的是A、用适量的10%~20%小牛血清的Hanks等培养液重悬B、以二甲亚砜作为保护剂C、短期保存中,放4℃保存D、短期保存中,迅速改变细胞所处的温度,以免造成温度休克E、长期保存中,放在液氮中,-196℃16、从单个核细胞悬液中分离出单核细胞的方法不包括A、E花环沉降法B、贴壁黏附法C、吸附柱过滤法D、磁铁吸引法E、Percoll分离液法17、下列关于淋巴细胞分离的说法错误的是A、进行细胞免疫的检测,一般须将待检淋巴细胞从血液中或组织中分离出来B、外周血细胞单个核细胞包括淋巴细胞、粒细胞和红细胞C、利用外周血的细胞的理化特性的差异可以分离不同的细胞群体D、淋巴细胞的理化特性与其他细胞差异很小,用简单的方法不易分离纯化E、淋巴细胞的分离利用专门的淋巴细胞分离纯化技术18、细胞活力测定常用的简便方法是A、伊红染色B、美蓝染色C、台盼蓝染色D、抗酸染色E、HE染色19、LPS可激发哪种细胞转化A、B细胞B、T细胞C、自然杀伤(NK)细胞D、杀伤细胞E、巨噬细胞20、可刺激T细胞增殖的刺激物是A、ConAB、MHCC、SPAD、AFPE、LPS21、自然杀伤(NK)细胞具有A、对TI抗原应答效应B、ADCCC、对TD抗原应答D、主要分泌细胞因子作用E、特异杀伤肿瘤细胞作用22、属于非抗原刺激物的物质是A、SRBCB、BCGC、LPSD、类毒素E、抗毒素血清23、关于溶血空斑试验的叙述错误的是A、1个空斑代表1个抗体生成细胞B、需要绵羊红细胞和补体参与C、空斑大小代表抗体产生的多少D、是可检测B淋巴细胞功能的一种体外试验方法E、只可检测IgG类抗体24、下列哪项不是T细胞表面标志的检测方法A、SmIg的检测B、抗体致敏细胞花环法C、免疫金银染色法D、免疫荧光法E、ABC法25、溶血空斑试验检测的是哪类细胞的功能A、T淋巴细胞B、巨噬细胞C、自然杀伤(NK)细胞D、B淋巴细胞E、LAK细胞答案部分一、A11、【正确答案】B【答案解析】单核细胞具有在37℃和Ca2+存在时,能主动黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性。
第三版免疫学检验技术第9-13章中级试题及答案
第九章酶免疫技术一、A11、下图所示的为哪一种ELISA技术的反应原理示意图()。
A、双抗原夹心法B、双位点一步法C、间接法测抗体D、竞争法E、捕获法2、钩状效应是指用ELISA一步法测定标本中待测抗原时,抗原浓度过(),实测值偏()的现象,极易造成假阴性A、低,高B、高,高C、高,低D、低,低E、高,不变3、ELISA试验中最常用的标记酶是()。
A、ASTB、HRPC、ACPD、LDHE、ALT4、酶增强免疫测定技术是最早取得实际应用的()。
A、均相酶免疫测定B、异相酶免疫测定C、固相酶免疫测定D、液相酶免疫测定E、固相-液相酶免疫测定5、利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体的方法,通常称为()。
A、双抗体夹心法B、双位点一步法C、间接法D、竞争法E、捕获法6、ELISA中最常用的固相载体是()。
A、聚氯乙烯B、聚苯乙烯C、三聚氧胺D、琼脂糖E、尼龙膜7、均相酶免疫测定不具有的特点是()。
A、常用于半抗原和小分子的检测B、操作简便,易于自动化C、不易受样品中的内源性酶的干扰D、酶与抗原结合后仍保留酶和抗原的活性E、灵敏度不及异相酶免测定8、酶增强免疫测定技术(EMIT)是一种()。
A、非均相酶免疫测定技术B、均相酶免疫测定技术C、酶免疫组织化学技术D、酶免疫测定与电泳相结合的技术E、电泳技术9、ELISA板包被后,最常用的封闭物质是()。
A、人白蛋白B、人球蛋白C、牛血清白蛋白D、牛血清球蛋白E、鼠白蛋白10、可用免疫渗滤试验和免疫层析试验检测的项目没有()。
A、抗HCV B、HIV C、HCG D、HBsAg E、HAV11、制备抗体酶结合物的方法通常采用()。
A、戊二醛交联法B、糖原染色法C、免疫印迹法D、酶耦联测定法E、捕获竞争法12、下列不属于ELISA测定方法中所必需的试剂()。
A、固相的抗原或抗体B、酶标记的抗原或抗体C、酶作用的底物D、戊二醛交联剂E、稀释的血清13、斑点免疫层析试验最常用的载体材料是()。
临床检验技术士《专业知识》考前点题卷一
临床检验技术士《专业知识》考前点题卷一[单选题]1.血液保存液中,其配方CPDA中的C是(江南博哥)指A.枸橼酸B.磷酸盐C.葡萄糖D.腺嘌呤E.枸橼酸三钠参考答案:E参考解析:血液保存液配方可分为:ACD(A,枸橼酸;C,枸橼酸三钠;D,葡萄糖)与CPD(C,枸橼酸三钠;P,磷酸盐;D,葡萄糖及枸橼酸)两大类保存液。
在CPD中加腺嘌呤即为CPDA-1。
掌握“血液保存液3,4”知识点。
[单选题]2.尿干化学检测白细胞呈阴性,离心镜检尿沉渣白细胞15~20个/HP。
合理的解释是镜下所见为A.淋巴细胞B.中性粒细胞C.上皮细胞D.酵母样真菌E.红细胞参考答案:A参考解析:白细胞:①分析仪法(+),镜检法(-):可能的解释为尿液在膀胱贮存时间过长或其他原因致使白细胞破坏。
②分析仪法(-),镜检法(+):多发生在尿液中以淋巴细胞或单核细胞为主时,应以显微镜检查结果为准。
掌握“尿有形成分分析仪临床应用2,4”知识点。
[单选题]3.再生障碍性贫血的血常规呈A.小细胞低色素性贫血B.单纯小细胞性贫血C.大细胞性贫血D.大细胞不均一性贫血E.正细胞正色素性贫血参考答案:E参考解析:再生障碍性贫血为正细胞正色素性贫血。
掌握“贫血的定义和分类1”知识点。
[单选题]4.IMViC实验不包括A.糖发酵试验B.吲哚试验C.枸橼酸盐利用试验D.甲基红试验E.V-P试验参考解析:IMViC实验主要包括吲哚试验,枸橼酸盐利用试验,甲基红试验和V-P试验。
掌握“肠杆菌微生物学检测3,4”知识点。
[单选题]5.有关磷的叙述错误的是A.血液中的磷以有机磷和无机磷2种形式存在B.血磷通常是指血浆中的有机磷C.儿童血磷高于成人D.磷是人体的重要组成物质E.血中磷酸盐是血液缓冲体系的重要组成成分参考答案:B参考解析:血液中的磷以有机磷和无机磷2种形式存在,血磷通常是指血浆中的有机磷和无机磷。
掌握“第七章钙磷镁与微量元素的临床意义及调解3,4”知识点。
临床检验技术师《相关专业知识》模拟试卷一
临床检验技术师《相关专业知识》模拟试卷一[单选题]1.ABH血型特异物质不存在于A.唾(江南博哥)液B.尿液C.泪液D.胃液E.脑脊液参考答案:E参考解析:ABH血型特异物质存在于唾液(含量最丰富)、尿、泪液、胃液、胆汁、羊水、血清、精液、汗液、乳汁等体液中,但不存在于脑脊液。
掌握“第五章血型和输血2”知识点。
[单选题]2.正常精液颜色一般为A.无色B.灰白色C.黄色D.淡红色E.棕色参考答案:B参考解析:正常刚射出的精液一般为微混浊的灰白色,自行液化后为半透明的乳白色。
掌握“第十四章精液检查1”知识点。
[单选题]3.人体内的淀粉酶是A.α淀粉酶B.γ淀粉酶C.A和DD.β淀粉酶E.A和B参考答案:A参考解析:人体内的淀粉酶是α淀粉酶。
掌握“第五章诊断酶学3,4”知识点。
[单选题]4.糖尿病患者尿液A.尿量少、比重低B.尿量多、比重低C.尿量少、比重高D.尿量多、比重高E.尿量、比重均正常参考答案:D参考解析:糖尿病患者尿量多、比重高。
掌握“第七章尿理学检验2”知识点。
[单选题]5.急性白血病复发的实验室指标之一是骨髓涂片中A.骨髓原粒(原单、幼单、原淋)大于5%B.骨髓原粒(原单、幼单、原淋)大于20%C.骨髓原粒(原单、幼单、原淋)大于10%D.骨髓原粒(原单、幼单、原淋)大于15%E.骨髓原粒(原单、幼单、原淋)大于30%参考答案:B参考解析:复发标准:有下列三者之一者称为复发。
1)骨髓原粒细胞(原单、幼单、原淋+幼淋)大于5%且小于20%,经过抗白血病治疗一个疗程仍未达骨髓完全缓解者。
2)骨髓原粒(原单、幼单、原淋)大于20%者。
3)骨髓外白血病细胞浸润者。
掌握“第八章白血病概述2,3”知识点。
[单选题]6.镜下呈竹节状排列的细菌是A.炭疽芽胞杆菌B.白喉棒状杆菌C.结核分枝杆菌D.破伤风梭菌E.溶血性链球菌参考答案:A参考解析:杆菌多数分散存在,但有的杆菌可排列成链状,如炭疽杆菌两端齐平,呈竹节状排列。
生化免疫质谱-概述说明以及解释
生化免疫质谱-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述生化免疫质谱是一种结合生化分析和免疫学技术的方法,通过质谱技术对生物样本中的代谢产物、蛋白质及其修饰以及其他生物分子进行检测和分析。
它在生物医学研究领域中被广泛应用,为了深入了解生物体内的生物化学变化、研究疾病的发生机制以及寻找生物标志物等方面提供了有力的工具和方法。
生化免疫质谱的原理主要是将生物样本中的目标分子(如代谢产物、蛋白质等)分离、富集和纯化,然后经过质谱仪的检测和分析,最终得到目标分子的质谱图谱和定量信息。
这种方法的核心是质谱仪的应用,它能够对分子的质量和荷质比进行高灵敏度的检测,从而实现对目标分子的定性和定量分析。
生化免疫质谱在生物医学研究中具有广泛的应用价值。
首先,它可以用于发现新的代谢产物和蛋白质修饰,揭示其在生物过程和疾病发展中的重要作用。
其次,通过比较病人与正常人的代谢和蛋白质谱图,可以寻找到潜在的生物标志物,从而实现早期疾病的诊断和治疗。
此外,生化免疫质谱还可以应用于药物代谢动力学的研究、药物毒性的评估以及个体化医疗等方面。
然而,生化免疫质谱也存在一些局限性。
首先,它对样本的预处理和分析过程要求较高,需要进行复杂的样本准备和仪器操作,因此操作技术要求高,且时间和劳动成本较高。
其次,生化免疫质谱对仪器的选择和优化也有一定的限制,不同类型的分子需要不同的质谱仪和离子源进行分析,而且仪器的灵敏度和分辨率也会影响到结果的准确性和可靠性。
未来,随着技术的不断进步和发展,生化免疫质谱在生物医学研究中的应用前景将会更加广阔。
一方面,随着新的分离、富集和纯化技术的引入和改进,样本处理的效率和准确性将会得到提高,进一步推动生化免疫质谱技术的发展。
另一方面,随着质谱仪技术的不断升级,仪器的灵敏度、分辨率和可靠性将会得到进一步的提高,为生化免疫质谱的应用提供更加强大和可靠的支持。
综上所述,生化免疫质谱是一种强大的生物分析方法,具有重要的应用价值。
临床检验技术士《相关专业知识》考前点题卷一
临床检验技术士《相关专业知识》考前点题卷一[单选题]1.正常前列腺液中有形成分主要为A(江南博哥).精子B.红细胞C.白细胞D.卵磷脂小体E.淀粉样小体参考答案:D参考解析:正常前列腺液中有形成分主要为卵磷脂小体,显微镜下观察为满视野分布。
掌握“前列腺液检查3,4”知识点。
[单选题]2.可使尿液pH增高的是A.肾小管性酸中毒B.糖尿病C.痛风D.低钾性代谢性碱中毒E.白血病参考答案:A参考解析:肾小管性酸中毒排碱性尿;糖尿病、痛风、白血病机体酸性代谢产物增多,尿液pH减低。
掌握“尿液化学检查参考值2,4”知识点。
[单选题]4.血清钙升高见于A.原发性甲状旁腺功能亢进B.维生素D缺乏C.甲状旁腺功能低下D.尿毒症E.严重肝病参考答案:A参考解析:甲状旁腺素有升高血钙的作用,其他备选答案都导致血钙降低。
掌握“第七章钙磷镁与微量元素的临床意义及调解3,4”知识点。
[单选题]5.人类白细胞膜上的抗原有A.1类B.2类C.3类D.4类E.5类参考答案:C参考解析:人类白细胞膜上有三类抗原。
即:①红细胞血型抗原,如Lewis、Kidd等;②白细胞本身所特有的抗原;③人类白细胞抗原(HLA)。
掌握“第二十八章排斥反应的类型及发生机制、常见的组织或器官移植3”知识点。
[单选题]6.关于类毒素,下列正确的是A.有抗原性B.无抗原性C.有毒性D.由内毒素经甲醛作用产生E.有佐剂作用参考答案:A参考解析:类毒素是由外毒素经甲醛作用脱毒后产生的,有抗原性,无佐剂作用。
掌握“细菌的生理与遗传变异3”知识点。
[单选题]7.支气管哮喘属于A.I型超敏反应B.Ⅱ型超敏反应C.Ⅳ型超敏反应D.Ⅲ型超敏反应E.迟发型超敏反应参考答案:A参考解析:全身超敏反应:是一种最严重的Ⅰ型超敏反应性疾病,机体再次接触变应原后数秒或数分钟内可出现症状,若抢救不及时,可导致死亡。
包括①药物过敏性休克:以青霉素引发的过敏性休克最为常见。
②血清过敏性休克。
临床免疫学检验技术考试题库及答案(三)
临床免疫学检验技术考试题库及答案1. 免疫监视功能低下时易发生()。
A.自身免疫病B.超敏反应C.肿瘤D.免疫缺陷病E.移植排斥反应答案C解析免疫系统的功能之一是对自身偶尔产生的有癌变倾向的细胞进行清除,此即免疫监视功能,免疫监视功能低下时易发生肿瘤。
2. 免疫自稳功能异常可发生()。
A.病毒持续感染B.肿瘤C.超敏反应D.自身免疫病E.免疫缺陷病答案D解析免疫系统的功能之一是对自身衰老的组织细胞进行清除,此即免疫自稳功能,免疫自稳功能异常可发生自身免疫病。
3. 既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞是()。
A.树突状细胞B.巨噬细胞C.中性粒细胞D. B细胞E. T细胞答案B解析树突状细胞、巨噬细胞和B细胞都有抗原加工提呈作用,但只有巨噬细胞兼有吞噬杀菌作用。
4. 免疫应答过程不包括()。
A. T细胞在胸腺内分化成熟B. B细胞对抗原的特异性识别C.巨噬细胞对抗原的处理和提呈D. T细胞和B细胞的活化、增殖和分化E.效应细胞和效应分子的产生和作用答案A解析免疫应答过程指免疫系统针对抗原的反应过程,不包括免疫细胞的发育过程。
5. 关于外周免疫器官的叙述,不正确的是()。
A.包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织B.发生发育的时间晚于中枢免疫器官C.是免疫应答发生的场所D.是免疫细胞发生和成熟的场所E.是所有淋巴细胞定居的场所答案D解析免疫细胞发生和成熟的场所在中枢免疫器官,故D项不正确。
5. 在正常血清中,含量最高的补体成分是()。
A. C1B. C3C. C4D. C5E. C4Bp答案B解析在正常血清中含量最高的补体成分是C3。
7. 细胞因子不包括()。
A.单核因子B.淋巴因子C.生长因子D.抗体E.集落刺激因子答案D解析细胞因子是生物活性的小分子多肽,抗体不是。
8. 体内抗病毒、抗毒素、抗细菌最重要的抗体为()。
A. IgMB. IgAC. IgGD. IgEE. IgD答案C解析IgG是体内抗感染的最主要的抗体。
免疫细胞分离及检测技术
第十三章免疫细胞分离及检测技术本章考点1.免疫细胞的分离2.淋巴细胞表面标志的检测3.淋巴细胞功能检测技术4.免疫细胞检测的临床意义第一节免疫细胞的分离一、外周血单个核细胞的分离1.原理:外周血中单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的比重与红细胞、多核白细胞及血小板不同,介于1.075~1.090之间,红细胞及粒细胞在1.092左右,血小板在1.030~1.035之间。
因而可利用一种比重介于1.075~1.092之间,而近于等渗的溶液作密度梯度离心,使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。
2.试剂:常用的分层液有Ficoll与Percoll两种(1)Ficoll分层液法:主要用于分离外周血中单个核细胞,是一种单次密度梯度离心分离法,其分布由上到下依次为:稀释的血浆层,单个核细胞层,粒细胞层和红细胞层。
Ficoll分层液即聚蔗糖-泛影葡胺,是一种较理想的细胞分层液,其主要成分是一种合成的蔗糖聚合物,具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。
操作时,将分层液置于试管下层,然后将肝素化的全血或白细胞悬液以Hanks或PBS液稀释后,轻轻铺于分层液面上,经2000rpm15-20min离心后,红细胞与粒细胞因比重大于分层液,故较快沉于管底。
血小板则比重小于分层液而悬浮于血浆中。
唯有与分层液比重相当的单核细胞和淋巴细胞密集于血浆层和分层液的界面中。
其分布由上到下依次为:稀释的血浆层,单个核细胞层,粒细胞层和红细胞层。
见下图。
图聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度梯度离心法外周血小分布示意图引自陶义训主编:免疫学和免疫学检验,人民卫生出版社1995年9月第1版第4次印刷(2)Percoll分层液法:是一种连续密度梯度离心分离法,其分布由上至下依次为:死细胞层,富含单核细胞组分层,富含淋巴细胞的组分层及红细胞与粒细胞组分层。
图连续密度梯度离心法分离单个核细胞中各细胞成分的分布示意图引自陶义训主编:免疫学和免疫学检验,人民卫生出版社1995年9月第1版第4次印刷二、淋巴细胞的分离1.纯淋巴细胞群的采集:利用单核细胞在37℃和Ca2+存在时,能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性,从单个核细胞悬液中除去单核细胞,从而获得纯淋巴细胞群。
免疫学研究中的单细胞测序技术
免疫学研究中的单细胞测序技术免疫学是研究免疫系统如何应对感染、肿瘤和自身免疫疾病等问题的科学。
随着单细胞测序技术日益发展,单细胞免疫学研究也逐渐成为热点领域。
本文将介绍免疫学研究中的单细胞测序技术,并探讨它在免疫系统研究中的应用。
一、单细胞测序技术简介随着高通量测序技术的出现,单细胞测序技术逐渐成为可行的实验手段。
单细胞测序技术可以快速获得单个细胞的基因表达谱,从而可以了解不同细胞之间的差异及其功能。
单细胞测序技术可以分为单细胞RNA测序(scRNA-seq)、单细胞DNA测序和单细胞蛋白质测序。
其中,scRNA-seq是目前最常用的单细胞测序技术。
scRNA-seq通常包括单细胞分离、细胞质提取、RNA扩增和测序四个步骤,可以获得全转录组的信息。
通过整合单细胞信息,可以对组织细胞的种类、分布、基因表达差异以及细胞间相互作用进行全面解析,为研究免疫系统提供了全新的视角。
二、单细胞测序技术在免疫系统研究中的应用1. 免疫细胞谱系及分化研究免疫系统由多个不同功能的免疫细胞协同作用,进行病原微生物和肿瘤细胞的清除和保护机体健康的功能。
免疫系统细胞主要分为两大类:免疫适应性细胞和免疫固有性细胞。
免疫适应性细胞是一类高度专一、可适应的细胞,主要包括T细胞和B细胞,可以识别和清除病原体,并形成细胞免疫记忆。
免疫固有性细胞是一类原始、不可适应、对多种病原体有广泛识别作用的细胞,主要包括树突状细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞等。
单细胞测序技术可以帮助建立免疫细胞谱系图,明确免疫系统中的细胞种类、分布以及基因表达差异等信息,为深入研究免疫系统提供了重要参考。
同时,我们可以通过单细胞测序技术进行细胞分化研究,探究免疫细胞如何分化为不同亚型,并了解在这个过程中的调控方式,为免疫系统的调节提供了理论依据。
2. 免疫细胞间相互作用免疫细胞间的相互作用是免疫系统中非常重要的一环。
单细胞测序技术可以探究不同免疫细胞在不同时期、不同功能状态下的基因表达谱及细胞表面分子表达情况。
临床检验主管技师-临床生化检验习题及答案-第三章 脂代谢及高脂蛋白血症
临床检验主管技师-临床生化检验习题及答案第三章脂代谢及高脂蛋白血症一、A11、以下叙述错误的是()。
A、不同组织的LDL受体活性差别很大B、VLDL受体在肝内大量存在C、VLDL受体与VLDL具有较高的亲和性D、LDL受体在肝内大量存在E、VLDL受体在脂肪细胞中多见2、血浆置于4℃冷藏10h,可见上层为奶油样,下层浑浊的标本是()。
A、Ⅱa型B、Ⅱb型C、Ⅲ型D、Ⅳ型E、Ⅴ型3、血清电泳图谱上出现深β带和深前β带的高脂血症是()。
A、Ⅰ型B、Ⅱa型C、Ⅱb型D、Ⅲ型E、Ⅴ型4、血清电泳图谱上出现宽β的高脂血症为()。
A、Ⅰ型B、Ⅱa型C、Ⅱb型D、Ⅲ型E、Ⅴ型5、Ⅰ型高脂蛋白血症不表现为()。
A、奶油样表层,下层透明B、可能是由于LPL活性减低所致C、CM明显增高D、电泳时出现深βE、血清ApoB-48升高6、以下叙述错误的是()。
A、通常测定LDL中胆固醇的含量来表示LDL的水平B、常用聚乙烯硫酸盐法测定HDL-CC、当TG水平大于4.52mmol/L时就不能采用Friedewald公式计算LDL-C含量D、Friedewald公式为LDL-C=TC﹣HDL﹣TG/2.2E、用自动分析仪测定LDL-C时采用直接测定均相法7、血脂异常预防的首要靶标为()。
A、TCB、TGC、HDLD、LDLE、Lp(a)8、流行病学研究发现以下检测指标与冠心病发生呈负相关的是()。
A、TCB、Lp(a)C、HDLD、LDLE、VLDL9、以下叙述正确的是()。
A、甘油三酯水平的个体内和个体间变异都比胆固醇大B、血中CM的半寿期为2~4hC、目前常用检测甘油三酯的方法为化学法D、甘油三酯不是冠心病的独立危险因素E、甲亢患者甘油三酯常升高10、载脂蛋白的功能错误的是()。
A、构成和维持脂蛋白结构B、是一些酶的辅助因子C、参与脂蛋白受体的识别D、调节脂蛋白代谢关键酶的活性E、不能由肾脏合成11、不由肝脏合成的脂蛋白为()。
2023年检验类之临床医学检验技术(士)高分通关题型题库附解析答案
2023年检验类之临床医学检验技术(士)高分通关题型题库附解析答案单选题(共40题)1、从临床标本中初次分离时需要二氧化碳环境的是A.淋病奈瑟菌B.金黄色葡萄球菌C.大肠埃希菌D.铜绿假单胞菌E.产气荚膜梭菌【答案】 A2、正常前列腺液镜检多量、均匀布满视野的是A.酸性磷酸酶B.卵磷脂小体C.淀粉样小体D.脓细胞E.杆菌【答案】 B3、丝虫病在流行病学上具有意义而又常被忽视的传染源是A.患象皮肿的患者B.出现乳糜尿的患者C.发生鞘膜积液的患者D.微丝蚴血症的患者E.急性丝虫热患者【答案】 D4、患者HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-Hbe(-)、抗-HBcIgM(+)、抗-HBs(-),正确的判断是A.急性乙型肝炎B.慢性活动性肝炎C.慢性迁延性肝炎D.乙肝恢复期E.慢性乙型肝炎【答案】 A5、患女,53岁,多饮、多食、多尿伴消瘦半年。
实验室检查:空腹血糖增高,尿糖阳性。
初诊:代谢性疾病。
拟进行甲状腺素、血清C-肽及胰岛素测定,选择以下最佳的测定方法是A.免疫放射分析B.放射免疫分析C.荧光免疫技术D.免疫电泳技术E.酶免疫技术【答案】 B6、白陶土样便常见于()。
A.痔疮B.霍乱C.梗阻性黄疸D.上消化道出血E.细菌性痢疾【答案】 C7、属于有机化学方法的是A.己糖激酶法B.葡萄糖氧化酶法C.氧化亚铜法D.邻甲苯胺法E.以上都不是【答案】 C8、免疫球蛋白定量的测定方法是()。
A.速率散射比浊法B.免疫球蛋白的分类与鉴定C.双向扩散D.免疫电泳E.免疫固定电泳【答案】 A9、急性白血病FAB分型主要是依据A.细胞形态学特点分型B.细胞化学特点分型C.细胞形态学和细胞化学特点分型D.细胞免疫学特征分型E.细胞遗传学特征分型【答案】 C10、G-6-PD缺乏者出现溶血的原因是缺乏()A.FMNB.NADC.FAD.NADPHE.NADP【答案】 D11、目前临床诊断淀粉样变性的"金标准"应当是A.做血清蛋白免疫电泳分析检查B.利用组织学或免疫组化技术做组织学检查C.做血液中某些前体蛋白的检查D.尿蛋白的检查E.做常规血液分析检查【答案】 B12、抗破伤风免疫的免疫学基础是A.抗菌体抗体B.抗鞭毛抗体C.抗毒素抗体D.抗荚膜抗体E.抗菌毛抗体【答案】 C13、不影响血红蛋白与氧亲和力的因素为A.pHB.血红蛋白量C.2,3-DPGD.POE.温度【答案】 B14、当尿中尿胆素原完全阴性时,应考虑有A.阻塞性黄疸B.肝细胞性黄疸C.溶血性黄疸D.药物性黄疸E.肠梗阻【答案】 A15、下列关于MA.骨髓以原始粒细胞增生为主≥30%B.骨髓以异常增生的早幼粒细胞增生为主≥30%C.骨髓以异常增生的中性中幼粒细胞增生为主≥30%D.骨髓以原始粒细胞和早幼粒细胞增生为主≥30%E.骨髓以原始粒细胞和单核细胞增生为主≥30%【答案】 C16、调节甲状腺激素合成和分泌的主要是A.下丘脑-甲状腺轴B.下丘脑-垂体轴C.垂体-甲状腺轴D.下丘脑-垂体-甲状腺轴E.以上均不对【答案】 D17、肝素的抗凝机制是A.促进内皮细胞释放血栓调节蛋白B.增强血栓调节蛋白与凝血酶的结合C.与凝血酶形成1:1的复合物D.与抗凝血酶结合并增强其功能E.促进灭活FVa和FⅧa【答案】 D18、从血清蛋白电泳中区别出脂蛋白的方法是用A.特殊缓冲剂B.特殊染色方法C.蛋白区带位置D.不同等电点E.不同支持介质【答案】 B19、中性粒细胞型类白血病可见A.血液中性粒细胞显著增高B.血液单核细胞显著增高C.血液异型淋巴细胞显著增高D.血液淋巴细胞持续显著升高E.血液嗜酸性粒细胞显著增高【答案】 A20、怀疑胎儿为黏多糖沉积病,首选试验是A.碱性磷酸酶测定B.真性胆碱酯酶测定C.甲胎蛋白测定D.甲苯胺蓝定性试验E.葡萄糖测定【答案】 D21、触酶阴性的细菌是A.淋病奈瑟菌B.腐生葡萄球菌C.A群链球菌D.脑膜炎奈瑟菌E.金黄色葡萄球菌【答案】 C22、粒细胞功能中具有共性的是()A.调理作用B.黏附作用C.吞噬作用D.杀菌作用E.中和作用【答案】 C23、患者男,55岁。
高中生物第4章免疫调节第节特异性免疫课后检测含解析选择性1
特异性免疫【合格考全员做】(学业水平一、二)1.下列关于人体淋巴细胞的叙述,正确的是()A.辅助性T细胞能识别抗原,只参与细胞免疫过程B.辅助性T细胞能产生细胞因子,可促进浆细胞的增殖分化C.浆细胞受抗原刺激,能增殖分化成记忆B细胞D.细胞毒性T细胞能识别被病原体感染的宿主细胞2.若流感病毒侵入人体,机体不会发生的是()A.流感病毒在内环境中增殖B.B细胞和细胞毒性T细胞的增殖分化C.活化的细胞毒性T细胞识别靶细胞D.产生针对该病毒的记忆细胞3.新冠肺炎由一种新型冠状病毒引起,感染者多会出现严重的呼吸系统问题并伴有急性肾衰竭.下列有关说法,错误的是()A.该病毒没有细胞结构B.该病毒的遗传物质是核酸C.通过体液免液可彻底清除该病毒D.肾衰竭会导致代谢废物在体内积累,引起内环境稳态失调4.在特异性免疫反应中,体液免疫和细胞免疫之间,既各有其独特的作用,又能相互配合,共同发挥免疫效应.下列关于它们之间相互关系的叙述,错误的是()A.在体液免疫的过程中需要辅助性T细胞传递抗原B.病毒进入细胞之前,常由体液免疫降低病毒的感染力C.在细胞免疫发挥作用后,常需要抗体来协助消灭抗原D.体液免疫针对细菌病原体,细胞免疫针对病毒病原体5.埃博拉出血热是由埃博拉病毒(EBV)侵染引起的,下列有关人体对抗EBV的叙述,错误的是()A.巨噬细胞在对抗EBV的特异性反应和非特异性反应中均起作用B.抗EBV抗体与EBV结合,可使EBV失去进入宿主细胞的能力C.细胞免疫过程中产生的活化的细胞毒性T细胞可识别并裂解被EBV侵染的细胞D.未感染EBV的个体,体内能合成与EBV特异性结合的抗体6.如图为体液免疫示意图,下列有关叙述正确的是()A.①过程体现了细胞膜的流动性B.⑤过程主要发生在细胞质基质中C.浆细胞能特异性识别抗原,并产生抗体D.此图中吞噬细胞参与的是非特异性免疫7.麻风分枝杆菌是可以引起麻风病的一种细菌,可通过接触和飞沫传播,下列关于人体第一次接触麻风分枝杆菌后发生的反应,正确的是()A.人体唾液及体液中的溶酶体对麻风分枝杆菌有一定的杀伤作用B.麻风分枝杆菌侵入人体后会被吞噬细胞吞噬,此过程主要与细胞膜的功能特点有关C.消灭寄生于细胞内的麻风分枝杆菌,既需要细胞免疫参与,也需要体液免疫参与D.该免疫过程中产生抗体的浆细胞,来自机体B细胞和记忆B 细胞的增殖分化8.人乳头瘤病毒( HPV)为DNA病毒,已知的亚型有100多种,分低危型和高危型.宫颈癌主要由高危型持续感染所致,严重危害妇女的身心健康.下图1是HPV入侵机体后,机体作出的部分免疫应答示意图,据图回答:(1)HPV在免疫学上被称作________.图1中甲是________细胞,其功能是________________________________________________________________________。
常见的单细胞测序技术方法及其原理_概述及解释说明
常见的单细胞测序技术方法及其原理概述及解释说明1. 引言1.1 概述在生物学研究中,获得单个细胞的详细信息是一项重要的任务。
传统上,多细胞组织被视为一个整体来研究,而单细胞的差异性和多样性往往被掩盖。
然而,随着技术的发展,单细胞测序技术已经成为解析复杂生物体内细胞异质性和动态过程的重要工具。
1.2 文章结构本文旨在概述常见的单细胞测序技术方法及其原理。
文章分为以下几个部分:引言、单细胞测序技术方法及其原理、单细胞测序技术方法的优缺点分析、常见的单细胞测序技术应用领域和案例研究、结论与展望。
1.3 目的本文的目的是介绍和解释常见的单细胞测序技术方法及其原理,并分析这些方法在生物学研究中的优缺点。
同时,将介绍具体案例研究来展示单细胞测序技术在不同领域中应用的情况。
最后,对未来发展方向和可能的突破进行展望和讨论。
以上就是文章“1. 引言”部分的详细内容。
2. 单细胞测序技术方法及其原理2.1 什么是单细胞测序技术单细胞测序技术是一种可以对单个细胞进行基因组、转录组以及表观组的测序技术。
传统的测序方法是对大量细胞进行平均化处理,而单细胞测序技术则可以在单个细胞水平上进行高通量的基因表达分析。
2.2 常见的单细胞测序技术方法概述目前,常见的单细胞测序技术包括以下几种方法:(1) 单细胞RNA测序(Single-Cell RNA Sequencing, scRNA-seq):这是最常用的单细胞测序方法,它通过对单个细胞提取RNA,并进行逆转录、扩增和测序,从而获取每个细胞中表达的所有基因信息。
scRNA-seq 方法广泛应用于研究不同类型细胞之间的转录差异以及在发育过程中特定基因在不同时间点的表达动态。
(2) 单细胞DNA测序(Single-Cell DNA Sequencing, scDNA-seq):这种方法主要用于研究个体间以及同一体内细胞间的基因组变异情况。
与传统测序方法不同,单细胞DNA测序可以检测到细胞间的遗传多样性。
临床医学检验技师初级(师)临床免疫学及检验(免疫细胞分离及检测技术)-试卷1
临床医学检验技师初级(师)临床免疫学及检验(免疫细胞分离及检测技术)-试卷1(总分:60.00,做题时间:90分钟)一、 A1型题(总题数:23,分数:46.00)1.EA花环实验是通过检测何种受体而对B细胞进行计数的一种实验(分数:2.00)A.补体受体B.IgGFc受体√C.SRBC受体D.小鼠RBC受体E.IgGFab受体解析:解析:B淋巴细胞有表面Fc受体,以红细胞作为指示细胞与相应的抗红细胞抗体形成EA,B淋巴细胞可以通过Fc受体与EA形成花环,以此计算B淋巴细胞的数目。
Fc受体并非B细胞所特有,中性粒细胞、单核细胞及巨噬细胞表面均有这种受体,但这些细胞可以通过形态学加以区别。
2.参加细胞免疫最主要的细胞是(分数:2.00)A.巨噬细胞B.B细胞C.T细胞√D.肥大细胞E.浆细胞解析:解析:细胞免疫是T细胞受到抗原刺激后,分化、增殖、转化为致敏T细胞,当相同抗原再次进入机体,致敏T细胞对抗原的直接杀伤作用及致敏T细胞所释放的细胞因子的协同杀伤作用。
3.分离外周血单个核细胞常用的分层液是(分数:2.00)A.Percoll分层液B.Ficoll分层液√C.(NH 4 ) 2 SO 4D.NaClE.CaCO 3解析:解析:分离外周血单个核细胞常用Ficoll分层液,Percoll分层液用于纯化分离单核细胞和淋巴细胞,但操作流程长。
4.NK细胞主要杀伤(分数:2.00)A.肿瘤细胞B.微生物感染细胞C.自身衰老细胞D.肿瘤细胞和病毒感染细胞√E.病毒感染细胞解析:解析:NK细胞具有直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的功能,是非特异杀伤,也无MHC限制性。
5.何种细胞表面具有小鼠红细胞受体(分数:2.00)A.中性粒细胞B.巨噬细胞C.T淋巴细胞D.B淋巴细胞√E.NK细胞解析:解析:B淋巴细胞上有许多特异性受体,如补体受体、Fc受体、EB病毒受体、小鼠红细胞受体等。
6.E花环实验是通过检测何种受体而对T细胞进行计数的一种实验(分数:2.00)A.补体受体B.Fc受体C.SRBC受体√D.小鼠RBC受体E.Fab受体解析:解析:外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体,能够与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。
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一、免疫细胞膜分子检测的原理与类型 1、以抗体识别抗原 2、以配体识别受体
二、免疫细胞膜分子的主要检测方法
1、免疫标记检测方法 荧光抗体法 酶免疫检测法 免疫金银染色法
2、补体依赖的细胞毒试验(CDC) 3、花环形成试验
SmIg的荧光抗体检测法SmIgBiblioteka 酶免疫检测法染料补体
补体依赖的细胞毒试验(CDC)
第一节 免疫细胞的分类与分离
一、免疫细胞的种类与特征 二、免疫细胞的分离技术 三、细胞的冻存与复苏
一、免疫细胞的特征
1、免疫细胞的形态学特征 理化性状 生物学特性
2、免疫细胞的膜分子特征 CD分子
吞噬溶酶体
NK cells
二、免疫细胞的分离技术
1、密度梯度离心法 2、黏附分离法 3、荧光激活分离法 4、磁性分离法 5、其他分离法
2、细胞复苏的原理与方法:细胞复苏时速度要快,
使之迅速通过细胞最易受损的-5~0℃,细胞仍能生长, 活力受损不大。
目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们 对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。
细胞冻存罐
第二节 免疫细胞膜分子的检测
一、免疫细胞膜分子检测的原理与类型 二、免疫细胞膜分子的检测方法
稀释抗凝血
血浆
淋巴细胞分离液 离心前
单个核细胞
粒细胞 红细胞 离心后
2、黏附分离法-纯淋巴细胞群的分离
贴壁法:将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平
皿或扁平小瓶中,移至37℃温箱静置1h左右,单核细胞和 粒细胞均贴于平皿壁上,而未贴壁的非粘附细胞几乎为纯淋 巴细胞,继用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。因B 细胞也有贴壁现象,用本法分离的淋巴细胞群中B细胞有所 损失。
可溶性MHC-肽四聚体法:mhc-肽四聚体复合物
的原理是通过增强t细胞受体与mhc-肽复合物亲和力,达 到可直接特异性检测t细胞的目的。 作为临床诊断工具,定量检测外周血及组织中抗原特异 性CTLs的比率,并进行表型及功能分析。 用于过继性肿瘤免疫治疗 用于疫苗疗效的监测
抗原肽-MHC分子四聚体技术
1、密度梯度离心法
聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液 Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,亲水性高,平均分子量为 400,000,当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理性渗透压,也不 穿过生物膜。 红细胞、粒细胞比重大,离心后沉于管底;淋巴细胞和单 核细胞的比重小于或等于分层液比重,离心后漂浮于分层液 的液面上,也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液 液面的细胞,就可从外周血中分离到单个核细胞。
单个核细胞悬液中加直径为3μm的羰基铁颗粒,置37℃温箱 内短时旋转摇动,待单核细胞充分吞噬羰基铁颗粒后,用磁 铁将细胞吸至管底,上层液中含较纯的淋巴细胞。
(2)磁激活细胞分离术MACs:是一种特异性细
胞分选技术,其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。 主要组成成分为MACS微珠、MACS分选柱和MACS分选器。 MACS微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微 粒。MACS分选柱置于一个永久性磁场—MACS分选器中, 可以将磁力增强1000倍,足以滞留仅标记极少量微珠的目的 细胞。用缓冲液冲洗分选柱,所有未标记的细胞被冲洗掉。 分选柱离开磁场,即可获得被标记的细胞组分。
MHC I类(左)和Ⅱ类(右)分子四聚体结构示意图
三、细胞的冻存与复苏
1、细胞冻存的原理与方法:在不加任何条件下直
接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶, 引起细胞死亡。向培养液加入保护剂,可使冰点降低。 在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细 胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
第三节 免疫细胞功能测定
一、转化、增殖试验 二、细胞毒试验 三、抗体形成试验 四、细胞吞噬与杀伤试验
一、转化、增殖试验
1、淋巴细胞转化试验:刺激物分为非特异性(如植
物血凝素、刀豆素A等)和特异性刺激因子(如抗原);检 测方法为形态学检测法和3H-TdR掺入法及MTT法等。
2、混合淋巴细胞培养:混合淋巴细胞培养(MLC)或
❖ 吸附柱法:将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶 SephadexG10的柱层中,凡有粘附能力的细胞绝大部分被吸附而粘 滞在柱层中,从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。此法简单易行, 对细胞极少损害。
3、荧光激活分离法(FACS)
流式细胞仪
4、磁性分离法
(1)磁铁吸引法:利用单核细胞具有吞噬的特性,在
N
S
MACS (阳性选择法)
N
S
MACS (阴性选择法)
5、其他分离法
花环沉降法:本法是将淋巴细胞与一定比例的绵羊红
细胞混合,待淋巴细胞形成E花环后,继用淋巴细胞分层液 分离细胞。浮悬在分层界面而不形成E花环的群则富含B细 胞,而沉降在管底的形成E花环的细胞用低渗法处理,使围 绕细胞周围的绵羊红细胞快速裂解,则获得纯的T细胞。
E-花环:利用T细胞膜上的异种动物红细胞受体
花环形成细胞
B细胞
绵羊红细胞 T细胞
EA-花环:B淋巴细胞表面有Fc受体,能与免疫球蛋白的
Fc段结合,因此用抗体致敏的红细胞与B淋巴细胞混合,可见B 淋巴细胞周围粘附有红细胞
EAC-花环:B淋巴细胞表面有补体受体,在抗体致敏的
红细胞中加入补体,可形成红细胞-抗体-补体复合物,再与B 淋巴细胞混合,则可形成EAC玫瑰花环。
称混合淋巴细胞反应(MLR)常用于器官移植前的组织配型, 以测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容的程 度。由于MLC中淋巴细胞接受同种异型抗原的刺激而发生活 化、增殖,产生种类众多的细胞因子,促进NK、LAK和 CTL等杀伤细胞的分化,因此又是免疫调节研究中常用的实 验模型。
2、黏附分离法:淋巴细胞亚群的分离
❖ 尼龙毛法:混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时,B细胞、浆细胞、 单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上,而多数T细胞则 通过尼龙毛柱,这是获得富含T细胞群的有效方法。 T细胞得率为2030%左右。
❖ 亲和板法:利用亲和层析法分离淋巴细胞亚群,其原理是各种淋巴细 胞亚群具有不同的抗原性,将相应抗体结合于塑料平板上,继加细胞 悬液,凡抗原阳性的细胞则与相应抗体结合,抗原阴性的细胞可从未 吸附的细胞悬液中获取。